8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞克隆形成的影响

研究8-MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞克隆的影响。方法。软琼脂克隆法。结果：照组细胞克隆形成率为53．1％,经IC308-MOP与ATRA单独及联合作用5－d以后,克隆形成率降低为8-MOP组0．9％,ATRA组35.1％,联合用药组3.2％。结论：8－MOP与ATRA单独及联合应用Mc3细胞克隆形成率降低,有可能使Mc3细胞的转移能力下降。     

8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞生长的抑制作用

研究8-MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞的生长抑制作用。方法：用IC30的8－MOP、ATRA以及二者联合作用于Mc3细胞,用细胞计数法测定细胞生长曲线。结果：细胞倍增时间分别为：对照组29．7h;8－MOP组39．9h;ATRA组73．4h;联合用药组56．7h。结论：8－MOP、ATRA以及二者联合应用能使Mc3细胞的倍增时间延长,生长速度减慢,表明8－MOP和ATRA可抑制Mc3细胞生长。     

足叶乙甙与8-甲氧基补骨脂素对人粘液表皮样癌高转移细胞株抑制作用

目的:观察足叶乙甙(VP16)与8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)联合用药对人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)的抑制作用。方法:采用MTT法及克隆形成法观察VP16与8-MOP联合用药对粘液表皮样癌的抑制作用。结果:Mc3细胞对VP16有较高的敏感性,且呈显著的剂量依赖性,其IC50值为1625.67ng/ml;小剂量的8-MOP可刺激Mc3细胞增殖,高浓度的8-MOP则明显抑制Mc3细胞生长,其IC50为75500ng/ml;VP16与8-MOP联合应用时,采用分别低于VP16IC50的100、320和1000ng/ml药物浓度,联合用药的合并指数(CI)均小于0.95,分别为0.350、0.599和0.880;VP16对Mc3细胞的生长及克隆形成有明显的抑制作用,IC50为126ng/ml。结论:8-MOP与抗癌药物VP16联合应用,显示明显协同抑制效应,VP16对Mc3细胞克隆形成有抑制作用     

8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞超微结构的影响

目的：研究8－MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞超微结构的影响。方法：扫描及透射电镜观察细胞形态结构的变化。结果：Mc3细胞经8-MOP与ATRA单独及联合作用5d以后，表面微绒毛减少，细胞表面由折皱状改变为平铺状，细胞伸展面积明显变大，胞核形态规则，核仁数目减少，ATRA组细胞外有网格状小体形成，二者联合应用组细胞有染色质凝聚及边集现象。结论：8－MOP与ATRA单独及联合应用可改变Mc3细胞的超微结构，使其趋向于正常细胞。     

高三尖杉酯碱、甲氧沙林对粘液表皮样癌Mc3的抑制作用

目的：研究高三尖杉酯碱(HHT)、甲氧沙林(8-MOP)以及二者联合作用于人涎腺粘液表皮样癌高转移细胞株Mc3，观察其生长抑制作用。方法：应用MTT检测法、细胞计数法、软琼脂克隆形成试验等方法观察Mc3细胞生长曲线、克隆形成率、细胞数与A值关系以及HHT及8-MOP单独或联合应用作用于：Mc3细胞的生长抑制作用。结果：Mc3、：MEC-1生长稳定，群体倍增时间分别为26．4h和30h。克隆形成率分别为14．6％和1．2％。HHT与8-MOP2种药物分别单独作用于Mc3细胞，在小剂量情况下对细胞杀伤作用较轻，随着药物浓度的增加，细胞生长明显抑制，其作用特点表现为明显的浓度依赖性。两种药物对Mc3细胞作用的IC50值分别为79．43和75980ng／ml，RAA值分别为20．14和1．7。浓度为1～320ng／ml的HHT分别与800、4000、20000ng／ml的8-MOP联合应用时HHT的CI50值分别为0．76、0．33和0．15，RAA则分别为25．36、31.92和160，显示了二者具有明显的协同抑制效应作用。结论：HHT及8-MOP联合应用方案，可有效抑制涎腺粘液表皮样癌高转移细胞的增殖。     

8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞生长的延迟抑制效应

研究8－MOP与ATRA单独及联合应用对Mc3细胞的延迟抑制效应。方法：Mc3细胞IC30的经8－MOP、ATRA及二者联合应用5d后，去药接重新种培养，MTT法测定细胞生长曲线。结果：重新接种后5d内Mc3细胞表现为继续生长，而5天后却表现出生长曲线下降。结论：适当剂量的8－MOP、ATRA以及二者联合作用足够的时间对Mc3细胞可产生延迟性生长抑制作用。     

8—MOP,ATRA以及二者联合应用对Mc3细胞周期的影响

研究8－MOP与ATRA单独及联合应用时Mc3细胞周期的影响。方法：流式细胞仪测定细胞DNA含量，Multicycle软件分析细胞周期分布情况。结果：Mc3细胞经IC30的8－MOP与ATRA单色及联合处理5天以后，实验组均表现为G1／G0期细胞增加，G2＋M或细胞减少，S期细胞变化不规律。结论：8－MOP与ATRA单独及联合作用可抑制Mc3细胞有丝分裂。     

表皮生长因子对Balb/3T3成纤维细胞生长周期及表皮生长因子受体表达的影响

目的:观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF) 对Balb/3T3成纤维细胞生长周期及表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响.方法:①通过血清饥饿法使细胞同步化,加入25 ng/ml的EGF予以刺激,用流式细胞仪检测不同时间细胞生长周期参数的改变;②于不同时间点对Balb/3T3细胞进行EGFR免疫组化染色,观察EGF对EGFR表达的调节作用. 结果:①Balb/3T3细胞在加入EGF 8 h后S期细胞比例及增殖指数达到最高峰,至10 h回落至原水平;②EGF在作用早期可促进成纤维细胞EGFR表达,其对受体表达的调节作用与正常培养液相当.结论:EGF可有效促进EGFR的表达,从而促进细胞增殖.     

17-β雌二醇对人粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的影响

目的 :研究 17-β雌二醇 (E2 )对体外培养的人粘液表皮样癌Mc3细胞增殖的调节作用。方法 :不同浓度、时间的E2 处理Mc3细胞 ,采用细胞计数、克隆形成测定、流式细胞术、免疫组织化学染色等方法 ,检测E2 对人粘液表皮样癌Mc3细胞系细胞群体倍增时间、克隆形成率、细胞周期分布以及对PCNA、Bcl -2阳性表达的影响。结果 :对照组E2 浓度为 10 -9、10 -8、10 -7mol/L时 ,其细胞群体倍增时间分别为 :3 6.0h、2 7.9h、2 8.8h、2 5 .7h ;细胞克隆形成率分别为 :13 .7%、18.1%、17.6%、2 0 .8% ;PCNA的阳性表达率分别为 :62 %、78%、74%、98% ;Bcl-2的阳性表达率分别为 :48%、82 %、77%、93 %。流式细胞术检查结果显示 10 -7mol/L的E2 处理 12、18、2 4h后 ,细胞周期中S期细胞所占比例分别为 :11.3 %、7.0 %、46.7%。结论 :一定浓度的雌激素具有促进细胞G1/S期转换 ,增加S期细胞数量 ,加速DNA合成 ,从而促进细胞增殖。     

生存素基因诱导人黏液表皮样癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究生存素(survivin)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3细胞的生长抑制效应及可能的作用机制,探讨生存素基因作为黏液表皮样癌基因治疗靶点的可行性.方法 设计合成靶向生存素特异性ASODN,转染Mc3细胞.将转染的Mc3细胞分为4组:空白对照组、脂质体转染组、生存素正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotide,SODN)转染组、生存素ASODN转染组.转染后24、48及72 h倒置显微镜观察Mc3细胞形态学变化,甲基噻唑基四唑(MTT)法观察转染前后对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法分析细胞凋亡指数,半定量反转录聚合酶链反应分别检测生存素mRNA的表达.结果 生存素ASODN转染组的Mc3细胞数量明显少于其他组,脱壁悬浮细胞明显增多,可见典型凋亡改变,并呈时间依赖性.生存素ASODN转染组Mc3细胞G1～G0期前出现明显的亚二倍体凋亡峰,Mc3细胞的凋亡率在转染后24、48及72 h分别为12.96%、14.43%及22.69%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN对Mc3细胞增殖抑制率分别为22.35%、39.04%、43.46%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN转染组在细胞转染后24、48及72 h Mc3的凋亡指数分别为11.038%、12.172%及18.900%,明显高于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.05).生存素ASODN转染组Mc3细胞生存素mRNA在24、48及72 h的相对表达量分别为0.739±0.008、0.668±0.007、0.500±0.006,相对抑制率分别为18.21%、26.06%、44.82%,明显低于其他组(P＜0.01),并呈时间依赖性(P＜0.01).结论 生存素ASODN可抑制人黏液表皮样癌高转移细胞株Mc3的生长增殖,诱导其凋亡,同时亦可抑制Mc3细胞生存素mRNA的表达,并呈时间依赖性.生存素可作为黏液表皮样癌基因治疗研究的一个靶点.     

8—甲氧基补骨脂素对粘液表皮样癌细胞的抑制作用

目的：研究８－甲氧基补骨脂素（８－ＭＯＰ）对粘液表皮样癌细胞（ＭＥＣ－１）的抑制作用。方法：应用常规ＭＴＴ法、细胞计数法和流式细胞术研究８－ＭＯＰ作用于粘液表皮样癌细胞的剂量－效应关系和时间－效应关系以及３０％抑制浓度的药物对细胞群体倍增时间和细胞周期的影响。结果：１）小剂量８－ＭＯＰ在短时间内对ＭＥＣ－１细胞没有抑制作用，当剂量大于２５ｍｇ／Ｌ时，药物的抑制作用呈剂量依赖性；作用时间在２４ｈ～７２ｈ之间时表现出时间依赖性关系；药物的抑制作用有延迟性。２）１２０ｈ作用组３０％抑制浓度ＩＣ３０＝３３．８６ｍｇ／Ｌ，５０％抑制浓度ＩＣ５０＝４５．３ｍｇ／Ｌ，ＲＡＡ值＝２．９。３）它阻止细胞进入Ｓ期完成细胞分裂。结论：ＭＥＣ－１细胞对８－ＭＯＰ较敏感，８－ＭＯＰ在人粘液表皮样癌的防治方面可能有一定意义。     

8一甲氧基补骨脂素对MEC-1细胞癌基因/抑癌基因表达的影响

目的：研究8-甲氧基补骨脂素（8－MOP）对MEC－1细胞部分基因表达的影响。方法：细胞贴壁后用30％细胞生长抑制浓度的药物处理120h,常规制备标本,ABC法免疫组织化学杂色。结果：药物处理后细胞P16和nm23－H1蛋白表达强度增强,而CDK4和H－ras蛋白表达强度减弱。结论：8－MOP可以调节MEC－1细胞部分基因的表达,从而可能影响细胞相关的生物学特性。     

趋化因子受体CXCR4 shRNA真核表达载体的构建

目的：构建趋化因子受体（CXCR4）特异的RNA干扰质粒载体。方法：根据GenBank数据库提供的CXCR4基因核苷酸序列,选择设计能转录短发夹状RNA（short hairpin RNAs,shRNA）的DNA序列,并与pWH1质粒载体连接,用酶切的方法进行鉴定;将构建成功的特异性表达载体（pWH1-CXCR4）稳定转染至人涎腺黏液表皮样癌Mc3细胞系,并应用RT-PCR和流式细胞术对细胞CXCR4的表达进行检测。结果：与Mc3细胞和转染空白质粒pWH1 Mc3细胞相比,转染pWH1-CXCR4表达载体的Mc3细胞CXCR4 mRNA和蛋白的表达明显降低。结论：构建的CXCR4特异性shRNA表达载体可有效的沉默CXCR4基因,为进一步研究CX-CR4表达对涎腺黏液表皮样癌增殖和转移的意义及治疗涎腺黏液表皮样癌奠定了基础。