成人慢性ITP患者外周血NKT细胞的检测

目的：了解成人慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血血小板（PLT）与自然杀伤T（NKT）细胞的变化及关系。方法：利用多色流式细胞术方法检测外周血NKT细胞,血细胞分析仪和手工计数检测PLT。结果：慢性ITP组PBMNCs中NKT细胞的比例为0.13%±0.03%,对照组NKT细胞比例为0.07%±0.01%,两者间差异无统计学意义（P〉0.05）。将慢性ITP组患者依据PLT计数进一步分组,PLT计数〈20×109/L的慢性ITP患者组NKT为0.22%±0.05%,显著高于健康对照组的0.07%±0.01%（P〈0.05）及PLT计数〉20×109/L的慢性ITP患者组的0.05%±0.01%（P〈0.05）;PLT计数〉2×109/L ITP患者组与健康对照组间NKT的差异无统计学意义（P〉0.05）。慢性ITP患者外周血PLT计数与NKT细胞水平间存在负相关,相关系数r=-0.373,P=0.033。结论：NKT细胞在血小板重度减少的慢性ITP患者中可能发挥作用,NKT细胞、PLT在慢性ITP患者中的变化存在负相关。     

细胞毒素相关蛋白A与特发性血小板减少性紫癜相关性研究

目的 幽门螺杆菌(HP)可能通过细胞毒素相关蛋白A( cagA)参与特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病.比较ITP患者不同血小板分组血小板抗体IgG(PA-IgG)、CagA定量,Hp、CagA阳性率,探索CagA与ITP相关性.方法 ITP组(93例)总体Hp、cagA阳性率与健康组(49例)、非血液系统疾病血小板减少组(55例)比较.ITP组按血小板数值分为PLT≤20×109/L,20×109/L＜PLT＜50×109/L,50×109/L≤PLT三组.快速尿素酶试验( RUT)及14C尿素呼气试验(UBT)检测Hp,酶联免疫法测定外周血cagA、PA -lgG.比较各组间PA-IgG、cagA定量及Hp、cagA阳性率.结果 ITP组Hp、cagA阳性率明显高于健康组、非血液系统疾病血小板减少组,差异有显著性,P ＜0.05;健康组Hp、cagA阳性率较非血液系统疾病血小板减少组差异无显著性,P＞0.05.ITP三组间PA- IgG、CagA定量,CagA阳性率比较,血小板低组,PA-IgG、CagA定量,cagA阳性率高,差异有显著性,P ＜0.05;50×109/L≤PLT组Hp阳性率明显低于PLT≤20×109/L组,P＜0.05;PLT≤20×109/L组与20×109/L＜PLT＜50×109/L组,20×109/L＜PLT＜50×109/L组与50×109/L≤PLT组HP阳性率差异无显著性,P ＞0.05.结论Hp参与ITP发病,ITP血小板计数与Hp感染率不完全一致,与PA-IgG、cagA存在相关性.提示,HP可能因CagA致PA-IgG升高,导致血小板降低.     

Treg细胞和Th17细胞在鼻咽癌中相关性的研究

目的:检测鼻咽癌患者外周血中Treg细胞与Th17细胞的比例以及相关细胞因子如IL-6、TGF-β1的变化.方法:选取我院鼻咽癌患者50例,另选取健康志愿者50例,鼻咽炎患者50例作为对照.采用流式细胞术检测外周血中Th17细胞和Treg细胞百分率,ELISA法检测血清中细胞因子TGF-β1、IL-6的水平,分析其相关性.结果:鼻咽癌外周血中Treg和Th17细胞占CD4+T细胞的比例均升高,与鼻咽炎组、正常对照组比较,均有显著性差异(P＜0.05);且Treg细胞与Th17细胞呈正相关(P＜0.05);鼻咽癌外周血中TGF-β1、IL-6的水平均明显高于鼻咽炎组、正常对照组,均有显著性差异(P＜0.05);鼻咽癌患者外周血Th17细胞、Treg细胞分别与血清中IL-6、TGF-β1水平呈正相关(P＜0.05).结论:鼻咽癌患者外周血中Treg、Th17细胞比例升高,且两者呈正相关;鼻咽癌患者患者血清中TGF-β1、IL-6水平升高,可能影响Treg与Th17细胞的平衡.     

Th17/Treg在系统性红斑狼疮患者中的探讨

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)及血浆中相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-6、IL-23的变化.方法 收集SLE患者70例和健康对照组30例,采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法将SLE患者分为活动组(≥5分,38例)和稳定组(0～4分,32例).采用流式细胞术(FCM)检测外周血Th17、Treg百分数,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆中IL-17、IL-6、IL-23水平.结果 SLE患者外周血Th17占CD4+T细胞比例高于对照组(P＜0.05),SLE活动组Th17占CD4+T细胞比例较SLE稳定组及对照组高(均P＜0.05);SLE患者外周血Treg占CD4+T细胞比例低于对照组(P＜0.05),SLE活动组Treg占CD4+T细胞比例较SLE稳定组及对照组低(均P＜0.05);SLE患者外周血Th 17/Treg高于对照组(P＜0.05),SLE活动组Th 17/Treg高于SLE稳定组及对照组(均P＜0.05).Th17、Th 17/Treg、IL-6与SLEDAI评分均呈正相关(r=0.923、0.567、0.397,均P＜0.05),Treg与SLEDAI评分均呈负相关(r=-0.458,均P＜0.05).结论 SLE患者中Th17细胞、调节性T细胞百分数存在异常,且与疾病活动性密切相,提示两种共同变化或失衡可能在SLE的发生、发展过程中起重要作用.     

免疫性血小板减少症患者Th17/Treg细胞失衡与特异性转录因子表达异常

目的探讨Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常在免疫性血小板减少症(ITP)中的临床意义。方法入组ITP患者40例,应用流式细胞术(FCM)检测Th17与Treg细胞、RT-PCR技术检测Th17特异性转录因子ROR-γt和Treg特异性转录因子Foxp3表达水平以及Aim Plex流式高通量技术检测Th17细胞因子IL-17A与IL-22以及Treg细胞因子TGF-β与IL-10水平。20例健康者作为正常对照组。结果与对照组相比较,ITP组Th17、Treg与Th17/Treg比值均显著降低(P 0.05),Th17细胞因子IL-17A与IL-22表达水平均显著升高(P 0.05),Treg细胞因子TGF-β与IL-10表达水平均显著降低(P 0.05)。Th17特异性转录因子ROR-γt与Treg特异性转录因子Foxp3表达水平均显著升高(P 0.05)。结论 ITP患者存在Th17/Treg细胞失衡以及特异性转录因子表达异常,反应了ITP患者机体免疫功能紊乱。     

Th17及相关细胞因子在系统性红斑狼疮中的变化

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17 (Th17)及血浆中相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-6、IL-23的变化.方法 收集SLE患者62例和健康对照组30例,采用SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分方法将SLE患者分为活动组(≥5分,34例)和稳定组(0～4分,28例).采用流式细胞术(FCM)检测外周血Th17细胞百分数,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆中IL-17、IL-6、IL-23水平.结果 SLE患者外周血Th17占CD4+T细胞比例高于健康对照组(P＜0.05),SLE活动组Th17占CD4+T细胞比例较SLE稳定组高(P＜0.05).SLE患者组血浆中IL-6、IL-17、IL-23均较健康对照组高(P＜0.05).Th17、IL-6、IL-17、IL-23与SLEDAI评分均呈正相关(r=0.923、0.393、0.689、0.501,均P＜0.05).结论 Th17细胞在SLE的发病及发展过程中起重要作用.     

TLR9联合CD40信号对ITP患儿外周血中IL10+ CD3-细胞亚群改变的研究

目的：探讨TLR9联合CD40信号对儿童免疫性血小板减少症（ITP）患儿外周血单个核细胞（PBMC）中CD3-细胞表达IL-10的作用及影响。方法：采用流式多因子阵列检测技术，分析8例ITP患儿和7例正常对照血浆样本中IL-10含量；分离8例ITP患儿及7例正常对照外周血PBMC，并经CpG联合CD40L体外刺激培养5 h， 采用流式胞内外染色及检测技术，比较ITP患儿与正常对照组PBMC中CD3-和CD3+亚群比例、IL-10表达能力及细胞存活率的差异。结果：ITP患儿血浆中IL-10含量显著高于正常对照组（P＜0.05）；CpG联合CD40L刺激后的ITP患儿和正常对照组PBMC中CD3-细胞比例与未刺激组相比均显著升高，而CD3+ T淋巴细胞比例显著下降（P＜0.05）；ITP患儿刺激组中CD3- IL-10+细胞的比例显著高于正常对照刺激组（P＜0.05）；与正常对照组相比，未刺激组ITP患儿CD3-细胞存活率显著下降（P＜0.05）。结论：TLR9联合CD40信号的活化能导致ITP患儿外周血IL10+ CD3-细胞比例升高，细胞死亡率升高，可能与ITP疾病进展有重要关系。     

辅助型T细胞相关细胞因子在特发性血小板减少性紫癜模型小鼠中的变化和意义

目的探讨外周血辅助型T细胞分泌的细胞因子在特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠的变化及意义;方法采用CBA方法分别检测14只正常小鼠,14只未治疗ITP模型小鼠及14只泼尼松治疗后ITP模型小鼠外周血血清中的IL-2、INF-γ(Th1)、IL-4、IL-10(Th2)、TGF-β1(Th3)和IL-17(Th17)细胞因子水平的变化;结果与正常组比较,模型组中的IFN-γ、IL-2(Th1)、IL-17(Th17)水平明显升高,IL-10、IL-4(Th2)、TGF-β1(Th3)水平明显降低,Th1/Th2比值增高(P均0.05),泼尼松组与正常组比较,Th1、Th2、Th17和Th3型细胞因子水平及Th1/Th2比值无明显差异(P均0.05);结论在ITP模型小鼠中存在细胞亚群平衡的偏移,表现为Th1、Th17型细胞相关细胞因子分泌亢进,Th2、Th3型细胞相关细胞因子分泌减低,提示辅助型T细胞相关细胞因子参与了ITP的发病机制。     

细胞因子 IL-17A 与免疫性血小板减少症发病关系的初步研究

目的 通过观察免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血中辅助性 T（Th）细胞相关细胞因子水平的变化,探讨其与 ITP 发病的关系。 方法 应用微量样本多重蛋白定量技术（CBA）检测和比较 35 例慢性 ITP 患者和 30 例健康体检者（正常对照组）外周 血中 IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ 和 IL-17A 的水平。 结果 ITP 患者外周血 IL-17A 水平较正常对照组显著升高,两组 IL-17A 的水平 分别为（6.767±1.066）pg/ml 和（1.679±0.253）pg/ml,比较有统计学差异（P＜0.01）;而患者外周血 IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ 水平与 正常对照组相比均无统计学差异（均 P ＞0.05）。血小板计数≥20×109/L 的患者外周血 IL-17A 水平为（8.217±1.477）pg/ml,血小板 计数＜20×109/L 的患者外周血 IL-17A 水平为（5.238±1.490）pg/ml,两者间比较无统计学差异（P ＞0.05）。 结论 慢性 ITP 患者 外周血 IL-17A 水平异常升高,提示 Th17 细胞和 IL-17A 可能在 ITP 的发生、发展中发挥重要的作用。     

Th9细胞的研究进展

Th9细胞是近期发现的一类CD4+亚群效应性T细胞,由转化生长因子β(TGF-β)和白细胞介素(IL)4共同培养的条件下由静息T细胞诱导产生,也可以由TGF-β单独诱导Th2细胞分化而成,PU.1和干扰素调节因子4基因被认为是Th9细胞分化的特异的转录因子。小鼠实验表明Th9细胞可大量分泌细胞因子IL-9和IL-10。但与小鼠不同的是,人Th9细胞不分泌IL-10。Th9细胞在过敏性疾病、抗寄生虫感染和自身免疫性疾病中起着重要作用。Th9细胞亚群的发现,为这些疾病的病因学及临床诊断治疗的研究找到了新的突破口。     

Th9细胞及其与炎性疾病关系的研究进展

CD4+T细胞亚群在人类和动物模型的自身免疫性疾病中发挥重要的免疫应答作用,包括辅助性T细胞1型(Th1)、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)。近几年,随着对CD4+T细胞研究的逐渐加深,新的细胞亚群不断被发现。最近新增加一群CD4+T细胞亚群Th9细胞,以分泌白细胞介素9为主要的细胞因子,在炎性疾病的发生过程中起着重要作用,该文就Th9细胞的研究进展及其与炎性疾病的关系进行综述。     

NF-κB和Caspase-9在胰腺癌中的表达及临床意义

目的探讨NF-κB和Caspase-9在胰腺癌生长、浸润、转移过程中的作用,为对患者进行预后判断及生物治疗提供理论依据。方法应用免疫组织化学技术S-P法,检测NF-κB和Caspase-9在53例胰腺癌、10例非肿瘤性胰腺组织中的表达,并分析它们与胰腺癌临床病理参数及患者生存率的关系。结果（1）NF-κB在非肿瘤性胰腺组织、胰腺癌中的阳性表达率分别为10.00%、79.20%,两者间的差异具有统计学意义（P〈0.01）。NF-κB的表达强度与临床分期及淋巴结有无转移呈正相关（P〈0.01）。（2）Caspase-9在非肿瘤性胰腺组织、胰腺癌中的阳性表达率分别为10.00%、52.83%,两者间的差异具有统计学意义（P〈0.05）。Caspase-9的表达强度与临床分期、淋巴结有无转移呈正相关（P〈0.05）,与组织学分级呈负相关（P〈0.05）。（3）NF-κB和Caspase-9在胰腺癌组织中存在协同作用。结论NF-κB在胰腺癌生长、浸润和转移过程中发挥一定作用,其检测可对胰腺癌的预后判断提供必要的理论依据;Caspase-9作为影响细胞凋亡过程因子,在胰腺癌的发展进程中也起一定作用;二者存在协同作用。     

Sox9、siRNA表达载体的构建与鉴定

目的构建Sox9 siRNA表达载体，分析Sox9在软骨肉瘤中的作用机制。方法根据Kou Ⅰ，IkegawaS提椟的Sox9 mRNA序列，设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中，并对重组质粒（命名为pSilencer／Sox9 siRNA）进行酶切及测序鉴定。结果双酶切证实Sox9 siRNA表达载体克隆构建成功，插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建Sox9 siRNA表达载体。     

母源性十溴联苯醚对子代大鼠卵巢和软骨发育的影响

目的 研究Wistar母鼠在孕前和孕期喂灌十溴联苯醚(BDE-209)对子代大鼠卵巢和软骨发育的影响.方法 20只雌性Wistar大鼠,随机分成观察组和对照组各10只.观察组雌鼠胃灌BDE-209 1 500 mg/(kg·d),对照组胃灌等量的纯花生油,30 d后按雌雄比例1:2合笼,雌鼠继续经口给药,方法同前,直至分娩后停止胃灌.出生后21 d处死雌性子鼠,取右侧卵巢、膝关节,观察组织学改变,采用免疫组化与图像分析技术.测定卵母细胞GDF-9,软骨表层2型胶原蛋白的表达水平.结果 观察组子代雌鼠卵母细胞GDF-9含量较对照组明显减少(P<0.01);膝关节骺板软骨增厚,软骨表层2型胶原蛋白表达明显减少(P<0.05).结论 孕前和孕期喂灌BDE-209可造成子代大鼠卵巢和软骨发育异常.     

基质金属蛋白酶-9在卵巢上皮性肿瘤中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-9与卵巢上皮性肿瘤发生与预后的关系。方法通过原位杂交方法用基质金属蛋白酶(MMP-9)寡核酸探针检测卵巢肿瘤73例(其中良性肿瘤20例、恶性肿瘤53例)中MMP-9的表达。结果(1)MMP-9在恶性肿瘤中的表达率明显高于在良性肿瘤中的表达率,差异具有显著性;(2)MMP-9在不同病理类型的恶性肿瘤中的表达率无显著性差异;(3)随着临床分期及组织学分级的递增,MMP-9在恶性肿瘤的表达率明显增加,差异具有显著性。结论MMP-9的过度表达可能与卵巢上皮性肿瘤的发生有关。对于卵巢恶性肿瘤的早期诊断具有一定意义,且MMP-9与肿瘤的侵袭和转移有关,随着卵巢肿瘤恶性程度的增加,其表达量增加,说明其与肿瘤分化和预后有关。     

丹参多酚酸盐对不稳定型心绞痛患者血小板聚集及MMP-9功能的影响

目的:探讨丹参多酚酸盐对不稳定型心绞痛患者血小板聚集及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)功能的影响.方法:将60例不稳定型心绞痛患者随机分为丹参多酚酸盐治疗组(A组)及常规治疗组(B组),均治疗14 d,观察两组治疗前后血小板聚集率、MMP-9表达变化情况.结果:A组在降低血小板聚集率和MMP-9方面均优于B组.结论:丹参多酚酸盐能明显抑制血小板的聚集和活化,同时可通过降低MMP-9稳定斑块,改善预后.     

水通道蛋白9在培养肝细胞脂肪变性模型中的表达及意义

目的:探讨油酸诱导的脂肪变性肝细胞模型中水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)的表达及意义.方法:用油酸诱导正常肝细胞株L-02建立肝细胞脂肪变模型.采用油红O染色观察细胞内的脂滴,并检测细胞内甘油三脂,游离脂肪酸.甘油含量,RT-PCR法和Western blotting法分别检测AQP9 mRNA和蛋白的表达.结果:油红O染色显示24h开始出现脂肪变性,72h脂肪变性最重;模型组TG、FFA、甘油含量均在各时相点较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01);模型组AQP9 mRNA的表达上调,于24h开始增高,72h表达最强,与对照组相比差异有统计学意义(P相似文献   

实验性ICH后MMP-9的表达与神经细胞凋亡关系的研究

目的探讨脑出血（ICH）后基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达和神经细胞凋亡发生情况之间的关系。方法30只Wistar大鼠随机分成对照组、ICH后2天组和应用MMP-9抑制剂BB-94处理组,每组各10只,分别应用免疫组化和流式细胞仪方法检测血肿周围脑组织MMP-9的表达和神经细胞凋亡率,同时对ICH大鼠进行神经功能缺损评分。结果大鼠ICH后2天、MMP-9和细胞凋亡率均明显升高、应用MMP-9抑制剂BB-94后MMP-9表达下降的同时,神经细胞凋亡率也明显下降（P〈0．01）,但是神经功能评分并未同时好转。在大鼠ICH5～10天后,处理组神经功能缺损评分明显好于ICH组（P〈0．01）。结论神经细胞凋亡与神经功能缺损有关,而MMP-9的高表达则促进神经细胞的凋亡。     

胆管癌组织中存活素及MMP-9的表达相关性及临床意义

目的研究存活素及MMP-9在胆管癌组织中的表达情况及其相关性,了解胆管癌组织中存活素及MMP-9表达的相关性及其与胆管癌浸润转移的关系,并讨论其临床意义。方法采用免疫组织化学法(PV-9000)检测45例胆管癌组织中(34例浸润转移组,11例无浸润转移组)存活素和MMP-9的表达情况。结果有浸润转移的34例胆管癌标本中,存活素和MMP-9表达的阳性率分别为61.8%(21/34)和70.6%(24/34);无浸润转移的11例胆管癌标本中,存活素和MMP-9表达的阳性率分别为27.3%(3/11),和36.4%(4/11);存活素的表达与胆管癌浸润转移倾向呈正相关性(P0.05),MMP-9的表达与胆管癌及浸润转移倾向也呈正相关性(P0.01)。存活素与MMP-9的表达呈正相关性(P0.01)。结论存活素及MMP-9在胆管癌组织中的表达呈正相关性,并且二者与胆管癌浸润转移也均呈正相关性,它们可能共同参与了胆管癌的恶变与转移过程。对存活素和MMP-9的联合检测可能作为胆管癌诊断、预后及转移潜能判断的指标。     

非小细胞肺癌患者S100A4蛋白和MMP-9的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中S100A4蛋白和MMP-9表达及二者相关性。方法采用SP免疫组织化学检测S100A4蛋白和MMP-9在90例NSCLC组织和20例正常肺组织中的表达。结果90例NSCLC组织中S100A4蛋白和MMP-9阳性表达率高于正常肺组织中的表达（P〈0.05）。并且S100A4蛋白和MMP-9阳性表达率均与NSCLC患者肿瘤分型,分期以及淋巴结是否转移相关（P〈0.05）。S100A4蛋白与MMP-9表达在非小细胞肺癌中呈正相关（P〈0.05）。结论S100A4蛋白和MMP-9在NSCLC中高表达,S100A4蛋白可能部分通过正调节MMP-9促进NSCLC侵袭和进展,S100A4蛋白和MMP-9过表达预示NSCLC预后不良。