反义寡聚脱氧核苷酸体外对乙型肝炎病毒基因表达的抑制作用

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)C基因翻译起始区和C基因区反义寡聚脱氧核苷酸对HBV表达的序列性抑制作用.方法以乙型肝炎病毒基因组(HBV DNA)转染人肝癌细胞系HepG2而建立起来的转染细胞系2.2.15作为实验对象,设计了一系列互补于HBV mRNA编码核心蛋白基因区(C区)15聚反义硫代寡聚核苷酸(ASON),通过脂质体介导将这些合成的外源基因导入2.2.15细胞中,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测作用细胞培养上清液中乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)含量,提取细胞中的HBV DNA经PCR扩增后,用Southern blotting方法对PCR产物进行半定量分析.结果与HBV mRNA C基因起始区互补的反义硫代寡核苷酸序列特异性地抑制乙型肝炎病毒基因表达,而正义硫代寡核苷酸未见有抑制效应,与HBV mRNA C基因内部互补的序列很少或无抗病毒活性.ASON作用24 h后的细胞培养上清液及细胞内HBV DNA量比对照组明显减少.另外,ASON对细胞生长无毒性作用.结论反义硫代寡核苷酸能够在细胞水平有效地抑制乙型肝炎病毒基因的表达.     

抗HBV反义寡核苷酸的筛选

目的 筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础.方法 合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核昔酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用.结果 寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TYG T...     

反义治疗给药途径

反义寡核苷酸、核酶和DNA酶是一种新型的高选择性的基因表达抑制剂或调节剂.过去几年中这种治疗已经应用于治疗遗传缺陷.第一个反义寡核苷酸分子已在欧洲和美国批准用于临床.然而反义寡核苷酸的成功应用还需要不断完善细胞靶标和细胞内给药途径.     

三种反义硫代寡核苷酸对培养细胞中乙型肝炎病毒基因表达抑制作用的比较

三种反义硫代寡核苷酸对培养细胞中乙型肝炎病毒基因表达抑制作用的比较郭军，周永兴，姚志强，陈勇（唐都医院传染科西安７１００３８）关键词反义寡核苷酸；乙型肝炎病毒；基因表达；细胞培养中图号Ｒ５１２．６我们应用三种反义硫代寡核苷酸，分别互补于乙肝病毒（ＨＢ...     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制Lewis肺癌的血管形成

目的 探讨反义寡核苷酸(ASODN)抑制Lewis肺癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达的效应.方法 将人工合成的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)、正义寡核苷酸(SODN)加入培养的Lewis肺癌细胞中,检测Lewis肺癌细胞中VEGF蛋白的表达,同时测定各上清液刺激血管内皮细胞生长的受抑情况.结果 VEGF-ASODN能明显抑制Lewis肺癌细胞VEGF蛋白的表达,而且可以通过抑制VEGF的表达抑制内皮细胞的生长.结论 VEGF反义寡核苷酸抑制肺癌细胞表达VEGF,有望成为肺癌基因治疗的一种新的治疗手段.     

反义寡核苷酸减弱转染p16基因对包装细胞生长的抑制

目的:应用p16(MTS1)反义寡核苷酸抑制转染p16逆转录病毒载体后外源性p16基因的表达,减弱p16表达对包装细胞的生长抑制作用.方法:合成p16 cDNA起始密码子区的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,加入筛选的转染p16逆转录病毒载体的包装细胞培养液中,记录各孔中出现细胞克隆的时间和数量,测量各形成细胞克隆的病毒上清滴度.Western blot 检测反义寡核苷酸对外源性P16蛋白表达的影响.MTT法检测加入反义寡核苷酸后对转染的包装细胞生长的影响.结果:p16(MTS1)反义寡核苷酸可以抑制外源性p16基因的表达.加入反义寡核苷酸的包装细胞形成细胞克隆的时间提前,克隆数量和滴度都高于对照组.结论:p16(MTS1)反义寡核苷酸可以抑制外源性p16基因的表达,促进p16逆转录病毒载体转染的包装细胞的生长并提高病毒滴度.     

乙肝特异性血清标志物检测的临床意义

乙型肝炎(HepatitisB,HB)是由HBV病毒引起的以肝脏炎症和坏死病变为主的一类世界性的传染性疾病.HBV不仅可引起急、慢性病毒性肝炎,且与肝硬化和肝癌的发生、发展有着密切关系,目前尚无明确有效的治疗方法,是已确认的病毒性肝炎中对人类健康危害最为严重的一种肝炎.HBV病毒属于嗜肝DNA病毒,1965年首次发现HBV的表面抗原(HBsAg).     

靶向微小RNA的病毒感染疾病治疗新策略

微小RNA(microRNA,miRNA)是真核生物细胞的一类长度约为19～25个核苷酸的非编码小RNA,在生物体发育和基因表达过程发挥重要的调控作用。miRNA分子通过与靶mRNA的互补配对,在转录后水平上对基因的表达进行负调控。近来研究表明miRNA在病毒感染宿主过程中发挥重要作用。通过设计抗miRNA反义寡核苷酸促进或阻断特定miRNA的表达可以实现抑制病毒复制的目标。本文综述了抗miRNA反义寡核苷酸研究现状和面临的挑战。     

反义寡核苷酸治疗白血病的研究现状

反义核酸技术是近十年来肿瘤治疗研究的热点,它包括反义寡核苷酸(又称反义DNA,Antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)、反义RNA、核酶及RNA干扰等技术.其中反义寡核苷酸技术的主要作用原理是根据碱基互补配对原则,利用合成的寡核苷酸选择性地与靶基因mRNA互补结合,干扰或阻止其基因产物的形成,从而达到治疗肿瘤的目的.     

VEGF反义核酸对Lewis肺癌细胞作用的研究

目的 探讨利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸的基因治疗肺癌.方法 制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组.接种Lewis肺癌细胞后24h内,用ASODN及SODN皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况.用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果 VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组、对照组平均瘤重分别为(4.31±0.45)g、(6.47±0.71)g、(6.23±0.76)g.VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为41.8%、5.2%.VEGF反义寡核苷酸能明显抑制VEGF蛋白表达及VEGF mRNA的表达.结论 原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长.