红景天苷通过PDGFR/STAT3信号通路调控大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的实验研究

目的:探索红景天苷(Salidroside)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMCs)表型转化的调控作用机制.方法:分离获取SD大鼠原代CCSMCs,在低氧环境中培养24 h并观察红景天苷(30 μg/ml)的干预作用,Western印迹测HIF-1α、PDGF受体(PDGFR)及表型转化相关蛋白(α-SMA和Coll...     

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧环境下SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设常氧对照组(21%O_2)、低氧组(1%O_2)、低氧+红景天苷8μg/ml组、低氧+红景天苷16μg/ml组、低氧+红景天苷32μg/ml组和低氧+红景天苷64μg/ml组,分别培养48 h;Western印迹测定Cx43相对表达量。结果:体外培养CCSMC生长良好,抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和抗desmin抗体免疫组化染色阳性,CCSMC占比90%以上。MTT法结果显示,红景天苷浓度≤64μg/ml时,对CCSMC无明显毒性;而128μg/ml和256μg/ml红景天苷对CCSMC有一定的抑制作用。未加红景天苷干预时,与常氧对照组相比,低氧组Cx43总蛋白和磷酸化蛋白表达均显著升高(P0.01和P0.05),磷酸化比例未见明显变化(P0.05);与低氧不加药组相比,不同浓度红景天苷干预后Cx43表达量仍显著升高,但Cx43蛋白磷酸化比例显著降低,差异均有显著性(P均0.05)。结论:低氧促进大鼠CCSMC Cx43表达升高,红景天苷浓度≤64μg/ml无法逆转上述缺氧改变,但降低了Cx43磷酸化比例。推测红景天苷能通过降低Cx43磷酸化比例抑制缺氧引起的缝隙连接通道形成,保护平滑肌细胞功能。     

低氧诱导因子-1α和p53在肝脏低氧损伤中的作用

目的:探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、p53及细胞凋亡在大鼠肝脏低氧损伤中的作用。方法:雄性SD大鼠64只,随机分为对照组和肝动脉结扎组(n=32)。各组均行剖腹、肝脏骨骼化及肝素林格液肝脏灌注,肝动脉结扎组行肝动脉结扎术。术后1、3、7、14d留取肝脏组织及血标本。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肝脏组织HIF-1αmRNA表达水平;免疫组织化学方法检测肝脏组织HIF-1α及p53蛋白表达水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡。自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性以评价肝损伤。结果:肝动脉结扎后肝组织HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白较对照组明显增高,分别于结扎后3d和7d达峰值[0.834±0.129比0.372±0.048,(7.8±3.1)%比(2.1±1.7)%,P均<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞p53均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(41.2±9.1)%比(5.2±4.3)%,P<0.01]。肝动脉结扎组肝细胞凋亡指数均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01),于术后7d达峰值[(21.3±7.4)%比(3.7±3.5)%,P<0.01]。肝动脉结扎组ALT水平均明显高于对照组。HIF-1α、p53蛋白表达及凋亡细胞都主要位于肝小叶中央静脉周围。结论:HIF-1αmRNA表达增加、HIF-1α蛋白积聚以及p53促凋亡途径的激活在肝脏低氧损伤中可能发挥重要作用。     

内质网应激在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡中的作用

目的:探讨内质网应激途径在高脂血症大鼠睾丸生殖细胞损伤中的作用。方法:42只雄性Wistar大鼠于鼠龄4周末随机化分为两组:对照组(12只)和高脂组(30只),分别给予普通饲料和高脂高热量饲料喂养建立高脂血症大鼠模型。第10周末(即鼠龄14周)全自动生化分析仪检测外周血甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量,TUNEL法检测睾丸组织中凋亡生殖细胞,免疫组化法检测睾丸组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及caspase-12蛋白表达,RT-PCR法检测睾丸组织GRP78及caspase-12 mRNA的表达。结果:高脂组大鼠血清TG、TC[(3.00±0.92)mmol/L、(3.04±0.39)mmol/L]较对照组[(1.43±0.41)mmol/L、(1.55±0.23)mmol/L]显著升高(P0.01),睾丸生殖细胞凋亡指数[(37.17±2.74)%]较对照组[(5.16±0.81)%]显著升高(P0.01);以精原细胞和精母细胞凋亡为主。高脂组睾丸组织中GRP78蛋白(0.32±0.03)及caspase-12蛋白(0.34±0.02)表达较对照组(0.19±0.01、0.12±0.01)明显升高(P0.01),GRP78 mRNA及caspase-12 mRNA(0.86±0.05、0.87±0.01)较对照组(0.37±0.03、0.34±0.03)明显增加(P0.01)。结论:高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多;内质网应激可能是高脂血症大鼠睾丸生殖细胞凋亡的主要途径之一。     

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21%O2浓度)、低氧组(1%O2浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1)0.4μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P<0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P<0.01),与PGE1作用相当(P﹥0.05)。结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化。红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当。     

纳美芬对老年大鼠术后早期脑功能影响及其机制研究

目的 探索纳美芬对老年大鼠术后早期脑功能的影响及其机制.方法 采用随机数字表法将36只20～22月龄雄性SD大鼠分为空白对照组(10组)、手术对照组(I1组)、纳美芬处理组(N组),每组12只.10组不做任何处理,I1组与N组建立大鼠剖腹探查模型,N组于手术结束时肌内注射纳美芬0.1 mg/kg.使用恐怖适应实验检测大鼠术后1d记忆能力(术前3d进行条件反射训练),采用ELISA检测大鼠术后1d脑组织促炎因子IL-1β、TNF-α浓度以及神经细胞凋亡蛋白caspase-3表达浓度. 结果 与10组比较,I1组与N组大鼠TNF-α[(38.3±2.3)、(29.4±2.5) ng/L比(21.4±2.1) ng/L]、IL-13[(31.6±3.3)、(21.2±2.0) ng/L比(14.2±2.9) ng/L]表达增多(P＜0.01),细胞凋亡蛋白caspase-3[(109±10)、(86±9) ng/L比(65±8) ng/L]表达上升(P＜0.01),僵直时间下降(P＜0.01).与I1组比较,N组大鼠手术后TNF-α、IL-1β表达下降(P＜0.01),细胞凋亡蛋白caspase-3表达下降(P＜0.01),大鼠术后僵直时间上升(P＜0.01). 结论 手术可导致老年大鼠脑内炎症反应,引发神经细胞凋亡,记忆能力下降,使用纳美芬可抑制这种改变,改善手术引起的大鼠记忆能力下降.     

红景天苷对缺氧肾小管上皮细胞Toll受体2、IL-6表达及其凋亡的影响

目的:观察红景天苷(salidroside Sal.)对氯化钴(cobaltous chloride,Co Cl2·6H2O)诱导的缺氧人肾小管上皮细胞(human kidney tubular epithelia cell,HKC)Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR-2)表达、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌及细胞凋亡的影响。方法:HKC细胞置于六孔板培养,随机分为正常对照组、缺氧模型组、红景天苷(salidroside Sal.)干预组(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)。其中缺氧模型采用300μmol/L氯化钴处理6 h得到,红景天苷干预组在此模型基础上再用不同浓度的红景天苷处理缺氧细胞24 h。RT-PCR和Western blot检测TLR-2的表达,ELISA检测各组细胞上清中IL-6含量,流式细胞仪检测缺氧HKC凋亡情况。结果:氯化钴诱导HKC TLR-2蛋白(P<0.05)及RNA表达上调(P<0.01)、IL-6分泌增加(P<0.01)及细胞凋亡增加(P<0.01)。25μg/ml和50μg/ml的红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的水平(P<0.01),50μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml(P<0.05)。与缺氧模型组比较,尽管100μg/ml红景天苷能降低缺氧HKC细胞IL-6的绝对值水平,但差异无统计学意义(P>0.05)。25μg/ml,50μg/ml和100μg/ml红景天苷均能抑制TLR-2蛋白表达(P<0.01),且100μg/ml较25μg/ml红景天苷抑制作用显著(P<0.05),但25μg/ml与50μg/ml、50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,它们抑制作用的强弱差异无统计学意义(P>0.05)。三种浓度的红景天苷也能抑制缺氧HKC TLR-2的RNA表达(P<0.01),50μg/ml及100μg/ml红景天苷抑制作用强于25μg/ml红景天苷(P<0.05),但50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,二者抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。50μg/ml和100μg/ml红景天苷能抑制缺氧HKC凋亡(P<0.01),但25μg/ml红景天苷未表现出抑制凋亡的作用(P>0.05),50μg/ml与100μg/ml红景天苷比较,两者抑制凋亡的作用差异无统计学意义(P>0.05)。结论:红景天苷对缺氧HKC的TLR-2蛋白及RNA表达、IL-6的分泌及细胞凋亡均有抑制作用,但其抑制效应呈现非剂量依赖性。     

TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用的实验研究

目的探讨TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用。方法 TNF-α重组慢病毒感染SGC-7901胃癌细胞为实验组,并设立阴性对照组以及空白对照组,采用RT-PCR检测3组细胞中TNF-αmR NA的表达情况,ELISA检测3组细胞上清液中TNF-α蛋白含量,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况。结果 PCR实验观察到TNF-αmR NA荧光条带24h后稳定表达。测得三组培养液中TNF-α含量,实验组[(2.6926±0.7563)ng/ml]明显高于阴性对照组[(0.9326±0.3091)ng/ml]和空白对照组[(0.8552±0.2768)ng/ml],且差异均有统计学意义(P均0.01),而阴性对照组和空白对照组之间差别无统计学意义(P0.05)。在流式细胞实验中,实验组细胞凋亡率明显高于其他组,差异有统计学意义(P0.05),而阴性对照组和空白对照组差别无统计学意义(P0.05)。结论TNF-α重组慢病毒可以感染SGC-7901胃癌细胞,并在胃癌细胞中稳定表达并自分泌TNF-α,诱导杀伤胃癌细胞。     

大鼠精索静脉曲张模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及其IL-1和NO含量的变化

目的:研究大鼠左侧精索静脉曲张(VC)模型及其高位结扎术后睾丸生精细胞凋亡及白细胞介素-1(IL-1)和一氧化氮(NO)含量的变化。方法:选用雄性SD大鼠60只,均选择左侧精索静脉作为研究对象,建立VC模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(SO)15只,VC后高位结扎组(VCT)组15只和VC模型对照组30只。模型对照组中随机选取15只大鼠作为VC1组,余下15只大鼠作为VC2组,分别测定VC1组和SO组、VC2组和VCT组大鼠精液质量及睾丸组织中IL-1和NO的含量并加以比较,采用TUNEL检测睾丸生精细胞凋亡情况。结果:所有大鼠均建模成功,VC1组精子浓度[(1.54±1.16)×10~6/ml]和精子活力[(44.23±15.46)%]均显著低于SO组[2.80±1.62)×10~6/ml、(72.34±12.62)%](P0.05),VCT组精子浓度[1.82±1.34)×10~6/ml]和精子活力[(51.21±12.62)%]较VC2组有显著提高[(1.04±1.21)×10~6/ml、(39.23±13.21)%](P0.05)。大鼠左侧睾丸NO[(0.172±0.030)ng/ml]、IL-1[(1.468±0.080)mg/ml]含量VC1组明显高于SO组[(0.134±0.021)ng/ml、(0.782±0.079)mg/ml](P0.05),VC2组左侧睾丸NO[(0.198±0.020)ng/ml]、IL-1[(1.994±0.090)mg/ml]含量明显高于VCT组[(0.141±0.010)ng/ml、(0.781±0.036)mg/ml](P0.05),而右侧睾丸2组比较差异无显著性(P0.05),而且NO与IL-1含量之间呈正相关关系(r=0.492,P0.01)。VC1组大鼠双侧睾丸生精细胞大量凋亡,左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05),SO组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01);VCT组大鼠左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数差异有统计学意义(P0.05);VC2组左、右侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05);2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。VC2组、VCT组组内同侧睾丸生精细胞凋亡指数无明显差异(P0.05),但VC2组、VCT组2组间同侧睾丸生精细胞凋亡指数差异显著,均有统计学意义(P0.01)。结论:VC致睾丸组织中NO和IL-1含量升高,并加重睾丸生精细胞凋亡,可能是其致睾丸损伤、影响睾丸生精功能障碍的原因之一。     

解脲支原体感染对大鼠生精细胞线粒体核糖体蛋白S22的影响及知柏地黄汤的干预作用

目的:观察解脲支原体(UU)感染对大鼠睾丸生精细胞线粒体核糖体蛋白S22(MRPS22)表达的影响及知柏地黄汤的干预作用。方法:UU感染SD雄性大鼠模型45只,随机分成模型组、知柏地黄汤组、西药组,并以健康大鼠为对照组,每组15只。造模成功后第10天起知柏地黄汤组予以知柏地黄汤灌胃[1 g/(k·d)],西药组予以阿奇霉素灌胃[0.105 g/(k·d)],对照组、模型组予以同体积生理盐水灌胃,连续灌胃21 d。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡,电镜观察生精细胞线粒体结构,流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),RT-PCR检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA表达,Western印迹检测大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达。观察各组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数(AI)、生精细胞线粒体结构、MMP、生精细胞MRPS22 m RNA和蛋白表达情况。结果:模型组大鼠睾丸生精细胞AI[(11.23±1.65)%]显著高于知柏地黄汤组[(6.62±0.49)%]和西药组[(7.82±0.81)%](P 0. 01),知柏地黄汤组显著低于西药组(P 0.05)。知柏地黄汤组及西药组大鼠睾丸线粒体结构较模型组显著改善。模型组大鼠睾丸生精细胞MMP水平[(8. 77±1. 73)%]显著低于对照组[(22. 33±1. 66)%](P 0. 01),知柏地黄汤组[(18. 26±1. 32)%]显著高于模型组(P 0.01)和西药组[(15.91±1.69)%],西药组MMP水平显著高于模型组(P 0. 01)。模型组MRPS22 m RNA表达(8.02±3.21)与对照组(15.43±2.54)、知柏地黄汤组(11. 26±3. 82)相比均具有显著性差异(P 0. 01),知柏地黄汤组MRPS22 m RNA表达显著高于西药组(8. 79±2. 03)(P 0. 01)。模型组(22. 65±5. 31) MRPS22蛋白表达与对照组(33.31±7.09)、知柏地黄汤组(33.35±3.96)和西药组(28.11±4.13)相比均具有显著性差异(P 0. 01),知柏地黄汤组显著高于西药组(P 0.01)。大鼠睾丸生精细胞MRPS22蛋白表达量与MMP呈显著正相关(r=0.639,P 0.01)。结论:UU感染可能通过抑制大鼠睾丸生精细胞MRPS 22 m RNA及蛋白表达,降低MMP,引起生精细胞的凋亡。知柏地黄汤通过改善UU感染大鼠睾丸生精细胞MRPS22 m RNA及蛋白表达,提高MMP,减轻大鼠睾丸生精细胞凋亡。     

Faculty of Anaesthetists of the Royal College of Surgeons of Ireland

The Faculty of Anaesthetists of the Royal College of Surgeons of England, 35–43 Lincoln's Inn Fields, London WC2A 3PN. Telephone: 01-405 3474.     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。