临床分离气单胞菌耐药性及毒力基因检测

摘要 目的 〖HT5"SS〗了解医院临床分离气单胞菌的耐药现状及毒力基因分布情况,为临床合理用药和治疗提供依据。方法 采用药敏试验和基因检测技术,对某医院临床分离的气单胞菌耐药性及其毒力基因进行检测与分析。结果 该医院从临床病原学标本中共检出气单胞菌86株,以嗜水气单胞菌和豚鼠气单胞菌为主,构成比分别为41.86%和34.88%。此两种气单胞菌对头孢呋辛和头孢曲松的耐药率均接近甚至超过50%,未发现对呋喃妥因、替加环素和碳青霉烯类耐药菌株。从临床分离的气单胞菌中共检测出5种毒力基因型,有50%的嗜水气单胞菌至少携带一种以上的毒力基因。结论 该医院临床分离的气单胞菌对部分抗生素有较高耐药率,毒力基因型复杂,应重视气单胞菌耐药性监测。     

临床分离气单胞菌喹诺酮类的耐药机制研究

摘要:目的探讨临床分 离气单胞菌属细茵(Aeromonas spp. )喹诺酮类药物耐药机制。方法收集从北京友谊医院2017年腹泻患者粪便标本中分离的气单胞菌,采用微量肉汤稀释法检测其对喹诺酮类药物的敏感性,提取菌株核酸进行PCR扩增,测序分析气单胞茵喹诺酮耐药决定区(quinolone-resistancedeter mining region, QRDR)及喹诺酮耐药质粒相关( plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因。结果共收集 111株气单胞菌,其中7株(6.3%)对萘啶酸(NAL)和环丙沙星(CIP )均耐药,54株(48.6%)对NAL耐药但对CIP敏感,50株(45.0%)对NAL和CIP均敏感。QRDR测序结果显示,NAL耐药菌株gyrA基因第83位发生丝氨酸(Ser)突变,突变为异亮氨酸(le)、缬氨酸(Val)或酪氨酸(Tyr)。对NAL-CIP耐药的菌株中,除了 gyrA基因突变外,parC基因第87位Ser突变为Ile。 CIP 敏感的104株菌株中,仅有7株parC基因第87位Ser突变。PMQR基因检测结果显示,QnrS基因检出率为7.2%(8株) ,aac(6'')-lb-cr 基因检出率为6.3%(7株),且QnrS和aac(6'' )-1b-cr基因检出 主要集中在CIP耐药菌株中,CIP耐药菌株PMQR基因检出率为85.7%。结论气单胞菌喹诺酮低水平耐药主要与 gyrA基因第第83位突变或QnurS基因有关。gyrA基因第83位突变和parC基因第87位突变Ser87lle联合PMQR基因存在时,可能与气单胞茵对喹诺酮的高水平耐药相关。     

气单胞菌不同种的流行及耐药性

目的：加强对气单胞菌感染的认识，我们分析了141株气单胞菌不同种感染的分布特点、对抗菌药物的耐药率及不同种耐药率的比较．为临床估计病情及选择抗菌药物提供客观依据。方法：有感染的临床表现者标本常规进行培养、分离和鉴定，同时用纸片扩散法及琼脂稀释法测定了气单胞菌对常用抗菌药物的敏感性。结果：气单胞菌的构成占肠道外分离菌的6．9％．占肠道感染菌的3．2％。气单胞菌主要来源于血液，其次为粪便和腹水。141株气单胞菌，包括嗜水气单胞菌54株(38．3％)、温和气单胞菌53株(37．6％)、豚鼠气单胞菌19株(13．5％)及简氏气单胞菌和杀鲑气单胞菌等其他气单胞菌15株(10．6)。主要发生夏秋季．71．6％产生β-溶血素。气单胞菌对抗菌药物的耐药，以氨苄西林最严重为78．3％，其次为头孢唑林48．0％、复方磺胺甲噁唑28．8％和头孢美唑30．5％，对亚胺培南及第三代头孢菌素也有一定程度的耐药。肠道感染的气单胞菌虽然均为院外感染，但除对氯霉素、磷霉素及左氧氟沙星外的其他抗菌药的耐药率均在10％以上。气单胞菌3个种的耐药率比较，无明显差别。结论：气单胞菌感染以嗜水气单胞菌及温和气单胞菌为主．易发生于夏秋季节，致病性强．对抗生素的耐药较普遍，气单胞菌3个种的耐药率比较多无明显差别。临床医师应根据药敏试验结果选用抗菌药物。     

气单胞菌耐消毒剂基因的研究

[目的]研究临床感染气单胞菌的耐药性及耐消毒剂及磺胺药基因的存在状况。[方法]选择分离自肝病患者及腹泻患者的耐药气单胞菌19株，PCR及琼脂糖凝胶电泳法检测了耐消毒剂及磺胺药基因（qacE△l-sull）。[结果]19株气单胞菌90％为多重耐药，以氨苄西林、头孢美唑、复方磺胺甲嗯唑及头孢唑林的耐药率最高，均在60％以上，未发现耐亚胺培南者。19株多重耐药气单胞菌中qacE△l-sull的阳性率为36．8％，包括3株嗜水气单胞菌，2侏豚鼠气单胞菌，温和气单胞蔺和维隆气单胞菌各1株。[结论]我围首次检测到气单胞菌中的qacE△l-sull基因，而且携带率辅高，需引起医院高度重视。     

rpoD和gyrA基因对气单胞菌鉴定的比较分析

目的 使用rpoD和gyrA基因对气单胞菌进行种水平的鉴定,比较两者分类结果的差异,同时对本研究中187株气单胞菌进行较为准确的种水平的分类。方法 对生化鉴定的187株气单胞菌进行rpoD和gyrA基因聚合酶链反应扩增并测序,将序列与种特异的参考序列一起构建系统发育树。结果 187株菌经rpoD基因鉴定为7个种,经gyrA基因鉴定为9个种,还有一个未定种。两者鉴定最多的3个种一致,即维氏气单胞菌温和生物变种、豚鼠气单胞菌和水族馆气单胞菌。gyrA基因鉴定增加的2个种是异嗜糖气单胞菌和简氏气单胞菌。rpoD和gyrA基因对气单胞菌鉴定一致的有174株(93%),但有13株菌(7%)两者鉴定不一致。结论 rpoD和gyrA基因能够对大部分气单胞菌进行准确一致的分类,对于两者鉴定不一致的菌株,应增加管家基因进行分析。     

用gyrB、rpoD基因扩增测序进行气单胞菌分类的探讨

目的获得气单胞菌更准确的分类结果。方法收集经Vitek全自动细菌分析仪及配套的GN鉴定卡鉴定为气单胞菌的菌株231株,对其gyr B、rpo D两个管家基因进行PCR扩增及测序,并与Gen Bank中标准序列进行基因序列比对和单核苷酸替代率分析,综合分析gyr B、rpo D两基因测序结果并进行基因分类。结果 231株气单胞菌中,69株(29.9%)gyr B和rpo D基因均获得测序结果,86株(37.2%)仅获得gyr B序列,50株(21.6%)仅获得rpo D序列,26株(11.3%)两种基因均未获得序列。生化表型鉴定为嗜水气单胞菌的菌株中62.7%基因分类结果为达卡气单胞菌,仅22.4%为嗜水气单胞菌,其种间生化反应结果相近。结论气单胞菌属的生化分类与基因分类结果存在差异。达卡气单胞菌与嗜水气单胞菌的鉴定依赖于基因序列分析。     

气单胞菌研究概况

气单胞菌在自然界分布广泛,除引发鱼类疫病外也可导致人体不同部位的感染,东南亚国家是腹泻病相对高发的地区,对肝胆外科术后病例有较高的机会性感染和疾病负担;全球耐药特征呈上升趋势,多重耐药（MDR）和超广谱-内酰胺酶（ESBLs）菌株与水产养殖业的抗生素过度使用后环境污染有关;不同地域气单胞菌的毒力因子存在差异。有关部门应制定措施控制水源、食品与养殖环境,降低肠道和非肠道感染的疾病负担。     

肠外感染气单胞菌的临床分布与毒力基因分析

摘要 目的 了解肠外感染气单胞菌的分布和来源,并分析其毒力基因,为防控感染提供依据。方法 采用病原菌分离培养和基因测定技术,对某医院临床送检病原学标本进行检测与分析。结果 本次共收集50株气单胞菌,其中以嗜水气单胞菌为主,其次是豚鼠气单胞菌,分别占52%和32%。标本来源以尿液和胆汁分居前2位,构成比分别为44%和38%。标本采集科室主要是神经内科重症监护室(NICU)和肝胆外科。检出1种或1种以上毒力基因的菌株占检出总数的98%,有3株气单胞菌所含11种毒力基因全部都有检出,同时检出9种毒力基因的菌株占26%。结论 肠外感染的气单胞菌有较大的致病力,不同来源、不同种型的气单胞菌毒力基因存在差异,应加强监测和实时控制。     

420例腹泻患者检出气单胞菌的分析与探讨

目的：研究腹泻患者粪便气单胞菌的流行趋势、药敏实验等。方法：1993年8月到2000年8月，我院消化科与小儿科肠道门诊收治420例腹泻患者，在粪便中分离出气单胞菌，并进行药敏实验。结果：从93年8月2000年8年间，气单胞菌引发的腹泻疾病逐年增加；检出气单胞菌共57例，其中嗜水气单胞菌（A.hydrophila,Ah）检出30例占52.63％，温和气单胞菌（A.sobria,As）21例占36.84％，豚鼠气单胞菌（A.caviae,Ac）6例占10.53％；57株受试菌株对氟哌酸敏感率为100％（57/57），头孢哌酮敏感率为78.94（45/57）。结论：从1993年开始观察到2000的，八年间本菌每年都在增加而且是持续升高，虽未引起大的流行，但可显示出气单胞菌在兰州地区腹泻患者中已成为腹泻的病原菌之一。     

从携带多种耐药基因认识鲍曼不动杆菌多重耐药性

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药基因和耐药性。方法用MIC法检测鲍曼不动杆菌的耐药性,用PCR方法检测各种耐药基因。结果2株菌对亚胺培南耐药,1株中介;所测菌均呈多重耐药性。23株菌均扩增到blaTEM和aacA4基因;22株菌检测到ampC基因,22株菌aacC1、aadA1基因为阳性,2株菌aphA1基因为阳性;2株菌blaPER基因为阳性,3株菌blaOXA-23型基因阳性。结论携带am-pC、blaPER、blaOXA-23、aacA4、aadA1等多种耐药基因是我院鲍曼不动杆菌多重耐药的主要原因。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应（PCR）对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均〉50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ和aac（3）-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac（3）-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

多药耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因分析

目的探讨临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌耐药性及相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,VITEK 2全自动微生物鉴定及药敏系统对其进行重新鉴定,聚合酶链反应（PCR）扩增oprD2、金属酶基因、氨基糖苷类酶修饰基因。结果 40株铜绿假单胞菌对临床常用的抗生素：厄它培南,亚胺培南（IPM）、头孢他啶（CAZ）、美罗培南、头孢吡肟（PEP）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、环丙沙星、氨曲南（ATM）、庆大霉素（GEN）、妥布霉素、阿米卡星、多粘菌素耐药率分别为100%、96.2%、92.0%、90.1%、84.8%、83.9%、83.1%、73.7%、65.1%、60.6%、58.0%、0%。PCR结果显示oprD2缺失率65.0%,整合子阳性率22.5%,发现金属酶基因IMP-1株,氨基糖苷类修饰酶基因ant3Ⅰ、aac6Ⅱ、aac6Ⅰ、ant2Ⅰ基因阳性率分别为36.0%、35.1%、26.2%,20.1%,同时携带2种或2种以上耐药基因占55.0%,携带2种以上氨基糖苷类修饰基因的有40.0%。结论多重耐药铜绿假单胞菌耐药性高,携带多种氨基糖苷类修饰酶基因,外膜孔蛋白oprD2缺失在多药耐药铜绿假单胞很常见,另外携带多种耐药基因盒的整合子的存在也是细菌耐药的常见原因,应引起高度重视。     

广州地区多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因的研究

目的探讨广州地区临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌相关耐药基因。方法采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)对多重耐药铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶相关基因和氨基糖苷类修饰酶基因检测,并对耐药基因进行测序。结果38株铜绿假单胞菌对多黏菌素B耐药率是0%,对其余抗菌药物耐药率均>50%,氨基糖苷类修饰酶基因ant(2″)-Ⅰ、ant(3″)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅰ、aac(6′)-Ⅱ和aac(3)-Ⅱ基因阳性率分别为21.1%、39.5%、28.9%、31.6%和21.1%,未检出aac(3)-Ⅰ基因;β-内酰胺酶基因OXA-10、TEM-1、DHA-1、PER-1和IMP-1基因阳性率分别为42.1%、18.4%、10.5%、7.9%和31.6%,未检出CTX-M-9基因和VIM基因;另外OprD2基因缺失率达60.5%。结论广州地区多重耐药的铜绿假单胞菌携带多种β-内酰胺酶和氨基糖苷类修饰酶基因,应引起高度重视。     

肠道内、外感染气单胞菌的菌种分布特征及毒力基因分析

目的了解肠道内、外分离气单胞菌菌种分布及毒力基因谱的差异,探究该菌致病性与感染部位的关系。方法收集2013年5月至2015年9月急性腹泻患者及肠道外标本来源的气单胞菌156株,采用PCR方法检测其18种毒力基因hlyA、aerA、act、alt、ast、aexT、ascV、aopP、asc F-G、gcat、tapA、fla、Ser、exu、ahyB、epr CAI、lip、laf,并统计分析肠道内、外来源气单胞菌毒力基因谱的差异。结果 156株气单胞菌中肠道内气单胞菌79株,以豚鼠气单胞菌为主(51.9%);肠道外气单胞菌77株,主要为嗜水气单胞菌(48.1%)和豚鼠气单胞菌(39.0%)。gcat、act、fla、ahyB、exu、lip基因在肠道内、外气单胞菌中的检出率较高(45.57%),而aexT、aopP、asc F-G、ascV则较低(20.78%);gcat、ahyB、laf、ast、exu、lip、hlyA、aerA在肠道内气单胞菌中的检出率显著低于肠道外(P0.05);嗜水气单胞菌gcat、ahyB、exu、lip、epr CAI、hlyA在肠道外的检出率显著高于肠道内(P0.05);豚鼠气单胞菌lip、hlyA在肠道外的检出率显著高于肠道内(P0.05),而aopP反之;维氏气单胞菌毒力基因在肠道内、外的检出率差异无统计学意义。结论肠道内、外气单胞菌感染的菌种分布及携带的毒力基因谱存在差异,临床需区别对待。     

产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌相关耐药基因研究

目的了解常州地区肺炎克雷伯菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因。方法用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度（MIC）。采用聚合酶链反应（PCR）检测产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌16种相关耐药基因,并用DNA测序仪测序。结果120株肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率为44．2％（53株）。从53株肺炎克雷伯菌中检出TEM、SHV、CTX—M-1群、CTX—M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75．5％、22．6％、18．9％、7．5％、11．3％、5．7％、3．8％和41．5％,其中2株菌同时检出6种B-内酰胺酶基因。基因测序证实为TEM-1、TEM-11、SHV-13、SHV．28、CTX—M-22、CTX—M-55、OXA-1和OKP-6等。结论本地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,是其对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一。     

婴幼儿感染猪霍乱沙门菌耐药基因特点及同源性分析

目的研究致婴幼儿败血症猪霍乱沙门菌的耐药基因特点及同源性。方法16株猪霍乱沙门菌．采用K—B纸片扩散法检测抗菌药物的耐药性,同时用PCR法及DNA测序法对其进行β-内酰胺酶类耐药基因检测;PFGE法测定同源性。结果对氨苄西林耐药的13株猪霍乱沙门菌经PCR扩增后并测序为bl岫。16株猪霍乱沙门菌经PFGE分型,可分为5个PFGE型,其中A型是最主要的克隆（12／16）。13株blTEM-1．基因阳性菌株分别为A型11株,B型1株,D型1株。结论产TEM-1割β-内酰胺酶是本地区猪霍乱沙门菌对氨苄西林耐药的主要机制,PFGE分型方法对猪霍乱沙门菌分型能力较好。克隆性传播为猪霍乱沙门菌的主要传播途径．同一PFGE型菌株的耐药谱非常接近。     

产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌相关耐药基因研究

目的了解常州地区肺炎克雷伯菌耐药状况及β-内酰胺类耐药基因。方法用琼脂稀释法检测氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林-他唑巴坦、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南和亚胺培南对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)。采用聚合酶链反应(PCR)检测产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌16种相关耐药基因,并用DNA测序仪测序。结果120株肺炎克雷伯菌ESBLs阳性率为44.2%(53株)。从53株肺炎克雷伯菌中检出TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-9群、OXA-1群、LEN、OKP和DHA 8种β-内酰胺酶基因,阳性率分别为75.5%、22.6%、18.9%、7.5%、11.3%、5.7%、3.8%和41.5%,其中2株菌同时检出6种β-内酰胺酶基因。基因测序证实为TEM-1、TEM-11、SHV-13、SHV-28、CTX-M-22、CTX-M-55、OXA-1和OKP-6等。结论本地区肺炎克雷伯菌已携带多种β-内酰胺酶耐药基因,是其对β-内酰胺类抗菌药物耐药的重要原因之一。     

Prevalence of antimicrobial resistant genes in Bacteroides spp. isolated in Oita Prefecture,Japan

IntroductionBacteroides spp. are the most common anaerobic bacteria isolated from the human gastrointestinal tract. Several resistant genes are present in Bacteroides spp. However, most studies have focused on the prevalence of the c?A gene in Bacteroides fragilis alone. We assessed the susceptibility to antimicrobial agents and the prevalence of cepA, cfiA, cfxA, ermF, nim, and tetQ genes in Bacteroides strains isolated from clinical specimens in our hospital.MethodsWe isolated 86 B. fragilis and 58 non-fragilis Bacteroides strains from human clinical specimens collected from January 2011 to November 2021. Resistance against piperacillin (PIPC), cefotaxime (CTX), cefepime (CFPM), meropenem (MEPM), clindamycin, and minocycline was determined.ResultsThe resistant rates of penicillins and cephalosporins in non-fragilis isolates were significantly higher than those in B. fragilis isolates. In B. fragilis isolates, the resistant rates of PIPC, CTX, and CFPM in cfxA-positive isolates were significantly higher than those in cfxA-negative isolates (71% vs. 16%, 77% vs. 19%, and 77% vs. 30%, respectively). Thirteen B. fragilis isolates harbored the cfiA gene, two of which were resistant to MEPM. Six of the 13 cfiA-positive B. fragilis isolates were heterogeneously resistant to MEPM.ConclusionIt is important to evaluate the use of MEPM as empirical therapy for Bacteroides spp. infections, considering the emergence of carbapenem resistance during treatment, existence of MEPM-resistant strains, and heterogeneous resistance.