CCl_4联合苯巴比妥和乙醇建立大鼠肝硬化腹水模型的研究

目的:应用四氯化碳(CCl_4)联合苯巴比妥和乙醇的方法建立大鼠肝硬化腹水模型,为肝硬化腹水治疗和药物研究提供可靠的动物模型。方法:将50只雄性Wistar大鼠随机分为5组,每组10只。正常对照组(A组),腹腔注射橄榄油2 ml/kg,4 d/次,正常饮水;模型CCl_4组(B组)、CCl_4+苯巴比妥组(C组)、CCl_4+乙醇组(D组)、CCl_4+苯巴比妥及乙醇组(E组),腹腔注射40%CCl_4橄榄油混合液2 ml/kg,4 d/次,给予不同饮用水处理。建模结束后,测量各组腹围、腹腔积液量、门静脉压力并取肝脏组织病理学检查。结果:第8周时,E组大鼠开始出现腹水阳性体征,个别达到建模标准;第9周时,C组和D组均有腹水阳性体征;B组到第10周时才开始出现腹水阳性体征。与A对照组相比,各模型组体质量、腹围、腹腔积液量等指标变化差异均具有统计学意义(P<0.05)。各模型组死亡率分别为40%、30%、30%和20%,成模率分别是60%、70%、70%和80%。各模型组大鼠的肝脏病理学检查均见肝细胞结节状再生,假小叶形成等典型的肝硬化特征。结论:CCl_4联合苯巴比妥和乙醇诱导大鼠肝硬化腹水动物模型较单纯CCl_4的方法可有效缩短建模周期,减少动物死亡率,提高实验动物的成模率。     

复合因素法致大鼠肝纤维化模型的建立

目的探讨一种新的制备肝纤维化动物模型的方法,为下一步研究肝纤维化发生机制、治疗方案提供稳定、可靠的动物模型。方法将80只雄性Wistar大鼠随机分成两组,对照组腹腔内注射橄榄油2 mL/kg,2次/周,并给予普通饮水及饲料。模型组采用腹腔注射猪血清+四氯化碳(CCl4)+高脂低蛋白饲料(10%猪油、2%胆固醇)+普通饲料+乙醇进行诱导。共8周,实验结束进行肝功能生化指标测定及病理学观察并加以评估。结果模型组70只,造模结束时死亡10只,死亡率14.3%。血清ALT、AST、ALP、GGT和Hyp与正常对照组有显著性差异(P<0.01),病理切片均可看到明显的肝纤维化形成,造模成功60只,成模率85.7%。对照组10只全存活。结论该方法可成功建立肝纤维化模型,为实验研究应用。     

不同浓度四氯化碳复合法诱导家兔肝纤维化模型的建立

目的 寻找到适宜做影像学和血清学研究的动物家兔肝纤维化模型建市方法.方法 分别用体积比为5%四氯化碳(CCl4)油溶液和纯CCl4,按0.1 ml/kg剂量每周1次腹腔注射,并辅以5%浓度的乙醇作为饮水,诱导家兔肝纤维化形成,并于注射后6、8、10、12周分组处夕匕家兔取其肝脏进行病理学检查.结果 家兔的死亡多发生在4周之内,6周之后趋于稳定.5%CCl4浓度组家兔死亡率为60%,纯CCl4组死亡率为25%.结论 长期给予CCl4可导致家兔的肝纤维化形成,采用腹腔注射纯CCI4,同时辅以5%浓度的乙醇作为饮水的复合法造模,家兔死亡率低,成模率高.     

干扰素-α对CCl4诱导的大鼠肝纤维化疗效研究

目的:观察干扰素-α (interferon α,IFN-α)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗效果,并探讨其可能的机制.方法:45只Wistar大鼠随机分为正常组(n=15)、模型组(n=15)、IFN-α治疗组(n=15).正常组大鼠予以橄榄油2 mL/kg腹腔注射,每周注射2次,共8周;模型组及IFN...     

当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水大鼠电解质的影响

目的观察当归芍药散及其拆方对肝硬化腹水大鼠电解质紊乱的纠正作用。方法将雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,甘利欣组,当归芍药散低、中、高剂量组,拆方活血药组和利水药组。采用苯巴比妥联合四氯化碳腹腔注射复制肝硬化腹水大鼠模型,用代谢笼收集大鼠24h尿液,采用冰点法测定大鼠尿渗透压,采用全自动生化分析仪检测大鼠血清及尿K+、Na+、Cl-浓度。结果与模型组比较,当归芍药散各剂量组大鼠尿渗透压显著降低(P<0.05),血清K+、Na+、Cl-水平显著升高(P<0.05),尿K+、Na+水平显著降低(P<0.05);当归芍药散各剂量组与甘利欣组、活血药组、利水药组血清和尿电解质水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论当归芍药散可纠正肝硬化腹水大鼠电解质紊乱,无明显剂量依赖性,全方和拆方的效应无明显差异。     

四氯化碳联合D-氨基半乳糖、脂多糖诱导慢加急性肝衰竭模型的建立

目的 建立小鼠慢性、慢加急性肝衰竭模型.方法 36只BAIB/C小鼠随机分为4组.实验8周组、12周组、急性攻击组(每组8只)给予腹腔注射20%四氯化碳(CCl4)油溶液,连续注射8周、12周、12周.12周时,急性攻击组再腹腔联合注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS);对照组(12只)注射橄榄油12周.给...     

犬肝硬化动物模型中饮食调控的研究

目的 :研究饮食因素在建立肝硬化模型中的作用。方法 :犬 2 5只 ,以四氯化碳腹腔注射 (CCl4 0 12mL/kg) ,每周注药 2次 ,并分 5组。A组 :普通饮食 ,量不限 ;B组 :限米饭 15 g/kg·d-1;C组 :B组条件加 10 %猪油喂养 ;D组 :C组条件加 10 %乙醇水饮用。E组 :限米饭 10 g/kg·d-1;加 15 %猪油喂养 ;10 %乙醇水饮用 ;结果 :D组 8周可制成肝硬化 ,形成率 75 % ,死亡率 2 0 %。结论 :腹腔注射四氯化碳、在饮食调节下 ,8周可制成肝硬化模型     

扶正化瘀方干预肝硬化大鼠血浆蛋白质组的初步研究

目的利用蛋白质组技术比较CCl4诱导肝硬化大鼠血浆蛋白质变化并研究扶正化瘀方对肝硬化大鼠血浆蛋白质的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予CCl4（CCl4／橄榄油：1体积比=1：1）腹腔注射、CCl4腹腔注射＋扶正化瘀方灌胃、橄榄油腹腔注射,8周后通过Masson三色染色法用图像分析仪自动分析肝脏胶原面积。应用双向凝胶电泳技术经银染显色和PDQuest7．3软件分析凝胶图像,对在三组中表达均有差异的蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间串连质谱进行鉴定。结果扶正化瘀方干预组肝纤维化程度明显轻于模型组,胶原纤维面积在肝内沉积少（8．9％±3．7％ vs 12．4％±4．7％,P〈0．05）。实验去除血浆中的高丰度蛋白质可获得重复性较好的血浆蛋白质图谱。实验共鉴定出10个明显差异表达的蛋白质。在这些蛋白质中,血浆谷胱甘肽过氧化物酶及其前体、前白蛋白、结合珠蛋白、载脂蛋白A-IV前体、补体4,α抑制剂重链4和微管相关调节激酶1在肝硬化大鼠血浆中表达减少,扶正化瘀方干预组表达增加,肝脏再生相关蛋白和波形纤维蛋白在肝硬化大鼠血浆中表达增加,扶正化瘀方干预组表达减少。结论CCl4诱导肝硬化大鼠血浆中与氧化应激、细胞增值和转化相关蛋白质表达明显改变。扶正化瘀方可通过促进蛋白质合成、抗氧化、调控细胞增值和转化等多方面发挥抗纤维化的作用。     

棉皮素在四氯化碳诱导的既存肝纤维化小鼠中的作用研究

目的 探讨天然类黄酮棉皮素对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型小鼠的作用。方法 将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl4组和CCl4+棉皮素组,每组6只。除对照组外,其余两组均采用20%CCl4橄榄油溶液(0.75 μL/g, 2次/周,持续6周)腹腔注射,建立肝纤维化模型。CCl4+棉皮素组于造模第6周开始每天腹腔注射棉皮素(10 mg/kg)进行干预,对照组与CCl4组小鼠同一时间注射等体积的PBS溶液。末次给药24 h内,3组均取新鲜肝脏组织,并灌注固定制备石蜡切片;采用HE染色与Masson染色观察3组肝脏组织病理改变;免疫组化染色检测3组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase3)的表达情况;同时采用蛋白质印迹技术检测α-SMA表达情况。结果 与对照组相比,CCl4组肝脏结构破坏,胶原纤维明显增生,形成纤维间隔,α-SMA、Caspase3、Cleaved Caspase3的蛋白表达水平升高(P<0.05),CCl4+棉皮素组胶原纤维沉积减少,α-SMA、Caspase3的蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论 天然类黄酮棉皮素可减少CCl4诱导的肝纤维化模型小鼠胶原纤维沉积、肝星状细胞激活和细胞凋亡,对肝脏起保护作用。     

四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型改良的研究

目的构建肝纤维化大鼠模型,并对经典四氯化碳(CCl4)复制模型方法进行适当改进。方法取Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,雌雄各半,按随机数字表法分为A组10只、B组14只和C组16只。B组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液2 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养(改良方法);A组为正常对照组,给予等量花生油腹腔注射,2次.周-1,同时给予普通全价饲料喂养;C组给予大鼠腹腔注射40%CCl4花生油溶液5 mL.kg-1,2次.周-1,同时给予添加10%猪油及2%胆固醇的饲料喂养(经典方法)。实验第8周末处死各组剩余大鼠:采用酶联免疫吸附法检测血清肝功能(ALT、AST、ALB、TP、A/G)水平;HE及Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化。结果实验第8周B、C组均可见明显肝功能损害表现。B组可见部分标本肝脏假小叶形成,达到早期肝硬化,肝细胞少量脂肪变性,死亡率28.6%。C组均已形成明显肝硬化,弥漫性肝细胞脂肪变性,死亡率43.7%。结论低剂量CCl4诱导并给予普通饲料喂养可成功建立大鼠肝纤维化模型,并明显降低大鼠死亡率,提高了模型质量及实验效率。     

微生物酵素对慢性肝衰竭大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的 通过动物实验的方法,观察微生物酵素对慢性肝衰竭大鼠肠黏膜屏障及免疫功能的影响.方法 雄性SD大鼠正常组5只,微生物酵素组20只,实验对照组20只.通过CCl4法建立慢性肝衰竭模型.微生物酵素组大鼠给予微生物酵素灌胃进行干预.观察各组大鼠生存时间、肝功能、D-乳酸、DAO、IEL及PP淋巴细胞T细胞及其亚群的表达...     

脐带血干细胞移植对失代偿性肝硬化大鼠模型的治疗作用

目的探索人脐带血干细胞(umbilical cord blood stem cells,UCBSCs)经尾静脉移植后,对失代偿性肝硬化大鼠的治疗作用。方法腹腔注射CCl4加酒精溶液法制备失代偿性肝硬化大鼠模型,随机分为实验组和对照组,每组10只,分别从大鼠尾静脉注射UCBSCs和DMEM/F-12,治疗后每周分别取血测定肝功能和肝纤维化指标,4周后处死所有大鼠。所有死亡的大鼠肝脏组织切片进行HE和Masson染色,检测大鼠肝细胞组织损伤和纤维化情况。观察并记录各组大鼠的生存状态及生存时间。结果实验组大鼠治疗后ALT的含量逐周下降且每周均低于对照组(P<0.05),而且PCⅢ有统计学差异(P<0.05)。大鼠治疗后肝脏切片HE和Masson染色显示,实验组病理组织分级评分低于对照组(P<0.05)。对两组大鼠进行生存分析发现,实验组与对照组的大鼠的生存率无统计学差异(P=0.259)。结论 UCBSCs移植可以改善失代偿性肝硬化大鼠的肝功能,为失代偿性肝硬化的治疗提供了一种有效的途径。     

下瘀血汤对四氯化碳诱导的肝硬化大鼠肝脏血管新生的抑制作用

目的：探讨下瘀血汤对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的大鼠肝硬化形成过程中肝脏血管新生的影响。方法：采用50%CCl4-橄榄油溶液1mL/kg剂量腹腔注射,每周2次,共9周,制备大鼠肝硬化模型。造模3周和6周后,随机抽取正常及模型大鼠各6只,处死作动态观察,其余模型大鼠随机分为模型对照组（15只）和下瘀血汤组（11只）,同龄正常大鼠6只设为正常对照。自第7周开始灌胃给予下瘀血汤干预治疗3周,于第9周末取材,苏木精和伊红染色及天狼星红染色观察肝组织病理学变化,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测肝组织中血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule-1,CD31）、第Ⅷ因子相关抗原（von Willebrandfactor,v WF）的表达,蛋白质印迹法检测肝组织中血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowth factor,VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGF receptor-2,VEGFR2）、补体衰变加速因子（complement decay-accelerating factor,DAF）和α平滑肌肌动蛋白（α-smooth actin,α-SMA）的表达,明胶酶谱法检测肝组织中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和MMP-9的活性。结果：与正常组比较,模型大鼠肝组织受损,脂肪变性显著,胶原纤维沉积严重,随造模时间的推移,肝组织CD31、v WF、VEGF、VEGFR2、DAF和α-SMA蛋白表达逐渐升高,MMP-2、MMP-9活性显著增强（P〈0.01）。与9周模型组比较,下瘀血汤显著改善肝组织损伤、脂肪变性及胶原纤维的沉积,降低肝组织CD31、v WF、VEGF、VEGFR2、DAF和α-SMA蛋白的表达及MMP-2、MMP-9的活性（P〈0.01）。结论：下瘀血汤可有效地抑制CCl4诱导的大鼠肝硬化形成过程中的血管新生,其作用机制主要在于抑制肝星状细胞的活化,下调MMP-2、MMP-9的活性以及消解新生血管的完整性。     

清肝活血方及其拆方对酒精性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物途径的影响

目的：通过观察清肝活血方及其拆方对酒精性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase-type plas-minogen activator,uPA）和纤溶酶原激活物抑制物1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）途经的调控作用,探讨清肝活血方及其拆方治疗酒精性肝纤维化的作用机制。方法：雄性SD大鼠随机分为空白组、四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）组和造模组。造模组采用56度二锅头酒、玉米油、吡唑混合物灌胃联合腹腔注射CCl4橄榄油溶液（CCl4∶橄榄油=1∶3）的方法造模。8周后造模组再随机分为模型组、清肝活血方组、清肝方组及活血方组。各治疗组分别加用相应药物（4.75、1.5、3.25g/kg）灌胃,其他各组灌胃等体积生理盐水。12周末处死大鼠,观察大鼠肝功能变化和肝组织病理学改变;采用蛋白印迹法、实时荧光定量聚合酶链式反应、免疫荧光法检测uPA、PAI-1蛋白和mRNA表达。结果：与空白组比较,CCl4组肝纤维化程度未见明显加重;模型组肝纤维化程度则明显加重（P〈0.01）,血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和门冬氨基氨转移酶（aspartate aminotransferase,AST）活性明显升高,肝组织uPA和PAI-1表达明显升高,并且PAI-1升高幅度高于uPA。与模型组比较,清肝活血方及其拆方均能不同程度地减轻酒精性肝纤维化大鼠肝纤维化程度（P〈0.01）,降低血清ALT和AST活性,显著降低PAI-1表达,提高uPA表达。全方对上述环节的调控优于拆方。结论：清肝活血方及其拆方均能改善酒精性肝纤维化大鼠肝功能,减轻纤维化程度,且全方作用优于拆方,其机制可能与调控uPA/PAI-1纤溶途径有关。     

四氯化碳复合、梯段用药法制备大鼠门脉高压模型的研究

目的探讨构建一种稳定、可靠的门脉高压大鼠模型的制备方法,并研究该模型肝脏病理结构以及血流动力学的改变。方法雄性SD大鼠95只,体重150～170g,按编号法随机分为模型组和对照组。模型组：按0.4mL/100g剂量予以背部皮下注射50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,持续4周。第5周开始改为以0.5mL/100g标准注射,每周2次,持续4周。对照组：仅注射橄榄油,频度及剂量同模型组。结果对照组10只大鼠全部存活。模型组85只大鼠,死亡24只,死亡率28%。存活61只大鼠,肝脏均可观察到纤维组织不同程度地增生,肝小叶结构破坏,假小叶形成,模型成功率100%。模型组门静脉压力和门静脉内径比对照组明显增加（P〈0.05）;血清TB、ALT及AST较正常对照组均明显升高（P〈0.05）,而ALB则明显降低（P〈0.05）。结论该方法所构建的动物模型其组织学改变与人类肝硬变相似,门静脉压力显著增高,是研究门脉高压症的理想模型。     

异甘草酸镁对四氯化碳肝纤维化大鼠肝组织病理改变的影响

目的:探讨异甘草酸镁(magnesium isoglycyrrhizinate,MgIG)早期、晚期干预对四氯化碳( carbon tetrachloride,CCl4)肝纤维化模型大鼠肝组织结构和肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响.方法: 32只3月龄雄性SD大鼠随机分为对照组(10只)、CCl4模型组(10 只)、MgIG早期干预组(6 只,在CCl4造模开始同时即每日腹腔注射MgIG 30 mg/kg)和MgIG晚期干预组(6只,在CCl4造模5周后每日腹腔注射MgIG 30 mg/kg).各组大鼠在造模10周后取材,从每只大鼠肝脏等距随机抽选4个肝组织块制作石蜡包埋切片,行Masson染色和HE染色观察肝组织一般结构和胶原纤维数量和分布的变化;另从每只大鼠肝脏随机抽选5个组织块制作电镜超薄切片,在电镜下观察肝组织超微结构的改变.结果: 与对照组比较, CCl4大鼠肝组织内肝细胞出现明显的脂肪变性、坏死和再生,胶原纤维增生,假小叶形成,HSC体积增大、数量增多;MgIG早期干预或晚期干预对CCl4大鼠肝组织一般结构、超微结构以及HSC的活化增殖均无明显影响.结论: CCl4诱导大鼠肝组织发生肝纤维化或肝硬化的病理改变,可能与HSC的活化、增殖有关;MgIG对CCl4大鼠的肝纤维化病理进展没有明显的抑制或逆转作用.     

The protective effect of vitamin E on gastric mucosal injury in ratswith cirrhosis of the liver

Objective　To evaluate the functional and morphologic features of stomach in liver cirrhosis model and the cytoprotective effects of Vitamin E. Methods　Experimental cirrhosis was induced in rats by subcutaneous administration of 0.4 ml CCl4 (diluted 1∶4 with olive oil) per kilogram of body weight twice a week for 12 weeks. Rats were divided into three groups. Group 1 was control. Group 2 consisted cirrhotic rats induced by CCl4 and Group 3 cirrhotic rats treated with Vitamin E (intramuscularly 100 mg/kg per day during study). At the end of 12 weeks, gastric mucosal injury was produced by instillation of absolute alcohol via an orogastric tube. After 3 hours, each animal was sacrificed. The stomachs were macroscopically, microscopically and biochemically analyzed. Results　Macroscopic and microscopic area of gastric mucosal injury were significantly larger in cirrhotic rats (P&lt;0.05). Gastric mucosal injury was more serious in cirrhotic rats as compared with Group 1. With vitamin E treatment, tissue Malondialdehyde (MDA) and glutathione ［GSH (X)］ levels were significantly lower in group 3 as compared with group 2 (P&lt;0.001). Conclusion　Gastric mucosa in cirrhotic rats has distinctive histological and functional abnormalities. These abnormalities can be reversed by Vitamin E or other antioxidants.     

Effects of spleen on inducing portal hypertension and liver cirrhosis in rats]

The role of spleen on inducing the portal hypertension and cirrhotic rat by carbon tetrachloride (CCl4) and ethyl alcohol was studied. Totally 412 male rats were divided randomly into four groups: group A (n = 42) underwent splenectomy before induction by CCl4; group B (n = 42) underwent splenectomy after induction by CCl4 and alcohol of 4 weeks; group C (n = 42) received sham-splenectomy and group D (n = 14) served as a control group. Free portal pressure (FPP), function of liver, the index of spleen (weight of spleen/weight of body) as well as the spleen and liver biopsy were evaluated at different time. The results showed that, in group C, the index of spleen and the area of splenic white pulp had significant increase. The degree of hepatic damage, the number of the infiltrating cells and the degree of hepatic fibrosis were significantly greater in sham-operated animals than in others (group A and B). These results suggested that the spleen should be an immunomodulatic organ in playing an exacerbation role of hepatic cirrhosis, and the effect of splenectomy be a preventive role against the induced rat liver cirrhosis, at least, at certain stage.     

鸡骨草醇提物对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的影响

目的研究鸡骨草醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的影响。方法复制肝纤维化大鼠模型,随机分成5组:模型组,阳性组(秋水仙碱0.2mg/kg),鸡骨草醇提物低、中、高剂量组(20、40、80mg/kg),并设立正常组。连续灌胃给药30天。检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平和谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性以及肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的表达,采用Masson染色观察肝组织纤维化程度。结果与模型组比较,鸡骨草醇提物组显著降低肝纤维化大鼠血清中AST、ALT水平,提高GSH-Px活力(P<0.05),同时减少肝组织中Hyp含量(P<0.05),并减少大鼠肝脏胶原纤维。结论鸡骨草醇提物对CCl4所致的肝纤维化大鼠具有保护作用。