稽留流产患者绒毛组织中TLR4、NF-κB和HBD2的表达及其相关性

稽留流产是常见的病理性妊娠之一,病因复杂,发病机制尚未完全阐明.生殖免疫学认为,稽留流产是母胎间免疫平衡失调,母体对胎儿产生免疫排斥的结果.Toll样受体4( Toll-like receptor 4,TLR4)是天然免疫系统中一类重要的模式识别受体,研究发现,滋养细胞能够表达TLR4;TLR4通过一系列跨膜信号传导激活核因子κB(NF-κB),引起大量炎症因子的合成和释放,发挥天然免疫和获得性免疫的作用[1-3].研究发现,人β防御素2(human β defensin,HBD2)具有直接杀伤细菌和抗病毒等活性,对维持生殖道微生物环境的稳态及妊娠的成功起关键作用[1].为探明TLR4、NF-κB、HBD2在稽留流产与健康早期妊娠妇女绒毛组织中的表达情况,本研究采用逆转录PCR( RT-PCR)和ELISA方法对其mRNA和蛋白表达水平进行检测,以探讨TLR4、NF-κB和HBD2在稽留流产发病过程中的作用.     

双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达的影响

目的 观察双表法对流感病毒感染小鼠肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达的影响,探讨双表法对流感病毒的防治机制.方法 以流感病毒FM1鼠肺适应株滴鼻感染昆明种小鼠,并用解表法（银翘散）、固表法（玉屏风散）、双表法（玉屏风＋银翘散）、阳性对照药（利巴韦林）干预相应组别小鼠.在感染病毒后5 d采用SABC免疫组织化学染色法检测肺组织TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达情况.结果 正常组和模型组肺组织中均可检测到TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达,但模型组明显高于正常组（P＜0.05）.双表法组TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达最低,与解表法组、固表法组、利巴韦林组比较有显著性差异（P＜0.05）.结论 流感病毒感染小鼠时激活了TLR4-MyD88-NF-κB P65信号通路,双表法能较好的抑制TLR4-MyD88-NF-κB P65蛋白表达,且优于解表法、固表法及利巴韦林.     

LPS-TLR4-NF-κB通路在妊娠期糖尿病、正常孕妇及育龄妇女外周血单核细胞中的表达

目的:研究外周血单核细胞LPS-TLR4-NF-κB通路在妊娠期糖尿病(GDM)、正常孕妇及育龄妇女外周血单核细胞的表达,探讨GDM的发病机制。方法:选取GDM孕妇、正常孕妇以及育龄妇女各20例,抽取外周静脉血5ml,分离单核细胞,用内毒素(LPS)刺激培养,RT-PCR法检测TLR4及NF-κB mRNA的表达,ELISA法检测培养液中IL-1、IL-10、TNF-α水平。结果:3组妇女TLR4、NF-κB mRNA表达的差异有统计学意义(P=0.000)。GDM组及正常孕妇组TLR4与NF-κB mRNA表达水平有良好的相关性(rGDM=0.768,r正常孕妇=0.833)。育龄妇女组TLR4与NF-κB mRNA的表达水平相关性稍差(r育龄妇女=0.719)。3组培养液中IL-1、IL-10、TNF-α水平的差异有统计学意义。结论:GDM孕妇体内TLR4、NF-κB mRNA的大量表达,提示可能LPS-TLR4-NF-κB通路介导了炎症因子释放,参与了GDM的发病。     

Toll样受体2和4表达与原因不明复发性流产

母胎界面的免疫耐受对维持正常妊娠至关重要。Toll样受体2(TLR2)和TLR4是机体重要天然免疫受体分子之一,TLR2识别肽聚糖,TLR4识别内毒素脂多糖。通过信号转导机制引起核因子κB(NF-κB)等转录因子的活化并调节肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素12(IL-12)等的产生。越来越多的证据认为,这些细胞因子与不明原因复发性流产(URSA)Th1/Th2细胞因子失衡密切相关。探讨TLR2和TLR4在胎盘中的表达,及其在URSA中的可能作用。     

Toll样受体4通过调节性T细胞引起不明原因复发性流产的机制研究进展

母-胎界面免疫耐受状态异常是致不明原因复发性流产(URM)的重要原因之一,但其机制目前尚不明确。调节性T(regulatory T,Treg)细胞在维持母-胎界面免疫耐受中发挥重要作用。最新研究发现Toll样受体可能是调节Treg细胞增殖、分化和功能的关键。母-胎界面Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)参与调控Treg细胞抑制活性,参与诱导滋养细胞凋亡和影响Treg/Th17平衡,可影响免疫耐受状态致不明原因复发性流产(URM)发生。本文就蜕膜TLR4调节Treg细胞对URM发生的作用机制作一综述。     

子痫前期母胎界面TLR4作用的研究进展

子痫前期是一种多脏器和系统损害的妊娠并发症,严重危害母儿健康,但子痫前期的病因和发病机制尚未完全阐明。正常妊娠过程中,母胎界面Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)调控炎症免疫微环境稳态;子痫前期过程中,母胎界面TLR4信号异常,不仅介导母胎界面炎症免疫紊乱,还与铁死亡、焦亡、代谢重编程和细胞衰老等新型病理现象密切相关,并可能介导子代神经系统发育异常。此外,靶向母胎界面TLR4可能是子痫前期新药研究的潜在药理机制之一。结合近年相关文献,综述子痫前期母胎界面TLR4的多种可能作用,为子痫前期发病机制和治疗手段的研究提供参考。     

TNF-α在IVF-ET后自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在胚胎早期发育过程中的作用及其与流产的关系.方法应用免疫组织化学标记法(SP法),比较IVF-ET后自然流产(10例,A组)、复发性流产(20例,B组)、人工流产(20例,C组)3组患者早孕绒毛、蜕膜组织中TNF-α的表达情况.结果TNF-α在3组绒毛及蜕膜组织中均有表达,A、B组蜕膜及绒毛组织中表达的平均光密度与C组相比差异有非常显著性(P＜0.01).结论TNF-α调节生殖免疫过程,参与了母-胎间相互作用,TNF-α表达异常,在自然流产发病中起重要作用,是导致自然流产的原因之一.     

CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展

正常妊娠有赖于母体对胚胎半同种抗原的免疫耐受,一旦免疫耐受失衡,将导致免疫排斥、免疫攻击从而导致自然流产,原因不明复发性流产被认为与母胎免疫耐受失衡有关.CD4＋T在同种异体急性排斥反应中发挥重要作用,根据所分泌的细胞因子不同,CD4＋T 细胞分为Th1、Th2、调节性T细胞（Treg）及新近发现的Th17细胞.早期研究发现母体外周血、母胎界面CD4＋T细胞增高与复发性流产密切相关.随免疫耐受机制研究的不断深入,母胎免疫耐受的研究历经Th1/Th2平衡到Treg的免疫负调控作用,再到Th17/Treg平衡.综述CD4＋T细胞在原因不明复发性流产中的研究进展.     

Toll样受体在妊娠期疾病的作用机制

Toll样受体（TLR）作为一种病原体识别受体备受关注,其在固有免疫中能识别病原体相关的分子模式（PAMP）,通过刺激信号的级联反应导致细胞因子的产生和协同刺激因子的表达,从而在天然免疫和获得性免疫中发挥一系列作用.妊娠结局和先天性免疫密切相关,母胎界面特有的滋养细胞、羊膜细胞等也可以通过TLR参与先天性免疫反应,从而影响妊娠结局.综述TLR的结构、信号通路及其与妊娠期疾病的关系.     

早期自然流产胚胎组织中微小病毒B19感染的研究

目的 :应用聚合酶链反应 (PCR)技术检测早、中期自然流产患者胚胎及胎盘等组织中的微小病毒B19,对比分析早期流产的原因。方法 :收集早期自然流产患者的胚胎绒毛组织和母亲血清 ,孕中期自然流产胎儿的胎盘、胎儿组织和母亲血清 ,足月分娩者的胎盘组织及母亲血清 ,应用PCR检测微小病毒B19DNA ,同时检测母血清抗体。结果 :6 1例早期流产胚胎绒毛中 ,3例 (5 % )B19病毒阳性 ;4 5例孕中期胚胎组织中 ,5例 (11% )检测出B19病毒 ;5 0例足月分娩胎盘组织中未检测出B19病毒。早期流产患者血清中特异性抗体IgG检出 31%、IgM阴性 ;检出孕中期母血清B19病毒特异性抗体IgG占 35 %、IgM占 11%。结论 :B19病毒是导致早期流产的原因之一 ,对有自然流产特别是反复自然流产者可采用PCR检测B19病毒     

蛋白质组学应用于早期妊娠流产的研究进展

妊娠过程类似于半同种异体移植,母胎界面的功能失调与早期妊娠流产,如早期自然流产、复发性流产等有关,但具体发病机制仍不十分清楚。蛋白质组学是通过高通量、快速鉴定与定量分析细胞、组织、体液中的所有蛋白质组成、功能及蛋白之间的相互作用的学科,将蛋白质组学应用于早期妊娠流产病理机制研究,发现早期妊娠流产与胎盘滋养细胞的侵袭力不足、母胎界面血管形成异常、氧化应激、母胎界面免疫功能失调、凝血功能异常、肥胖等有关,有利于相关疾病的早期诊断。将蛋白质组学应用于不明原因复发性流产(URSA)的治疗研究,发现淋巴细胞主动免疫疗法可通过调整并恢复患者的免疫状态,从而维持妊娠,改善妊娠结局。综述蛋白质组学及其在早期妊娠流产中的应用。     

Th17及相关细胞因子在妊娠早期母-胎免疫耐受中的作用

目的:研究Th17细胞及相关细胞因子IL-22、IL-23在人孕早期不明原因的自发性流产母-胎免疫耐受中的作用。方法:以10例正常人工流产患者为正常早孕组,收集18例染色体正常自发性流产患者为自然流产组。分离两组患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术检测上述细胞中Th17细胞比例及相关细胞因子的表达,探讨其与自发性流产的关系。结果:自然流产组外周血Th17细胞比例显著高于正常早孕组(P<0.05),IL-23显著低于正常早孕组(P<0.01),但两组IL-22无显著差异;自然流产组蜕膜局部Th17细胞比例显著高于正常早孕组(P<0.01),IL-23亦显著高于正常早孕组(P<0.01),IL-22则显著低于正常早孕组(P<0.01)。结论:Th17细胞在孕早期蜕膜局部及外周血中的数量增多可能导致母胎免疫耐受失衡,在早期自然流产中发挥重要的正诱导作用,而IL-22、IL-23等细胞因子在其中的调控效应则具有明显的微环境相关性。     

Toll样受体与自然流产

正常妊娠时母体免疫系统对同种移植物的胎儿产生免疫耐受。宫内感染等因素可使母体免疫系统排斥胎儿,引起流产。Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）是组成天然免疫的模式识别受体的主要家族,参与母胎界面的抗微生物的天然免疫反应,在正常妊娠的维持和自然流产的发生中发挥重要作用。TLRs可与入侵的病原体相互作用激活母体的天然免疫抵抗感染,同时可能介导母胎界面的微环境改变,使炎症细胞因子表达失调,自然杀伤（NK）细胞等天然免疫细胞异常激活,诱导滋养细胞过度凋亡,从而导致流产的发生。TLRs还参与抗磷脂抗体诱发的母胎界面血栓形成的过程,诱发流产。     

Expression of CD28 and cytotoxic T lymphocyte antigen 4 at the maternal-fetal interface in women with unexplained pregnancy loss.

OBJECTIVE: To investigate the expression of CD28 and CTLA-4, two costimulatory molecules involved in T-cell activation at the maternal-fetal interface in women with unexplained pregnancy loss. METHODS: A total of 57 women, 39 with unexplained spontaneous abortion (SA) and 18 with unexplained recurrent spontaneous abortion (RSA), were enrolled in the study. A high-resolution spectratyping analysis of fluorescent bands was performed to detect CD28 and CTLA-4 expression in decidual tissues. RESULTS: The mean expression of CTLA-4 mRNA was significantly higher in women with SA than in controls (P<0.05). Moreover, the expression of CTLA-4 was higher in SA patients with genotype AA and phenotype A+ (AA+AG) than in controls (P<0.01). The expression of CTLA-4 was not significantly different in patients with RSA and in controls. The expression of CD28 was significantly decreased in patients with RSA (P<0.01) and SA (P<0.05) compared with controls. The mean ratios of CTLA-4/CD28 were significantly higher in patients with RSA (P<0.01) and SA (P<0.05) than in controls. CONCLUSIONS: This study suggests that an imbalance in CTLA-4/CD28 expression or suppressed T-cell activity at the maternal-fetal interface may confer susceptibility to unexplained pregnancy loss.     

反复胚胎植入失败和流产与子宫内膜免疫因素

胚胎着床及发育是一个母-胎相互识别、相互适应的复杂过程。在此过程中,滋养细胞表达胚胎抗原并分泌细胞因子,逃避母体免疫系统的攻击,母体蜕膜特征性免疫细胞的富集形成母-胎界面独特的免疫微环境,从而有利于胚胎着床及发育。虽然近年来体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的成功率已有很大提高,反复种植失败（RIF）仍是困扰辅助生殖技术发展的难题。胚胎作为同种异体移植物不被母体免疫系统排斥是妊娠建立和维持的关键,母-胎免疫调节异常可致复发性流产（RSA）,给患者夫妇身心及经济均带来极大负担。随着生殖免疫学的发展,子宫内膜免疫因素在RIF和RSA发病中的作用日益受到关注,针对性的免疫治疗也在RIF和RSA的治疗方案中扮演着越来越重要的角色。文章就RIF和RSA子宫内膜免疫因素的分子病理机制及其免疫治疗的当今认识进行阐述,以期为未来的科学研究及临床治疗提供参考。     

反复胚胎植入失败和流产与子宫内膜免疫因素

胚胎着床及发育是一个母-胎相互识别、相互适应的复杂过程。在此过程中，滋养细胞表达胚胎抗原并分泌细胞因子，逃避母体免疫系统的攻击，母体蜕膜特征性免疫细胞的富集形成母-胎界面独特的免疫微环境，从而有利于胚胎着床及发育。虽然近年来体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的成功率已有很大提高，反复种植失败（RIF）仍是困扰辅助生殖技术发展的难题。胚胎作为同种异体移植物不被母体免疫系统排斥是妊娠建立和维持的关键，母-胎免疫调节异常可致复发性流产（RSA），给患者夫妇身心及经济均带来极大负担。随着生殖免疫学的发展，子宫内膜免疫因素在RIF和RSA发病中的作用日益受到关注，针对性的免疫治疗也在RIF和RSA的治疗方案中扮演着越来越重要的角色。文章就RIF和RSA子宫内膜免疫因素的分子病理机制及其免疫治疗的当今认识进行阐述，以期为未来的科学研究及临床治疗提供参考。     

记忆滤泡性辅助T细胞细胞与原因不明复发性流产的关联研究

目的 探讨原因不明复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)的发生与记忆滤泡性辅助T(memory Tfh)细胞表达异常是否存在关联.方法 收集15例染色体正常的URSA为流产组,并以15例正常人工流产患者为正常对照组.分离所有患者外周血单个核细胞及蜕膜组织免疫细胞,用流式细胞术(FCM)检测上述细胞中CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平.结果 流产组蜕膜局部CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平显著高于正常对照组(P＜0.05).流产组外周血CD4+CXCR5+memory Tfh以及CD4+CXCR5+PD-1 +memory Tfh细胞水平与正常对照组无明显差异(P＞0.05).结论 早孕妇女蜕膜局部memory Tfh细胞数量增多可能与URSA发生有关,母-胎界面的免疫异常可能导致URSA的发生.     

Comparison between lymphocytic infiltration in early spontaneous abortions and in elective abortions with signs of disruption at the chorio-decidual interface

AIM: The aim of the study was to compare lymphocytic infiltrations in early spontaneous abortions with those with signs of disruption at the chorio-decidual interface in elective abortions. Determinations were performed on preparations received at the Anatomy-Pathology Services of Ospedale San Paolo, Savona (Italy) in 2005. METHODS: Immunohistochemistry studies were performed using antisera CD3, CD4 and CD14 with a DAB detection kit on a Ventana BenchMark automated slide staining system. The material was grouped into three classes: early spontaneous abortions (class 1); elective abortions with signs of disruption at the chorio-decidual interface (class 2); elective abortions without such signs (class 3). RESULTS: Preparations from classes 1 and 2 shared a similar picture of lymphocytic activation and the presence of macrophagic elements. The test results demonstrated that the proportion of the T cell population increased with the rise in CD8+ lymphocytes in both class 1 and class 2 preparations. CONCLUSION: The results indicate that T-cell-mediated immune activation may the cause or one of the causes of spontaneous abortion and that the effects of disruption at the chorio-decidual interface observed in elective abortion provide a clue to initial signs of loss of pregnancy. From the discovery of a population without evident signs of active abortion (elective abortion with a disturbed chorio-decidual interface) but with evidence of initial lymphocytic activation compared with that devoid of such signs (elective abortion) one can conjecture that lymphocytic activation is a major factor in the process leading to early spontaneous abortion.