HPLC-MS/MS测定大鼠血浆中人参皂苷Rg3的浓度

目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定大鼠血浆中人参皂苷Rg3的浓度,用于大鼠体内人参皂苷Rg3的药代动力学研究.方法 血浆样品经乙酸乙酯液-液提取.色谱柱为Inertsil ODS-3(2.1 mm×50 mm,5μm),流动相:乙腈:10 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1％甲酸,90:10);流速:0.4 mL/min;ESI离子源,负离子模式监测.6只大鼠灌胃给予人参皂苷Rg3 20 mg/kg后按预定时间点眼眶采血.采用DAS 3.3.1软件统计其药代动力学参数.结果 血浆中人参皂苷Rg3的线性范围为2 ～ 400 ng/mL,日内、日间精密度及基质效应RSD均小于15％,主要的药代动力学参数:AUC0-t为(821.659±170.125)ng·h/mL,AUC0-∞为(912.468±190.653)ng·h/mL,Cmax为(138.803±28.997) ng/mL,t1/2为(2.803±0.263)h.结论 建立的方法快速、灵敏、准确.适用于大鼠血浆中人参皂苷Rg3浓度的测定.     

液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度及其药代动力学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度,并研究其灌胃给药后在大鼠体内的药代动力学特征。方法以槲皮素为内标,采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-10 mmol/L醋酸铵水溶液-甲酸(80∶20∶0.15,v/v/v),采用多反应监测(MRM)模式,监测离子分别为:m/z 449.1→m/z287.1(紫云英苷),m/z301.1→m/z151.1(槲皮素);DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果紫云英苷在1.00～1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r2=0.9929);定量下限为1.00 ng/ml;低、中、高浓度的提取回收率均大于93%。大鼠灌胃给药后在0.5±0.1 h达到231.1±67.3 ng/ml的峰值浓度,血浆半衰期为3.9±1.3 h,AUC0-∞为782.6±152.8(ng.h/ml)。结论本方法灵敏度高、选择性强、分析时间短,适用于血浆中紫云英苷的浓度测定及其药代动力学研究。     

LC-MS法测定大鼠血浆中EXH-1626的浓度

目的:建立测定大鼠血浆中EXH-1626浓度的液相色谱-质谱(LC-MS)方法?方法:大鼠血浆样品中加入内标卡马西平,经蛋白沉淀剂(甲醇∶5%硫酸锌溶液 = 70∶30,V/V)沉淀血浆蛋白后取上清液5 μl进行LC-MS测定?色谱条件:色谱柱为汉邦ODS C18柱(5 μm,150 mm × 4.6 mm),流动相为乙腈∶10 mmol/L醋酸铵水溶液(用乙酸调pH至3)70∶30,流速为0.6 ml/min,柱温30℃;质谱条件:采用电喷雾离子化(ESI)方式,以选择性离子监测(SIM)方式检测,EXH-1626和内标选择检测离子的质荷比(m/z)分别为453.3([M+H]+)和274.3([M+H]+)?结果:大鼠血浆中EXH-1626在5~10 000 ng/ml内线性关系良好(r = 0.999 7),最低定量限(LOQ)为5 ng/ml,由低到高(10?100?1 000和10 000 ng/ml)4个浓度的日内和日间精密度RSD均< 10%,绝对回收率均> 70%,相对回收率90%~110%?结论:该方法快速?准确,灵敏度高,操作简便,适用于EXH-1626血药浓度测定及其非临床药代动力学研究?     

β-葫萝卜素血浓度测定方法的研究

建立了用高效液相色谱法(HPLC)及可见紫外分光光度(VIS-UV)单波长法、双波长法,测定血浆中β-胡萝卜素(β-C)的浓度。在氯仿或乙醇溶液中检测限为5ng,人血浆中最低检测浓度为25ng/ml,平均回收率为98.8％,CV ％为3.2％。HPLC法的线性范围为25～2000 ng/ml血浆,UV单波长法线性范围为50～4000 ng/ml血浆,双波长法线性范围为100～4000ng/ml血浆。HPLC法与UV法的相关系数>0.99,斜率接近1。     

LC-MS/MS测定大鼠血浆中没食子酸丙酯浓度

目的没食子酸丙酯是从中药赤芍中提取的有效成分没食子酸经酯化反应而成的化学药物。文中建立LC(液相)-MS(质谱)/MS方法研究大鼠口服没食子酸丙酯后的体内药代动力学。方法采用LC-MS/MS测定大鼠血浆中没食子酸丙酯的浓度,以没食子酸乙酯为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(3.5μm,100 mm×2.1 mm,I.D.),流动相为甲醇-乙腈-10 mmol/L醋酸铵内含0.1%甲酸水溶液(10∶25∶65,V/V/V),流速0.25 ml/min,柱温30℃。结果没食子酸丙酯的线性范围为5.0~500.0 ng/ml(r=0.998 4),最低定量检测浓度达5.0 ng/ml(S/N>10),提取回收率>75%,日内和日间精密度RSD<15%。结论本法操作简单,选择性好,灵敏度高,费时少,适用于没食子酸丙酯在大鼠体内的药代动力学研究。     

高效液相色谱法测定小鼠血浆中芦荟大黄素的浓度

目的：建立以高效液相色谱法测定小鼠血浆中芦荟大黄素浓度的分析方法。方法：取0.3ml小鼠血浆,二氯甲烷萃取;HPLC采用Agilent 1100高效液相色谱仪系统,以Symmetry Shield RPC18为色谱柱,流动相为甲醇-水-醋酸（65∶35∶0.2）,并用荧光法测定（λex=410nm和λem=510nm）。结果：芦荟大黄素的保留时间为11.7min;芦荟大黄素浓度在10～1000ng/ml（r=0.999）的范围内具有良好的线性关系,最低检测限（LOD）和最低定量限（LOQ）分别为4.5ng/ml和5ng/ml。结论：本方法简便,准确,灵敏,特异性强,重现性好,可用于血浆中芦荟大黄素的测定及药动学研究。     

HPLC法测定丹皮酚血浓度及其胶囊与片剂人体生物等效性研究

目的：建立HPLC法测定人血浆中丹皮酚的浓度,进行丹皮酚胶囊和片剂生物等效性研究。方法：采用双周期双交叉试验设计,20名健康男性志愿者随机单剂量口服丹皮酚胶囊或片剂160mg,按设定时间采集肘静脉血,经乙睛萃取处理,以XB-C18(250mm×4.6mm,5μm) 色谱柱为固定相,四氢呋喃-甲醇-水-磷酸(6∶60∶34∶0.1,V∶V) 为流动相测定丹皮酚血浆浓度。采用DAS 2.0软件计算丹皮酚主要药代动力学参数,评价丹皮酚胶囊和片剂的生物等效性。结果：HPLC法测定血浆中丹皮酚的最低检测限为10ng/ml,在10～500ng/ml范围内线性关系良好（r=0.9998）,日内、日间RSD均小于13.72%。丹皮酚胶囊和片剂主要药代动力学参数t1/2为（1.03±0.35）h和(1.09±0.62) h,Tmax为(1.02±0.13) h和(1.03±0.15) h,Cmax为(116.39±45.57)ng/ml和 (111.16±41.24)ng/ml,AUC0～3为(173.91±45.41)ng·h/ml和(171.26±42.63)ng·h/ml,AUC0 ∞为(217.13±56.55)ng·h/ml和(220.27±67.24)ng·h/ml。丹皮酚胶囊相对生物利用度F为（101.56±9.31）%。结论：建立的HPLC方法特异性强、灵敏度高,可用于丹皮酚血浓度测定和人体药动学研究。丹皮酚片剂、胶囊剂的主要药代动力学参数差异无统计学意义,符合生物等效性的假设,为生物等效制剂。     

高效液相色谱法检测晚发性佝偻病儿童血浆25-羟基维生素D3

目的　检测晚发性佝偻病 (DR)儿童血浆 2 5 -羟基维生素D3 (2 5 -OH -D3 )水平。方法　从 2 0 2 8名6～ 11岁小学生中筛检出DR可疑者 2 2 1人 ,抽取静脉血肝素抗凝分离出血浆 ,经 10 %二氯甲烷 -正己烷提取 ,用LichrospherC18(5 μm ,2 5 0mm× 4 6mm)色谱柱分离 ,97%甲醇 - 3%水为流动相 ,流速 1 0ml/min ,检测波长为2 6 5nm ,检测其血浆 2 5 -OH -D3 水平。结果　血浆 2 5 -OH -D3 在 2 0～ 32 0ng/ml的浓度范围内线性关系良好 (r =0 9992 ) ,方法的回收率为 96 34% ,相对标准偏差为 4 5 8% ,最小检出浓度为 0 0 6ng/ml(S/N =3)。确诊DR 15 1人 ,血浆 2 5 -OH -D3 水平为 (5 2 8± 1 99)ng/ml。结论　本法操作简便、准确 ,可作为确诊DR的病因学检测手段。     

HPLC-MS/MS测定大鼠血浆及组织中盐酸戊乙奎醚浓度

目的 建立用高效液相色谱质谱联用(HPLC-MS/MS)技术测定大鼠血浆、脑组织及肺组织中戊乙奎醚浓度的方法.方法 大鼠血浆、脑组织及肺组织样品中戊乙奎醚及内标苯海拉明经石油醚:乙醚(70:30)提取后,采用HPLC-MS/MS技术进行测定.以Allure C_(18)(50×2.1 mm,5 μm)为色谱柱,以甲醇:5 mmol/L醋酸胺:三乙胺=90:10:0.05(甲酸调pH5.8)为流动相进行分离,检测离子为质荷比(m/z)316.2/128.3(戊乙奎醚),256.3/167.1(内标).结果 标准曲线线性范围为血浆0.391～200 ng/mL,脑组织及肺组织0.391～100 ng/mL.预处理回收率为血浆67.32%～70.80%,肺组织84.99%～89.27%,脑组织76.86%～81.98%;方法 回收率为血浆97.66%～99.97%,肺组织96.55%～101.65%,脑组织95.18%～100.21%;日内精密度RSD分别为:血浆1.94%～2.93%,肺组织1.73%～3.70%,脑组织2.35%～2.79%;日间精密度RSD分别为:血浆3.00%～3.85%,肺组织2.86%～3.94%,脑组织2.77%～5.00%;血浆和组织样品保存于-30℃低温冰箱7、21 d,分别测定浓度以考察稳定性,RSD分别为:血浆1.52%～5.26%,肺组织1.88%～2.93%,脑组织2.22%～3.76%;反复冻融1次和2次测定样品浓度,血浆RSD为0.38%～3.55%,肺组织为2.79%～9.60%,脑组织为1.35%～2.29%.结论 成功建立HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆及组织中戊乙奎醚浓度的方法 ,该法简便、准确、重现性好,可用于盐酸戊乙奎醚药动学和生物利用度研究.     

液相色谱-串联质谱测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度及其药代动力学研究

目的建立液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定大鼠血浆中紫云英苷的浓度,并研究其灌胃给药后在大鼠体内的药代
动力学特征。方法以槲皮素为内标,采用HPLC-MS/MS方法,色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-10 mmol/L
醋酸铵水溶液-甲酸（80∶20∶0.15, v/v/v）,采用多反应监测（MRM）模式,监测离子分别为：m/z 449.1→m/z 287.1（紫云英苷）,m/z
301.1→m/z 151.1（槲皮素）;DAS2.0药动学软件计算药动学参数。结果紫云英苷在1.00~1000 ng/ml浓度范围内线性关系良好
（r2=0.9929）;定量下限为1.00 ng/ml;低、中、高浓度的提取回收率均大于93%。大鼠灌胃给药后在0.5±0.1 h达到231.1±67.3 ng/ml的
峰值浓度,血浆半衰期为3.9±1.3 h,AUC0-∞为782.6±152.8 (ng·h/ml)。结论本方法灵敏度高、选择性强、分析时间短,适用于血
浆中紫云英苷的浓度测定及其药代动力学研究。
     

犬组织匀浆中乌头碱的高效液相色谱-质谱测定法及体外稳定性研究(英文)

目的建立了犬组织匀浆中有毒生物碱乌头碱的高效液相色谱-质谱测定法,并应用该方法考察了乌头碱在犬主要组织匀浆中的代谢稳定性。方法色谱柱为C18柱,流动相为含有5 mmol/L甲酸铵和0.2%甲酸的乙腈和水,梯度洗脱。三重四级杆串联质谱配备电喷雾电离源(ESI),正离子模式下以选择离子监测进行检测。乌头碱分别与犬的肝、小肠、胃和肾的组织匀浆温孵,温孵后不同时间点取出,加入内标西酞普兰,乙腈沉淀后取上清液直接进样测定。结果乌头碱浓度在5～500 ng/ml峰面积和内标的比值与浓度呈良好的线性关系;方法的回收率为85.73%～92.12%,其日内、日间的RSD值分别为5.32%～8.95%和5.45%～8.86%。体外孵育2 h后,在犬肝、小肠匀浆中有约20%的乌头碱进行了代谢转化,其t1/2分别为460.6和521.3 min。但在胃和肾中几乎无变化。结论研究提示犬体内的乌头碱主要在小肠、肝脏中代谢转化,但其代谢和清除较慢。     

HPLC-MS/MS法研究普萘洛尔对映体在不同种属肝微粒体中的代谢差异

目的 采用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）建立R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在肝微粒体孵育体系中的含量测定方法,并分别比较普萘洛尔不同对映体在大鼠、犬、猴以及人4种肝微粒体中的代谢特征。方法 分别将R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔溶解在由烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）启动孵育的不同种属的肝微粒体中,在孵育不同的时间后加入乙腈终止反应。使用电喷雾离子源（ESI）,以卡维地洛为内标,在多反应监测模式（MRM）下进行正离子扫描,分别测定各孵育体系中R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔的浓度。以孵育0 min时不同构型的普萘洛尔的质量浓度为参照,分别计算R-（+）-普萘洛尔和S-（-）-普萘洛尔在不同肝微粒体样品中的药物剩余百分比和体外代谢半衰期和固有清除率。结果 普萘洛尔的线性范围为0.05～10.00μg/mL,定量下限为0.05μg/mL;日内、日间精密度的RSD%均小于13%。在4个种属的肝微粒体孵育体系中,R-（+）-普萘洛尔在大鼠肝微粒体中代谢快,在猴肝微粒体中次之,在犬和人肝微粒体中代谢慢,体外消除半衰期依次为大鼠<猴&l...     

分光光度法测定新疆乌头属植物总生物碱的含量

目的考察新疆乌头属植物总生物碱含量测定的方法。方法用分光光度法测定新疆乌头属植物中总生物碱的含量。以乌头碱为对照品,溴甲酚绿为酸性染料,缓冲溶液pH(3.0±0.1)条件下,三氯甲烷萃取45min,于415nm波长处测定其吸光度。结果乌头碱在11.76～27.44mg/L浓度范围内线性关系良好,回归方程Y=21.403 X+0.003 5,r=0.999 1,精密度良好,RSD=0.99%;样品溶液显色后4h内稳定,RSD=1.27%。本法测定的重复性良好,RSD=1.37%;平均加样回收率为100.89%,RSD=1.82%。新疆伊犁不同地区分布的白喉乌头和准噶尔乌头较多,其总生物碱含量平均值分别为0.236%和0.238%。结论分光光度法简便、准确,可用于新疆乌头属植物中总生物碱的含量测定。     

LC-MS/MS法测定黄柏碱及其葡萄糖醛酸结合物在大鼠中的组织分布研究

目的 建立大鼠组织中黄柏碱(Phellodendrine, PHE)及其葡萄糖醛酸结合物黄柏碱-11-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(Phellodendrine-11-O-β-D-glucuronide, M1),黄柏碱-2,11-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(Phellodendrine-2,11-di-O-β-D-glucuronide, M2)的含量测定方法,考察PHE、M1和M2在各组织的分布特征。方法 正常SD大鼠以40 mg·kg^-1的剂量灌胃黄柏碱水溶液,于0.117、0.17、0.5、1、2、3、4 h处死,剪取心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、胰腺和小肠。组织匀浆样品采用甲醇沉淀蛋白方法处理,以乌头碱为内标,ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈柱(150 mm×2.1 mm, 3.5μm)为色谱柱,0.1%甲酸水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,柱温35℃,在电喷雾离子化和正离子多离子反应模式下,运用API4000⁺型三重四级杆质谱联用仪进行测定。结果 PHE、M...     

LC—MS／MS测定乌头属中药中8个生物碱含量

目的：建立LC-MS／MS测定乌头属中药8种生物碱含量的方法。方法：以甲醇-水（水相含0．1％甲酸和2．5mM醋酸铵溶液）为流动相,C18柱分离,采用ESI（＋）源,MRM监测,对制川乌、制草乌、制附子药材饮片中的双酯型生物碱（乌头碱、新鸟头碱、次乌头碱）,单酯型生物碱（苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱）,胺醇型生物碱（乌头原碱、新鸟头原碱）进行含量测定。结果：上述8种生物碱的线性关系良好,精密度、重复性的RSD都低于6％,加样回收率为95．77％-101．90％。结论：该方法简便、快速、精密度高、重复性好,可应用于乌头属中药的质量控制。     

蒙药扎冲十三味片中乌头碱的含量测定

目的：建立测定蒙药扎冲十三味片中乌头碱的含量的方法。方法：采用酸性染料比色法测定,检测波长为416nm。结果：乌头碱在29.55～394μg范围内呈良好的线形关系,回归方程：Y=0.0013X＋0.3036（r=0.9983）;平均回收率为99.13%,RSD为2.33%。结论：该方法简便、灵敏、准确、重复性好,可用于蒙药扎冲十三味片乌头碱的含量测定。     

乌头碱中毒致心律失常的表现及对内皮功能的影响

目的探讨乌头碱中毒致心律失常的表现和对内皮功能的影响。方法回顾性分析29例乌头碱中毒患者的临床资料,检测患者血浆一氧化氮（NO）和一氧化氮合成酶（NOS）,同时检测20名正常人（对照组）的NO和NOS。结果中毒组83％的患者有明显心律失常,其中室性心律失常最为明显,治愈出院26例,3例死亡;中毒组患者血浆NO和NOS明显高于对照组（P〈0．05）。结论乌头碱中毒可导致多种心律失常,尤其是室性心律失常;同时可以导致NO和NOS升高,造成细胞毒性。     

人工虫草提取物抗心律失常作用的研究

目的：利用乌头碱、氯化钡所致大鼠心律失常模型比较人工虫草提取物对实验性心律失常的保护作用。方法：采用乌头碱,氯化钡分别制备心律失常实验模型。观察虫草提取物的保护作用。结果：人工虫草菌丝体石油醚提取物抗心律失常作用较强,可明显对抗乌头碱所致大鼠的心律失常,延长心律失常的诱发时间,降低心律失常持续时间及严重程度;对氯化钡所致心律失常也有一定的对抗作用,可降低心律失常严重程度。结论：人工虫草菌丝体石油醚提取物为抗心律失常的有效部位。     

HPLC法检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其关联化合物的残留

目的:建立高效液相色谱法检测虾类水产品中孔雀石绿、结晶紫及其相关代谢物残留量的方法.方法:样品经乙腈提取后、浓缩、纯化,经Waters UPLC BEH C18柱（2.1mm×50 mm,粒径1.7 μm）分离,以0.5 mmol/L乙酸胺:乙腈=30∶70为流动相进行测定分析.结果:孔雀石绿、无色孔雀石绿的加标平均回...     

Neurotoxicity mechanism of aconitine in HT22 cells studied by microfluidic chip-mass spectrometry

Aconitine, a common and main toxic component of Aconitum, is toxic to the central nervous system. However, the mechanism of aconitine neurotoxicity is not yet clear. In this work, we had the hypothesis that excitatory amino acids can trigger excitotoxicity as a pointcut to explore the mechanism of neurotoxicity induced by aconitine. HT22 cells were simulated by aconitine and the changes of target cell metabolites were real-time online investigated based on a microfluidic chip-mass spectrometry system. Meanwhile, to confirm the metabolic mechanism of aconitine toxicity on HT22 cells, the levels of lactate dehydrogenase, intracellular Ca²⁺, reactive oxygen species, glutathione and superoxide dismutase, and ratio of Bax/Bcl-2 protein were detected by molecular biotechnology. Integration of the detected results revealed that neurotoxicity induced by aconitine was associated with the process of excitotoxicity caused by glutamic acid and aspartic acid, which was followed by the accumulation of lactic acid and reduction of glucose. The surge of extracellular glutamic acid could further lead to a series of cascade reactions including intracellular Ca²⁺ overload and oxidative stress, and eventually result in cell apoptosis. In general, we illustrated a new mechanism of aconitine neurotoxicity and presented a novel analysis strategy that real-time online monitoring of cell metabolites can provide a new approach to mechanism analysis.