人脐血单个核细胞移植对卵巢早衰大鼠卵巢功能的影响

目的本研究旨在探讨人脐血单个核细胞(HCMNCs)在大鼠卵巢早衰模型中的修复作用,以期为临床细胞治疗卵巢早衰提供一种理论和实验依据。方法(1)建立卵巢早衰模型;(2)确定POF造模成功;(3)利用Ficoll密度梯度离心法制备HCMNCs细胞悬液;(4)将大鼠随机分为三组:A组大鼠不予任何处置,B组大鼠双侧卵巢各注入10■细胞悬液,C组将等量的L-DMEM培养基注入大鼠的双侧卵巢;(5)利用ELISA方法检测血清E2、FSH、LH水平,卵巢组织切片进行HE染色,观察卵巢未闭锁卵泡数量及卵巢形态学情况。结果HCMNCs细胞悬液移植后50 d:(1)B组大鼠动情周期紊乱率较C组有明显的减少,阴道脱落细胞涂片开始有上皮细胞、角化细胞、白细胞等多样细胞交替的变化;(2)B组血清E2水平较C组升高,两者差异有高度统计学意义(P0.001);LH、FSH水平较C组LH、FSH水平降低,两者差异有高度统计学意义(P0.001);(3)卵巢病理切片形态学观察B组未闭锁卵泡数目较C组明显增多,差异有高度统计学意义(P0.001)。结论人脐血单个核细胞参与修复受损卵巢的功能,可缓解低雌激素的状态,对卵巢早衰的治疗起到积极的作用。     

卵巢早衰诊治进展

卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）是妇科内分泌领域常见的疾病,病因复杂多样,遗传、自身免疫性疾病、感染、医源性因素等均可引起POF,但超过50%的POF患者病因不清。 POF临床表现复杂多样,早期诊断困难,确诊平均需要5年。阴道超声、激素水平、抗苗勒管激素及抑制素B等在一定程度能预测卵巢功能。 POF对患者身心健康产生重要影响,因此其早期诊断与治疗至关重要。目前主要治疗方法是激素替代疗法缓解绝经症状、赠卵辅助生殖技术解决生育问题。自身卵巢移植术、卵巢及卵泡冷冻技术等新方法给患者带来希望。     

干细胞治疗卵巢早衰的研究进展

卵巢早衰（POF）是由多种病因导致的卵泡功能衰竭。大约80%患者属于特发性POF。POF治疗棘手,近年国内外取得了应用干细胞恢复卵巢功能及生育力等方面的动物试验成果,为POF患者卵巢功能及生育功能的恢复带来了希望。干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞,胚胎干细胞治疗因其引起伦理争议而受到限制。目前成体干细胞治疗包括生殖干细胞、骨髓间充质干细胞和胎儿间充质干细胞的治疗。干细胞可能通过分化为卵母细胞或通过旁分泌抑制卵泡凋亡来修复受损卵巢。现对POF的干细胞治疗进展进行综述。     

脐血移植与实体瘤治疗

常规治疗手段已使肿瘤患者预后得到明显改善 ,但在晚期肿瘤病例并无明显改观 ,如Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者的 5年存活率仅为 17%及 5 %。其主要原因是 ,患者的造血系统对化疗或放疗的有限承受能力制约着有效治疗剂量的提高 ,导致不能将体内癌细胞彻底清除 ,并且治疗到一定阶段 ,还会出现耐药等棘手问题 ,如何进一步提高综合治疗的有效率 ,突破常规治疗的“瓶颈”已成当务之急。突飞猛进的现代生物学技术 ,将传统治疗手段与生物学高科技相结合 ,使肿瘤治疗进入一个崭新阶段 ,造血干细胞移植技术正是这一领域里最具潜力的技术之一。造血干细胞属专能…     

褪黑素对新生儿脐带血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的 探讨褪黑素(melatonin,MLT)对新生儿脐带血单个核细胞(cord blood mononuclear cells,CBMC)产生细胞因子的影响. 方法 体外培养10例健康足月新生儿CBMC,取10例健康成人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)作正常对照,不同浓度MLT(50 pg/ml～50 ng/ml)作为刺激物与CBMC或PBMC共培养,测定培养上清中IL-β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、IFN-γ及TNF-α水平. 结果 500 pg/ml MLT可刺激CBMC产生较高水平的IL-2[(12.18±7.31)pg/ml]、IL-6[(2091.08±968.58)pg/ml]、IL-8[(2779.04±1168.49)pg/ml]、IL-12[(15.29±6.88)pg/ml]及IFN-γ[(52.22 17.77)pg/ml],与对照组[分别为(6.99±4.94)pg/ml、(1017.06±452.60)pg/ml、(1293.33±791.34)pg/ml、(6.84±2.26)pg/ml、(22.24±10.38)pg/ml]相比,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组[(175.63±62.10)pg/ml]相比,不同浓度MLT(50 ng/ml、5 ng/ml、500 pg/ml、50 pg/ml)均可降低CBMC培养上清中TNF-α水平,分别为(24.87±11.21)pg/ml、(18.14±9.44)pg/ml、(31.38±15.28)pg/ml和(28.18±17.35)pg/ml,差异均有统计学意义(P<0.05).5 ng/ml MLT可诱导PBMC产生IL-2、IL-12及IFN-γ,抑制TNF-α的分泌,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).比较各自最佳效应浓度的MLT对CBMC(MLT最佳效应浓度为500 pg/ml)和PBMC(MLT最佳效应浓度为5 ng/ml)释放细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ的诱导作用及对TNF-α的抑制作用,除TNF-α外,差异均有统计学意义(P<0.01). 结论 MLT不但可调节PBMC细胞因子的释放,也可调节CBMC细胞因子的释放,且MLT对CBMC分泌细胞因子IL-12、IFN-γ等的调节作用强于其对PBMC的作用.因此,MLT有可能提高新生儿的免疫功能,为临床应用提供了实验依据.     

间质干细胞移植治疗卵巢早衰的研究进展

卵巢早衰(POF)是妇科内分泌领域的常见疾病,在不孕患者中所占比例呈逐年上升趋势。POF不仅影响女性健康,还会带来一系列心理及社会问题。POF治疗困难,目前尚无有效措施完全恢复或保护受损的卵巢功能。近年采用间充质干细胞(MSCs)移植治疗POF取得了一定的效果,开拓了POF治疗的新方向,具有可观的临床应用前景。本文就MSCs治疗卵巢早衰的研究进展做一综述,以期为临床和科研提供一定的指导意义     

冻融抗原致敏的树突细胞对裸鼠人卵巢癌移植瘤治疗作用的研究

目的 :研究冻融抗原致敏的树突细胞 (DC)对裸鼠人卵巢癌移植瘤的治疗作用。方法 :联合应用粒性白细胞与巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)及白介素 4 (IL 4 )从正常足月产妇分娩后新生儿脐血中培养出DC ,以人卵巢癌细胞系 3AO细胞冻融抗原激活DC ,测定其诱导的细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)对 3AO的杀伤活性 ;CTL预防性接种于裸鼠皮下 ,观察裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生率 ,以DC激活的CTL治疗裸鼠人卵巢癌移植瘤并观察治疗效果。结果 :体外抗原冲击致敏的DC能显著刺激T淋巴细胞增殖 ,其诱导的CTL对细胞系 3AO具有显著的杀伤作用 ,在效靶比为 4 0 :1、2 0 :1、10 :1、5 :1时 72h杀伤率平均分别为 90 .1%、67.4 %、4 0 .4 %、17.8%。DC激活的CTL能预防裸鼠人卵巢癌移植瘤的发生 (预防组 16.6% ,对照组 10 0 % ,P <0 .0 0 1) ,并能抑制移植瘤生长 ,对照组、治疗组移植瘤的大小分别为 (5 .6± 1.1)cm3 、(2 .7± 0 .78)cm3 (P <0 .0 1)。结论 :人卵巢癌细胞冻融抗原体外冲击致敏的DC可作为一种抗癌疫苗在免疫治疗卵巢癌患者中发挥重要作用     

PKH26标记的人脐带间充质干细胞在大鼠化疗性卵巢早衰模型中的卵巢迁移

目的:人脐带间充质干细胞用PKH26标记,探讨人脐带间充质干细胞在大鼠化疗性卵巢早衰模型中的卵巢迁移示踪。方法:提取并培养人脐带间充质干细胞,按PKH26标记程序进行细胞标记,透射电镜观察标记组和未标记组细胞的超微结构,测定细胞增殖、周期、凋亡情况。荧光显微镜下观察PKH26标记的人脐带间充质干细胞移植后的卵巢情况。结果:标记后细胞的形态无明显差别,均为成纤维细胞样,细胞增殖未见明显影响,细胞生长状态良好,PKH26标记阳性的细胞主要存在卵巢血管中。结论:PKH标记技术可用于人脐带间充质干细胞移植治疗化疗所致卵巢早衰中的归巢、分化、增殖的研究。     

脐血移植治疗难治性儿童白血病

目的：研究用ＨＬＡ不合多个脐血移植治疗难治性儿童白血病。方法：选择难治性白血病患儿，给予强烈化学治疗杀灭残存白血病细胞，再用多个脐血混合移植解救处于严重抑制状态的骨髓，以缓解白血病，延长生命。结果：治疗６例，年龄２５～１６岁，均为男性。用ＶＡＣ或ＡＶ方案化疗后，约１１ｄ外周血颗粒细胞降至零。输注脐血后平均１３ｄ外周血白细胞升至１０×１０９／Ｌ，６０ｄ内骨髓象正常，全部患者达到完全缓解。随诊１～４年，３例死亡，３例分别存活３６、４４、２０个月。结论：混合脐血移植对难治性白血病有较好疗效，其治疗作用机理值得进一步探讨。     

脐血淋巴因子激活杀伤细胞的实验研究

本研究用脐血淋巴细胞诱导产生淋巴因子激活杀伤（ＬＡＫ）细胞，并且比较脐血ＬＡＫ细胞与正常成人和妇科肿瘤患者外周血ＬＡＫ细胞的杀伤活性；利用单克隆抗体研究脐血ＬＡＫ细胞表面抗原变化以及在电镜下观察ＬＡＫ细胞杀伤靶细胞时的形态学变化。研究结果表明：（１）脐血可诱导出ＬＡＫ细胞，脐血ＬＡＫ细胞能明显杀伤传代的肿瘤细胞系，包括对自然杀伤细胞（ＮＫ）敏感的Ｋ＿（５６２）细胞和对ＮＫ抵抗的Ｒａｊｉ细胞；（２）脐血ＬＡＫ细胞活性显著高于妇科肿瘤患者外周血ＬＡＫ细胞活性，但与成人外周血ＬＡＫ细胞无明显差异；（３）脐血ＬＡＫ细胞的ＯＫＴ抗原为Ｔ３￣＋和Ｔ８￣＋，与其他来源的人ＬＡＫ细胞相似；（４）脐血ＬＡＫ细胞与Ｒａｊｉ细胞共育一定时间后，在光镜下可见两者形成不典型的玫瑰花状结合物，在透射电镜下，脐血ＬＡＫ细胞伸出突起，主动与靶细胞结合。     

卵巢功能早衰的免疫学发病机制及免疫治疗的研究进展

卵巢功能早衰（POF）是指女性在40岁以前发生自然绝经,发病率呈逐年升高的趋势,且有低龄化倾向,可导致不孕不育,雌激素水平低下,对骨骼、心血管系统等也会造成一定影响。POF病因复杂、机制不明,除了部分遗传因素、自身免疫性因素、感染因素、酶缺陷及医源性因素等可明确病因以外,大部分无明确病因可循（即特发性POF）,是临床治疗的一个难题。近期研究表明,自身免疫是POF的重要发病机制之一。自身抗体的产生及细胞免疫功能异常均参与POF的发生。目前的治疗方法疗效均不理想,阐明POF的分子免疫学发病机制及与神经内分泌间的内在联系,将是寻求预防、治疗POF有效方法的关键。     

免疫性卵巢早衰小鼠卵巢组织中Cx43、Bcl-2表达的研究

目的:检测免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢组织中缝隙链接蛋白43(Cx43)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的m RNA及蛋白水平,以探讨其在免疫性POF发病中的作用。方法:建立免疫性POF小鼠模型并选择同期佐剂对照组及正常对照组,分别于2周、4周、6周观察各组小鼠双侧卵巢组织学变化。ELISA法测定各组小鼠血清FSH水平。免疫组化法检测各组小鼠卵巢组织中Cx43和Bcl-2蛋白相对表达量,PCR法检测Cx43和Bcl-2 m RNA水平。结果:POF组4周及6周Cx43蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量显著低于正常对照组和佐剂对照组(P0.05);POF组4周及6周Cx43蛋白、Bcl-2蛋白相对表达量较POF组2周降低(P0.05)。POF组4周及6周Cx43 m RNA、Bcl-2 m RNA表达水平显著低于正常对照组佐剂对照组(P0.05);POF组4周及6周Cx43 m RNA、Bcl-2 m RNA表达水平较POF组2周降低(P0.05)。结论:在免疫性POF小鼠卵巢组织中Cx43和Bcl-2蛋白及m RNA表达均下调,可能与在免疫性POF的发生发展有关。     

脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞对人卵巢癌裸鼠移植瘤治疗的研究

目的研究脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞用于卵巢癌过继免疫治疗的可行性。方法采用肿瘤细胞和淋巴细胞混合培养法获得脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞对人卵巢癌裸鼠移植瘤进行治疗并与外周血来源淋巴因子激活的杀伤细胞相对照。结果脐血来源的细胞毒性T淋巴细胞有明显的抑瘤作用,移植物抗宿主病的发生不明显。结论脐血可作为过继免疫治疗中效应细胞来源试用于卵巢癌的治疗。     

人β防御素3在胎膜早破妊娠妇女中的表达及其意义

目的:探讨人β防御素3(h BD3)在胎膜早破妊娠妇女中的表达及其临床意义。方法:随机选择2013年1—12月于湖北省孝感市中心医院妇产科住院分娩的初产胎膜早破患者45例作为胎膜早破组,取同期正常妊娠妇女45例作为对照组。应用免疫组织化学SP法检测胎膜组织中h BD3的表达,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和h BD3的含量。结果:胎膜早破组h BD3阳性33例;对照组h BD3阳性13例,2组阳性率比较差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,胎膜早破组血清TNF-α、h BD3在入院及分娩时均升高(P0.05),且胎膜早破组分娩时血清TNF-α、h BD3较入院时均升高(P0.05)。结论:胎膜早破时h BD3可能是在TNF-α的介导下参与了抗微生物的天然免疫反应。     

黏液性卵巢癌的诊治进展

黏液性卵巢癌(m EOC)是上皮性卵巢癌的一个特殊亚型,有其特有的生物学特性。其多为单侧性体积较大的盆腔肿块、发病率低、淋巴结转移率低、对铂类耐药、晚期预后差,并且有其特有的基因突变谱:KRAS基因突变率高,p53及乳腺癌易感基因(BRCA)突变率低。这些独特性使之在临床诊疗方面与其他上皮性卵巢癌有所不同。在临床分期早期的年轻患者中允许保留外观正常的子宫和对侧附件以保留其生育功能,并且若术中阑尾外观正常,且无腹膜假黏液性瘤证据时,不需行阑尾切除术。奥沙利铂与5-氟尿嘧啶联合应用可作为m EOC药物治疗的新方向。     

循环肿瘤DNA在卵巢癌诊治中的研究进展

卵巢癌(ovarian cancer,OC)近年发病率逐渐增高,具有高复发率、高病死率的特点,成为危害女性生命健康的主要疾病之一.目前在卵巢癌的早期检测和筛查、复发监测、治疗评估方面尚缺乏有效的检测手段.循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA,ctDNA)是肿瘤细胞释放进入血液循环中的DNA片段,具...