玻璃化冷冻人卵裂期胚胎的效果观察

目的观察总结玻璃化冷冻第三天(D3)胚胎复苏后的存活率与妊娠率。方法对人D3早期胚胎进行玻璃化冷冻,统计分析了2013年1月份至2013年12月份来我中心进行冷冻胚胎复苏移植的215个周期。结果胚胎复苏215个周期,共493个胚胎,胚胎复苏后存活487个,胚胎存活率为98.8%(487/493),487个存活胚胎均予以移植;临床妊娠90例,临床妊娠率为41.9%(90/215)。妊娠的90例中分娩59例,流产31例(其中宫外孕4例)。妊娠90例中单胎68例,双胎20例,3胎2例。结论玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎的损伤较小,适用于临床对卵裂期胚胎长期保存的需求。     

玻璃化法与慢速程序法对人第3天胚胎冷冻复苏效果的比较

目的比较玻璃化法与慢速程序法对人第3天（D3）胚胎冷冻复苏的效果。方法将接受体外受精-胚胎移植患者的取卵周期移植后剩余的D3胚胎分别进行玻璃化法或慢速程序法冷冻,比较胚胎解冻后的复苏率、妊娠率等指标。结果玻璃化法冷冻解冻78个周期,228个胚胎,存活210个（92.11%）,完整胚胎172个（81.90%）,移植77个周期,临床妊娠32个周期（41.56%）,种植率20.95%;慢速程序法冷冻解冻157周期,702个胚胎,存活405个（57.69%）,完整胚胎207个（51.11%）,移植148周期,临床妊娠58个周期（39.19%）,种植率17.78%。玻璃化法的胚胎复苏率、完整胚胎率高于慢速程序法（P〈0.05）;玻璃化法的临床妊娠率和种植率略高于慢速程序法,但差异无统计学意义。结论玻璃化法的冷冻复苏率比慢速程序法高,更适用于人D3胚胎的冷冻保存。     

GMP玻璃化法冻存人早期胚胎的临床应用

目的探讨GMP玻璃化法冷冻技术的临床应用效果。方法应用GMP玻璃化法冷冻技术保存了解12例患者的33个优质胚胎并复苏后移植。结果复苏了12例患者的33枚胚胎,32枚存活并移植,胚胎存活率为96.97%（32/33）,6枚胚胎种植,种植率为18.75%（6/32）,5例获得妊娠,妊娠率为41.67%（5/12）。结论GMP玻璃化法是一种可应用于临床的冷冻保存技术。     

玻璃化和程序化冻融人卵裂期胚胎结果分析

目的探讨冻融周期中玻璃化和程序化两种不同方法对人卵裂期胚胎的冷冻复苏效果。方法回顾性分析35例玻璃化冷冻复苏周期和123例程序化冷冻复苏周期资料,比较冷冻胚胎复苏后的胚胎存活率、完整性胚胎存活率,冻融前后的优质胚胎率,临床妊娠率、胚胎种植率。结果①玻璃化法与程序化法冷冻前优质胚胎率无显著性差异（70．83％和71．97％,P〉0．05）,冷冻后优质胚胎率差异显著（63．89％和47．75％,P〈0．05）,复苏后的胚胎存活率差异显著（95．83％和86．16％,P〈0．05）,完整性胚胎存活率差异极显著（90．28％和63．32％,P〈0．01）;②玻璃化法与程序化法临床妊娠率差异显著（48．57％和29．27％,P〈0．05）,种植率差异显著（31．88％和18．83％,P〈0．05）。结论在冻融人卵裂期胚胎的过程中,玻璃化优于程序化,可以更好的提高累积临床妊率。     

利用玻璃化冷冻技术复苏囊胚移植的临床应用

目的探讨不孕症患者的剩余胚胎继续培养成囊胚进行玻璃化冷冻复苏囊胚移植的临床结局。方法对2015年在我中心接受常规IVF-ET治疗不孕症130例患者剩余胚胎继续培养成囊胚进行玻璃化冷冻复苏移植后临床资料分析。结果133个周期中共冷冻复苏囊胚258枚,移植囊胚244枚,复苏存活率94.57%,临床妊娠率30.76%。结论采用玻璃化冷冻复苏囊胚技术可以提高一次取卵的总妊娠率,是治疗不孕症的重要组成部分。     

钢丝环法胚胎玻璃化冷冻技术的初步应用

目的探索自制钢丝环用于人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的效果。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共33个胚胎（卵裂胚20个,囊胚13个）,用自制钢丝环作为胚胎载荷物行玻璃化冷冻,复苏和移植后,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为85%、23.5%、28.6%（2/7）和76.9%、40%、33.3%（2/6）,无流产病例。结论使用自制钢丝环作为胚胎载荷物行玻璃化冷冻,对人类卵裂胚和囊胚均可获得良好的临床效果,可以作为常规冷冻的一种应急或补充技术。     

人卵裂胚和囊胚的玻璃化冷冻及临床应用

目的探索人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的有效性。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共270个胚胎（卵裂胚167个,囊胚103个）,用Cryoloop作为胚胎载体和相同的玻璃化方法进行冷冻、复苏和移植,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为97.0%、33.1%、42.9%和96.1%、43.9%、52%,流产率分别为13.3%和15.4%。结论以Cryoloop为胚胎载体,使用相同的玻璃化冷冻方法对人类卵裂胚和囊胚均可获得同样理想的冷冻效果和临床结局。     

冷冻时间对冻融胚胎移植周期结局的影响

目的探讨受精后第二天（D2）和第三天（D3）人胚胎冷冻对冻融胚胎移植周期结局的影响。方法回顾性分析本中心403个D2和D3胚胎程序化慢速冷冻-快速解冻周期,冷冻复苏后的胚胎存活率、完整率、种植率、临床妊娠率等指标。结果 D2冻融移植周期291个,存活率98.2%,完整率78.5%,胚胎种植率16.9%,临床妊娠率33.0%;D3解冻移植周期112个,存活率95.8%,完整率67.5%,胚胎种植率21.5%,临床妊娠率34.8%。D2比D3能显著提高胚胎存活率和完整率（P〈0.05）,但在临床妊娠率、胚胎种植率上无显著性差异。D2和D3胚胎在当天和提前解冻组的临床妊娠率、胚胎种植率差异没有显著意义。结论 D3胚胎冷冻没有比D2胚胎更有优势,D2胚胎对冷冻解冻可能具有更好的耐受。可以根据工作需要以及病人情况选择冷冻时间。     

玻璃化冷冻法和程序化冷冻法对人卵裂期胚胎冷冻复苏效果及临床结局的比较

目的比较辅助生殖技术中玻璃化和程序化2种冷冻方法对卵裂期胚胎的冷冻复苏效果及临床结局。方法对3396个玻璃化冷冻周期和685个程序化冷冻周期的相关资料进行回顾性统计学分析,比较解冻后胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率等指标。结果玻璃化冷冻后的胚胎复苏率、优质胚胎率、临床妊娠率和胚胎着床率均显著高于程序化冷冻,且复苏周期移植取消率显著低于程序化冷冻。结论相对于程序化冷冻法,玻璃化冷冻法具有更好的冷冻复苏效果以及临床结局,更适用于卵裂期胚胎的冷冻保存。     

冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响

目的探讨慢速冷冻和玻璃化冷冻方法对人卵裂期冷冻胚胎移植周期妊娠结局的影响。方法回顾性分析2011年1月~2015年12月在北京大学第一医院进行卵裂期冷冻胚胎移植的1331个周期,包括慢速冷冻周期431个和玻璃化冷冻周期900个,比较两种不同冷冻方法的胚胎复苏率、完整胚胎率、临床妊娠率、种植率、流产率等各项指标,并分析卵裂球损伤对胚胎发育潜能的影响。结果玻璃化冷冻的胚胎复苏率(92.53%)、完整胚胎率(75.43%)、临床妊娠率(45.72%)、种植率(27.41%)高于慢速冷冻(76.93%、48.46%、39.52%、19.88%,P0.05);而流产率分别为12.20%、12.56%(P0.05);周期取消率分别为3.71%、1.33%(P0.05)。慢速冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:36.2%、37.7%、42.0%、44.3%(P0.05);玻璃化冷冻移植0、1、2、3个无卵裂球损伤胚胎的临床妊娠率分别为:20.5%、42.3%、48.8%、54.1%(P0.05)。结论玻璃化冷冻法更适合于人卵裂期胚胎冷冻保存,其冷冻胚胎移植周期的妊娠结局要优于慢速冷冻法;卵裂球损伤对玻璃化冷冻复苏胚胎的发育潜能影响较大。     

常规IVF受精失败补救ICSI后行冻融胚胎移植的临床价值

目的探讨冻融胚胎移植在常规体外受精(IVF)失败后补救卵胞浆内单精子注射(L-ICSI)中的应用价值。方法在12个常规体外受精失败周期中应用ICSI对未受精的MⅡ期卵子进行显微授精,将获得的优质胚胎进行冷冻,再择期行冻融胚胎移植。结果对93个未受精的MⅡ卵子接受L-ICSI,受精63枚,受精率为67.7%(63/93),异常受精3枚(2枚1PN,1枚3PN),57个正常受精卵发生卵裂,卵裂率为95.0%(57/60),优质胚胎率为43.9%(25/57),10例患者冷冻胚胎25枚,其中4例采用程序化冷冻,6例采用玻璃化冷冻。9个患者行冻融胚胎移植,共移植胚胎18枚(其中解冻后胚胎碎裂死亡5枚),其中1个周期因冻融后2个胚胎碎裂放弃移植,2例获得临床妊娠,1例分娩出正常婴儿,1例正在妊娠中,临床妊娠率为22.2%。结论 ICSI可使常规体外受精失败的卵子再受精,冻融胚胎移植可以解决胚胎与子宫内膜不同步的问题,获得相对满意的临床结局,具有一定的应用价值。     

Comparison of the survival of human biopsied embryos after cryopreservation with four different methods using non-transferable embryos

BACKGROUND: The standard embryo cryopreservation method is still less than optimal for biopsied embryos. The aim of this study was to compare the survival of biopsied embryos cryopreserved with four different methods using non-transferable embryos. METHODS: Abnormal embryos from one or three pronuclei and spare embryos of grade 3 and 4 were used for this study. Non-biopsied embryos were cryopreserved using the standard method as control. Biopsied embryos were cryopreserved using four methods as follows: standard method, modified freezing method, modified thawing method and vitrification. Blastomere survival and blastulation of frozen-thawed embryos were compared between the different methods. RESULTS: The proportion of embryos with > or = 50% blastomere survival and total blastomere survival rate of biopsied embryos were significantly higher with vitrification than the other three methods. Both the modified freezing and modified thawing methods had significantly higher embryo survival and total blastomere survival rates than standard methods. However, there was no significant difference in blastulation of surviving embryos in all the five groups. CONCLUSIONS: Non-transferable embryos derived from clinical IVF/ICSI are useful for evaluation of the optimal freezing procedures for biopsied embryos. Vitrification increases the survival rate of human biopsied embryos above standard and modified cryopreservation methods.     

超速玻璃化冷冻载体Cryotop和Cryoloop冻存小鼠卵裂期胚胎的效果比较

目的应用冷冻薄膜(Cryotop)和冷冻环(Cryoloop)两种超速玻璃化冷冻载体,氯化胆碱替代氯化钠的低钠磷酸盐缓冲液配置的玻璃化冷冻保护剂冷冻小鼠胚胎,比较两种载体的效果差异。方法将300个小鼠胚胎随机分为3组:对照组60个、Cryotop组120个和Cryoloop组120个。比较复苏后胚胎存活率和继续发育能力。结果 Cryotop组复苏后胚胎存活率达93.3%,Cryoloop组90.4%,无显著性差异(P>0.05);继续发育率:Cryotop组和Cryoloop组比较,4细胞率分别为48.2%和29.8%(P<0.05),囊胚率分别为31.5%和16.1%(P<0.05),差异具有显著性。结论Cryotop和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体相比,Cryotop操作更为简便,复苏后小鼠胚胎获得了更高的继续发育能力。     

不同玻璃化冷冻载体对胚胎复苏的影响

目的比较分析封闭式玻璃化冷冻载体-JYstraws和及开放式载体-medicult管用于人卵裂期胚胎玻璃化冷冻的效果。方法以本中心2010年10月至2013年7月的患者卵裂期胚胎（1678个）为研究对象,选择合适的胚胎进行玻璃化冷冻。实验分为封闭式载体-JY straws管冷冻组和开放式载体．medicult管冷冻组,比较其复苏胚胎成功率及复苏胚胎完整率。进一步,我们将冻存的胚胎按照胚胎质量分为优质胚胎和非优质胚胎,分别比较两种冷冻载体对不同质量胚胎的复苏效果。结果开放式载体-medicult管的胚胎复苏成功率（98．69％）和复苏完整率（90．23％）明显高于封闭式载体-JYstraws的胚胎复苏率（87．41％）和复苏完整率（65．41％）。无论优质胚胎还是非优质胚胎,开放式载体的复苏成功率及复苏胚胎完整率均好于封闭式载体。结论开放式载体-medicult管胚胎解冻效果更好。     

种属和发育期及不同实验条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响

背景：人卵裂期胚胎冷冻复苏的研究中,不同的实验条件及实验动物模型是否与人类胚胎具有相同的敏感性从而反映出实验方案的优劣值得探讨。 目的：观察胚胎种属和发育期及不同冷冻条件对卵裂期胚胎冷冻复苏结局的影响。 方法：将人卵裂期胚胎作为对照组,将KM小鼠胚分为2细胞,4细胞,8细胞组。各组胚胎随机采用以下实验方案：①冷冻操作环境温度18~20 ℃、24~26 ℃和37 ℃。②慢速程序化方案、自制straw叶片玻璃化方案和CPS玻璃化方案。③与玻璃化液接触时间< 40 s、40~60 s和60~90 s。各组胚胎比较不同实验条件下胚胎复苏率和培养24 h发育率。 结果与结论：①对照组24~26 ℃冷冻操作环境温度复苏率高于37 ℃冷冻操作环境(P < 0.05)。②对照组和4细胞鼠胚组采用自制straw叶片玻璃化方案复苏率高于慢速程序化方案(P < 0.05),培养24 h胚胎发育率差异无显著性意义(P > 0.05)。③各组胚胎与冷冻保护剂接触不同时间胚胎复苏率差异无显著性意义(P > 0.05)。表明卵裂期胚胎玻璃化冷冻复苏效果优于慢速程序化,24~26 ℃操作环境、减少冷冻保护剂剂量和缩短接触时间可改善玻璃化冷冻复苏结局;相同冷冻条件下,胚胎种属和发育阶段对冷冻复苏结局有影响,4细胞鼠胚更适合作为研究人类卵裂期胚胎冷冻复苏的实验模型。     

冷冻载体对扩张期囊胚解冻结局的影响

背景：囊胚的冷冻复苏对人类辅助生殖技术的发展具有重要意义,合适的冷冻载体可以降低冷冻毒性提高冷冻效率,是改善囊胚冷冻复苏结局的研究热点之一。 目的：观察不同冷冻载体对昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化冷冻解冻结局的影响。 方法：以新鲜昆明小鼠扩张期囊胚作为对照组,随机选取同期小鼠胚进行玻璃化冷冻解冻,冷冻前使用激光仪行人工皱缩,使用玻璃化法进行冷冻和解冻,按实验载体不同分为冷冻环组、闭合拉细麦管组和自制麦管叶片组;冷冻环组和自制麦管叶片组投入液氮前与冷冻保护剂接触时间 <40 s,40-60 s和60-90 s;解冻后囊胚使用胚胎囊期培养基添加10%血清替代品进行微滴培养。比较解冻后组间囊胚丢失率、囊胚复苏率和培养24 h囊胚孵出率。 结果与结论：相比闭合拉细麦管组,冷冻环组和自制麦管叶片组的囊胚丢失率降低,胚胎复苏率增高(P < 0.05),各冷冻组复苏囊胚培养24 h孵出率均低于对照组(P < 0.05)。使用冷冻环载体和自制麦管叶片载体冷冻解冻囊胚,投入液氮前与冷冻保护剂接触时间90 s内不同时间胚胎复苏率和孵出率的比较差异无显著性意义。结果说明冷冻环载体和自制麦管叶片载体用于昆明小鼠扩张期囊胚玻璃化解冻复苏的效果较好。     

Pregnancy outcome following transfer of human blastocysts vitrified on electron microscopy grids after induced collapse of the blastocoele

BACKGROUND: The purpose of this study was to examine the effects on blastocyst survival and subsequent pregnancy rate of 'artificial shrinkage' (i.e. induced collapse of the blastocoele) before vitrification of human blastocysts. METHODS: After embryo transfer in IVF cycles, surplus embryos that developed to the expanded blastocyst stage were cryopreserved. Before vitrification on electron microscopy (EM) grids, artificial shrinkage was induced in expanded blastocysts using a 29-gauge needle. After thawing, transfers were performed on 25 couples. Post-thaw survival rates and clinical outcome after the transfer of vitrified blastocysts were examined. RESULTS: Of 90 expanded blastocysts vitrified from 25 patients, 81 survived (90.0%) and 40 of them were hatched (49.4%) at the time of transfer. The implantation rate was 29.0% (20/69), and the pregnancy rate was 48.0% (12/25). Nine patients delivered 15 infants, two pregnancies are ongoing and one ended in miscarriage. CONCLUSIONS: The results suggest that artificial shrinkage is a useful technique for vitrification of expanded blastocysts on EM grids.     

Simple, efficient and successful vitrification of bovine blastocysts using electron microscope grids.

This study demonstrates that higher survival of vitrified-thawed bovine blastocysts can be obtained using electron microscope (EM) grids as embryo containers at freezing, rather than plastic straws. In-vitro produced day 7 bovine blastocysts after in-vitro fertilization (IVF) were vitrified on grids or in straws with EFS40 freezing solution and their survival after thawing was compared. Embryo survival was assessed as re-expanded and hatched rates at 24 and 48 h after thawing respectively. When the effects of exposure to vitrification solution and chilling injury from the freezing procedure were examined, embryo survival in the exposure group (24 h: 100, 48 h: 73.3%) was not different compared with that in the control group (100, 84.4%). After vitrification, the hatched rate of the EM grid group 48 h after thawing (67.8%) was significantly higher than that of the straw group (53.3%) (P < 0.05). Fast developing embryos (expanded blastocyst and early hatching blastocyst stage) showed better resistance to freezing than delayed ones (early blastocyst stage), irrespective of embryo containers (early: 24 h, 57.1 and 48 h, 24.4%; expanded: 84.7 and 60.6%; early hatching: 91.7 and 80.0%) (P < 0.001). When using expanded and early hatching blastocysts, embryo survival rates in the vitrification-EM grid group (67.8, 95.0% respectively) were significantly higher than that of the vitrification-straw group (53.0, 65.0%) at 48 h.     

激光辅助在囊胚玻璃化冷冻及复苏过程中的合理应用

目的探讨激光辅助在囊胚玻璃化冷冻和复苏过程中的合理应用及其在囊胚玻璃化冷冻效果和移植后妊娠率提升中所起的作用。方法囊胚玻璃化冷冻前行激光辅助皱缩使囊胚腔脱水;囊胚复苏后于内细胞团扩张前行激光辅助孵化。统计囊胚复苏后存活率、2h完全扩张率、孵出率及移植妊娠率。结果囊胚复苏238例,移植237例,平均移植囊胚1.87个,妊娠145例,临床妊娠率61.18%;共解冻囊胚445个,存活率99.78%,培养2h完全扩张率99.78%,孵出率68.1%。结论冷冻前行激光辅助皱缩对囊胚玻璃化冷冻的成功是必要的,可以避免内细胞团损伤,保证复苏后高存活率;囊胚复苏后在内细胞团扩张前行激光辅助孵化安全、高效,克服了囊胚孵出障碍,对提升妊娠率有帮助。     

两种冷冻方法冻融人卵巢组织异种移植后血管生成素-2表达变化的比较

目的 通过检测血管生成素-2（Ang-2）的表达,探讨两种冷冻方法对人卵巢组织的冻融及异种移植后的效果。 方法 共收集16例人卵巢组织标本,每例分成2份,其中1份应用程序化冷冻方法进行冷冻,另1份应用玻璃化冷冻方法进行冷冻。解冻后分别移植到去卵巢的雌性裸鼠颈部皮下。32只SCID裸鼠随机分为两组：A组16只,移植以程序化方法冷冻复苏的人卵巢组织;B组16只,移植以玻璃化方法冷冻复苏的人卵巢组织。解冻后及移植6周后观察两组卵巢组织中始基卵泡的存活及颗粒细胞Ang-2的表达情况。 结果 解冻后,A组Ang-2的阳性率明显高于B组（P<0.05）,始基卵泡正常率两组相比差别不明显（P＞0.05）。移植后,始基卵泡正常率及Ang-2的阳性率两组相比均无明显差别（P＞0.05）。解冻后和移植后相比,两组的Ang-2阳性率及A组的始基卵泡正常率差别均不明显（P＞0.05）,B组移植后始基卵泡正常率明显低于解冻后（P<0.05）。 结论 与玻璃化冷冻相比,程序化冷冻对人卵巢组织始基卵泡颗粒细胞Ang-2的表达影响更小。将解冻后的人卵巢组织进行异种移植不影响Ang-2的表达。