桃红四物汤有效成分的交互作用及其对骨痂VEGF蛋白表达的影响

目的:探讨桃红四物汤主次要有效成分的交互作用及其对骨痂微血管新生调控因子VEGF蛋白表达的影响。方法:从桃红四物汤中提取了4类有效成分:总生物碱(A)、总苷(B)、总多糖(C)和总挥发油(D),按照前期实验所得结果(主要成分为A,次要成分为B、C、D),对清洁级小白鼠徒手定点折骨造模后进行实验。按照L8(27)正交设计方案分组,观察分析骨折断端骨痂微血管新生调控因子VEGF蛋白表达,探讨主次要成分之间是否存在交互作用。结果:骨折造模后断端局部出现VEGF蛋白高表达,提取物组表达量显著高于模型组(P0.01);动态观察结果,第2时相点(15 d)以内表达量逐渐升高,在第15天出现表达峰值,此后表达量开始下降;各组间比较,1～8组、10组3个时相点表达量均明显高于9组;在表达峰值(15 d)后VEGF表达量下降过程中,提取物及浓缩剂药物使表达量下降程度减缓,使其在第3时相点(25 d)断端骨痂组织内仍维持高量VEGF蛋白表达。正交实验表明,B药取水平1与水平2差异有统计学意义(P0.05),C药和D药取水平1与水平2差异无统计学意义(P0.05)。结论:有效成分总生物碱与总苷有交互作用,与总多糖和总挥发油无交互作用;总苷、总多糖与总挥发油之间也无交互作用。     

桃红四物汤有效成分的交互作用及其对骨痂微血管形态学的影响

目的:探讨桃红四物汤主次要有效成分的交互作用及其对骨痂组织及骨痂微血管形态的影响。方法:从桃红四物汤中提取了4类有效成分:总生物碱(A)、总苷(B)、总多糖(C)和总挥发油(D),按照前期实验所得结果(主要成分为A,次要部位为B、C、D),对清洁级小白鼠徒手定点折骨造模后进行实验。按照L8(27)正交设计方案分组,观察分析骨折断端骨痂组织形态、微血管新生形态,探讨主次要成分之间是否存在交互作用。结果:提取成分处方组与原方组药物能促进骨折后骨生成细胞、成骨细胞、骨痂微血管的生长,并能使骨新生和微血管新生提早进入塑形期,与模型组比较有统计学意义(P0.05)。其中第1组对骨细胞与微血管新生、重建的促进作用最强。另从L8(27)正交实验方差分析法分析,总苷类取水平1和水平2差异有统计学意义(P0.05),而总多糖和总挥发油类取水平1和水平2均无统计学意义(P0.05)。结论:有效成分总生物碱与总苷有交互作用,与总多糖和总挥发油无交互作用;总苷、总多糖与总挥发油之间也无交互作用。     

加味桃红四物汤阻断大鼠视网膜静脉阻塞模型JAK2-STAT3通路活化的机制

目的 观察加味桃红四物汤对视网膜静脉阻塞（RVO）大鼠模型Janus激酶蛋白2-信号转导及转录因子3(JAK2-STAT3)通路的影响。方法 将8周龄90只SD大鼠随机分成空白组（A组）、模型组（B组）、加味桃红四物汤高浓度组（C组）、加味桃红四物汤中浓度组（D组）、加味桃红四物汤低浓度组（E组）,每组18只。A组不做处理,其他组大鼠右眼使用激光联合孟加拉玫瑰红的方法建立SD大鼠RVO模型。造模成功后,A组与B组予2 mL无菌注射液灌胃,C组、D组、E组灌胃给予低浓度（10 mg/kg）、中浓度（20 mg/kg）、高浓度（40 mg/kg）的加味桃红四物汤。给药后7、14、21 d用HE染色观察各组大鼠的视网膜结构、厚度和节细胞层（GCL）水肿情况,采用Western blot法检测21 d时视网膜组织中Janus激酶蛋白2(JAK2)、磷酸化Janus激酶蛋白2(P-JAK2)、信号转导及转录因子3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录因子3(P-STAT3)的蛋白表达。结果 (1)视网膜结构：7 d时各组视网膜3层结构完整,14 d时各组见散在视网膜静脉血管内血栓部分再通,21 d...     

活血通络汤在激素性股骨头缺血性坏死兔造模过程中对VEGF、BGP和DLL4的影响

目的：研究活血通络汤在SANFH兔造模过程中对Delta样配体4（DLL4）、骨钙素（BGP）、血管内皮生长因子（VEGF）水平的影响。方法：将192只日本大耳兔随机分为模型组A、模型组B、模型对照组C、空白对照组D,各48只,A、B、C组运用贺西京造模法造模。A组第2周开始喂服中药饲料,B组第3周开始喂服中药饲料,C、D组均喂服等量普通饲料。分别于第2、5、8周末检测血中DLL4、BGP、VEGF的水平,同时做股骨头病理镜检,计算空骨陷窝率。结果：第8周时,C组VEGF浓度比D组明显低（P<0.01）,即VEGF表达明显减弱,A组VEGF浓度比C组高（P<0.05）,即VEGF表达增强,B组VEGF浓度比C组高（P>0.05）,差异无统计学意义;第8周时, A、B组BGP浓度比C组明显高（P<0.01）,表示成骨细胞分泌BGP明显增加。A组、B组、C组、D组的DLL4表达值在2、5、8周呈递增趋势;第8周时,A组、B组DLL4表达值低于C组（P>0.05）,差异无统计学意义,A组的增长幅度比C组大;第8周,C组空骨陷窝率明显高于D组（P<0.01）,即骨坏死明显加重,A组、B组空骨陷窝率明显低于C组（P<0.01）,即骨坏死明显减轻。结论：激素可明显抑制VEGF的表达,活血通络汤可上调DLL4表达水平,促进VEGF的表达,提高BGP的含量,从而促进骨坏死的修复,对干预SANFH有显著疗效。     

基于网络药理学预测桃红四物汤促进股骨干骨折愈合的潜在靶点及核心靶点的验证

目的：采用网络药理学方法预测桃红四物汤促进股骨干骨折愈合的药效物质基础及作用靶点,并建立右侧股骨干骨折大鼠模型对关键靶点进行验证。方法：通过TCMSP数据库筛选桃红四物汤的化合物及其作用靶点;使用GeneCards数据库获得股骨干骨折的疾病靶点;采用Cytoscape 3.6.0软件构建“药物-成分-基因-疾病”网络;通过STRING数据库建立靶蛋白交互作用（PPI）网络并分析核心靶点。使用多个剂量桃红四物汤干预右侧股骨干骨折大鼠对核心靶点进行初步验证,通过HE染色法观察桃红四物汤对骨折愈合的影响,利用Western blotting技术检测骨折早期骨痂内核心靶点蛋白的表达情况。结果：筛选后获得14个活性成分,共对应28个靶点。PPI网络分析发现VEGF节点度值最大,为潜在的核心靶点;通过分子对接技术分析可知黄芩苷、β-胡萝卜素可能为靶向VEGF的关键活性化合物。动物实验验证发现,桃红四物汤早期干预后,大鼠股骨干骨折端骨痂成骨进程加快,软骨细胞大量凋亡,成骨细胞不断增加,骨基质分泌增多且钙化加强,并以桃红四物汤高剂量组为佳。VEGF蛋白表达结果表明,与模型组比较,桃红四物汤中、高剂量组...     

桃红四物汤促进随意皮瓣血管再生机制的探讨

目的:探讨桃红四物汤对大鼠皮瓣移植后血管再生的作用机制.方法:将40只SD大鼠按随机排列表法分为A组(实验组)和B组(对照组),每组20只.制成8cm×3cm的背部随意皮瓣,A、B组分别予以桃红四物汤、生理盐水灌胃,于术后3d、7d两时相点,取吻合区皮片组织,免疫组化法染色光镜下观察bFGF及VEGF的含量.结果:术后3d、7d检测吻合区组织中bFGF及VEGF含量,A组各时相点均高于B组,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:桃红四物汤可通过提高皮瓣组织中bFGF与VEGF含量,从而起到促进血管再生的作用.     

桃红四物汤对实验性骨折愈合过程中VEGFmRNA表达的影响

为了解研究桃红四物汤对骨折断端骨痂组织内VEGFmRNA表达的影响.将日本大耳白兔39只随机分成4组,其中3组分别作左侧桡骨中段手术骨折造模后给予桃红四物汤、炎迪宁片、蒸馏水灌胃.另1组为正常对照组,在骨折后7、15、21、35天采用RT-PCR方法检测骨痂组织内VEGFmRNA的表达及变化,并进行半定量对比分析.结果显示桃红四物汤干预后,各时相点骨痂中VEGFmRNA表达量均高于其他各组,并且15天达峰值后下降不显著.表明桃红四物汤能提高骨折愈合各时期断端VEGFmRNA的表达水平,使骨折断端在愈合过程始终保持VEGFmRNA高表达状态,从而促进骨折愈合.     

基于Hippo-YAP信号通路探讨桃红四物汤对BMSCs增殖与成骨分化的影响

目的 分离培养大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,运用桃红四物汤含药血清和Hippo信号通路抑制剂Verteporfin干预,进而观察BMSCs增殖和成骨分化的能力。方法 采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,选用10倍等效剂量的桃红四物汤灌服大鼠制备桃红四物汤含药血清,采取0.9%氯化钠注射液灌胃大鼠制取空白组对照血清,将BMSCs分为3组：空白血清组、桃红四物汤含药血清组（THSWT组）以及桃红四物汤含药血清+Verteporfin组（THSWT+V组）,使用CCK-8分析法分析4个时相点0、1、3、7 d细胞增殖活力;干预7 d后,进行ALP测定,观察骨向分化程度;处理21 d后,进行茜素红染色,观察钙积累,Western blotting法检测各组细胞成骨关键因子及Hippo通路关键蛋白表达。结果 THSWT组BMSCs细胞增殖能力明显高于THSWT+V组及空白血清组（P <0.01）;THSWT组BMSCs成骨分化能力及钙盐沉积程度高于THSWT+V组及空白血清组;THSWT组中YAP蛋白表达低于空白血清组、TAZ蛋白表达高于空白血清组（P <0.05）;THSWT...     

雄芍汤调节TGF-β/Smad通路有效部位的研究

目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础,筛选其调节TGF-β/Smad通路的有效部位。方法：Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组（扶正组）、雄芍汤组（雄芍组）、粗多糖组（多糖组）、总苷组、总生物碱组（总碱组）,二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。造模成功后,开始灌胃给药,治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g·mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg·mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg·mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg·mL-1）,正常组与模型组灌服等量生理盐水,每日1次,疗程4周。4周后处死取材,实时荧光定量PCR检测肝组织TGF-β1mRNA表达,Western blotting检测肝组织Smad3、Smad7蛋白表达。结果：与模型组比较,各治疗组TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达均显著降低,Smad7蛋白表达均显著升高（P〈0.05或P〈0.01）,总苷组Smad7、总碱组与模型组无显著性差异。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤调节TGF-β/Smad通路的有效部位。     

雄芍汤调节TGF-β/Smad 通路有效部位的研究

目的：研究雄芍汤抗肝纤维化的药效物质基础,筛选其调节TGF-β/Smad 通路的有效部位。方法：Wistar 雄性大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊组（扶正组）、雄芍汤组（雄芍组）、粗多糖组（多糖组）、总苷组、总生物碱组（总碱组）,二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型。造模成功后,开始灌胃给药,治疗组分别给予扶正化瘀胶囊（0.105 g?mL-1）、雄芍汤粗多糖提取物（35.420 mg?mL-1）、雄芍汤总苷提取物（25.725 mg?mL-1）、雄芍汤总生物碱提取物（0.196 mg?mL-1）,正常组与模型组灌服等量生理盐水,每日1 次,疗程4 周。4 周后处死取材,实时荧光定量PCR 检测肝组织TGF-β1 mRNA 表达,Western blotting 检测肝组织Smad3、Smad7 蛋白表达。结果：与模型组比较,各治疗组TGF-β1 mRNA、Smad3蛋白表达均显著降低,Smad7 蛋白表达均显著升高（P<0.05 或P<0.01）,总苷组Smad7、总碱组与模型组无显著性差异。结论：粗多糖部位和总苷部位为雄芍汤调节TGF-β/Smad 通路的有效部位。     

具抗氧化活性的中药有效组分的配伍研究

目的:以4种中药有效组分配伍的抗氧化活性为研究对象,探索适合中药多组分多指标"组效关系"的研究方法。方法:基于LARS回归算法和综合权重分析方法,按照均匀试验设计-药效试验-数学建模(模型验证)-综合药效评价程序,进行甘草总黄酮、银杏叶提取物、淫羊藿总黄酮和黄芪总苷4个中药组分不同配伍剂量体外清除DPPH和多环芳烃的研究。结果:采用改进最小角回归分析和综合权重法,评价清除DPPH和多环芳烃的最优综合药效,中药组分配伍最佳剂量组合为甘草总黄酮-银杏叶提取物-淫羊藿总黄酮-黄芪总苷(1∶0.254 5∶0.007 6∶0.011 5)。结论:上述中药组分配伍能有效清除多环芳烃和DPPH,具有良好的抗氧化作用。本实验采用的均匀设计结合综合权重法,适合"非线性、小样本"生物实验数据分析,是进行中药组分配伍筛选评价的适合研究方法。     

黄金菊粉针药效组分红外指纹表征分析

目的:研究黄金菊粉针(金莲花、野菊花、金银花)药效组分的红外指纹表征,为建立中成药组分指纹鉴定法提供科学数据。方法:采用傅里叶红外光谱(Foru ier transform infrared,FT-IR)及其导数光谱法进行测定,用相关系数法进行解析,用原料药和化学药效组分指纹表征表述质量特征。结果:黄金菊粉针有15个红外特征指纹峰(νcm-1),即3 735,2 931,1 664,1 614,1 450,1 408,1 360,1 291,1 191,1 067,915,768,687,597,417;二阶导数光谱的表征峰是1 416 cm-1。原料药效组分表征峰(νcm-1):金莲花为2 926,1 609;野菊花为1 660,1 609;金银花为767。化学药效组分表征峰(νcm-1):Baicalin为1664,1614,1450,1408,1067,915,768,687,597,417;O rientin为2931,1614,1291,1191;V itexin为1614,1360,1067,597;L inarin为1450,1067,597;Chorogen ic ac id为1614,1291,1191;Caffe ic ac id为1450,1360;Hyperin为1360,1291。结论:采用红外药效组分指纹表征鉴别法可评价黄金菊粉针的质量,可反映出其本质的主要特性,具有明显的专属性。     

微波帮助提取中药金银花中有效成分的分析

目的:分析微波帮助提取中药金银花中有效成分的可行性。方法:以中药金银花作为提取对象,采用微波帮助提取以及超声波提取法对中药金银花有效成分进行提取。采用紫外可见分光光度法进行两种方法提取效果的对比。结果:紫外可见光光度法检测结果显示微波帮助提取金银花有效成分的提取率要比超声波提取法高30.2%。微波帮助提取恒定时间为1 min、超声波提取时间为40 min。结论:微波帮助提取中药金银花中有效成分的提取效果较佳,且所需时间较短,可对中药有效成分进行快速分析。     

补骨脂雌激素样作用的有效成分研究

目的筛选中药补骨脂类雌激素样作用的有效成分。方法采用系统溶剂法对补骨脂药材进行分段制样,通过小鼠子宫增重法筛选出活性部位;对石油醚部位进行硅胶柱色谱分离,通过小鼠子宫增重法筛选出有效成分。结果补骨脂石油醚提取部位高剂量组(5g/kg)能显著增加子宫重量和子宫系数,与正常对照组相比有显著性差异(P<0.01),具有较强的类雌激素样作用;从补骨脂石油醚提取部位分离得到的化合物补骨脂酚具有显著的雌激素样活性(P<0.01)。结论补骨脂酚为中药补骨脂雌激素样作用的有效成分之一。     

Effective-constituent compatibility-based analysis of Bufei Yishen formula,a traditional herbal compound as an effective treatment for chronic obstructive pulmonary disease

ObjectiveCritical effective constituents were identified from Bufei Yishen formula (BYF), a traditional herbal compound and combined as effective-constituent compatibility (ECC) of BYF I, which may have potential bioactive equivalence to BYF.MethodsThe active constituents of BYF were identified using four cellular models and categorised into Groups 1 (Bufeiqi), 2 (Bushen), 3 (Huatan) and 4 (Huoxue) according to Chinese medicinal theory. An orthogonal design and a combination method were used to determine the optimal ratios of effective constituents in each group and the ratios of “Groups 1 to 4” according to their pharmacological activity. We also comprehensively assessed bioactive equivalence between the BYF and the ECC of BYF I in a rat model of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).ResultsWe identified 12 active constituents in BYF. The numbers of constituents in Groups 1 to 4 were 3, 2, 5 and 2, respectively. We identified the optimal ratios of effective constituents within each group. In Group 1, total ginsenosides:Astragalus polysaccharide:astragaloside IV ratio was 9:5:2. In Group 2, icariin:schisandrin B ratio was 100:12.5. In Group 3, nobiletin:hesperidin:peimine:peiminine:kaempferol ratio was 4:30:6.25:0:0. In Group 4, paeoniflorin:paeonol ratio was 4:1. An orthogonal design was then used to establish the optimal ratios of Group 1, Group 2, Group 3 and Group 4 in ECC of BYF I. The ratio for total ginsenosides:Astragalus polysaccharide:astragaloside IV:icariin:schisandrin B:nobiletin:hesperidin:peimine:paeoniflorin:paeonol was determined to be 22.5:12.5:5:100:12.5:4:30:6.25:25:6.25. A comprehensive evaluation confirmed that ECC of BYF I presented with bioactive equivalence to the original BYF.ConclusionBased on the ECC of traditional Chinese medicine formula method, the effective constituents of BYF were identified and combined in a fixed ratio as ECC of BYF I that was as effective as BYF itself in treating rats with COPD.     

湿疹汤Ⅱ号内服治疗慢性湿疹临床疗效观察

目的:观察湿疹汤Ⅱ号内服治疗慢性湿疹的临床疗效。方法:将80例慢性湿疹患者随机分为湿疹汤Ⅱ号内服治疗组和左西替利嗪口服对照组各40例。结果:治疗组治愈18例,显效10例,有效9例,无效3例,总有效率92.5%;对照组治愈11例,显效8,有效10例,无效11例,总有效率72.5%,两组总有效率比较有显著性差异(P<0.05)。结论:湿疹汤Ⅱ号内服治疗慢性湿疹有较好的临床疗效。在治疗慢性湿疹方面,中医药具有明显优势,采用中西医结合的方法治疗慢性湿疹,会取得满意效果。     

毛叶木姜子叶挥发油化学成分的研究

 目的：研究毛叶木姜子叶挥发油的化学成分,并与其果油的化学成分作比较。方法：用毛叶木姜子叶的水蒸汽蒸馏所得的油状物,通过气相色谱-质谱分析,结合计算机检索技术对其化学成分进行分离和鉴定,应用色谱峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量。结果：分离和鉴定了41种成分,占挥发油总量的91.46%。结论：毛叶木姜子叶挥发油的主要成分为 单萜和倍半萜,与果实挥发油的化学成分相差很大。     

葡萄糖氧化酶法筛选西洋参干预胰岛素抵抗脂肪细胞模型的活性成分

目的:通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,筛选西洋参干预胰岛素抵抗的活性成分。方法:将西洋参的根部用70%EtOH回流,将提取物进行AB-8型大孔树脂柱色谱分析,按不同浓度洗脱,得到西洋参95%醇提组、西洋参60%醇提组、西洋参30%醇提组和水提组四个部分。本课题组的前期药效学试验已证明,西洋参60%醇提组为活性部位。将西洋参60%醇提部位用硅胶柱色谱及HPLC等现代分离技术与方法分离和纯化,通过理化常数及光谱数据确定其结构,共得12个化合物。将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟的脂肪细胞,给予高糖高胰岛素(25mmol·L-1葡萄糖,1×10-6mol·L-1胰岛素)刺激,建立胰岛素脂肪细胞模型,随机分为空白组、模型组、罗格列酮组、西洋参单体成分组。药物干预培养24h后,通过葡萄糖消耗试验测定西洋参单体成分对IR脂肪细胞模型葡萄糖消耗量的影响,筛选西洋参干预胰岛素抵抗的有效成分。结果:与模型组细胞葡萄糖消耗量比较,罗格列酮组、人参皂苷R3组、20(R)人参皂苷Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、拟人参皂苷F11组细胞葡萄糖消耗量有不同程度的升高,其中人参皂苷R3组、20(R)人参皂苷Rb1组、20(R)人参皂苷Rb2组、罗格列酮组葡萄糖消耗量明显升高,差异极显著(P0.01),拟人参皂苷F11组差异显著,(P0.05)。其余化合物组与模型组比较,葡萄糖消耗量无统计学差异。结论:20(R)人参皂苷Rb1,20(R)人参皂苷Rb2,人参皂苷R3,拟人参皂苷F11可能是西洋参干预IR脂肪细胞模型的活性成分。