川芎提取物对胰腺癌HS 766T细胞体外增殖的影响

目的：研究川芎对胰腺癌HS 766T细胞体外增殖的影响。方法：采用细胞培养的方法建立稳定传代的胰腺癌HS 766T细胞系。采用MTT法检测川芎对HS 766T细胞增殖的作用；采用PI染色、流式细胞分析技术测定川芎作用后HS 766T细胞周期的改变及细胞凋亡情况。结果：川芎可以抑制胰腺癌HS 766T细胞的体外增殖。川芎可以通过阻滞HS 766T细胞G0／G1轴，抑制细胞增殖；通过增加合成期细胞百分比促进细胞凋亡的产生。结论：川芎在体外可以抑制胰腺癌HS 766T细胞的增殖。     

生长抑素对人胰腺癌细胞株HS766T的生长调控

目的 观察生长幔地人胰腺癌细胞株HT766T的生长抑制作用并探讨其作用机制。方法 细胞培养，分别加入不同浓度的生长抑素，应用四甲基偶氮唑盐法观察细胞增殖程度；放射免疫法测定细胞内cAMP含量；Fura-2/AM测定细胞内Ca^2 浓度。结果 不同浓度的生长抑素（10^-6-10^-12M）均能有效地抑制HS766T的生长，能抑制HS766T细胞内cAMP生成和Ca^2＋水平，分别在5min时和3min时作用最大，cAMP生成量和Ca^2 水平与生长抑素浓度呈负相关。它能使垂体腺苷酸环化酶激活多肽（PACAP）诱导的细胞内cAMP生成量和Ca^2 减少。结论 生长抑素能抑制人胰腺癌HS766T细胞的生长，可明显抑制PACAP诱导的细胞的生长。     

Dpc4基因转染胰腺癌细胞株对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的影响

目的 探讨Dpc4基因转染胰腺癌细胞株HS766T对裸鼠移植瘤生长的影响.方法 按pcDNA3,1-Dpc4是否转染人胰腺癌细胞株HS766T将细胞分为pcDNA3.1-Dpc4转染组、pcDNA3.1空载体组和未转染组,RT-PCR鉴定目的基因的表达;将3组细胞分别接种于裸鼠,比较Dpc4基因对裸鼠胰腺癌移植瘤的生长抑制作用,Western blot检测移植瘤中Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达.数据以(x)±s表示,组间比较采用方差分析,两两比较采用SNK-q检验.结果 经RT-PCR鉴定,Dpc4基因在pcDNA3.1 -Dpc4中稳定表达.与pcDNA3.1空载体组和未转染组比较,pcDNA3.1-Dpc4转染组胰腺癌细胞HS766T肿瘤体积更小(F=19.43,P＜0.05);pcDNA3,1-Dpc4转染组与pcDNA3.1空载体组的抑瘤率分别为32.3％和4.0％.与pcDNA3.1空载体组比较,pcDNA3.1 -Dpc4转染组Caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,而Bcl-2蛋白表达显著降低(F=14.24,13.83,19.50,P＜0.05).结论 Dpc4基因转染可抑制裸鼠胰腺癌移植瘤生长.影响肿瘤细胞的凋亡可能是Dpc4基因抗肿瘤作用之一.     

胶质瘤细胞和血管内皮细胞的相互作用对侵袭的影响及其与纤维连接蛋白的关系

目的　探讨胶质瘤细胞和血管内皮细胞的相互作用对胶质瘤细胞侵袭力的影响及其这种影响与纤维连接蛋白 (FN)表达的关系。方法　在体外利用Transwell共培养系统对人脐静脉内皮细胞和C6胶质瘤细胞进行共培养 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和免疫细胞化学方法检测经和C6细胞共培养下血管内皮细胞上FN的基因转录及蛋白的表达情况 ;采用体外快速侵袭力测定法检测C6细胞侵袭力在不同状态的血管内皮细胞作用下的变化及FN抗体对这种变化的影响。结果　人脐静脉内皮细胞经和C6细胞共培养后出现FN的基因转录及蛋白的表达 ;在血管内皮细胞 共培养上清液组 ,C6细胞侵袭Matrigel膜最明显 ,其次是以单纯共培养上清液为诱导剂组 ,两者差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,而在 0 .1%BSA RPMI 164 0 血管内皮细胞组 ,孵育 2 4h仍未发现C6细胞侵袭Matrigel膜。而在FN抗体封闭下孵育 2 4h时只有血管内皮细胞 共培养上清液组的C6细胞出现侵袭 ,但侵袭的细胞数较未封闭的少 (P <0 .0 5 )。结论　胶质瘤细胞和血管内皮细胞相互作用可促进瘤细胞侵袭 ,这种影响与相互作用后内皮细胞表达FN有关。     

右旋柠烯对胃癌细胞粘附和侵袭能力影响的研究

目的观察右旋柠烯对胃癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法用四唑氮蓝比色法检测右旋柠烯对胃癌细胞的抑制作用 ;以纤维粘连蛋白和层粘连蛋白为对象 ,检测右旋柠烯对胃癌细胞与细胞外基质粘附作用的影响 ;利用Transwell小室 ,以Matrigel和纤维粘连蛋白构建重组基底膜 ,检测右旋柠烯对胃癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响 ;应用Westen blot法检测右旋柠烯对胃癌细胞条件培养液中基质金属蛋白酶 2 (MMP 2 )和组织金属蛋白酶抑制剂 2 (TIMP 2 )蛋白表达的影响。结果右旋柠烯对胃癌细胞的生长具有显著的抑制作用 ,并抑制胃癌细胞和细胞外基质的粘附及对重组基底膜的侵袭。右旋柠烯 (0 2 5mmol/L)作用后胃癌细胞培养液上清中TIMP 2表达升高(2 9 5± 0 6 ) ,MMP 2表达下降 (2 9± 0 3) ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 5 )。结论右旋柠烯对胃癌细胞SGC 790 1具有明显的细胞毒作用 ,并可能通过下调胃癌细胞MMP 2和上调TIMP 2的表达抑制其粘附和侵袭。     

体外共培养hBMSCs和HUVECs对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的:利用三维共培养技术体外构建含多种细胞的胰腺癌微组织,研究骨髓间充质干细胞(hBMSCs)、内皮细胞(HUVECs)对Panc-1胰腺癌细胞上皮间质转化的影响。方法:水凝胶复合细胞培养构建三维胰腺癌微组织模型。第一组:单纯Panc-1细胞;第二组:Panc-1细胞复合HUVECs;第三组:Panc-1细胞复合hBMSCs;第四组:Panc-1细胞复合HUVECs和hBMSCs。实时定量PCR分析胰腺癌肿瘤侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP-9)、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail基因。Western blot测定胰腺癌肿瘤侵袭相关的MMP-9、肿瘤上皮间质化E-cadherin和Snail蛋白。结果:HUVECs共培养不影响MMP-9、E-cadherin和Snail基因和蛋白的表达(P>0.05),hBMSCs共培养促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05),同时加入两种细胞促进MMP-9和Snail基因和蛋白的表达、抑制E-cadherin基因和蛋白的表达(P<0.05)。结论:利用水凝胶为载体,加入骨髓间充质干细胞、内皮细胞与Panc-1胰腺癌细胞共培养,成功构建复杂的胰腺癌肿瘤微组织。通过对胰腺癌上皮间质转化相关机制研究,发现骨髓间充质干细胞通过调节MMP-9和上皮间质化对胰腺癌的侵袭行为起重要作用。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭能力影响的初步研究

目的：探讨γ-干扰素对前列腺癌细胞粘附和侵袭行为的影响。方法：用纤维粘连蛋白和层粘连蛋白处理细胞培养板，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞系LNCaP和PC-3粘附作用的影响；用Transwell小室，以Matrigel和纤维粘连蛋白构建基底膜，检测γ-干扰素对前列腺癌细胞侵袭人工基底膜能力的影响；应用Western-blot法检测γ-干扰素对前列腺癌细胞膜粘连蛋白-2（annexin-2）表达的影响。结果：γ-干扰素未处理的两种人前列腺癌细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为46％和40％，γ-干扰素处理的两种细胞系细胞LNCaP、PC-3粘附率分别为21％和23％，同种细胞系γ-干扰素处理组与未处理组间差异有显著性（P均〈0．05）。在相同细胞系γ-干扰素处理组较未处理组前列腺癌细胞24h侵袭能力明显降低（P均〈0．05）。Western印迹结果表明γ-干扰素可显著抑制annexin-2蛋白的表达（P〈0．05）。结论：γ-干扰素可能通过下调annexin-2的表达来抑制前列腺癌细胞的粘附和侵袭。     

血红素氧合酶-1抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用

目的研究血红素氧合酶-1(HO-1)抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。方法采用脂质体介导基因转染技术将PcDNA3-HO-1质粒转入血管内皮细胞。用间接免疫荧光技术在蛋白质水平检测HO-1在血管内皮细胞上的表达;用γ-干扰素(INF-γ)活化血管内皮细胞;用CFSE标记植物血凝素(PHA)活化的JurkatT细胞;采用粘附阻断实验观察转染HO-1的血管内皮细胞和JurkatT细胞间的粘附作用。结果HO-1可在人血管内皮细胞系中稳定表达;转染HO-1的活化内皮细胞与JurkatT细胞的粘附作用显著下降,CFSE标记的阳性率为21.24%,而未转染的对照组CFSE标记的阳性率为56.16%,两组相比,差异有统计学意义(P<0.05);应用HO-1抑制剂ZnPP后,粘附抑制作用消失。结论HO-1可以明显抑制T淋巴细胞对血管内皮细胞的粘附作用。     

血管生长抑素基因联合生长抑素治疗人胰腺癌的体外研究

目的 探讨血管生长抑素基因联合生长抑素在体外对人胰腺癌细胞BXPC-3和血管内皮细胞ECV-304增殖的抑制作用.方法 重组pcDNA3/angio质粒转染人胰腺癌细胞BXPC-3,利用RT-PCR和Western blot检测其表达及分泌血管生长抑素的情况;MTT法和流式细胞仪检测生长抑素和血管生长抑素对BXPC-3和ECV-304细胞增殖的影响.结果 转染后的BXPC-3细胞表达并分泌血管生长抑素.一定浓度(≥10μg/ml)的生长抑素对BXPC-3细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01),并在一定浓度范围内呈剂量依赖性,同时能诱导BXPC-3细胞凋亡(P<0.01);但其对ECV-304细胞的增殖无明显影响(P>0.05).血管生长抑素对ECV-304细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.01),并能诱导其凋亡(P<0.01);但对BXPC-3细胞的增殖无明显影响(P>0.05).血管生长抑素联合生长抑素对BXPC-3及ECV-304细胞的增殖均有明显抑制作用(P<0.01),也可诱导其凋亡(P<0.01),但无协同增强效应.结论 ①生长抑素主要通过直接抑制胰腺癌细胞增殖、促进其凋亡而发挥抗胰腺癌作用;在体外其对血管内皮细胞无抑制作用.②血管生长抑素主要通过特异性地抑制胰腺癌血管内皮细胞的增殖并诱导其凋亡,从而抑制新生毛细血管的生成,致胰腺癌细胞坏死和肿瘤消退.     

抑制核因子-κB的活性减少内皮细胞与T淋巴细胞粘附

目的探讨抑制核因子κB(NFκB)对内皮细胞活化及内皮细胞与T淋巴细胞粘附的影响。方法应用pCMVIκBαM质粒建立稳定表达突变型IκBα蛋白的内皮细胞系,同时以表达野生型IκBα蛋白(pCMVIκBα)的内皮细胞作为对照。通过逆转录聚合酶链反应及流式细胞仪检测细胞表面细胞间粘附分子1(ICAM1)、血管细胞粘附分子1(VCAM1)和P选择素的变化,并将两种转染细胞分别与人T淋巴细胞株Jurkat细胞混合培养,通过相差显微镜下细胞计数来观察内皮细胞与T淋巴细胞的粘附情况。结果高表达突变型IκBα蛋白的内皮细胞的NFκB活性被显著抑制,其ICAM1mRNA和VCAM1mRNA水平明显低于对照细胞(P<0.05),细胞表面的ICAM1、VCAM1和P选择素的表达较对照细胞显著减少(P<0.05),与T淋巴细胞的粘附较对照细胞显著减少(P<0.05)。结论抑制核因子κB的活性能有效减少内皮细胞与T淋巴细胞的粘附。     

siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的:探讨慢病毒介导的siRNA沉默HER2对人胰腺癌细胞株PANC-1侵袭能力的影响。方法:运用HER2基因小干扰RNA(siRNA)的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞,荧光定量RT-PCR和Western blotting观察HER2 mRNA和蛋白表达的改变,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒稳定转染PANC-1细胞可显著抑制HER2 mRNA和蛋白表达;体外侵袭实验显示siRNA沉默HER2后,PANC-1细胞侵袭能力明显下降。结论:HER2基因小干扰RNA的重组慢病毒能有效抑制HER2的表达,抑制胰腺癌细胞体外侵袭能力。siRNA沉默HER2可能为预防和治疗胰腺癌的侵袭转移提供一种新的策略。     

利多卡因抑制内皮细胞粘附因子表达进而抑制肝癌细胞粘附脐带静脉内皮细胞

【摘要】 目的 探讨利多卡因对血管内皮细胞粘附因子表达的影响。方法 采用不同浓度利多卡因预处理脐带静脉内皮细胞（HUVECs）30 min后,加入肿瘤坏死因子α（TNFα）进行刺激。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测选择素E（CD62E）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达量,蛋白免疫印迹分析NF-Kappa B（NF-κB）通路蛋白的改变,并通过细胞粘附实验评估利多卡因预处理对肝癌细胞（HepG2）粘附于HUVECs的影响。结果 利多卡因预处理可以明显抑制p65并抑制HepG2粘附于HUVECs。qRT-PCR结果表明利多卡因预处理可明显抑制TNF-α刺激后的CD62E、VCAM-1和ICAM-1表达水平的增高。结论 利多卡因可能通过抑制NF-κB通路进而抑制细胞粘附因子表达并抑制结肝癌细胞粘附于血管内皮细胞。     

白藜芦醇抑制膀胱癌细胞体外侵袭能力的研究

目的探讨白藜芦醇对膀胱癌T24细胞体外迁移与侵袭能力的影响及可能的机制。方法采用划痕试验检测白藜芦醇对T24细胞体外迁移能力的影响,Transwell实验检测白藜芦醇对T24细胞体外侵袭能力的影响,Real-time PCR与Western检测白藜芦醇对MMP-2与MMP-9蛋白表达水平变化的影响。结果 30μmol/L白藜芦醇处理T24细胞24h与48h后,划痕试验发现白藜芦醇可抑制T24细胞体外迁移能力,Transwell实验证实白藜芦醇可抑制膀胱癌T24细胞体外侵袭能力。Real-time PCR与Western结果表明,白藜芦醇可从mRNA与蛋白水平抑制MMP-2与MMP-9的表达,且呈时间依赖性。结论白藜芦醇可能通过下调MMP-2与MMP-9的表达而抑制膀胱癌T24细胞体外迁移与侵袭能力,可能成为治疗膀胱癌的新策略。     

氟伐他汀诱导人膀胱癌细胞凋亡抑制细胞增殖与迁移的研究

目的 研究羟甲戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂--氟伐他汀在体外对人膀胱癌T24细胞凋亡、增殖和迁移及侵袭能力的影响,并探讨相关分子机制.方法 MTT法检测氟伐他汀对T24细胞增殖的影响;流式细胞术(PI和Annexin V双染法)检测细胞凋亡率的变化;划痕愈合和Transwell试验检测氟伐他汀对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot检测Bax、Cleaved-caspase-3等蛋白的表达情况.结果 氟伐他汀在体外能显著抑制T24细胞的增殖,成明显浓度和时间依赖性;可以显著诱导肿瘤细胞凋亡;能显著抑制T24细胞的迁移和侵袭能力.结论 氟伐他汀能显著诱导T24细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力.     

Tumstatin活性片段-T7肽抑制血管生成的实验研究

目的:探讨肿瘤抑素(Tumstatin)的活性片段T7肽在体外对血管生成的影响及相关机制。方法:选取人脐静脉内皮细胞(HUVECs)作为研究对象,在模拟肿瘤缺氧微环境的缺氧培养箱内进行相关实验。分为缺氧对照组、缺氧+T7肽(1.0μmol/L)处理组、缺氧+T7肽(2.0μmol/L)处理组。体外小管形成实验观察T7肽在缺氧环境下对血管生成的影响;CCK-8法检测T7肽对HUVECs活力的影响;Annexin V-FITC法检测细胞凋亡情况;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达变化;免疫荧光及Western blot检测HUVECs中VE-钙黏蛋白表达变化。结果 :在缺氧环境下,T7肽可明显抑制体外血管生成(P0.05),并显著降低HUVECs活力,促进其凋亡(P0.05);T7肽可诱导促凋亡蛋白BAX表达增加(P0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.01);T7肽可降低HUVECs内VE-钙黏蛋白的表达(P0.05)。结论:T7肽可通过抑制内皮细胞活力、促进内皮细胞凋亡及降低VE-钙黏蛋白表达发挥其抗血管生成的作用。     

β1整合素反义寡核苷酸对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响

目的观察β1整合素反义寡核苷酸（ASODN）对人胰腺癌BXPC-3细胞体外侵袭力的影响。方法采用脂质体将不同浓度β1整合素ASODN转染到人胰腺癌BXPC-3细胞中，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、Western印迹法和Transwell侵袭室方法分别检测细胞β1整合素mRNA、蛋白表达水平及体外侵袭能力。结果与对照组相比，32～128mg／LASODN转染后可抑制β1整合素mRNA和蛋白的表达（P〈0．05），64mg／LASODN转染使BXPC-3细胞体外侵袭力明显下降（P〈0．05）。结论靶向β1整合素的ASODN可有效抑制其在人胰腺癌BXPC-3细胞中的表达。并降低癌细胞体外侵袭力。     

骨形态发生蛋白对骨骼肌卫星细胞粘附特性的影响及其机制

目的：探讨骨形态发生蛋白（BMP）对骨骼肌卫星细胞粘附特性的影响。方法：体外获取与培养骨骼肌卫星细胞，分别用0、50、100、500、1000μg/L的BMP诱导培养基诱导培养48h。通过荧光法测定接种后1h的粘附细胞率，利用放射免疫法测定细胞层粘连蛋白的含量。结果：BMP可促进骨骼肌卫星细胞的粘附，在500μg/L的浓度时粘附率最高，当BMP浓度进一步增加时，细胞粘附率不再增加；BMP诱导后可促进骨骼肌卫星细胞层粘连蛋白的表达，当BMP浓度为500μg/L时这种作用最强。结论：BMP可增强骨骼肌卫星细胞的粘附特性，其机制与层粘连蛋白的表达增高有关。     

抑制信号传导与转录激活因子3对人胰腺癌体外血管生成的影响

目的　探讨RNA干扰(RNAi)抑制信号传导与转录激活因子3(STAT3)对人胰腺癌体外血管生成的影响及其机制.方法 RNAi抑制胰腺癌细胞株SW1990细胞中STAT3、噻唑蓝(MTT)和流式细胞技术分别检测胰腺癌细胞上清液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞增殖和细胞周期的影响.体外迁移实验检测胰腺癌细胞上清液诱导的HUVEC迁移能力;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰腺癌细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达.结果　MTT和流式细胞仪结果显示RNAi抑制STAT3后,HUVEC增殖能力下降,24、48、72 h的细胞增殖率分别为(1.19±0.11)％、(1.62±0.15)％、(1.95±0.18)％;细胞周期阻滞于G0/G1期,为(80.95±7.49)％.体外迁移实验显示RNAi抑制STAT3后,HUVEC迁移能力明显减弱.ELISA显示RNAi抑制STAT3后,VEGF蛋白表达下降60％.结论　RNAi抑制STAT3可以通过下调VEGF,抑制胰腺癌细胞体外血管生成能力.