c-erbB-2与bcl-2基因蛋白表达在人肺癌组织分型及分化中的关系及意义

一、材料与方法采用暨南大学第一附属医院外科肺癌术后标本，参照ＷＨＯ（１９８１）的组织学分类标准，筛选病理组织学分型及分化程度较明确的肺癌组织标本１１０例。其中，４０例鳞癌（高分化１３例，中分化１２例，低分化１５例）；４１例支气管性腺癌（未含粘液性腺癌...     

四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

目的 研究由四环素调控的反义bcl-2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK－N－MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1^CMV/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine^TM介导转染SK－N－MC细胞,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）研究细胞凋亡中bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl-2及其上下游相关基因caspase-3、PARP的变化。结果 转染反义bcl-2的细胞生长增殖缓慢,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase-3酶原蛋白减少并检测到bcl-2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达无明显变化。结论 反义bcl-2 mRNA可抑制SK－N－MC细胞的生长和增殖,促进去血清培养所诱导的SK－N－MC细胞的凋亡。大细胞凋亡过程中caspase-3被激活,bcl-2和PARP蛋白被裂解,但bcl-xL/bcl-xS在反义bcl-2 mRNA诱导的SK－N－MC细胞的凋亡过程中无变化。     

c-erbB-2、nm23和bcl-2蛋白在乳腺癌中的意义及其相关性的探讨

我们用免疫组化ＡＢＣ法观察了三种有代表性的不同类别的癌基因产物在乳腺癌中的表达，探讨其与乳腺癌临床病理参数、预后和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）、雌激素受体（ＥＲ）、孕激素受体（ＰＲ）的关系，以及它们之间的相互关系。一、材料与方法１．材料：我院１９８８年...     

p53和bcl-2蛋白过度表达与大肠癌生物学行为的关系

目的：探讨p53蛋白和bcl－2蛋白共同表达与大肠癌生物学行为的关系。方法：应用免疫组织化学染色ABC法检测p53蛋白及bcl－2蛋白在67例大肠癌组织中的表达。结果：全阴性组和p53阴性bcl－2阳性组的PCNA增殖指数低于p53阳性bcl－2阴性组及全阳性组（P＜0．01或P＜0．05）。全阳性、p53阳性bcl－2阴性组及p53阴性bcl－2阳性组均多呈浸润性生长（P＜0．01或P＜0．05）。全阳组浸润深度多至浆膜外（P＜0．01或P＜0．05）。两蛋白全阴性组5年生存率高（P＜0．05）。P53和bcl－2蛋白表达与大肠癌Dukes分期、淋巴结转移和组织学类型均无统计学意义。结论：bcl－2蛋白表达对细胞增殖的相关性不大。主要是p53蛋白的作用。只要有1种蛋白表达时大肠癌即多呈浸润性生长，两种蛋白全部阳性组浸润深度较深，蛋白全部阴性组的预后较好，提示p53和bcl－2蛋白的表达情况可部分地反映大肠癌的生物学行为。     

胃黏膜相关淋巴组织型淋巴瘤细胞凋亡和bcl—2、p53蛋白表达

目的 :探讨胃黏膜相关淋巴组织型 (MALT)淋巴瘤中细胞凋亡特点及其与bcl 2、p5 3基因蛋白表达的关系。 方法 :应用TdT酶介导生物素化dUTP缺口末端标记 (TUNEL)技术 ,显示肿瘤凋亡细胞 ,免疫组织化学S P法显示bcl 2、p5 3基因蛋白表达。结果 :低度恶性 ,低高混合恶性 ,以及高度恶性组肿瘤细胞凋亡率平均分别为 (0 2 5± 0 12 ) %、(0 46± 0 2 4) %及 (1 32± 0 35 ) % ;而三组bcl 2阳性率分别为 83%、61 6 %及 43 7%。高度恶性组与低度恶性组bcl 2阳性率及凋亡发生率均差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;bcl 2表达与凋亡率呈显著负相关 (P <0 0 5 ) ;86例肿瘤组织中 ,p5 3阳性者 2 7例 (30 % ) ,其中低度恶性组 3例 ,混合恶性组 3例 ,高度恶性组 2 1例。高度恶性组 p5 3阳性率高于其余两组。p5 3表达与bcl 2表达著负相关 (P <0 0 5 )。结论 :在胃MALT淋巴瘤中 ,随着组织学分级的提高 ,凋亡细胞显著增多 ,凋亡在肿瘤发生发展转化中起重要作用。p5 3和bcl 2均为重要的凋亡调控基因 ,在胃MALT淋巴瘤从低度恶性到高度恶性的转化中 ,p5 3和bcl 2基因可能起重要作用。     

cyclin D1、bcl-2和fas蛋白与霍奇金淋巴瘤R-S/H细胞凋亡及增殖的关系

目的 :探讨cyclinD1蛋白与霍奇金淋巴瘤 (HL)R S/H细胞凋亡及增殖的关系。 方法 :利用免疫组化检测了 40例HL中R S/H细胞bcl 2、fas及cyclinD1的表达。结果 :bcl 2和fas蛋白阳性信号在R S/H细胞中主要呈浆 膜型。在HL 4种亚型 (LP、NS、MC和LD)中bcl 2阳性细胞密度逐渐增高 (P <0 0 5 ) ,而fas阳性细胞密度依次降低 (P <0 0 1) ,并呈明显负相关(r =- 0 5 6 90 )。在 40例HL中cyclinD1阳性表达率为 70 % (2 8/ 40 ) ,阳性信号主要位于核内 ;cyclinD1阳性病例中的bcl 2阳性细胞密度显著高于fas阳性细胞密度 (P <0 0 1) ,而在cyclinD1阴性病例中两者差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;在cyclinD1阳性和阴性病例中 ,bcl 2和fas阳性细胞密度均呈明显负相关 (分别r =- 0 6 131,r =- 0 7310 )。结论 :cyclinD1可能在HLR S/H细胞增殖中与bcl 2蛋白具有协同作用 ,并与fas蛋白一起调控R S/H细胞的增生与凋亡 ;bcl 2和fas的表达与HL不同组织学亚型及预后有关。     

细胞周期蛋白D1和bcl-2蛋白在鼻咽区非霍奇金淋巴瘤中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

我们选择了细胞周期蛋白(cyclin)D1蛋白和bcl-2蛋白及增殖和凋亡指数，分别从淋巴瘤的增殖和凋亡两方面进行观察，以探讨该指标在鼻咽区非霍奇金淋巴瘤中的表达水平及其意义。     

肝癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达及其与血管形成、bcl-2和细胞增生的关系

一氧化氮合酶 (NOS)是NO合成的关键限速酶 ,它的生物学活性直接决定着NO的合成量。NOS有两个异构体 ,即结构型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)。通常iNOS与肿瘤的免疫相关 ,且产生NO的能力较cNOS高出 10 0～ 10 0 0倍。NOS活性的增高与肿瘤血管形成关系密切[1] 。另有研究显示 ,iNOS产生的NO可通过bcl 2介导途径抑制细胞凋亡并有利于生长停止的肿瘤细胞的存活[2 ] 。我们采用免疫组织化学法检测肝细胞性肝癌中iNOS、血管内皮生长因子(VEGF)、CD34标记的微血管密度 (MVD)及凋亡相关蛋白bcl 2和p5 3蛋白的表达。同时应用流式…     

膀胱癌中p53、c—myc和bcl—2的表达及意义

目的：研究癌基因和抗癌基因蛋白产物在膀胱移行细胞癌组织中异常表达与病理分级,临床分期间关系。方法：应用免疫组化S－P法检测96例膀胱移行细胞癌中p53,c-myc和bcl-2的表达水平。结果：96例膀胱移行细胞癌中p53,c-myc和bcl-2的阳性表达率分别为60．4％,68．8％和81．3％,结果表明,p53,c-myc和bcl-2异常表达与膀胱移行细胞癌的分级和分期间差异有统计学意义。结论：p53,c-myc和bcl-2表达在膀胱癌的发生发展中起重要作用。在膀胱癌变过程中,有多种癌基因的变化。     

鼻T细胞性淋巴瘤细胞凋亡和增生的比较研究

为研究鼻Ｔ细胞性淋巴瘤细胞凋亡和增生二者的数量变化及其与该病的临床表现，病理及预后的关系，采用原位末端标记ＤＮＡ片断技术，配合Ｋｉ－６７抗原的表达，对３０例鼻Ｔ细胞性淋巴瘤进行凋亡细胞，增生细胞及细胞分裂像的定量计数观察，并与临床病理表现及生存情况等进行比较和统计学分析。２８例进行了６～２９个月的随访观察，８例死于该病的复发和恶化。结果表明：（１）凋亡细胞与Ｋｉ－６７阳性细胞的数量变化呈明显正相关（Ｐ＜０．０１），与分裂像数及ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达和患者的临床分期等未见明显关系；（２）Ｋｉ－６７阳性细胞数量变化与患者的平均生存时间有明显关系（Ｐ＜０．０２），但凋亡细胞的数量变化及各形态学指标与患者的平均生存时间未见明显关系。还对细胞增生、凋亡、ｂｃｌ－２癌基因蛋白的表达及ＥＢ病毒感染等彼此之间的关系进行了讨论。     

胶质瘤bcd—2基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的 探讨胶质瘤细胞ｂｃｌ－２基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法 以６９例不同级别的人胶质瘤组织为研究对象,用原位杂交及免疫组化染色ＡＢＣ法分别检测ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ、ｂｃｌ－２蛋白和增殖细胞核抗原（细胞增殖活性标记物）的表达,并用３’末标记法做原位细胞凋亡检测。结果 ６４例（９２．８％）表达ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ,６０例（８７．０％）表达ｂｃｌ－２蛋白,两者的表达水平呈正     

大鼠实验性心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系

目的 探索心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系。方法 结扎大鼠左侧冠状动脉造成心肌缺血,10min—7d后取心脏标本做末端脱氧核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)原位细胞凋亡染色、Fas、bcl-2蛋白的免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物法(ABC法)染色。结果 在时间上,心肌细胞凋亡从缺血后3h开始,36h仍较显著,7d时TUNEL法检测不到凋亡细胞;而bcl-2、Fas分别于缺血后10min和3h开始检出,持续到缺血后7d;在组织学关系上,凋亡的心肌细胞和Fas、bcl-2阳性细胞不在心肌同一区域,凋亡的心肌细胞在心肌缺血区,Fas、bcl-2表达在无明显缺血的心肌区域。结论 Fas、bcl-2的表达可能并不直接参与缺血心肌细胞凋亡的调控。     

鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白1的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨治疗前鼻咽癌组织中潜伏膜蛋白１（ＬＭＰ－１）的表达对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集未经治疗的鼻咽癌活检组织标本５５例,采用原位分子杂交和免疫组化检测ＥＢＵ病毒编码的小ＲＮＡｓ和ＬＭＰ－１以及癌细胞增殖细胞核抗原指数和癌组织中凋亡要关基因产物ｂｃｌ－２的表达,以末端标记原位细胞死亡指数（ＴＵＮＥＬ ｉｎｄｅｘ ＴＩ）表示癌细胞的凋亡程度。结果（１）５５例末治疗鼻咽癌组织中２７例呈ＬＭＰ     

芹菜素对人肺癌A549细胞凋亡及相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响

目的研究芹菜素对人肺癌 A549细胞增殖抑制和凋亡诱导作用与 Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法10~80μmol/L 不同浓度芹菜素作用 A549细胞,采用 MTT 法检测芹菜素对 A549细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258细胞核染色法观察芹菜素诱导细胞凋亡形态学的变化;流式细胞仪 AnnexinV- FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡率;Western blot 法检测凋亡相关蛋白 Bax 和 Bcl-2表达的变化。结果 MTT 法显示,芹菜素对 A549细胞有显著的增殖抑制作用（P <0.01）,且具浓度和时间依赖性;荧光显微镜下观察到芹菜素处理组细胞出现典型的凋亡形态学改变：细胞核固缩、染色质凝集和核碎片化等;流式细胞仪分析结果显示,芹菜素呈浓度依赖性诱导 A549细胞凋亡;Western blot结果显示,促凋亡蛋白 Bax 随着芹菜素浓度升高表达增加,抗凋亡蛋白 Bcl-2随着芹菜素浓度升高表达减少。结论芹菜素具有抑制人肺癌 A549细胞增殖,诱导其凋亡的作用,其机制可能与上调 Bax 蛋白表达和下调 Bcl-2蛋白表达有关。     

胃癌及其癌前病变中细胞凋亡及其调控基因的表达

目的:通过观察胃癌及其癌前病变中细胞凋亡及其调控基因p53、bcl-2、c-myc的表达,探讨其在胃癌恶性转化进程中的作用。方法:利用DNA末端标记技术(TdT-mediateddUTP-biotinnickendlabeling,TUNEL法)和免疫组织化学(streptavidin/peroxidase,S-P法),原位观察了46例胃癌、20例癌前病变、24例正常粘膜中的凋亡细胞和p53、bcl-2、c-myc的表达。结果:癌前病变和胃癌中凋亡指数显著高于正常粘膜(P＜0.01),癌前病变组高于胃癌组(P＜0.01)。p53、bcl-2、c-myc蛋白在胃癌中阳性率分别为60.9%、67.4%、73.2%,均高于正常粘膜组(P＜0.01);在癌前病变中3种蛋白阳性表达率分别为40%、95%、58.8%(P＜0.01)。胃癌中p53、bcl-2蛋白阳性细胞凋亡指数分别低于阴性组(P＜0.05),c-myc蛋白阳性组细胞凋亡指数高于阴性组(P＜0.01)。结论:细胞凋亡调控异常在胃癌发生中可能起重要作用。p53、bcl-2蛋白分别抑制细胞凋亡,c-myc蛋白在胃癌中促进细胞凋亡。     

bcl-6基因5'非编码区突变与弥漫性大B细胞淋巴瘤生发中心亚型的相关性

目的 分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中bcl-6基因5'非编码区突变频率及与其生发中心B细胞(GCB)型的相关性.方法 对60例DLBCL行套式PCR检测t(14;l8)易位,并经免疫组织化学EnVision两步法进行GCB和非GCB分子分型.PCR扩增bcl-6主要突变区,测序检测突变位点.结果 60例中7例(11.7%)发生t(14;18)易位,为主要断裂点发生转位;联合免疫组织化学分析和t(14;18)易位检测,筛选出GCB型18例和非GCB型42例;5'非编码区总突变率为20.0%(12/60),GCB型突变率为7/18,非GCB型突变率为11.9%(5/42);+363和+469位点频繁发生突变.结论 DLBCL的bcl-65'非编码区发生突变频率较国外低,突变多发生于GCB型中.t(14;18)易位检测有助于DLBCL的分子分型.     

Bcl－2家族蛋白质的相互作用的机制和应用

 细胞死亡一般有两种方式：细胞坏死（necrosis）和细胞凋亡（apoptosis）。细胞坏死使细胞膜破裂，引起细胞内物质释放，进而影响其他细胞，引发炎症反应；而细胞凋亡只是个别细胞的行为，发生于局部，不会影响其他细胞，也不引起炎症反应，对维持细胞正常发育和体内环境的平衡具有重要作用。目前细胞凋亡已成为癌症和神经退行性疾病药物开发的一个重要研究方向。 Bcl-2 家族蛋白质是线粒体凋亡途径的主要调控因子，是开发治疗癌症和神经退行性疾病的细胞凋亡相关药物的一类重要靶标^[1]。自2000年以来，通过虚拟筛选、体外竞争性分子结合试验等手段发现了一批具有开发前景的先导化合物，有些已经进入临床前研究。Bcl-2 家族蛋白质对细胞凋亡的调控需要通过该家族中各蛋白质的相互作用以及该家族蛋白质与其他蛋白质的相互作用，这些蛋白质之间的相互作用是针对该家族蛋白进行药物开发的基础。......     

细胞周期蛋白D1、Ki-67和bcl-2的表达与CD117阳性的胃肠道间质瘤生物学行为的关系

目的 检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、Ki-67和bcl-2在胃肠道间质瘤（GIST）中的表达,探讨它们在GIST发生、发展中的作用及临床病理意义。方法 59例手术切除GIST标本进行CD117、CD34、平滑肌肌动蛋白（SMA）、结蛋白、S-100、cyclin D1、bcl-2和Ki-67免疫组织化学染色,同时进行病理形态学观察包括形态学类型、肿瘤大小、坏死和核分裂象。所有病例随访2～9年。所有数据进行单因素、多因素和相关分析。结果 随访40例患者一直健在,15例患者死于GIST,4例患者死于其他原因。统计学分析显示肿瘤直径〉5cm、有坏死、核分裂象在每50个高倍视野〉5个、Ki-67增殖指数（LI）〉5％、cyclin D1和bcl-2免疫组织化学染色强阳性都可以作GIST患者手术后的预测指标,且具有统计学意义;核分裂象和Ki-67增殖指数是独立的预测指标;Ki-67 LI≥5％和核分裂象≥5／50 HPF呈正相关（r=0．532,P〈0．01）;cyclin D1与bcl-2强阳性表达呈正相关（r=0.273,P〈0．05）。结论 肿瘤大小、坏死、核分裂象、cyclin D1、Ki-67增殖指数和bcl-2可作为GIST患者临床预测指标;核分裂象和Ki-67增殖指数可作为独立的预测指标;cyclinD1与bcl-2呈明显相关性,Ki-67免疫组织化学染色可以代替核分裂象作为一项很有用的预测指标。     

上海地区弥漫性大B细胞淋巴瘤的生发中心B细胞样型显著偏低

目的 探讨中国上海地区弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的生发中心B细胞(GCB)样型与非GCB样型的分布以及可能影响因素.方法 应用免疫组织化学EnVision法分析124例来自该院的原发DLBCL中CD10、bcl-6、MUMl、GCET1和FOXP15种蛋白的表达,采用Hans和Choi两种免疫表型分型法进行分型.其中118例应用荧光原位杂交技术检测t(14;18)和bcl-6基因重排情况.结果 使用Hans法对124例DLBCL进行分型,27例(22%)为GCB样型,97例(78%)为非GCB样型.使用Choi法进行分型显示34例(27%)为GCB样型,90例(73%)为非GCB样型(即ABe样型).GCB样型显著低于非GCB样型(P=0.0001).t(14;18)易位仅4例(3%),3例发生于GCB样型中.bcl-6基因重排阳性的病例为46例(39%),高发于GCB样型中.bcl-6基因重排与bcl-6蛋白表达没有明显相关性.结论 中国上海地区DLBCL的GCB样型显著低于非GCB样型,可能与其DLBCL的t(14;18)低水平发生有关.     

Caspase-4在霍奇金及间变性大细胞淋巴瘤中的表达

目的:在利用基因芯片技术研究霍奇金氏淋巴瘤(HL)及间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)细胞株凋亡相关基因的表达时发现caspase-4 在两者的mRNA表达水平存在明显差异的基础上,我们拟检测caspase-4在HL 及ALCL肿瘤组织中蛋白质水平的表达及试图探讨它们的表达与此两种淋巴瘤的发生机制的关系。方法:选取临床手术切除、石蜡包埋的标本HL 18例、ALCL 15例,4 μm厚连续切片,HE染色及CD30(Ber-H2)、CD15(C3D-1)、CD20(L26)、CD45RO(UCHL1) 等免疫组织化学染色,通过形态学和免疫分型进行严格的病例筛选,确定诊断。切片经微波抗原修复,抗caspase-4抗体(SP法)染片,DAB显色,光学显微镜高倍镜下计数阳性细胞。结果:在ALCL组,15/15例(100%)均高表达caspase-4;而在HL病例组16例(88.8%)不表达、2例(11.2%)弱表达caspase-4,两者表达差异显著(P<0.01)。结论:①Caspase-4在两种淋巴瘤中的表达存在明显差异,即在ALCL的表达明显高于在HL的表达。Caspase-4在HL和ALCL中表达的显著差异,提示两种肿瘤在发生发展的过程中存在不同的病理机制以及细胞凋亡信号转导途径受损部位不同。②Caspase-4的表达特点有助于HL及ALCL的鉴别诊断。