甘氨酸对大鼠腹腔巨噬细胞钙离子浓度的影响

Ｃａ2 + 在ＬＰＳ激活巨噬细胞 (ＭΦ)的过程中起着重要作用。我们应用荧光指示剂Ｆｕｒａ 2 ＡＭ观察 2ｍｍｏｌ Ｌ甘氨酸对ＬＰＳ诱发的Ｗｉｓｔａｒ大鼠腹腔ＭΦ[Ｃａ2 + ]ｉ升高的作用 ,结果见表 1。有研究发现 ,甘氨酸可剂量依赖性地抑制ＬＰＳ诱发的大鼠Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞[Ｃａ2 + ]ｉ升高和ＴＮＦ α产生 ,低浓度士的宁可拮抗此作用 ,而培养液不含氯离子时 ,此作用消失 ,提示Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞表面存在类似神经系统中的甘氨酸受体 (本质是甘氨酸调控的Ｃｌ- 通道 ,结合甘氨酸后通道开放 ,Ｃｌ- 快速内流引起细胞内电位下降 ,导致…     

LPS刺激后细胞内静态游离钙浓度[Ca2+]i升高

目的 :前文已报道 ,Ｍ细胞ＲＡＷ2 64 7在ＬＰＳ预处理后诱导了致敏和耐受 ,提示ＬＰＳ预处理引起细胞内参与反应的信号转导分子或效应分子发生了某种变化。已知 [Ｃａ2 ]ｉ在白细胞活化中的重要性以及静态 [Ｃａ2 ]ｉ与Ｍ反应性有密切关系 ,因此我们推测ＬＰＳ预处理可能引起了静态 [Ｃａ2 ]ｉ的变化。方法 :ＲＡＷ2 64 7细胞培养条件见 ;细胞在置有载玻片的 6孔板中完全贴壁后 ,ＬＰＳ1 0ｎｇ/ｍＬ作用 1 8ｈ ,取玻片 ,Ｆｕｒａ - 2负载 ,测细胞内钙。结果及讨论 :8批实验结果中 ,有 7批ＬＰＳ预处理后 ,[Ｃａ2 ]ｉ均明显升高如下…     

蛋白激酶C在调节血管内皮细胞通透性中的作用

蛋白激酶Ｃ(ｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ ,ＰＫＣ)是一种钙或 /通过激活ＰＫＣ来增加内皮细胞的通透性 ,同时伴有细胞间连接缝隙增宽[2 ] 。而ＰＫＣ活性的抑制剂如隙形成 ,导致通透性的升高[9] 。2　参与调节内皮细胞通透功能的ＰＫＣ亚型和激活通路 ,引起蛋白质如细胞骨架蛋白的磷酸化 ,最终导ＤＡＧ再分别激活以Ｃａ2 +和ＰＫＣ为代表的两条信号ＰＫＣ活化和Ｃａ2 +升高 ;再由Ｃａ2 +与钙调蛋白结合形成Ｃａ2 +-ＣａＭ ,激活ＭＬＣＫ ;最后由ＭＬＣＫ介导ＭＬＣ蛋白激酶C在调节血管内皮细胞通透性中的作用@杨滔$第一军医大学病理生理…     

小鼠腹腔巨噬细胞内的游离钙离子浓度 及PMA、fMLP反应性的不均一性

目的 :巨噬细胞 (Ｍ)的反应性是炎症过程中的重要问题。迄今为止绝大多数的工作是以细胞群作为研究对象。我们推测在细胞群中各个细胞的反应可能是不一样的 ,因此有必要在单细胞水平上对白细胞的反应性进行研究。本实验以细胞内游离钙离子浓度 ( [Ｃａ2 ]ｉ)为指标 ,测定了静息状态下单个腹腔Ｍ内 [Ｃａ2 ]ｉ水平及其对ＰＭＡ、ｆＭＬＰ的反应性。方法 :用生理盐水灌洗昆明小鼠腹腔获得Ｍ ,在铺有鼠尾胶的盖玻片上贴壁 30～ 90ｍｉｎ后用 2 μｍｏｌ/ＬＦｕｒａ - 2 /ＡＭ及 0 0 4 %Ｆ - 1 2 7负载 ,利用荧光显微镜成像系统检测并…     

内皮素对成年鼠离体心室肌细胞内游离钙浓度的影响及机制

目的和方法：采用分离的Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠心室肌细胞,以Ｆｕｒａ－２／ＡＭ荧光指示剂负载,检测心肌细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化,探讨内皮素－１（ＥＴ－１）对［Ｃａ２＋］ｉ的作用及其机制。结果：ＥＴ－１（１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ）引起［Ｃａ２＋］ｉ升高分两个时相：快速相和持续相,可被ＥＴＡ的特异性受体阻断剂ＢＱ１２３（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）所阻断。移去细胞外液钙以及用百日咳毒素（２００ｎｇ／ｍＬ）处理１０ｈ后,ＥＴ－１仍引起快速相,但持续相消失。Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ（４μｍｏｌ／Ｌ）和异搏定（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对ＥＴ－１诱导［Ｃａ２＋］ｉ升高的作用无显著影响。结论：ＥＴ－１升高［Ｃａ２＋］ｉ是通过ＥＴＡ受体介导;快速相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞内Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ不敏感的钙池释放造成,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白无关;持续相［Ｃａ２＋］ｉ升高主要由胞外Ｃａ２＋内流引起,不是通过电压依赖性Ｌ－型钙通道介导,与百日咳毒素敏感的Ｇ蛋白有关     

FGF-2在心肌细胞钙离子调节作用的研究

目的 :观察ＦＧＦ - 2对心肌细胞的 [Ｃａ2 ]ｉ是否有调节作用 ,并对ＦＧＦ - 2在心肌细胞促生长作用中的钙信号转导机制进行了初步的研究。方法 :选择狗胚心肌细胞系作为研究模型 ,观察 1、1 0、1 0 0和 1 0 0 0ｎｇ/ｍＬ重组ＦＧＦ - 2对细胞生长和细胞内钙离子的影响。细胞在含不同浓度ＦＧＦ - 2低血清培养基中生长 5ｄ ,测定细胞数量和分裂指数作为ＦＧＦ - 2对细胞生长的影响。细胞以Ｆｌｕｏ - 3/ＡＭ负载作为细胞内钙离子的指示剂 ,用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙离子含量的变化 ,不同浓度ＦＧＦ - 2作用后的1、4和 8ｈ时的细…     

Gas2基因在肝细胞癌中的表达及意义

已知Ｇａｓ2在细胞周期阻滞时特异性表达 ,并因其被证实参与细胞凋亡而引起人们的关注[1] 。我们对肝细胞肝癌(ＨＣＣ)和癌旁及正常肝组织中Ｇａｓ2的原位表达作对比观察 ,结合ＨＣＣ中细胞增殖及凋亡状况 ,分析Ｇａｓ2在ＨＣＣ发生、发展中的可能作用。一、材料与方法1.标本处理 :36例ＨＣＣ及相应癌旁组织取自 1999年复旦大学附属中山医院首次住院手术患者 ,另有 8例正常组织 ,取自同期因良性肿瘤而部分切除的肝手术标本。2 .原位杂交检测Ｇａｓ2ｍＲＮＡ :探针由上海肿瘤研究所提供 (与ＧｅｎｅＢａｎｋ的Ｇａｓ2ｍＲＮＡ序列有 98.6 %同…     

脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞株耐受与致敏并存的研究

目的 :全身炎症反应综合征 (ＳＩＲＳ)和多器官衰竭 (ＭＯＤＳ)时血中出现多种炎症介质 ,一般认为这是白细胞致敏 (ｐｒｉｍｅｄ)的结果。我们用巨噬细胞株作为研究对象 ,建立了代表单克隆细胞水平耐受与致敏并存的细胞模型 ,并对其机制做了初步探讨。方法 :巨噬细胞株ＲＡＷ 2 64.7以不同刺激作用后测上清中ＴＮＦ -α(Ｌ92 9杀伤活性 )、ＮＯ(Ｇｒｉｅｓｓ反应 )、ＩＬ - 1 (胸腺细胞增殖 ,ＭＴＴ法 )和细胞内游离浓度 ( [Ｃａ2 ]ｉ,用荧光显微镜成像系统 ,Ｆｒｕａ- 2负载 )。结果至少重复 6次。结果及结论 :1 0ｎｇ/ｍＬＬＰＳ预处理 (…     

雌激素对大鼠附睾上皮细胞非基因组作用及其机制研究

目的：研究雌激素对大鼠附睾上皮细胞非基因组作用及其机制。方法：青春期大鼠附睾上皮细胞,ＦＬＵＯ－３／ＡＭ标记,激光共聚焦显微镜技术观察。结果：１７β－雌二醇能快速诱导附睾上皮细胞内Ｃｑ＾２＋〖Ｃａ＾２＋〗ｉ升高,并且有剂量依赖性（１０＾－２～１０＾－９Ｍ）,无Ｃａ＾２＋液及２ｍＭ ＥＧＴＡ育附睾上皮细胞不影响雌二醇诱导效应;Ｃａ＾２＋通道阻活跃剂ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ、ｖｅｒａｐａｍｉｌ也不影响雌二     

抗钙调素抗体对K562细胞增殖的抑制作用

钙调素 (ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ ,ＣａＭ )是普遍存在于真核细胞内的Ｃａ2 受体蛋白 ,是细胞内信号传导系统的重要成分 ,可缩短细胞周期 ,促进细胞增殖。近年来发现ＣａＭ也存在于细胞外 ,细胞外ＣａＭ能促进Ｋ5 6 2细胞、Ｂｕｒｋｉｔｔ细胞的增殖[1,2 ] 。本课题用抗ＣａＭ抗体 (ＲＡＣａＭ )及纯化的重组人钙调素 (ｒｈＣａＭ )进行的研究结果初步表明 ,抗ＣａＭ抗体可抑制Ｋ5 6 2细胞增殖。1　材料和方法1 1　细胞及试剂　Ｋ5 6 2细胞 (本中心保存 ) ;ＭＴＴ (Ｓｉｇｍａ ) ;Ｎ 羟基琥珀酰亚胺基 3 (2 吡啶二硫 ) 丙酸酯 (ＳＰＤＰ ,…     

狼疮性BXSB小鼠B细胞增殖反应异常的初步探讨

系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ )小鼠模型是研究人ＳＬＥ发病机制的主要工具。本室曾发现狼疮性ＢＸＳＢ小鼠Ｂ细胞增生异常升高 ,更新速度明显加快[1] 。另一方面 ,ＢＸＳＢ小鼠血清ＩｇＧ2ａ和ＩｇＧ3水平及相应亚类的自身抗体显著升高[2 ,3 ] ,而一般认为ＩｇＧ类型抗体负反馈性抑制Ｂ细胞的功能是机体免疫调节的重要机制之一。本实验初步探讨了正常的 2月龄ＢＡＬＢ/ｃ小鼠和发病的 4月龄雌雄ＢＸＳＢ小鼠Ｂ细胞体外增殖反应状态以及ＩｇＧ类型的兔抗小鼠Ｉｇ (ＲａＭＩｇ )对此的调节作用。1　材料和方法1 1　动物　ＢＸＳＢ小鼠由北医大三院…     

地塞米松对谷氨酸升高海马神经元胞内[Ca~(2+)]i作用的影响

为了研究谷氨酸致痫和人工合成的糖皮质激素地塞米松抑痫作用的细胞内机制,本文在ＥＰＣ ９ 光电联合检测系统上用Ｆｕｒａ ２ 阳离子检测法观察了地塞米松对谷氨酸引起的培养乳鼠海马神经细胞内［Ｃａ２＋ ］ｉ 的影响。结果：（１）谷氨酸引起海马神经元内［Ｃａ２＋ ］ｉ 显著升高,ＥＧＴＡ（５ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）耗竭细胞外钙后,谷氨酸升钙作用消失,给予氯化钙（１ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ）后其升钙作用恢复：Ｖｅｒａｐａｍ ｉｌ（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ）对谷氨酸升钙作用无明显的影响,ＭＫ ８０１（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ,ＮＭ ＤＡ 受体特异性非竞争性阻断剂）可明显阻断谷氨酸的升钙作用。（２）地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）作用２ ｈ 明显抑制了谷氨酸（２００ μｍ ｏｌ／Ｌ）的升钙作用,地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）＋ 放线菌酮（１０ μｍ ｏｌ／Ｌ,蛋白合成抑制剂）共同作用２ ｈ,再加入谷氨酸,则地塞米松的抑制作用消失,地塞米松（１００ μｍ ｏｌ／Ｌ）作用２ ｍ ｉｎ 对谷氨酸（２００ μｍ ｏｌ／Ｌ）的升钙作用无明显影响。本实验结果提示,谷氨酸通过ＮＭ ＤＡ 受体介导的外钙内流升高了海马神经元胞内［Ｃａ２＋ ］ｉ,地塞米松可能通过基因组机制抑制了谷氨酸的这种升     

钙与细胞损伤

细胞损伤时，常引起胞内［Ｃａ２＋］ｉ升高。胞内［Ｃａ２＋］ｉ增高进一步引发细胞一系列不可逆损伤，而胞内钙超载则是许多细胞损伤的最后通道。钙拮抗剂对细胞损伤有保护作用。     

异丙嗪对家兔EGTA性发热的解热作用及其机制研究

目的：观察异丙嗪（ｐｒｏｍｅｔｈａｚｉｎｅ,ＰＭＺ）对家兔ＥＧＴＡ性发热的影响并探讨其作用机制。方法：侧脑室和静脉给药。用Ｆｕｒａ－２荧光分光光度法测定细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）。结果：（１）侧脑室灌注０６μｍｏｌＥＧＴＡ引起家兔明显的发热反应,侧脑室灌注０６μｍｏｌＥＧＴＡ２０ｍｉｎ后,静脉注射ＰＭＺ（５ｍｇ／ｋｇ）明显抑制ＥＧＴＡ引起的结肠温度上升,其３ｈ发热反应指数明显低于侧脑室灌注０６μｍｏｌＥＧＴＡ２０ｍｉｎ后静脉注射生理盐水（ＮＳ）组。而侧脑室灌注人工脑脊液（ＡＣＳＦ）２０ｍｉｎ后静脉注射ＰＭＺ（５ｍｇ／ｋｇ）组家兔结肠温度明显低于ＡＣＳＦ＋ＮＳ对照组。（２）体外实验发现,向下丘脑细胞悬液中加入终浓度为０７４ｍｍｏｌ／Ｌ的ＰＭＺ,下丘脑细胞［Ｃａ２＋］ｉ从（１５９２±１８８）ｎｍｏｌ／Ｌ升高到（５３３７±９０１）ｎｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜００５）。结论：ＰＭＺ诱导体温调节中枢神经细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高可能是ＰＭＺ抑制家兔ＥＧＴＡ性发热的中枢机制之一。     

糖皮质激素对PMA诱导的CD18表达的抑制作用及机制

国内外大量研究表明糖皮质激素 (ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ ,ＧＣ)能明显抑制包括由于ＣＤ1 8在内的多种粘附分子的表达。以往研究多限于ＣＤ1 8蛋白质水平 ,无法阐明ＧＣ -ＧＲ使细胞表面ＣＤ1 8数量减少 ,是由于合成减少 ,分解增多 ,还是细胞内转位过程受到抑制 (ＣＤ1 8从胞内储存池脱落并转位至质膜有关 )。对ＧＣ在ＣＤ1 8基因转录水平上的抑制作用极其机制目前研究得很少。目的 :探讨ＧＣ抑制ＣＤ1 8ｍＲＮＡ表达的作用及机制。方法 :本研究以细胞激活剂ＰＭＡ诱导下的人组织淋巴瘤细胞系Ｕ937细胞和人早幼粒白血病细胞系ＨＬ - 6…     

环氧-二十碳三烯酸：细胞内信号转导通路

花生四烯酸 (ａｒａｃｈｉｏｎｄｉｃａｃｉｄ ,ＡＡ)细胞色素Ｐ4 5 0单氧化酶代谢产物是环氧 -二十碳三烯酸 (ｅｐｏｘｙｅ ｉｃｏｓａｔｒｉｅｎｏｉｃａｃｉｄ ,ＥＥＴｓ) ,可分为 :5 ,6 -ＥＥＴ ;8,9-ＥＥＴ ;11,12 -ＥＥＴ和 14,15 -ＥＥＴ[1] 。ＥＥＴｓ作为内皮衍生性超极化因子 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｄｅｒｉｖｅｄｈｙｐｅｒｐｏｒｌａｒｉｎｇｆａｃｔｏｒ ,ＥＤＨＦ) ,调节多种血管张力 ;抑制血小板的聚集 ;促进有丝分裂等。近来 ,有关ＥＥＴｓ的作用机制尤其在信号转导方面的作用引起了重视。近来的研究表明 ,ＥＥＴｓ通过影…     

细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白质依赖激激酶4在去甲二氢愈创木酸抑制恶性胶质瘤细胞增殖中的作用

近年来发现去甲二氢愈创木酸 (ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃａｃｉｄ ,ＮＤＧＡ)能阻止多种肿瘤的发生和抑制其细胞的增殖[1 3 ] ,但机制不清。我们检测了ＮＤＧＡ对ＳＨＧ 4 4细胞细胞周期蛋白Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)基因的蛋白表达及细胞周期蛋白质依赖激酶 4(ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅ 4 ,ＣＤＫ4 )活性的影响 ,旨在探讨ＮＤＧＡ抑制ＳＨＧ 4 4细胞增殖的分子机制。一、材料和方法1.细胞培养 :人脑恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ 4 4 (第 110代 )引自苏州医学院附属第二医院脑肿瘤研究室。按我室常规进行培养。2 …     

多聚C1q诱导免疫细胞的Ca^2＋动员

多聚Ｃｌｑ与人Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ、Ｂ细胞系Ｒａｊｉ和ＭΦ系Ｕ９３７细胞表面ＣｌｑＲ相互作用，诱导＾４５Ｃａ＾２＋跨膜快速内流，刺激［Ｃａ＾２＋］ｉ迅速增高，前者可为质膜Ｃａ＾２＋通道阻滞剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ所阻断，后者能被胞外Ｃａ＾２＋络合剂ＥＧＴＡ部分抑制，被蛋白酪氨酸激酶（ＰＴＫ）抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ完全消除。资料表明，Ｃｌｑ／ＣｌｑＲ系统介导的信号转导机制涉及内Ｃａ＾２＋和外Ｃａ＾２＋     

医学细胞遗传学检验的质量控制

随着医学科学的飞速发展 ,医学遗传学检验在临床诊断中的作用显得日益重要。而细胞遗传学检验是医学遗传学检验的基础 ,尤其是在细胞遗传学基础上发展起来的细胞 -分子遗传学技术比如 :荧光原位杂交 (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉ ｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＦＩＳＨ) ,染色体涂抹 (ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｐａｉｎｉｔｉｎｇ ,ＣＰ) ,引物介导的原位标记 (ｐｒｉｍｅｄｉｎｓｉｔｕｌａｂｅｌｌｉｎｇ ,ＰＲＩＮＳ) ,比较基因组杂交 (ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｇｅｎｏｍｉｃｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,ＣＧＨ)等均需要获得质量优…     

多聚Clq诱导免疫细胞的Ca~（2＋）动员

多聚Ｃｌｑ与人Ｔ细胞系Ｊｕｒｋａｔ、Ｂ细胞系Ｒａｎ和Ｍφ系Ｕ９３７细胞表面ＣｌｑＲ相互作用，诱导４５Ｃａ２＋跨膜快速内流，刺激［Ｃａ２＋］ｉ迅速增高，前者可为质膜Ｃａ２＋通道阻滞剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ所阻断，后者能被胞外Ｃａ２＋络合剂ＥＧＴＡ部分抑制，被蛋白酪氨酸激酶（ＰＴＫ）抑制剂Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ完全消除。资料表明，Ｃｌｑ／ＣｌｑＲ系统介导的信号转导机制涉及内Ｃａ２＋和外Ｃａ２＋两者的动员，且与ＰＴＫ有关。