调节性T细胞在小鼠巨细胞病毒感染胚胎成纤维细胞机制中的免疫调控作用

目的 体外研究调节性T细胞（Treg）在小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）感染小鼠巨细胞病毒（MCMV）机制中的免疫调节作用。方法 采用尼龙毛柱和MACS Treg磁珠法获得纯化的Treg和去除Treg的T细胞（TdepTreg），建立TdepTreg和添加Treg的T细胞与感染MCMV的MEF（MEFMCMV）体外共培养细胞模型。用蚀斑法检测共培养细胞上清中感染性病毒量；流式细胞术检测共培养体系中Tc1(CD3+CD8+IFN-γ+)，Tc2（CD3+CD8+IL4+），Th1（CD3+CD8-IFN-γ+），Th2（CD3+CD8-IL-4+）细胞比率变化；双抗体夹心ELISA法检测共培养细胞上清中转化生长因子-β（TGF-β）和IL-10蛋白表达水平。结果 TdepTreg与MEFMCMV共培养3 d后上清中感染性病毒量较感染对照组显著降低，同时效应性T细胞各亚群比率较非感染对照组显著增加。向TdepTreg-MEFMCMV体系中添加Treg可增加共培养体系中感染性病毒量，同时Tc1、Tc2和Th1细胞比率显著减少，且均与Treg比率存在剂量相关性；而Th2比率仅在Treg比率增至20%时显著低于感染对照组。添加Treg的共培养体系中IL-10和TGF-β蛋白表达水平随Treg比率增加而增高，与Treg存在正性相关。结论 Treg可通过IL-10、TGF-β等途径抑制效应性T细胞的免疫保护作用，并且由于Treg抑制作用的不均衡性，导致Th1/Th2和Tc1/Tc2平衡失调，创造了一个利于CMV增殖的免疫环境。     

辅助性T淋巴细胞17/调节性T淋巴细胞偏倚在川崎病发病机制中的作用

目的 探讨辅助性T淋巴细胞17(Th17)和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞在儿童川崎病(KD)免疫发病机制中的作用.方法 急性期KD患儿40例,同龄健康对照儿童30例.KD患儿在静脉丙种球蛋白(IVIG)治疗前直接取血备检.流式细胞术检测其外周血Th17细胞及Foxp3+CD4+T淋巴细胞比例;荧光定量PCR检测其CD4+T淋巴细胞转录因子ROR-γt、Foxp3 mRNA表达;ELISA法检测其血浆中IL-17、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)、IL-23水平.结果 急性期KD患儿外周血Th17细胞明显升高(P<0.01),而Foxp3+CD4+T淋巴细胞明显降低(P<0.01);急性期KD患儿Th17细胞转录因子ROR-γt转录水平明显高于健康对照组(P<0.01),Foxp3+CD4+T淋巴细胞转录因子Foxp3表达明显降低(P<0.01);血清IL-6、IL-23和IL-17水平明显升高(Pa<0.01),而TGF-β水平无明显变化(P>0.05).结论 Th17促炎性T淋巴细胞高表达和Foxp3+CD4+调节性T淋巴细胞数量减少导致免疫抑制效应不足是导致儿童KD免疫失衡的重要原因,体内相关细胞因子的变化是引起上述改变的原因.     

Foxp3表达与CD+4CD+25调节性T细胞在儿童哮喘发病中的作用

目的研究Foxp3基因表达与CD+4CD+25调节性T细胞在哮喘发病中的作用.方法以确诊哮喘的患儿为研究对象,急性发作期15例、缓解期15例,同期选10例正常儿童作对照,提取外周血单个核细胞(PBMC)进行CD4、CD25表面标志及血浆、培养上清液IL-4、IFN-γ、IL-10和TGF-β等细胞因子的ELISA检测,同时收集哮喘患儿和正常儿童的诱导痰,用RT-PCR方法检测PBMC及诱导痰中转录因子Foxp3-mRNA的表达.结果 PBMC CD+4CD+25T细胞百分率在哮喘急性发作期、缓解期分别为(10.1±2.1)%、(11.7±2.5)%,低于对照组的(15.5±2.7)%(P分别<0.01、<0.05);对照组PBMC在体外培养后CD+4CD+25细胞百分率显著升高,同培养前比较差异有统计学意义(P<0.01).PBMC Foxp3-mRNA表达水平(Foxp3/β-actin) 在哮喘急性发作期、缓解期分别为0.46±0.14 、0.50±0.19,低于对照组0.77±0.22,诱导痰Foxp3-mRNA表达水平哮喘患儿也低于对照组;PBMC在体外培养后对照组Foxp3-mRNA表达水平较培养前升高(P<0.05),而哮喘患儿培养前后Foxp3-mRNA表达水平无显著变化.血浆及培养上清液IFN-γ、TGF-β在哮喘急性发作期、缓解期低于对照组 (P<0.05),且IFN-γ、TGF-β与PBMC Foxp3-mRNA水平、CD+4CD+25细胞百分率呈正相关. 哮喘患儿血浆及培养上清液IL-4显著高于对照组,急性发作期血浆IL-10显著高于对照组,而缓解期与正常组无显著性差异;IL-4、IL-10与PBMC Foxp3-mRNA水平、CD+4CD+25细胞百分率无相关性.结论哮喘患儿的TGF-β分泌不足、Foxp3基因表达降低、CD+4CD+25调节性T细胞数量减少及分化发育障碍可能在儿童哮喘的发病中起重要作用.     

调节性T细胞/Th17细胞失衡在血液系统疾病发病中的作用

国内外研究证实,CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Foxp3+ regulatoryTcells,简称Treg细胞)/Th17细胞失衡与多种血液病的发病密切相关.肿瘤性血液病如白血病、淋巴瘤存在Treg细胞水平上调Th17水平下调,可能与Treg诱导免疫抑制增强、Th17介导抗肿瘤免疫缺陷相关;而非肿瘤性血液病如再生障碍性贫血、过敏性紫癜、免疫性血小板减少性紫癜等存在Treg水平下调、Th17水平上调,可能与Th17介导过度免疫损伤、Treg介导免疫抑制功能不足有关.提示Treg细胞/Th17细胞比率升高可能对肿瘤性血液病的发生起促进作用,其比率降低则可能对非肿瘤性血液病的发生起促进作用.     

Th17细胞与CD4~+CD25~+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用

目的 探讨Th17细胞与CD4+CD25+调节性T细胞在儿童过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿48例,采用流式细胞术检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)的比例,采用荧光定量PCR(real-time PCR)检测CD4+ T细胞IL-17A、IL-17F、转录因子ROR-γt、Foxp3及细胞因子IL-6、TGF-β等mRNA表达;同期40例同龄健康儿童作为对照.结果 过敏性紫癜急性期患儿CD4+T细胞高表达IL-17A及IL-17F(P<0.01).Th17细胞转录因子ROR-γt及前炎症细胞因子IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.01).CD4+CD25+调节性T细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),其转录因子Foxp3表达亦明显降低(P<0.01).结论 Th17等促炎性T细胞高表达和CD4+CD25+调节性T细胞数量减少导致的免疫抑制效应不足,是导致过敏性紫癜免疫失衡的重要原因,IL-6高表达与此密切相关.     

干扰Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达及对其免疫功能的影响

目的 探讨降低Foxp3的表达对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2免疫功能的影响.方法 设计、合成Foxp3的siRNA干扰序列,转染神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2,分别采用Real-time PCR及流式细胞术观察Foxp3以及共刺激分子CD86在于扰前后的表达;最后将Foxp3干扰的SK-N-BE2细胞与人外周血共培养,观察Foxp3的不同表达水平对上述培养体系中T淋巴细胞功能的影响.结果 本研究设计、合成的siRNA显著降低了Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达,低表达Foxp3的SK-N-BE2细胞上共刺激分子CD86的表达显著升高,且在共培养体系中细胞因子IFN-γ、IL-17的表达出现轻微上调,但同时显著降低了免疫抑制分子IL-10、TGF-β在mRNA水平的表达.结论 Foxp3在神经母细胞瘤中的高表达可能是该细胞逃避免疫监视的重要机制,干扰Foxp3的表达能降低共培养体系中的免疫抑制分子表达,表明干预该分子可望为肿瘤的免疫防治提供新的思路.     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞与IL-33在儿童哮喘发病机制中的作用

目的 探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)与IL-33在儿童哮喘发病中的作用.方法 采用流式细胞仪检测45例哮喘患儿(哮喘组)、50例呼吸道合胞病毒感染喘息患儿(喘息组)及40例健康儿童(对照组)外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞百分比,采用ELISA法检测各组外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-5及IL-33浓度,进行比较分析.结果 哮喘组患儿体内CD4+CD25+Foxp3+Treg 水平较喘息组及对照组均降低(P<0.05);哮喘组患儿体内IL-33水平较喘息组及对照组均升高(P<0.05),哮喘组患儿体内CD4+CD25+Foxp3+Treg与IL-33呈负相关(r=-0.156,P<0.01).结论 在哮喘患儿发病机制中,CD4+CD25+Foxp3+Treg与IL-33可能存在相互作用.     

白细胞介素10与胰岛素样生长因子-1基因联合免疫治疗对非肥胖性糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用

目的 观察腺病毒介导的胰岛素样生长因子-1(Ad-IGF-1)和IL-10基因(Ad-IL-10)联合免疫治疗对非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛炎、CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的影响及其对胰岛β细胞的保护作用.方法 雌性NOD小鼠40只随机分为Ad-IGF-1组、Ad-IL-10组、Ad-IGF-1+ Ad-IL-10组(联合组)、腺病毒空载体Ad-绿色荧光蛋白(GFP)对照组、PBS对照组.分别腹腔注射Ad-IGF-1、Ad-IL-10、Ad-IGF-1和Ad-IL-10、Ad-GFP、PBS各100 μL,3周后重复1次.每周监测血糖、体质量变化及糖尿病(DM)发病率.反转录(RT)-PCR检测胰腺IGF-1、IL-10表达,ELISA法检测血清Th1/Th2细胞因子及胰岛素水平,病理学检查胰岛炎程度,流式细胞术分析CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg,TdT介导的dUTP缺口末端标记技术观察胰岛细胞凋亡并计数胰岛β细胞凋亡率.结果 腹腔注射Ad-IGF-1、Ad-IL-10可使IGF-1、IL-10在胰腺表达增强,IGF-1、IL-10单基因治疗可以减少DM的累积发病率,延缓DM的发生,增加体质量,联合组以上效果更加明显.联合组较单基因组降低胰岛炎积分效果更明显(P＜0.01);联合基因干预明显降低TNF-α、IFN-γ水平,增加IL-10水平,调节Th1/Th2平衡;联合组CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞数为(7.17±0.38)％,与单基因组及对照组比较差异均有统计学意义(P均＜0.05);联合组β细胞凋亡率为(10.29±2.20)％,低于单基因组及对照组,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 IGF-1与IL-10基因联合治疗可增加CD4+ CD25+ Foxp3+ Treg细胞数,诱导免疫耐受,减少β细胞凋亡,促进胰岛β细胞重建,从而起到抗DM作用.     

毛细支气管炎CD4+CD25+调节性T细胞和Foxp3 mRNA表达及与IgE关系

目的：通过对呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+CD25+Treg）、Foxp3 mRNA的表达、IgE合成的检测,以探讨其在RSV毛细支气管炎发病机制中的作用。方法：在RSV检测阳性的57例毛细支气管炎患儿中,运用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Treg的比例,RT-PCR检测Foxp3 mRNA的表达量、ELISA法检测血清总IgE含量。25例健康儿童作为对照组。结果：毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg细胞数量减少,特应性体质（7.7±1.6%）和非特应性体质组（8.8±2.1%）均低于对照组（10.5±1.6%）（P均<0.01）。毛细支气管炎特应性体质和非特应性体质组外周血Foxp3 mRNA表达亦均低于对照组（P<0.01）。而血清总IgE含量毛细支气管炎特应性体质（241.2±102.5 IU/mL）和非特应性体质组(125.5±63.2 IU/mL)均高于对照组(27.2±10.5 IU/mL)（P<0.01）。外周血CD4+CD25+Treg细胞数量、Foxp3 mRNA表达及血清总IgE含量在毛细支气管炎特应性体质和非特应性体质组之间差异有显著性意义。CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA与血清IgE水平之间相关密切,r=-0.70,-0.79(均P<0.01)。结论：毛细支气管炎外周血淋巴细胞CD4+CD25+Treg和Foxp3 mRNA表达降低,二者低水平表达使IgE合成增多,共同参与了RSV毛细支气管炎的发病。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：349-353］     

环孢素对慢性再生障碍性贫血患儿外周血T调节细胞及Foxp3表达的影响

目的：探讨再生障碍性贫血（简称再障）患儿应用环孢素治疗后外周血中CD4+CD25+CD127low T调节细胞（Treg）及Foxp3 mRNA表达水平的变化。方法：选取50例慢性再障（CAA）患儿,随机分为环孢素治疗组（30例）及非环孢素治疗组（20例）,同时选取健康儿童20例作为对照组。采用流式细胞术检测各组患儿CD4+CD25+CD127low Treg的表达,并用实时荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA的水平。结果：治疗6个月后,环孢素治疗组外周血CD4+CD25+CD127low Treg和Foxp3 mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义;而非环孢素治疗组两者表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义;环孢素治疗组两者表达水平明显高于非环孢素治疗组,差异有统计学意义。结论：环孢素可以促进再障患儿外周血CD4+CD25+CD127low Treg及Foxp3 mRNA表达水平上升。