2016年河南省淡水产品养殖环节4种常见致病性弧菌污染状况监测

目的 了解河南省淡水产品养殖环节4种常见致病性弧菌（霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌和溶藻弧菌）的污染状况,为河南省食源性疾病的预防及溯源提供数据支持。方法 参照2016年国家食品安全风险监测-淡水动物性水产品养殖环节中常见弧菌专项监测工作手册进行样品的采集和检测。结果 从开封市和鹤壁市淡水产品养殖场中分别采集水产品、养殖水体和水底淤泥共计312份,开封市检出73株霍乱弧菌（46.79％）、13株副溶血性弧菌（8.33％）和17株溶藻弧菌（10.90％）,未检出创伤弧菌;鹤壁市检出8株霍乱弧菌（5.13％）,未检出副溶血性弧菌、溶藻弧菌和创伤弧菌。对13株副溶血性弧菌进行3种毒力基因（TLH、TRH和TDH）检测。13株副溶血性弧菌均具有不耐热溶血素基因（TLH）,有12株具有耐热相关直接溶血素基因（TRH）,均未携带耐热直接溶血素（TDH）。对81株霍乱弧菌进行血清分群,O1群霍乱弧菌3株（小川1株、稻叶1株和彦岛1株）,O139群霍乱弧菌5株,非O1/O139群霍乱弧菌73株。81株霍乱弧菌CTXA毒力基因阳性菌株7株,均为非O1/O139群霍乱弧菌。结论 河南省淡水养殖环节主要受霍乱弧菌、副溶血性弧菌和溶藻弧菌的污染,监测的2个地区污染情况存在差异,污染的优势弧菌是霍乱弧菌。     

多重PCR检测霍乱弧菌的毒素相关基因

目的 探索建立一种快速、敏感地检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1／非O139群的毒素相关基因的方法。方法 针对霍乱弧菌霍乱肠毒素A亚单位基因(ctxA)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(oce)、霍乱弧菌毒素共调菌毛A基因(tcpA)、毒素表达调控蛋白基因(toxR)分别设计引物，建立多基因PCR方法；通过一次扩增反应之产物经琼脂糖凝胶电泳，可检测出菌株的毒素相关基因的携带情况。结果 阳性对照菌株：MO45(霍乱弧菌O139群)检出5种毒素相关基因，结果符合设计要求；其他不同来源的霍乱弧菌(O1群、O139群、非O1／非O139群)检出1—5种不等的毒素相关基因；根据毒素相关基因携带情况，可将菌株分为5个基因型，并可区分为产毒株和非产毒株；多重PCR敏感度可达10^2cfu／ml。结论 该方法快速、特异、敏感，具有较大的应用价值。     

平湖市市售水产品中致病性弧菌检测结果

目的了解平湖市市售水产品中副溶血性弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌的污染状况及其致病力,为预防食源性疾病并制定防控措施提供依据。方法采集2016—2017年平湖市海鲜批发市场、农贸市场及大型超市的海水产品和淡水产品,采用弧菌显色法进行副溶血性弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌定性检测,并进行毒力基因、血清型和药敏试验。结果 239份市售水产品中,副溶血性弧菌检出率为51.46%,创伤弧菌检出率为0.84%,O1群和O139群霍乱弧菌未检出。副溶血性弧菌血清型以O1、O2、O4和O5为主,分别占13.01%、26.02%、17.07%和17.07%,所有菌株均携带tlh基因,未携带tdh、trh基因,均为非毒力株,氨苄西林耐药率为69.57%;2株创伤弧菌均携带vvhA毒力基因,且对头孢西丁耐药。结论平湖市市售水产品中的致病性弧菌以副溶血性弧菌为主,均为非毒力株,不具有致病力。     

霍乱弧菌多重PCR检测方法的建立和运用

[目的]建立一种快速检测霍乱弧菌O1群、O139群、非O1非O139群及是否产毒株的方法。[方法]以霍乱弧菌的外膜蛋白基因（ompW）、编码O1群O抗原基因（O1rfb）和编码O139群O抗原基因（O139 rfb）、霍乱肠毒素A亚单位基因（ctxA）为目的基因,建立一种多重PCR方法对霍乱弧菌进行检测和分型。[结果]根据相关基因携带情况分为6种型别,并分产毒株和非产毒株。以该法对140株霍乱弧菌分型结果与血清学诊断结果相一致,而其它弧菌和肠杆菌等均未检出相关基因。[结论]该方法快速、特异,可应用于霍乱弧菌的检测和分型。     

2021年河北省沧州市水产品中致病性弧菌污染状况分析

目的 了解致病性弧菌在沧州市水产品中的污染状况，为食源性疾病防控和食物中毒监测提供数据支持。方法 采用随机抽样的方法采集2021年沧州市水产品样品，按照《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中监测方法，对副溶血性弧菌等4种致病性弧菌进行检测，对霍乱弧菌和副溶血性弧菌进行基因检测，确定其毒力基因，并对霍乱弧菌进行血清分型。结果 220份水产品中74份检出致病性弧菌，检出率为33.64%。其中副溶血性弧菌检出率为22.73%，溶藻弧菌检出率为7.27%，霍乱弧菌检出率为2.73%，创伤弧菌检出率为0.91%。分离出的50株副溶血性弧菌均携带tlh基因型，未携带tdh和trh基因；6株霍乱弧菌都为非O1/O139群霍乱弧菌，ctx毒力基因为阴性。结论 2021年沧州市部分水产品中存在致病性弧菌污染，以副溶血性弧菌和溶藻弧菌为主。市场监管部门应加强对各类水产品的监管力度，降低致病性弧菌引发的食源性疾病风险。     

陕西省渭南市水产品及淡水养殖环境中致病性弧菌污染状况及病原学特征分析

目的了解渭南市水产品及淡水养殖环境中致病性弧菌的污染状况及病原学特征,为食品安全风险评估提供基础数据。方法参照陕西省食品微生物及致病因子监测工作手册及淡水鱼养殖环节中常见弧菌专项监测工作手册进行样品的采集及致病性弧菌的检测。结果 434份水产品及淡水养殖环境样品中共检出致病性弧菌177株,总检出率40.78%;其中霍乱弧菌检出率最高(35.53%),其次为副溶血性弧菌(5.53%)。不同种类样品中淡水鱼致病性弧菌检出率最高(57.93%),其次为淡水鱼存养水体(42.59%)和淡水养殖场水底沉积物(40.62%)。不同采样环节中采自养殖环节的样品中致病性弧菌的检出率最高(48.21%),其次为流通环节(17.24%)。检出的140株霍乱弧菌均为非O1群和非O139群霍乱弧菌;副溶血性弧菌trh毒力基因的检出率为45.83%。结论渭南市水产品及淡水养殖环境中存在不同程度的致病性弧菌污染,非O1/O139群霍乱弧菌和副溶血性弧菌是污染水产品样品的主要致病菌,淡水养殖环节中的水产品是遭受致病性弧菌污染的高危样品。     

海宁市霍乱病原学调查检测

目的:为了查清我市水体等外环境及患者中霍乱弧菌的菌型分布特征、毒力基因、药敏等,为霍乱防控提供科学依据。方法:采用GB15984-1995附录A、C及《霍乱防治手册》第五版中有关要求进行调查检测。结果:从外环境标本和患者中共检出霍乱弧菌83株,经血清学鉴定分型,其中:O1群埃尔托霍乱弧菌(Vibriocholerae serotypeO1,b iotype E ltor,EVC)稻叶型38株,占45.78%,O1群EVC小川型16株,占19.28%,O139群霍乱弧菌29株,占34.94%。23株霍乱弧菌噬菌体生物分型以O1群EVC稻叶型1 f居多,占86.96%(20/23);14株霍乱弧菌毒力基因检测结果均为阳性(携带ctx,ace,zot 3种毒力基因);药敏试验O1群、O139群霍乱弧菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,其中对磺胺的耐药率高达100%;对头孢噻肟、诺氟沙星、丁胺卡那霉素敏感率高达100%。结论:河水中菌型复杂,O139群、小川、稻叶三型并存,但以O139群为主,占48.94%;井水中检出4株埃尔托霍乱弧菌均为稻叶型;甲鱼塘水中O139群与O1群小川型并存;患者中以O1群EVC稻叶型为主,占88.24%(15/17)。经噬菌体生物分型,以不常见流行株为主,毒力基因检测均为产毒株。     

用溶血素基因探针检测非01群霍乱弧菌的初步研究

本文应用霍乱弧菌溶血素基因探针对87株从临床急性感染性腹泻患者粪便中分离的致病性弧菌进行了检测,同时以血琼脂平板溶血性检测作为对照。结果表明,该探针只与非01群霍乱弧菌杂交,而不与其它致病性弧菌(副溶血弧菌、拟态弧菌、河弧菌和溶藻弧菌)产生阳性反应。18株非01群霍乱弧菌中有16株(88.9%)具有与霍乱弧菌溶血素同源性基因,另2株用该探针杂交为阴性,但其在血琼脂上显示有溶血性,表明非01群霍乱弧菌存在着不同种的溶血素。应用这种特异性溶血素基因探针,检测到1株蔗糖阴性的非01群霍乱弧菌。     

16SrRNA基因探针与ctxA基因探针用于霍乱弧菌分型

以地高辛为标记物,利用PCR方法制备16SrRNA基因探针与ctxA基因探针,经Southern杂交,对霍乱弧菌进行分型.对广东地区分离自病人的60株埃尔托型(EVC)、10株O139群和2株标准株进行研究.经16SrRNA基因在探针共分为4个类型(A、B、C和D),EVC和O139群均以D型为优势克隆.经ctxA基因探针Southern杂交,共分为A和B型,2株分离自1998年的EVC为A型,其余EVC和O139群均为B型.与国内外资料比较,广东地区霍乱弧菌的优势克隆与国内其它地区及东南亚地区的基本一致.     

霍乱弧菌4种新类型tcpA基因发现及序列分析

目的研究中国霍乱弧菌（VC）毒力协同调节菌毛A亚单位基因（tcpA）的多态性.方法分别进行聚合酶链反应及限制性片段长度多态性分析、型特异引物PCR分型、基因测序及序列分析.结果 200株O1群埃尔托型（EVC）产毒株和100株O139群VC产毒株的tcpA基因均与EVC国际标准株N16961株为同一类型（t2型）.50株EVC非产毒株中只有3株携带tcpA基因,1株为t2型,另2株为2种新类型.20株O139群VC非产毒株均不携带tcpA基因.20株非O1非O139群VC中只有2株携带tcpA基因,且为2种新类型.4种新类型tcpA基因与国外发现的4种类型比较,基因序列及推测的氨基酸序列同源性分别为58.3%～77.5%和61.0%～85.5%;5′端约102bp基因序列基本一致,推测的氨基酸序列完全一致;3′端约210bp基因序列变异最大,推测的氨基酸序列变异也最大.抗原表位分析,C末端差异最大.结论建立快速准确区分不同类型tcpA基因的方法,并发现4种新类型.     

随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究

研究建立了随机引物PCR方法用于霍乱分子流行病学研究,其中两组引物针对霍乱弧菌重复插入序列设计,一组引物为任意序列.对2株霍乱弧菌O1群古典型(CVC)、81株埃尔托型(EVC)和10株O139群进行了分析,上述菌株经PCR鉴定,均携带霍乱肠毒素(ctx)基因和毒力协同调节菌毛(tcp)基因.2株CVC分为2个类型,81株EVC分为14个类型,10株O139群分为3个类型.其中10株EVC分离于一次霍乱暴发,分为2个类型,提示该次暴发可能存在多个传染源.随机引物PCR方法简便、快速、分辨力高,在霍乱分子流行病学研究中有较大的应用前景.     

用多基因PCR检测和区分不同群型霍乱病原菌

目的 建立一种快速、敏感的诊断方法,用于检测和区分霍乱弧菌Ｏ１群古典型（ＣＶＣ）,埃尔托型（ＥＶＣ）、Ｏ１３９群和非Ｏ１和Ｐ１３９群,方法 分别针对霍乱弧菌肠毒素Ａ亚单位（ｃｔｘＡ）基因,Ｏ１３９群特异基因、霍乱弧菌溶血素Ａ亚单位（ｈｌｙＡ）基因和毒力协同调节菌毛Ａ亚单位（ｔｃｐＡ）基因设计引物,建立多基因ＰＣＲ方法。ＰＣＲ产物经电泳,根据扩增条带的大小和数目,可检测和区分ＣＶＣ、ＥＶＣ,Ｏ１３９     

广东省外环境O1/O139群霍乱弧菌毒力基因分型

目的 分析广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌毒力基因的携带及基因分型特征,为霍乱防控提供依据.方法 选取2008—2009年广东省O1/O139群霍乱弧菌水体分离株69株,水产品分离株16株和同期病例分离株5株,应用多重聚合酶链反应对ctxA、ace、zot、tcpA、tcpI、hlyA、ompU、toxR等8种毒力基因进行检测和分型分析.结果 90株O1/O139群霍乱弧菌均携带hlyA和toxR基因;5株病例菌株中有3株携带8种毒力基因,另外2株小川型菌株为非产毒株,基因型为hlyA⁺toxR⁺ompU⁺zot⁺tcpA⁺tcpI⁺型和hlyA⁺toxR⁺tcpA⁺型;水体菌株中,稻叶型菌株以hlyA⁺toxR⁺ompU⁺ace+zot⁺tcpI⁺型(34.15%)为主,小川型(66.67%)和O139群(70%)以hlyA⁺toxR⁺型为主;水产品菌株中,稻叶型菌株以hlyA⁺toxR⁺ompU⁺tcpI⁺型(75.00%)为主,小川型菌株各种基因型别均有分布,无明显优势基因型别.结论 广东省外环境来源O1/O139群霍乱弧菌以非产毒株广泛存在,毒力基因型别多样.     

PCR和毛细管电泳技术检测沙门氏菌等5种病原菌的方法研究

目的采用多重PCR技术检测结合毛细管电泳成像技术建立快速检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157的方法。方法根据沙门氏菌hilA基因、志贺氏菌ipaH基因、副溶血性弧菌TDH基因、金黄色葡萄球菌的pSa-442 Sau3AI fragment基因及大肠杆菌O157的rfbE基因设计异性特PCR引物,被检样品经4 h振荡培养后金属浴裂解制备DNA模板,使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物。结果在580 bp、423bp、257 bp、245 bp和194 bp处分别出现预期的特异性DNA条带,且无非特异扩增条带出现。敏感性试验显示在模拟标本中的检测灵敏度,沙门氏菌为101-2cfu/ml、志贺氏菌为101cfu/ml、副溶血性弧菌为102cfu/ml、金黄色葡萄球菌为102cfu/ml、大肠杆菌O157为101cfu/ml。结论该方法操作方便、特异性和灵敏度高、分辨率高,可同时完成5种病原菌的检测,在公共卫生突发事件中具有实用价值。     

环介导等温扩增技术检测副溶血性弧菌方法的建立与应用

目的建立适合基层实验室快速检测副溶血性弧菌的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法根据副溶血性弧菌gyrB基因设计4条特异性引物,并对反应条件进行优化。结果建立的LAMP体系具有高度特异性,经对14株细菌进行扩增,副溶血性弧菌为阳性,其他菌株均为阴性。该方法对培养的副溶血性弧菌的检测下限为25cfu/mL,可在60min内完成扩增反应。用该体系对120份海产品进行检测,阳性率62.5%,与传统方法一致。结论 LAMP法与传统方法相比,可节省大量时间,且对实验仪器要求低,具有良好的实用性。     

双重PCR检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因方法建立与初步应用

目的 建立同时检测副溶血性弧菌的tlh和tdh基因的双重聚合酶链式反应(PCR)法. 方法 根据副溶血性弧菌的tlh、tdh基因序列设计引物,进行PCR扩增及电泳检测.同时优化反应体系,测定稳定性、重复性、特异性及灵敏度. 结果 本实验设计的引物能特异性地扩增副溶血性弧菌的450、269 bp的片段,而对其它种类的菌物无特异性扩增,结果表明该方法特异性好,双重PCR检测灵敏度为100 cfu/ml.并进行了肛门拭子样品的检测. 结论 初步建立能在8h内快速、灵敏、特异地检出副溶血性弧菌毒力菌株的双重PCR技术.     

2005年上海市霍乱弧菌菌株表型及ctxA毒力基因分析

目的：分析本市2005年不同来源01群和0139群霍乱弧菌菌株表型和ctxA毒力基因特征。方法：以PCR方法，对所有菌株进行ctxA毒力基因检测。采用WHO推荐的改良K—B纸片法，对所有菌株均进行了12种抗菌药物的药敏试验。结果：从病人和外环境中分离出的0139群霍乱弧菌均为产毒株；从病人中分离出的01群霍乱弧菌流行株均产毒，外环境中分离出的非流行株少数也产毒。0139群霍乱弧菌菌株耐药谱较01群霍乱弧菌菌株广；两者对氨苄青霉素、强力霉素、庆大霉素、复方新诺明、利福平耐药率有显著差异。结论：本市2005年霍乱的流行株都是产毒株，但产毒株不一定是流行株。药敏结果显示，对01群和0139群霍乱弧菌应采取不同抗菌治疗，0139群霍乱弧菌多重耐药应引起重视。     

2016—2019年北京市海淀区副溶血性弧菌血清型、毒力基因及分子分型研究

目的　综合分析北京市海淀区副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分型结果,并找出其相关性,从而掌握海淀区副溶血性弧菌的流行特征。方法　对2016—2019年北京市海淀区检出的63株副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因检测和PFGE分型试验。结果　海淀区副溶血性弧菌最优势流行株的血清型为O3:K6,毒力基因组合为tlh+tdh+,占比69.8%（44/63）;63株副溶血性弧菌经PFGE聚类分析得到37种带型,各带型之间相似度为84.8%～100.0%,其中,61株副溶血性弧菌聚集形成5个簇（带型相似度≥90%）;4年间共出现了8次一定时间内（发病日期间隔≤90 d）分离得到的菌株血清型、毒力基因和PFGE带型均一致的情况。结论　海淀区副溶血性弧菌的污染来源相对固定且单一。副溶血性弧菌血清分型和PFGE之间无特殊相关性;毒力基因相同的菌株,PFGE带型相似度更高。