临沂地区RhD初筛阴性献血人群分子遗传背景研究

目的通过对临沂地区RhD初筛阴性献血者的研究,了解其分子遗传背景。方法 2011年1月～10月采集无重复54 458人份全血,其中盐水法初筛RhD阴性标本241份。对初筛RhD阴性标本运用本室建立的SSP-PCR作基因检测分型,并对未确定型别携带RHD的标本进行基因测序。结果临沂地区献血人群中RhD阴性比例为0.44%,241例初筛RhD阴性标本检测到1～10外显子全缺失169例,2～9外显子缺失22例,1227GA突变38例,845GA突变5例,3～6外显子缺失5例,RHD(711DelC)1例,DVa(Hus)1例。分子生物学试验确定的Del型共38例,占初筛RhD阴性的15.77%(38/241)。结论临沂地区RhD初筛阴性献血人群中RHD基因存在多态性,其中RHD1227A等位基因为临沂地区Del型的遗传标志性基因。     

汉族、藏族和维吾尔族人群RHD基因启动子区检测

目的探讨汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性与RhD阴性机制相关性。方法对476例汉族(200例RhD阳性、228例RhD阴性、6例弱D和42例Del型)、57例藏族(50例RhD阳性和7例RhD阴性)和120例维吾尔族(50例RhD阳性和70例RhD阴性)标本,使用PCR-SSP方法检测RHD基因的Upstream盒、Down-stream盒和hybrid盒,使用PCR-SSP法和多重PCR法检测RHD基因启动子区-1~-1 246 bp内的4个RHD基因多态性位点。结果 348例RhD阳性标本(含6例弱D和42例Del型)、76例表型为RhD阴性但RHD基因型为RHD+/RHD-杂合子和RHD+/RHD+纯合子标本中均检测到4个RHD基因特异性多态性位点;而所有229例表型为RhD阴性基因型为RHD-/RHD-纯合子标本均未检测到RHD基因启动子区多态性位点。结论汉族、藏族和维吾尔族RHD基因启动子区多态性可能与RhD阴性机制无关;本研究所建立的RHD基因启动区4个多态性位点PCR-SSP检测方法可用于RHD基因启动区多态性位点研究。     

豫西地区汉族RhD(-)基因的遗传多态性研究

目的观察豫西地区人群RhD(-)基因的遗传多态性,探讨本地区RhD(-)个体的RH基因构成。方法利用(SSP-PCR)方法检测豫西地区的无偿献血者中无血缘关系的40例RhD(+)和129例RhD(-)个体的7个RHD特有的外显子(外显子第3,4,5,6,7,9和10)和RHD及RHCE第4内含子的构成状态。结果 40例RHD(+)献血者中均发现了RHD、RHCE内含子4以及RHD外显子第3,4,5,6,7,9和10;在129例RhD(-)献血者标本当中77例(59.69%)的个体既没有RHD内含子4,也没有上述7个RHD外显子,32例(24.81%)的献血者检查出有RHD内含子4和所有的RHD外显子,其余的20例(15.50%)RHD(-)献血者中携带至少1个RHD外显子;从129例RhD(-)标本中检出的20例Del型均能捡出上述7个外显子。结论豫西地区RHD(-)个体的RH基因结构具有多态性,主要表现为RHD基因全缺失、部分缺失和不缺失。     

Del型RHD基因外显子区及启动子区多态性检测

目的检测Del型RHD基因启动子区是否存在多态性。方法对32例Del型样本RHD基因编码区10个外显子扩增并测序;对样本RHD基因启动子区-1--1 246 bp内的4个多态性位点进行检测;对RHD基因启动子区+3--1138扩增并测序。结果 32例Del型样本均携带完整的RHD基因,并且均为RHD基因1227位点GA的突变;所有样本均检测到4个多态性位点;RHD基因启动子区+3--1138测序未发现突变位点。结论 Del型RHD基因启动子区序列与正常基因一致,未发现新的突变位点,提示Del型D抗原的弱表达与启动子区突变无关。     

成都地区献血人群RhD阴性个体遗传学背景研究

目的 RhD阴性存在多种变异体,通过研究成都地区RhD阴性献血者,了解其遗传背景。方法 2009年6—11月采集的74947人份全血中获得盐水法初筛阴性标本318例,采用间接抗球蛋白试验(IAT)筛选部分D和弱D,对IAT阴性的标本采用吸收放散试验,筛查Del型,采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)检测各种变异D基因型。检测的Del等位基因包括RHD(M285)、RHD(IVS3+1)、RHD(IVS1+1)、RHD(1227A)、RHD(DelEX9)、RHD(M1I)、RHD(R10W)、RHD(L84P)。吸收放散试验阳性标本使用DelDNA分型试剂盒筛查,未分出型别的标本检测RHD基因1—7和9—10外显子,并对检测到的各种变异D以及疑难标本进行测序分析。结果 318份盐水法初筛阴性标本中检出IAT阳性标本3例,弱D152例,部分D(RhDⅥⅢ)1例。成都地区献血人群中RhD阴性比例为0.42%,表型dccee(56.19%)和dCcee(32.06%)比例高。对可获得的303例IAT阴性标本进行微量吸收放散试验,发现阳性71例。通过DelDNA分型试剂盒检测,RHD(1227A)型57例、RHD(M1I)型1例、无法确定为已知的Del型13例。无法确定的13例标本通过检测RHD基因1—7和9—10外显子,发现11例部分或全部缺失上述外显子,2例含有完整的RHD基因。34例吸收放散阴性含有C或E抗原标本,经检测RHD基因1—7和9—10外显子及1227A,发现RHD(1227A)型9例、部分或全部缺失型25例。血清学试验和分子生物学试验确定的Del型共69例,占IAT筛查RhD阴性的22.77%(69/303)。结论成都地区常规血清学筛查RhD阴性献血人群中RHD基因存在多态性,RHD1227A等位基因是Del型的主要基因类型。吸收放散试验检测Del准确率偏低。     

中国人群RhD阴性个体中D基因多态性的研究

目的 建立RHD基因分型技术，分析中国人群RhD阴性个体的RHD基因多态性分布状况。方法 设计8对特异性引物扩增RHD7个外显子(3，4，5，6，7，9，10)和内含子4，应用PCR—SSP技术，对l15例经常规血清学试验和吸收放散试验鉴定的“Rh阴性个体”，进行D基因多态性的研究。结果 l15例RhD阴性个体，用吸收放散试验检测后分成2组，一组被确认为RhD阴性表现型共88例(76．5％)，另一组是Del(放散)表现型共27例(23．5％)。应用PCR—SSP法对l15例RhD阴性个体作RHD内含于4检查，结果Del型个体都显示有RHD内含于4；对l15例中的17例进一步作RHD的7个外显子的鉴定，其中6例Del带有完整的RHD基因，ll例经吸收放散试验确认为RhD阴性表现型的个体则显示4种情况：7例全部缺失RHD基因，2例(1例ccEe和1例Ccee)带有完整的RHD基巴，1例缺失RHD的第5外显子和1例仅携带第10外显子。结论 PCR—SSP技术可用于RHD基因的研究。常规血清学鉴定的RhD阴性中存在较高比例的Del型，且有可能带有完整的RHD基因。而被吸收放散试验确认为RhD的阴性个体有可能携带RHD基因并显示出多态性，这些个体中有Rhc抗原表达，有别于献中认为全局RhC抗原表达的报告。     

多重聚合酶链反应分析中国汉族人群RHD基因

目的 分析中国汉族人群RHD基因的构成。方法 采用2套多重PCR－SSCP扩增体系，对450例献血（328例RhD阳性、112例RhD阴性、10例D变异型）的基因组DNA进行RHD特异性外显子3、4、5、6、7、9和内含子4，RHDΨ及C、c等位基因扩增，并与血清学Rh定型结果进行对比。结果 328例RhD阳性献血中，326例具有全部的RHD基因特异性外显子，另有2例分别为D^Va和D^IVb；112例血清学RhD阴性献血中，35例存在全部的RHD基因特异性外显子（31．25％），但该35例样本中未检出RHDΨ基因37bp的插入片段。10例D变异型中3例为D^ⅥⅢ，1例D^Va,1例R0^Har,1例D^DFR;另外4例中，2例缺乏RHD所有特异性外显子，2例扩增出RHD所有特异性外显子。结论 中国汉族人群RHD基因的表达存在多种模式。多重PCR体系分析RHD基因既可诊断个体的RhD表型，又具有确认不完全D以及发现新的D变异型的优势。     

118例汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性分析

目的观察汉族人群IAT检测RhD阴性个体RHD基因多态性。方法采用常规血清学技术检测RhD、C、c、E、e抗原表型;采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)方法同时检测RHD基因和RHCE基因。结果抗球蛋白试验(IAT)证实的118例RhD阴性个体中,PCR-SSP方法检测RHD基因结果有28例Del表型个体(23.7%)。在余下的90份真正RhD阴性标本中,有69份标本(76.7%)RHD基因完全缺失;21份标本带有不表达RHD基因。Del表型个体均带有C抗原,带有不表达RHD基因的真正RhD阴性个体大多表现为RhC阳性。结论汉族人群IAT证实的RhD阴性个体呈现RHD基因结构多态性,不表达RHD基因主要以RHD-CE(2-9)-D2为主。     

中国哈尔滨地区献血人群RhDel表型的分子机理研究

本研究探讨中国哈尔滨地区献血人群RhDel表型表达的分子机制。应用血清学及分子生物学方法,对374例经间接抗人球蛋白试验确认为RhD阴性的献血者进行红细胞RHD血型基因分型和RH基因变异体检测,并对无法确定RHD基因型别的特殊样本进行测序分析。结果表明,374例阴性献血者样本中共检出RHD Del型62例,占16.6%。其中RHD 1227A型61例,发现中国人中罕见的RHD Del(cde)1等位基因1例。经测序分析,检出存在RHD711DelC等位基因者11例。另外,在3份样本中发现了新等位基因突变点。结论:RHD1227A等位基因是中国哈尔滨地区Del表型人群所普遍携带的等位基因,是Del表型个体的重要遗传标记。     

中国汉族人群RHCE和RHD基因结构研究

目的 研究中国汉族RhD(-)个体Rh血型系统RHCE基因4种外显子和RHD基因8种外显子的构成情况。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法对80名汉族RhD(-)个体的RHD基因及RHCE基因进行研究。扩增RHD基因的第2、3、4、5、6、7、9、10外显子和内含子4以及RHCE基因的第1、2、4、5外显子和内含子4。结果 80名RhD(-)供者的Rh表型为ccdee38人,ccdee34人,ccdEe4人,ccdEe4人。在表型为ccdee和ccdEe的42人中,D基因8种外显子全部缺失。在表型为ccdee和ccdEe的38人中,RHD基因则表现出多态性,16人存在全部D基因8种外显子,11人缺失全部D基因8种外显子,8人存在D基因第2外显子,3人存在D基因第2、10外显子。结论 中国汉族RhD(-)个体D基因外显子具有多态性。Rh表型为cc的个体D基因8种外显子全部缺失,在表型为cc的个体中观察到4种D基因多态性。中国汉族人群D基因结构不同于高加索人种,故应用RHD基因定型时,临床医生应慎重对待。     

多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术在广州地区RhD阴性献血者基因分型研究中的应用

目的 采用新型Rh血型系统的MLPA检测试剂盒,对广州地区收集的200名RhD阴性献血者进行基因分型.方法 采用传统的血型血清学方法,对RhD阴性献血者进行RhD表型鉴定.提取基因组DNA,采用MLPA检测试剂盒对收集的200名RhD阴性献血者进行RHD基因分型.对于不能明确分型的标本,进行RHD基因直接测序分析.结果 在200名RhD阴性献血者中,采用MLPA方法对196名进行了明确的基因分型.其中,127名为RHD基因缺失(占63.5％);仅检测到包含RHD1227A突变的DEL等位基因有41例,其中38例包含杂合等位基因,其余3例包含纯合等位基因;仅检测到RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10)等位基因的有23例,其中19例杂合,4例纯合;3例包含2种不同的RHD等位基因(1条为RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为RHD1227A);其余2例分别包含杂合的DFR-2(RHD-CE(4) -D)及弱D15型(RHD845A)等位基因.在其余4例直接测序分析的标本中,2例包含杂合的RHD711 delC突变;1例1条等位基因为MLPA检测到的包含RHD1227A突变的DEL等位基因,另1条为包含711delC突变的RHD等位基因;其余1例的1条等位基因为MLPA检测到的RHD (1-2)-CE (3-9)-D (10),另1条为包含新突变的RHD等位基因(1154G ＞T,385Gly＞ Val).结论 MLPA检测试剂盒是适用于中国人群的1种快速、有效的高通量基因分型方法,能够对中国人群常见的各种RHD基因型进行明确分型,适用于参比实验室相关疑难标本的基因分型检测.也可应用于中国人群常见的Del表型检测,使Del表型患者不必再输注RhD阴性血液,节约稀有的RhD阴性血液资源.     

西安地区RhD阴性个体RHD 711D~(el) C等位基因频率研究

目的研究西安地区RHD基因711Del C等位基因分布状况。方法应用PCR方法检测RhD阴性个体,对特殊标本进行测序分析。结果在1 492名RhD阴性个体中,检出RHD 711Del C等位基因8例(占0.54%),且均为E抗原阳性。结论获得了西安地区RHD 711Del C基因分布的初步状况,RHD基因711Del C的突变可能与E抗原有相关性。     

恩施州土家族人群RhD阴性个体Rh表型及RHD基因合子型检测分析

目的了解恩施州土家族人群RhD阴性个体的表型分布及基因合子型特点。方法根据中国人Rh分子特点和RHD基因缺失原理设计2对引物,对从56 159(人)份土家族人群中筛查出无血缘关系的Rh阴性个体,检测其RHD基因第1外显子和融合合子型。结果血型血清学检测恩施州土家族人群的RhD阴性比例为1.5‰(85/56 159);PCR-SSP法鉴定出其中63.53%(54/85)为RHD-/RHD-,32.94%(28/85)为RHD+/RHD-型,3.53%(3/85)为RHD+/RHD+型。结论恩施州土家族RhD阴性人群的RHD基因合子型中的RHD+/RHD-杂合型比例高于浙江汉族RhD阴性人群(25.48%)及中国哈萨克族RhD阴性人群(16.67%)的相应比例。     

RhD阴性献血者的遗传背景研究

目的 通过检测RhD阴性献血者RHD和RHCE基因,分析RhD阴性献血者的遗传背景。方法 对2021年3月～2022年5月雅安市中心血站经RhD初筛及确证试验为RhD阴性的无偿献血者标本,首先鉴定RHD等位基因是否完全缺失,随后检测非RHD等位基因完全缺失型标本10个外显子是否存在缺失,最后对无RHD等位基因及外显子缺失的剩余标本进一步进行DNA测序分析;采用SSP-PCR法检测RHCE基因。结果 104份RhD阴性标本的RHD基因检测结果中,完全缺失65份(d/d),RHD基因部分缺失(1条等位基因缺失)33份,RHD基因无缺失6份;对上述33份RHD基因部分缺失标本的RHD等位基因进行10个外显子检测发现13份部分外显子缺失,其基因型均为RHD^*D-CE(3-9)-D/d,表型为RhD阴性,余20份未见外显子缺失;其余无缺失标本的外显子测序结果显示,6份标本的基因型为RHD^*1227A/RHD^*1227A型,19份标本的基因型为RHD^*1227A/d型,1份标本的基因型为RHD^*     

海南汉族RhD阴性个体RHD基因研究

目的探讨海南汉族Rh阴性献血者的RHD基因结构,为建立适合本群体的正确的RHD基因定型方法提供依据。方法采用常规盐水法和抗球蛋白法筛选RhD阴性献血者,通过吸收放散试验确定其中RhDel,并采用PCR SSP技术分析其RHD基因存在情况,对存在全部外显子的个体进一步检测RHD内含子2、10和RHDψ假基因。结果筛选获得的106名RhD阴性个体中,31例(29.25%)为RhDel,存在完整RHD基因;剩下75例中,67例(63.21%)完全缺失RHD基因,8例缺失部分RHD基因;存在全部外显子的31例RhDel个体均存在RHD内含子2、10而无RHDψ基因。另外,在1例ccdEe样本中检测到外显子1、3、4、6、7、9及10,仅缺少外显子5。结论海南汉族RhD阴性群体中存在高比率的RhDel,且所有RhDel样本均可检测到全部的RHD基因外显子;海南汉族真实RhD阴性个体的RHD基因呈多态性,缺失部分RHD基因的个体均未检测到RHD外显子5,提示对本群体而言,特异性扩增外显子5在RHD基因定型中具有重要意义。     

徐州地区汉族RhD阴性人群RHD基因多态性研究

目的：研究徐州地区汉族RhD阴性人群RHD基因多态性。方法采用常规血清学技术检测RhD抗原表型,采用抗球蛋白试验（IAT）确认结果。采用序列特异性引物-聚合酶链反应（SSP-PCR）方法检测RHD基因。结果110例RhD阴性个体中,SSP-PCR检测RHD基因结果为RHD 阳性基因携带者5例,RHD阴性基因携带者47例,RHD-CE（2-9）-D 基因携带者22例,DVI Ⅲ型基因携带者17例,弱D15基因携带者2例,DEL-1227A基因携带者17例。结论徐州地区汉族人群RhD阴性个体呈现RHD基因结构复杂的多态性,以变异体等位基因RH-CE（2-9）-D 基因、DVI Ⅲ型基因、DEL-1227A基因为主。     

117名RhD阴性个体RHD基因序列分析

目的 研究调查辽宁地区RhD阴性个体的分子机制及RHD基因的多态性.方法 用间接抗球蛋白方法(IAT)确认RhD阴性个体,采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)扩增RHD基因特异性的外显子1～10,测序分析RHD基因全长编码序列;同时用特异性Rh盒子进行RHD基因的纯合性测定.结果 在117名RhD阴性个体中,84例(71.80％)RhD阴性个体完全缺失RHD基因,23例(19.66％)RhD阴性个体携带RHD1227A等位基因,8例(6.84％)携带RHD-CE-(2-9)-D2融合基因,2例(1.71％)携带RHD 711 delC等位基因.完全或部分含有RHD基因的个体均含有RhC抗原.结论 辽宁地区RhD阴性个体的RHD基因具有丰富的多态性和不同的遗传背景,主要以RHD基因完全缺失为主,其次部分缺失和无缺失,并存在其他稀有基因型.     

1例Del表型献血者RHD基因分析

目的:分析云南1例Del表型献血者的RHD基因型。方法:鉴定标本Rh血清学表型，对RHD基因进行PCR-SSP分型检测及10个外显子测序分析，扩增第9外显子进行克隆测序并分析序列，检测RHD基因合子型。结果:本研究病例标本Rh表型为CcD^elee;RHD基因第9外显子包含第8内含子和第9内含子缺失共1 003 bp,缺失发生在两个7 bp的短串联重复序列之间；其余外显子序列无变异；Rh杂交盒检测表明存在1条RHD阴性等位基因。结论:本研究病例标本为RHD基因第9外显子缺失导致的Del型。     

高通量MLPA基因分型技术在1个Del表型家系基因鉴定中的应用

目的 对1个Del表型家系作基因鉴定.方法 运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA.运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认.结果 血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体.MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因.结论 高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液.     

用PCR技术检测RhD(-)个体RHD基因的国内文献分析

我们对RhD(- )个体采用PCR技术检测RHD基因 8个外显子及 1个内含子 ,将RhD(- )者分成三类 :RHD基因完全缺失型 ,RHD基因部分缺失型及RHD基因正常存在型。目的对中国汉族RhD(- )者RHD基因多态性 ,以及Del(弱D)的形成、Du(D变异型 )进行研究。据不完全统计 ,国内对RhD(- )、Del表型、Du 型和RHD基因检测有 7篇[1 7] 报道。现将中国汉族RhD(- )个体的D基因结构情况综述如下。1　材料与分析1.1　RhD(- )个体资料来源　收集的RhD(- ) 30 2例均来自上述文献报道。Rh表型采用多克隆和单克隆抗 D和多克隆抗 C、抗 c、抗 E、抗…