应用蛋白质芯片技术筛选急性淋巴细胞白血病患儿血清标志物的研究

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)急性期、缓解期(CR)患儿血清蛋白质谱的变化,旨在筛选可用于ALL早期诊断、病情变化监测及预后判断的蛋白质标志物。方法应用蛋白质芯片CM10及表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术获得ALL、正常健康儿童血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard和Biomarker Patterns System5.0软件对数据进行分析,建立诊断模型。结果通过检测、分析发现,ALL组与正常对照组比较有显著差异(P<0.05)的蛋白质峰有14个,并获得质荷比(M/Z)为2770.43、7576.2和5288.68的蛋白质在ALL患儿血清蛋白质谱中波峰强度明显升高;进一步利用这3个蛋白质建成的诊断模型,可将ALL与正常儿童正确分组,其正确分组率分别为93%(25/27)和90%(19/21)。ALL完全缓解后血清蛋白质谱中,原高表达的蛋白质明显下调。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是一种快速、简单易行、用量少和高通量分析方法,能够直接检测出ALL患者血清中特异的蛋白标志物,其对于ALL的早期诊断具有一定的临床意义。     

应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱筛选急性特发性血小板减少性紫癜患儿血清生物标志物

目的 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS) 技术结合蛋白芯片检测并筛选急性血小板减少性紫癜(AITP)早期诊断、病情变化监测及判断预后的血清蛋白质标志物,建立AITP诊断模型,并验证在血清蛋白质组水平,创立AITP的分子诊断新方法.方法 应用SELDI-TOF-MS检测结合在蛋白质芯片上的血清蛋白质,获得35例AITP、35例健康对照者血清蛋白表达指纹图谱,并用Biomarker Wizard软件对数据进行分析,建立人工神经网络诊断模型.结果 在分子质量/电荷比值(质荷比,M/E)为2 000～20 000,AITP组与健康对照组之间差异有统计学意义(P<0.01)的蛋白质峰有29个,其中高表达的蛋白质峰7个,低表达的蛋白质峰22个,从分析的结果看最有意义的蛋白质为质荷比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质,可以将其作为AITP的血清生物标志物;在蛋白质库中搜索与上述M/E值相对应的蛋白质,M/E为4 109.23的标志物是核蛋白体large subunit,M/E为 5 521.35 的标志物在蛋白质库中未发现.应用其血清标志物进入人工神经网络组合的诊断模型,将AITP组与健康儿童准确分组,敏感度为95%,特异度为90%.结论 1.M/E比为4 109.23、5 521.35 的蛋白质组合的诊断模型能将AITP与健康儿童完全准确地分开,提示该蛋白质可能是AITP的血清生物标志物;其中M/E为5 521.35的蛋白质可能是新的蛋白质.2.SELDI-TOF-MS技术是寻找疾病相关性蛋白质的有效工具.     

肾病综合征激素耐药型的诊治

肾病综合征激素耐药型的诊治杨霁云肾上腺皮质激素（简称激素）用于治疗小儿肾病综合征（简称肾病）逾４０年，已作为该征之首选药用于临床。虽多数患儿可由之诱导缓解，但勤复发、激素依赖及激素耐药仍为治疗棘手的问题，而常称之“难治性肾病”。一、概述根据我国儿科肾...     

激素耐药型和激素依赖型肾病患儿肾脏病理计量分析

目的 探讨病理计量分析评价激素耐药型（SR）和激素依赖型（SD）肾病综合征患儿的肾脏病理损害及其临床应用意义。方法 采用自行研制的评分法,对73例SR型和SD型肾病患儿的肾脏病理从病理类型、肾小球病变、小管间质病变、肾脏总的病理损害4个方面计量分析,并以血尿素氮为应变量,临床表现和肾脏病理计分为自变量进行逐步回归分析。结果 （1）病理类型评分结果：微小病变、局灶节段肾小球硬化、膜性肾病、系膜毛细血管性肾小球肾炎和系膜增生性肾小球肾炎五组间的年龄、病程、复发次数、血尿素氮、胆固醇、白蛋白、尿蛋白定量、肾脏总的病理损害的差异均无显著意义,而五组患儿的肾小球病变计分分别为1,5,5,6,5,微小病变组与其他各组比较差异有显著意义（H＝19．278,P＜0．01）。（2）73例患儿肾小球病变计分结果：正常2例（3％）,轻度53例（73％）,中度17例（23％）,重度1例（1％）。且正常、轻度、中度三组间血尿素氮、小管间质病变的差异有显著意义（H＝8．40,P,0．01;H＝11．56,P＜0．05）。（3）肾小管间质病变计分结果：轻度23例（34％）,中度37例（18％）,且轻、中、重三组间病程、复发次数、血尿素氮、肾小球病变计分的差异均有显著意义。（H值分别为25．016,38．775,14．944,10．625,P值均＜0．01）。（4）肾脏损害的总分结果：轻度33例（45％）,中度34例（7％）,重度6例（8％）,轻、中、重三组间病程、复发次数、血尿素氮的差异有显著意义（H值分别为19．42,14．335,18．923,P值均＜0．01）。（5）以血尿素氮为应变量行逐步回归分析,小管间质及肾小球损害对血尿素氮均有显著影响,小管间质病变的回归系数为0．862（P＜0．01）;肾小球病变的回归系数为0．212（P＜0．05）。结论 采用评分法对肾脏病理进行主分评价其病变程度,具有临床实用性,尤其对小管间质病变的计分评价对判断肾功能受损更有价值。     

环孢素治疗激素耐药型肾病综合征的研究进展

儿童激素耐药型肾病综合征(SRNS)的治疗相对棘手,目前治疗上常用的免疫抑制剂有环孢素(CsA)、环磷酰胺、他克莫司等。CsA的药物代谢动力学不稳定,需定期监测其血药水平。CsA对SRNS儿童的诱导缓解率优于安慰剂及环磷酰胺,与他克莫司相当。SRNS儿童在CsA停药后易出现复发,其复发率为45%～64%。为增强CsA的疗效、减少其肾毒性,推荐应用小剂量、长疗程CsA治疗儿童SRNS的方案。     

儿童肾病综合征激素耐药机制研究进展

激素耐药是儿童原发性肾病综合征治疗的难点,其产生机制较复杂。近来研究发现,多药耐药基因1(multidrug resistance gene l,MDR1)及其产物P-糖蛋白170(P-glycoprotein170)、糖皮质激素受体( glucocorticoid receptor,GR)、肾脏病理、基因突变、并发症等均与激素耐药密切相关。该文就儿童原发性肾病综合征的激素耐药机制进行综述,以指导临床治疗。     

激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2基因多态性变异研究

目的分析激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿NPHS2基因突变及其特点。方法收集30例SRNS患儿(男19例,女11例)和20例健康儿童病例资料。采集SRNS患儿外周血2～4 mL,采用盐析法提取其基因组DNA。采用PCR方法扩增NPHS2基因,对PCR产物进行测序。结果受试者均未检测到NPHS2基因突变;其中发现11例SRNS患儿和4例健康儿童存在单核苷酸多态性(SNP),均为已报道的SNP:288C>T的等位基因频率(C/T)分别为93%、7%;954T>C的等位基因频率(T/C)分别为80%、20%;1038A>G的等位基因频率(A/G)分别为90%、10%,2组间各SNP的基因频率和基因型比较差异均无统计学意义(Pa>0.05);检测出SNP的患儿与未检出SNP的患儿其临床特征亦无统计学差异(P>0.05)。结论 NPHS2基因多态性可能不是中国南方儿童SRNS的遗传学基础。     

儿童激素耐药型肾病综合征的诊疗现状

儿童激素耐药型肾病综合征(SRNS)是指以泼尼松足量治疗＞4周尿蛋白仍为阳性者.SRNS诊断包括临床诊断、病理诊断和病因诊断.SRNS病因分为T淋巴细胞功能紊乱和肾小球滤过屏障的原发性缺陷2类.因T淋巴细胞功能紊乱所致的儿童SRNS推荐钙调蛋白磷酸酶抑制剂作为初始治疗方案.因肾小球滤过屏障的原发性缺陷所致儿童SRNS绝大多数对激素和免疫抑制剂耐药,治疗该类SRNS的新药急待研发.     

环磷酰胺冲击治疗儿童激素耐药型肾病综合征的疗效

目的 探讨激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿大剂量环磷酰胺(CTX)冲击治疗的疗效及影响疗效的相关因素.方法 总结本院2004年12月～2009年12月收治的资料完整并进行CTX静脉冲击治疗的38例SRNS患儿的病例资料及随访情况,并就其缓解情况及与临床分型、病理类型、临床指标之间的关系及药物不良反应进行回顾性分析.结果 1.本组完全缓解18例(47%),部分缓解11例(29%),总有效率76%;部分缓解患儿均发生于疗程6个月内,延长疗程无累积缓解率增加;未缓解患儿1例在起病5 a内进展至终末期肾病.2.SRNS患儿单纯型肾病组缓解率高于肾炎型肾病组.3.SRNS病理改变以非微小病变肾病为主,即以系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)为主;其中MsPGN缓解率较高,而FSGS缓解率相对较低.4.不良反应发生率为53%,最常见不良反应为一过性胃肠道反应,占36%,其次为轻度脱发(10%)、白细胞降低(7%),无严重感染、出血性膀胱炎发生.结论 CTX冲击联合激素治疗SRNS疗效肯定;临床类型、病理类型等因素可能与疗效及预后有关,单纯型肾病、MsPGN有效率较高,FSGS患儿CTX冲击疗效较差,发展为终未期肾病的风险较高.     

儿童激素耐药型肾病综合征治疗进展

原发性肾病综合征(PNS)是儿童最常见的肾小球疾病之一,足量泼尼松口服4周后如仍未缓解则为激素耐药型肾病综合征(SRNS)。根据是否存在单基因致病,分为特发性SRNS及遗传性SRNS。目前激素联合钙调神经磷酸酶抑制剂(CNI)是治疗特发性SRNS首选推荐治疗方案,50%~70%的患儿可达完全或部分缓解;少部分特发性SR...     

Efficacy of captopril treatment in children with steroid-resistant nephrotic syndrome

We studied the efficacy of captopril, an angiotensin-converting enzyme inhibitor in treating persistent moderate or severe proteinuria in children with various glomerular diseases other than minimal-change nephrotic syndrome. Captopril was administered for 3 months to 15 normotensive and nonazotemic or mildly azotemic patients (12 boys, 3 girls) in whom corticosteroid and cytotoxic treatment had failed to induce remission. Urinary protein excretion decreased from 2873.14±1937.50 (mean ± s.e.m.) to 1684.71 ± 1463.13 mg/day (P < 0.05). The reduction in proteinuria was not related to a significant fall in systemic blood pressure or a change in renal function. Serum albumin did not rise and side effects due to captopril were not observed. We concluded that, in the short term, captopril can be used safely and effectively for decreasing the proteinuria of nephrotic children unresponsive to conventional therapy.     

激素抵抗型肾病环孢霉素受体的研究

目的探讨激素抵抗型肾病患儿血白细胞环孢素受体的表达和临床意义及介导免疫抑制的机理。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定23例激素抵抗型肾病患儿血白细胞中环孢素受体的表达,并与正常儿童作对照。结果不同病理类型激素抵抗型肾病患儿中,系膜增殖性肾小球肾炎血白细胞中环孢素受体呈高表达,微小病变型肾病、膜增殖性肾小球肾炎、局灶节段性肾小球硬化血白细胞中环孢素受体表达差异无显著性。激素抵抗型肾病患儿急性期血白细胞中环孢素亲和素(CyP)mRNA水平高于恢复期与对照组。激素抵抗型肾病患儿以环孢素5mg/(kg·d)口服治疗10～45d后,56.5%完全缓解,17.4%部分缓解。当环孢素血浓度在100～200μg/L范围、环孢素受体呈高水平表达时,激素抵抗型肾病患儿易引起临床缓解。结论激素抵抗型肾病患儿高水平环孢素受体表达时,可给予合适剂量的环孢素A(CyA)治疗;测定环孢素受体表达水平,对肾病的治疗有指导意义。     

神经管缺陷胎儿和神经管缺陷胎鼠羊水蛋白质标记物的比较研究

目的 利用表面增强激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术研究神经管缺陷胎儿羊水和神经管缺陷胎鼠羊水的蛋白质谱变化规律.方法 根据实验对象不同分为①经超声确诊为胎儿神经管缺陷的孕妇11例为畸形组.包括脊柱裂5例,无脑儿5例.脑积水1例,病例组孕母均于引产前经腹抽取羊水5 ml,另选产前行羊膜腔穿刺取羊水做染色体核型检测,结果正常且孕周数相匹配的正常孕妇9例为对照组;②45只雌性Wistar大鼠(体重220～260 g),随机分为畸形组(n=30)和对照组(n=15).在标准条件下饲养,午夜雌:雄=4:16笼.次日清晨8时阴道涂片,镜检精子,确定其妊娠日期,有精子者计为孕0日(E_0).在孕10日(E_10)晨8时,畸形组雌鼠称体重.按120mg/kg称取维甲酸与矿物油混合均匀(维甲酸浓度为40mg/ml),经胃管一次注入孕鼠胃内.对照组仅将与畸形组同量且不含维甲酸的矿物油经胃管一次注入.在孕17 d剖腹,每只胎鼠抽取羊水约0.1～0.3 ml,选取11只脊柱裂畸形胎鼠的羊水,15只正常对照胎鼠的羊水.选用CM10蛋白质芯片,在PBSⅡ C型蛋白质芯片阅读机读取数据.采用Ciphergen protein chip 3.1.1软件对数据进行统计分析.结果在设定的优化相对分子量1～30 × 10~3范围内,神经管缺陷胎儿的孕母羊水中共检测到35个差异蛋白峰,其中7个有统计学意义,有6种蛋白质/多肽高表达,相对分子质量分别为14 700,7 995,15 891,16 027,13 776,11 040;1种蛋白质/多肽低表达,相对分子质量为23 417.神经管缺陷胎鼠羊水中共检测到55个羊水差异蛋白峰,有统计学意义的差异蛋白峰有9个.脊柱裂畸形组有5种蛋白质/多肽高表达,相对分子质量分别为11 658,27 387,7 898,11 603,13 829;4种蛋白质/多肽低表达,相对分子质量分别为5 124,14 702,5 403,13 626.将神经管缺陷胎鼠和神经管缺陷胎儿羊水蛋白质谱进行比较分析,发现二者羊水中共同蛋白质/多肽:4 138(4 145),7947(7941),8 588(8 588),9 385(9 390),14 702(14 700).其中14 700(P=0.006)差异具有统计学意义,很可能是神经管缺陷胎儿和神经管缺陷胎鼠羊水共同蛋白质/多肽标志物.结论 神经管缺陷胎儿和胎鼠羊水中可能存在相同的特异性蛋白质/多肽标志物,相对分子质量14 700的蛋白质/多肽对神经管缺陷诊断具有更重要的意义.     

The role of cow''s milk protein intolerance in steroid-resistant nephrotic syndrome

The role of cow's milk protein intolerance in steroid-resistant nephrotic syndrome was evaluated in 17 children. Cow's milk was excluded from the diet for at least 14 days without changing previously ineffective prednisone dosage. Six patients with minimal change or mesangial proliferation went into remission 3 to 8 days after elimination of cow's milk. After a period of 2-3 weeks of remission, cow's milk challenge was positive in three patients. After one year on a cow's milk-free diet, two of six patients became milk tolerant and are in remission of NS, one of six became steroid-dependent, two of six are still unable to tolerate cow's milk and are in remission on a cow's milk-free diet and one of six children was lost from observation. The role of cellular mechanisms in steroid-resistant nephrotic syndrome is suggested.     

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目的探讨肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)与肾脏病理进展及原发性肾病综合征(INS)糖皮质激素(GC)耐药的关系。方法2005年9月至2007年12月在中南大学湘雅二医院儿科住院行肾穿刺活检的INS患儿40例,分为激素耐药性肾病综合征(SRNS)组(20例)和激素敏感性肾病综合征(SSNS)组(20例)。免疫组化双染法检测INS患儿和5例正常对照组儿童肾组织中细胞角蛋白(CK)和波形蛋白(vimentin)的表达,肾脏病理评分半定量评价肾组织病理损害程度。结果SRNS组肾小管-间质病理评分显著高于SSNS组(P<0.05);正常对照组肾小管上皮细胞内只表达CK,不表达vimentin;INS肾小管上皮细胞均不同程度表达vimentin;SRNS组肾组织CK表达较SSNS组显著降低[分别为(66.25±12.13)%和(76.64±7.64)%,P<0.05],vimentin表达较SSNS组显著增高[分别为(11.51±7.48)%和(4.98±2.27)%,P<0.05];不同肾小管-间质病变(轻、中、重度)组肾小管上皮细胞内CK和vimentin表达量的差异均有统计学意义[CK表达量分别为(79.97±...     

Challenges and opportunities for discovery of disease biomarkers using urine proteomics

Modern medicine has experienced a tremendous explosion in knowledge about disease pathophysiology, gained largely from understanding the molecular biology of human disease. Recent advances in mass spectrometry and proteomics now allow for simultaneous identification and quantification of thousands of unique proteins and peptides in complex biological tissues and fluids. In particular, proteomic studies of urine benefit from urine's less complex composition as compared to serum and tissues, and have been used successfully to discover novel markers of a variety of infectious, autoimmune, oncological, and surgical conditions. This perspective discusses the challenges of such studies that stem from the compositional variability and complexity of human urine, as well as instrumental sampling limitations and the effects of noise and selection bias. Strategies for the design of observational clinical trials, physical and chemical fractionation of urine specimens, mass spectrometry analysis, and functional data annotation are outlined. Rigorous translational investigations using urine proteomics are likely to discover novel and accurate markers of both rare and common diseases. This should aid the diagnosis, improve stratification of therapy, and identify novel therapeutic targets for a variety of childhood and adult diseases, all of which will be essential for the development of personalized and predictive medicine of the future.     

利妥昔单抗治疗难治性激素耐药型肾病综合征的疗效和安全性

目的:探讨利妥昔单抗(RTX)治疗儿童难治性激素耐药型肾病综合征(SRNS)的疗效和安全性。方法:回顾性分析2013年9月至2018年3月东部战区总医院儿科收治并接受RTX治疗的10例难治性SRNS患儿的临床资料。结果:10例患儿发病年龄(4.47±2.75)岁,男女各5例;5例(50%)肾活检为局灶节段性肾小球肾炎,...     

P-糖蛋白170在原发性肾病综合征患儿糖皮质激素耐药中的作用

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿治疗前外周血单个核细胞(PBMC)P-糖蛋白170(P-gp170)与糖皮质激素(GC)耐药的关系。方法采用流式细胞仪(FCM)检测30例PNS患儿PBMCP-gp170的表达,并分析其与复发次数、24h尿蛋白定量(24hUTP)及肾脏病理积分的关系。根据随访结果分成激素耐药型肾病综合征(SRNS)和激素敏感型肾病综合征(SSNS)2组,各15例。10例健康体检儿童作为正常对照组。结果SRNS组患儿PBMCP-gp170的表达量显著高于SSNS组患儿(P均<0.05)。PNS患儿激素治疗前PBMCP-gp170的表达量与复发的次数呈正相关(r=0.399,P<0.05);SRNS患儿激素治疗前PBMCP-gp170的表达量与24h尿蛋白定量(24hUTP)及肾脏病理积分均呈正相关(r=0.576、0.529,P均<0.05)。结论PBMCP-gp170表达增高可能与PNS患儿GC耐药有关,可作为PNS患儿GC耐药的标志之一。PBMCP-gp170表达增高与PNS活动、复发及病理有关,可做为临床判断预后的指标。     

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??Abstract??Objective To investigate the clinical efficacy and safety of tacrolimus ??FK506?? therapy for children with steroid-dependent and steroid-resistant nephrotic syndrome ??NS??. Methods From Jun.2007 to Dec.2011 in Guangzhou Medical College Guangzhou First Municipal People's Hospital??42 children with primary nephrotic syndrome were enrolled??in which 32 cases were steroid-dependent NS ??SDNS?? and 10 cases were steroid-resistant NS ??the SRNS??. The indicators were tested before treatment and 12 weeks later??including ??1?? the 24h urinary protein excretion??blood urea nitrogen ??BUN????serum creatinine ??Scr????plasma albumin ??Alb????blood and urine ??2-microglobulin ????2-MG??????2?? lipid testing indicators??total cholesterol ??TC????triglyceride ??TG??????3??hypercoagulable state indicators??the prothrombin time ??PT????activated partial thromboplastin time ??APTT ????the plasma concentration of fibrinogen ??Fib?? and blood D-dimer ??D-dimer??. Results Tacrolimus combined with steroid therapy had significant effects.The clinical and biochemical indicators improved significantly after treatment ??P??0.05 or P??0.01????lipids and hypercoagulability-related indicators also improved significantly??proteinuria significantly reduced.Complete remission was achieved in 29 cases??partial remission in 10 cases??no remission in 4 cases.Eleven cases of simple type NS got complete remission??and 18 cases of nephritis type NS got complete remission??partial remission in 9 cases??no remission in 4 cases.Pathological type??5 cases of minimal change disease??complete remission????5 cases of focal segmental glomerulosclerosis??3 no remission??2 partial remission????six cases of mesangial proliferative glomerulonephritis??4 complete remission??2 partial remission??.Mild gastrointestinal reaction occurred in 4 cases and diarrhea in 2 cases.Conclusion The tacrolimus and steroid combination therapy for children with steroid-dependent and steroid-resistant NS can reduce proteinuria??reduce high cholesterol and improve the hypercoagulable state??the majority of children get complete remission??steroid-resistant nephrotic syndrome also has a significant improvement in the treatment.This combined treatment is safe and effective with fewer adverse reactions.