原代SD大鼠海马神经元扫描电镜形态学特点

目的:观察体外培养的原代海马神经元扫描电镜形态学特点。方法:体外培养新生SD乳鼠原代海马神经元,行免疫细胞化学鉴定,用扫描电镜观察其形态学特点。结果:培养的海马神经元形态多样,梭形神经元胞体较大,伸出两个突起;神经元细胞有的基底宽广,突起有粗有细,与周围的神经元细胞连结紧密;锥体细胞从胞体发出2～3个突起,从粗大的突起上又分出突起;培养的神经元以锥体形为主,其次为梭形、三角形。结论:培养的神经元为MAP-2染色阳性,扫描电镜可见神经元胞体及突起形成神经元的特有结构。     

SD乳鼠海马神经细胞原代培养方法的探讨

目的 寻求一种简单、廉价的原代SD乳鼠海马神经细胞培养方法.方法 采用胰蛋白酶消化法制备游离海马神经细胞悬液,进行培养.结果 通过多次探索、观察、成功的进行了原代海马神经细胞培养.结论 本方法适合一般实验室开展海马神经细胞培养.     

新生大鼠海马神经元的原代培养方法

目的：介绍一种条件简单，生长良好的海马神经元培养方法。方法：急性分离及原代培养海马神经元，并用膜片钳全细胞记录方法观察培养好的神经元电生理学特性。结果：培养的神经元胞体清晰，晕光明显，表达了多种电压门控和化学门控离子通道。结论：本实验方法简单、可靠，保持了神经元结构和功能特性。     

鼠胚脑皮质及海马神经元原代培养方法的改进

神经细胞原代培养是研究神经细胞的重要手段之一^[1,2].传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,因此无法满足在单一神经细胞培养基础上进行研究的需要。1998年10月至1999年9月,我们对传统混合培养方法在取材、消化、温度、机械操作等方面进行控制和改进,得到了比较满意的相对单一的神经细胞培养物和单神经细胞网络,为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型。     

一种简单高效的新生鼠海马神经元原代培养方法

【目的】建立一种简单、高效、高纯度的新生小鼠海马神经元的原代培养方法。【方法】取出生24 h内的C57BL/6J新生鼠,分离海马组织,采用胰蛋白酶消化加机械吹打的方法获得单个细胞,用含体积分数1%B27及2%Glutamax-100X、终浓度25μmol/L Glutamate的Neurobasal-A培养基接种培养,3 d后用去Glutamate成分的上述培养基换液,并加阿糖胞苷作用48 h以抑制胶质细胞增长。于倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态,采用微管蛋白相关标志物2(MAP2)及Hoechst33258免疫荧光染色鉴定神经元纯度。【结果】此培养方法获得的海马神经元生长状态良好,细胞形态从接种时的圆形透亮、无突起,到培养第7天后发展为神经元胞体聚集、树突发达并形成纵横交错的神经网络;经鉴定,神经元的纯度高达97.2%以上,且能稳定存活2~3周。【结论】该方法操作简单、高效,所得神经元纯度高,结果稳定。     

简易大鼠海马神经元原代培养方法及神经元兴奋性检测

目的 对原有大鼠海马神经元原代培养方法进行改进,在获得数量多、纯度高、体外生长时间长的神经细胞的同时,简化操作流程、节省时间、减少污染.方法 分离24h内出生的Wistar大鼠双侧海马,采用机械吹打法,以沉降法代替过滤制备单细胞悬液,细胞接种24h后培养液更换为添加B27的DMEM/F12无血清培养基,以后每周半量换液2～3次.用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性标志物神经元特异烯醇化酶(NSE)鉴定神经细胞的纯度,并以钙影像仪测定KCl作用神经元后细胞的钙离子浓度变化,了解神经元的兴奋性.结果 此简易方法节约操作时间及科研成本,减少了污染的机会.所培养的神经元杂质少、纯度高、细胞活性好,体外存活时间长.结论 该方法简便可行,结果稳定,用该方法培养的大鼠海马神经元可作为神经元体外培养的良好实验模型.     

新生大鼠大脑皮层神经元原代培养方法

目的：介绍一种简单、生长良好的大脑皮层神经元的培养方法。方法：急性分离新生鼠大脑皮层制作单细胞悬液进行原代培养,观察培养神经元的生长形态,并用免疫荧光化学法对其进行鉴定。结果：培养的神经元细胞清晰,光晕明显,生长良好,免疫荧光鉴定结果表明该方法培养的细胞纯度较高,能够达到实验研究的要求。结论：该培养方法简单、可靠,是神经元培养的良好方法。     

胎鼠海马神经细胞的原代培养及鉴定

目的建立较理想的SD大鼠胎鼠海马神经细胞体外原代培养方法。方法孕18 d(E18)SD大鼠的胎鼠,采用胰酶消化和机械分离相结合的方法进行海马神经元的原代无血清培养。结果在体外培养条件下神经细胞结构特征明显化,并能形成典型的神经细胞网络。结论该培养技术是海马神经细胞体外培养的理想方法。     

海马神经元原代培养与纯度鉴定方法的优化

目的:通过优化和改进传统的神经元培养方法,探讨一个简单、高纯度的大鼠胚胎海马神经元的原代培养及活性检测方法。方法:颈椎脱臼处死孕鼠,迅速取海马,剥离血管网等结缔组织后,消化并吹打制成细胞悬液,以适当的密度接种入DMEM/HG培养基,4h后换用Neurobasal培养基,以后每2-3d进行1/3量换液。倒置显微镜观察神经元的形态变化,并采用CCK-8试剂盒检测神经元活性和神经元特异性烯醇化酶(NSE)鉴定神经元纯度。结果:细胞接种4h后贴壁,随着培养时间的延长神经元的形态发生一系列变化,从圆形、透亮、体积小逐渐变为椭圆形、三角形或椎形,有光晕,胞体增大,突起伸长且分支增多,在培养第4天后逐渐连接呈网络状。神经元纯度随时间的延长逐渐升高,培养第7天纯度高达90%以上。神经元在培养的第9、10天达到成熟,即可用于后续研究。结论:本实验方法简便易行,神经元纯度高、细胞活性好,体外存活时间长,是体外研究的良好实验模型,值得推广应用。     

大鼠海马锥体神经元的急性分离方法

目的：建立一种适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法,并对其离子通道进行描述。方法：采用酶加机械分离法制备10~12 d鼠龄的大鼠海马锥体神经元,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性。结果：分离出的神经元形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。结论：建立一种简单快速的适用于膜片钳技术的大鼠海马锥体神经元急性分离方法。     

神经生长因子NGF对原代培养的海马神经元缺氧反应的影响

目的 :观察不同浓度NGF对大鼠海马神经元缺氧的保护作用。方法 :采用MTT比色法测定NGF对缺氧神经细胞活性的影响 ,测定LDH漏出率 ,分光光度法检测MDA ,同时进行形态学观察。结果 :各浓度NGF均对大鼠海马神经元缺氧损伤具有保护作用 ,NGF明显减少缺氧所增加的LDH漏出率和MDA含量 ,且能减轻细胞的形态学损伤。结论 :NGF可以通过减少LDH漏出率和MDA含量 ,对大鼠海马神经元缺氧损伤具有明显的保护作用     

铅对大鼠海马神经元胞质PKC活性的影响

目的 :观察不同低浓度醋酸铅不同染铅时间对大鼠海马神经元原代培养细胞胞质蛋白激酶C(PKC)活性及神经元细胞生长的影响。方法 :出生 4～ 8dWistar大鼠海马神经元原代细胞培养 ,显微照相 ,并不同时间不同浓度染铅 ,应用改良的Takai法测定PKC活性的变化。结果 :0 .1～ 1.0 μmol/L染铅 ,PKC活性依浓度依赖方式被激活 ,染铅浓度 >1.0 μmol/L ,PKC活性下降 ;染铅 15min后PKC活性升高并保持。低浓度醋酸铅并可抑制原代神经元细胞生长 ,呈浓度依赖方式。结论 :低浓度醋酸铅可持续激活大鼠海马神经元原代培养细胞胞质PKC ,抑制原代神经元细胞生长。     

大鼠海马神经细胞原代培养及塑料孔板原位鉴定

目的 原代培养大鼠海马神经细胞,探讨简单、有效的塑料孔板原位鉴定方法.方法 采用Hiroaki等的方法并做了改良,在塑料孔板里进行胎鼠海马神经细胞原代培养,7 d后分别用传统和改良的甲苯胺蓝(TB)染色法、改良的神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)染色法对海马神经细胞进行鉴定.结果 无血清细胞培养法神经细胞结构特征明显,能形成明显的神经网络结构.传统的TB染色法染色单一,均为淡蓝色;改良的TB染色法红蓝匹配,对比度好;改良的免疫组化NSE染色法胞质阳性.结论 无血清培养法是海马神经细胞培养的理想方法,塑料孔板细胞培养原位染色简单易行,对细胞及分子水平研究有重要意义.     

碱性成纤维细胞生长因子对染铅大鼠海马神经元胞浆ERK的保护作用

目的研究碱性成纤维细胞生长因子（b FGF）对染铅大鼠海马神经元细胞外调节蛋白激酶（ERK）的保护作用。方法神经元培养7 d后,用0.6μg/L的b FGF以及不同浓度铅处理细胞,然后测定ERK活力。结果铅处理神经元30 min后,在铅浓度0.1~2.0μmol/L时ERK活性明显升高,其中2.0μmol/L时最高。经过b FGF处理以后的细胞,在铅浓度1.0~4.0μmol/L时ERK活性与对照组相比无明显差异。结论染铅浓度不同对ERK活性影响也不同,b FGF可以保护神经元中ERK活性。     

左归降糖解郁方对大鼠海马神经元细胞的保护作用

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症（DD）细胞模型海马神经元损伤的保护作用。方法建立DD细胞模型,并采用左归降糖解郁方含药血浆进行干预,阳性对照组采用二甲双胍合氟西汀含药血浆。药物干预24 h,NSE鉴定神经细胞,MTT测定细胞存活率,TUNEL染色测定凋亡小体,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶（GOD-POD）法检测海马神经元细胞葡萄糖消耗情况。结果 NSE法鉴定海马神经元细胞纯度达93%以上;左归降糖解郁方组在第24、48、72 h细胞存活率分别为80.5%、78.7%、73.2%,与模型组比较差异具有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）,且其海马神经元细胞存活率在72 h时增加较二甲双胍合氟西汀组更明显（P〈0.05）;TUNEL染色显示左归降糖解郁方含药血浆组免疫阳性细胞数明显减少,凋亡率为13.2%;左归降糖解郁方可明显消耗培养基中葡萄糖浓度,从12 h开始与模型组相比差异均有显著性统计学意义（P〈0.01）。结论左归降糖解郁方对DD细胞模型海马神经元细胞具有保护作用。     

SD乳鼠原代心肌细胞培养方法的改进

目的:探讨SD乳鼠原代心肌细胞最佳分离、纯化及培养方法,以提供可靠的心肌细胞模型.方法:用含0.1％的胰蛋白酶及0.1％Ⅱ型胶原酶的酶混合液分离乳鼠心脏组织,并用差速贴壁分离法和5-溴脱氧尿核苷抑制法进行纯化,用台盼蓝染色法检测细胞的存活率,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,免疫组织化学染色方法检测心肌细胞的纯度.结果:台盼蓝染色观察细胞存活率达(96.9±8.9)％以上.显微镜下心肌细胞由圆形渐变为梭形、多边形,逐渐形成细胞簇,搏动频率约120～150次/min.用抗横纹肌肌动蛋白单克隆抗体鉴定心肌细胞,阳性率为(90.5±1.6)％.结论:本方法所获SD乳鼠的心肌原代细胞纯度高、活力强.     

雷公藤内酯对海入酸致痫大鼠神经元caspase3和caspase9蛋白表达的影响

目的：通过检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达,探讨雷公藤内酯抑制神经元凋亡的机制。方法：结晶紫染色观察海马神经元形态,免疫组化法检测海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平。结果：结晶紫染色结果显示,海人酸组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则。雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似,胞浆清晰淡染,核仁清楚。免疫组化染色显示,与对照组比较,海人酸组海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著增高（P〈0．05）;与海人酸组相比,雷公藤内酯干预组神经元caspase3和caspase9蛋白表达水平显著减少（P〈O．05）。结论：雷公藤内酯可下调海人酸致痫大鼠海马神经元caspase3和caspase9蛋白表达．从而抑制神经元凋亡。