干扰素对骨肉瘤组织MMP—2和Cath—D表达的调节作用

目的 探讨干扰素（ＩＦＮｓ）对骨肉瘤组织表达基质金属蛋白酶－２（ＭＭＰ－２）和组织蛋白酶－Ｄ（Ｃａｔｈ－Ｄ）的调控作用,并为临床上应用ＩＦＮｓ防治肿瘤转移提供一些实验基础。方法 采用ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ对体外培养的ＯＳ－７３２骨肉瘤细胞ＭＭＰ－２和Ｃａｔｈ－Ｄ表达进行诱导调节,并利用细胞－酶联免疫吸附试验（Ｃ－ＥＬＩＳＡ）方法对其表达水平的变化进行半定量检测。结果 ＩＦＮ－α及ＩＦＮ－γ对ＭＭＰ     

α干扰素增强骨肉瘤U2OS细胞对足叶乙甙的敏感性

目的探讨α干扰素对人骨肉瘤U20S细胞足叶乙甙敏感性的作用及其机制，为提高骨肉瘤化疗的敏感性探索新的治疗方法。方法应用MTT法测定IFNα和VPl6单用以及联用对U20S细胞的细胞毒作用；Hoeehst33258荧光染色检测药物对U20S细胞凋亡的影响；Westernblot法检测Caspase-3、8、9的表达和活化。结果IFNα在50U／ml、500U／ml、5000U／ml等剂量处理48h、72h、96h对U20S细胞无毒性作用，却明显增强了VPl6（2．5μg／m1）诱导的细胞毒作用；与单药组相比，IFNα（5000U／m1）与VPl6（2．5μg／m1）联用72h后U20S细胞出现更为明显的凋亡特征性形态变化；并且联合用药组的凋亡关键酶Caspase-3、8、9均发生明显断裂活化。结论IFNα能够增强VP16诱导的骨肉瘤U20S细胞毒作用和凋亡，且与Caspase级联活化有关，二者联合应用可能成为提高骨肉瘤化疗敏感性的有效途径。     

MMP-2、MMP-9及TIMP-3在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶2，9（MMP-2，MMP-9）及金属蛋白酶组织抑制因子3（TIMP-3）在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对35例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中MMP-2，MMP-9，TIMP-3的表达进行检测分析。结果MMP-2，MMP-9在膀胱癌中呈高表达，且随分期、分级的增高而增高；TIMP-3在膀胱癌中亦呈高表达，且与分级呈正相关，但与分期不相关。结论MMP-2，MMP-9和TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移，在膀胱移行细胞癌中的表达对其预后判断具有参考价值。     

自体静脉移植再狭窄与MMP-1、MMP-2及TIMP-2的表达

目的：通过测定自体静脉移植术后移植静脉管腔狭窄度、金属基质蛋白酶-1（MMP-1），MMP-2金属蛋白酶特异性抑制剂-2（TIMP-2）的表达，探讨自体静脉移植术后再狭窄与金属蛋白酶家族，（MMps）及其特异性抑制剂（TIMP）s的关系。方法：60只Wister大鼠均行颈静脉腹主动脉移植术，在术后28d后取出移植静脉行病理学检查测量移植静脉管腔狭窄度，根据移植静脉管腔狭窄程度，分成正常、轻、中、重4组，并采用免疫组织化学方法（ABC法）行MMP-1，MMP-2及TIMP-2的检测。结果：静脉移植后，移植静脉出现不同程度的狭窄。在狭窄的移植静脉， MMP-1、MMP-2和TIMP-2高水平表达；静脉狭窄程度越重，MMP-1、MMP-2和TIMP-2表达强度越高，MMP-1、MMP-2的升高幅度高于TIMP-2的升高幅度。结论：自体静脉移植术后移植血管再狭窄的发生和发展与MMPs及TIMPs的表达失衡密切相关。     

MMP-9和TIMP-1在人结核性淋巴结中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP9)及其组织抑制物(TIMP1)在人结核性淋巴结中的表达及其临床意义。方法免疫组化SP法检测MMP9和TIMP1蛋白在20例活动性淋巴结结核、20例陈旧性结核性淋巴结病灶和20例慢性非特异性淋巴结炎中的表达,采用图象分析技术对免疫组化结果进行定量分析。结果MMP9和TIMP1在三组淋巴结病变均有表达,其中MMP9在活动性淋巴结结核的肉芽肿、坏死周围炎性区呈强表达,在非特异性淋巴结炎和陈旧性结核病灶呈弱表达。MMP9,TIMP1及MMP9/TIMP1在活动性结核组表达显著高于非特异性淋巴结炎和陈旧性结核病灶(均为P<0.01),在单纯活动性淋巴结核组和合并活动性肺结核组表达无显著性差异(均为P>0.05)。结论MMP9、TIMP1高表达可能在结核性淋巴结炎发病机制中发挥重要作用,MMP9/TIMP1失衡可能预示疾病进展和结核播散。     

MMP-1和MMP-2在肝纤维化组织中的表达和意义

目的:探讨MMP-1和MMP-2在肝纤维化组织中的作用及其机制。方法:应用免疫组化法并用图像分析技术定量检测28例手术切除的肝纤维化组织标本中MMP-1和MMP-2的表达。结果:正常肝组织与肝纤维化组织MMP-1表达无显著性差异(P>0.05),而MMP-2的表达在肝纤维化组织中明显高于正常肝组织(P<0.01)。结论:MMP-1和MMP-2可能在肝纤维化的发生和发展中有重要作用。     

白藜芦醇抑制骨肉瘤细胞侵袭实验研究

目的探讨白藜芦醇对骨肉瘤细胞侵袭的作用及其潜在的作用机制。方法用不同浓度的白藜芦醇处理4种骨肉瘤细胞系,24、48、72h后采用CCK-8法评估细胞增殖情况,并进行流式细胞术实验分析细胞凋亡情况。采用Transwell测定法检测细胞侵袭能力。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)分析肿瘤细胞侵袭相关基因的表达。结果白藜芦醇以剂量依赖性的方式抑制骨肉瘤细胞增殖,同时促进骨肉瘤细胞凋亡,并显著抑制骨肉瘤细胞侵袭,其中相关基因基质金属蛋白酶(MMP)1、MMP2、MMP9表达明显下降。结论白藜芦醇可有效抑制骨肉瘤细胞侵袭,其潜在机制可能是下调MMP1、MMP2、MMP9等肿瘤侵袭相关基因的表达。     

miR-133a靶向MMP-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制研究

目的 研究微小RNA(microRNA,miR)-133a靶向基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-14抑制骨肉瘤细胞侵袭的作用及机制.方法 培养正常成骨细胞株hFOB1.19及骨肉瘤细胞株MG63、U20S、SAOS2,采用荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain...     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与骨肉瘤

寻找新方法,提高骨肉瘤(OS)治愈率,已成为骨科研究的重点.多个基因参与OS的发生发展,基质金属蛋白酶(MMP)与MMP组织抑制剂(TIMP)平衡紊乱在OS中起重要作用.MMP表达与肿瘤分级或侵袭性相关,且与复发或转移风险相关;TIMP表达与较弱的肿瘤侵袭行为及良好预后相关,其中以明胶酶(MMP-2、MMP-9)及TIMP-2、TIMP-1与OS关系最密切.明胶酶和MT1-MMP过表达多提示OS预后不良.尽管MMP-9、TIMP-1有不同作用,对疾病不同时期有重要意义,但都可作为OS不良预后的标记物,对高危病人更好地划分亚型有意义.抑制MMP治疗OS有潜在可行性.该文就MMP及TIMP在OS研究中的进展作一综述.     

结肠肿瘤组织中MMP-2和MMP-7表达的临床研究

目的:观察正常结肠黏膜、结肠腺瘤和结肠癌组织中MMP-2和MMP-7的表达,探讨两种蛋白表达在结肠肿瘤发生、侵袭及转移中的意义.方法:采用RT-PCR方法检测40例结肠腺瘤、60例结肠癌肿瘤组织和周围正常黏膜组织中MMP-2、MMP-7的表达,进行半定量分析.结果:结肠腺瘤组织中的MMP-2表达水平高于正常黏膜(P<0.05),结肠癌组织中MMP-2和MMP-7的表达水平均高于结肠腺廇和正常黏膜(P均<0.05),Ⅲ、Ⅳ期结肠癌组织MMP-2、MMP-7的表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05),Ⅳ期结肠癌组织MMP-2、MMP-7的表达水平高于Ⅲ期(P<0.05).结论:MMP-2和MMP-7的高表达可能与结肠肿瘤的侵袭和转移有关,但其高表达的机制尚需进一步探讨.MMP-7水平的检测可用于结肠癌的早期诊断.     

顺铂诱导人成骨肉瘤耐药细胞系的建立及生物学特性研究

目的：建立顺铂诱导的人成骨肉瘤多药耐药细胞系MG63／R并观察其生物学特性。方法：以顺铂为诱导剂,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法诱导人成骨肉瘤MG63细胞,建立多药耐药系MG63／R。MTF法检测药物敏感性：光镜、透射电镜观察MG63、MG63／R细胞形态及超微结构变化;生长曲线、克隆形成试验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数、P—pg、bcl-2、p53蛋白表达。结果：经顺铂186d的诱导建立了MG63／R,MG63／R对顺铂的耐药指数为83．557,对阿霉素、长春新碱、氨甲蝶呤、环磷酰氨亦产生不同程度的交叉耐药;光镜观察可见MG63／R细胞排列不规则,形态呈三角形、多角形及多核现象;透射电镜显示MG63／R细胞表面突起增加,粗面内质网丰富;细胞周期分析显示细胞增殖能力明显增加而细胞凋亡明显降低;MG63／R细胞P—pg、bcl-2阳性表达较MG63细胞明显增加,p53表达则明显降低。结论：本研究建立了稳定的人成骨肉瘤多药耐药细胞系（MG63／R）,为进一步研究顺铂的多药耐药机制和耐药治疗提供了一种新的实验模犁。     

骨肉瘤体外多药耐药模型（R—OS—732）的建立及其意义

目的：体外建立骨肉瘤多药耐药模型（Ｒ－ＯＳ－７３２）。方法：小剂量递增阿霉素浓度与骨肉瘤细胞（ＯＳ－７３２）连续培养，使阿霉素浓度达３０ｎｇ／ｍｌ，总体培养６个月，共传代４９次，初步建立体外骨肉瘤多药耐药模型（Ｒ－ＯＳ－７３２）应用组织学技术判断Ｒ－ＯＳ－７３２和ＯＳ－７３２细胞的形态学差异，应用免疫组化技术检测Ｐ－糖蛋白（Ｐ－１７０蛋白）拓扑异构酶－Ⅱ（ＴＯＰＯ－Ⅱ）谷胱甘肽－巯基转移酶（ＧＳＴ     

转染环氧合酶-2反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞侵袭性的抑制作用

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)反义寡核苷酸(ODNs)对人骨肉瘤细胞株OS-732侵袭性的抑制作用及其机制.方法 设计和合成COX-2反义寡核苷酸,体外转染骨肉瘤OS-732细胞,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot证实转染效果.改良Boyden-transwell方法观察肿瘤细胞侵袋抑制率,RT-PCR方法研究转染COX-2反义ODNs对OS-732细胞尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体(uPA、uPAR)mRNA表达的影响.结果 转染COX-2反义ODNs的细胞COX-2核酸、蛋白表达水平显著降低.转染组细胞侵袭能力显著降低,呈浓度依赖性.转染组细胞uPA、uPAR的mRNA表达水平显著降低(P<0.01).结论 COX-2反义ODNs对OS-732细胞侵袭能力有明显抑制作用,其对uPA、uPAR表达的下调是主要作用机制.     

IL－2基因修饰人骨肉瘤细胞的制备及骨肉瘤患者IL－2和sIL－2R测定

目的ＩＬ－２基因修饰人骨肉瘤细胞的制备及骨肉瘤患者ＩＬ－２、ｓＩＬ－２Ｒ水平测定。方法用逆转录病毒载体将人ＩＬ－２基因插入人骨肉瘤细胞系制备成ＩＬ－２基因修饰骨肉瘤细胞；用放射免疫法及ＥＬＩＳＡ法检测骨肉瘤患者血清内ＩＬ－２、ｓＩＬ－２Ｒ水平。结果经Ｇ４１８筛选和ＰＣＲ鉴定后制备成功人骨肉瘤ＩＬ－２基因修饰细胞，并证实其有分泌ＩＬ－２功能，用ＭＴＴ法测得其培养上清中ＩＬ－２表达量为每１ｘ１０５细胞２４小时５０－８００ｕ。骨肉瘤患者免疫功能调查发现其血清ＩＬ－２水平明显低于正常，而ｓＩＬ－２Ｒ则明显高于正常，术后两者可逐渐正常。结论　制备成功ＩＬ－２基因修饰骨肉瘤细胞并发现骨肉瘤患者ＩＬ－２水平低下，为进行骨肉瘤基因治疗创造条件。     

外源性一氧化氮对骨肉瘤细胞株表面超微结构的影响

目的：研究外源性一氧化氮（NO）作用于体外培养的骨肉瘤细胞株（HOS）后细胞表面形态的变化，推测其对HOS侵袭能力的影响。方法：在OS培养液中加入不同浓度的硝普钠（SNP）以产生外源性的NO，通过扫描电镜，观察骨肉瘤细胞株表面形态的超微结构变化。结果：不同浓度的SNP在体外均可改变细胞表面形态，浓度越高，细胞表面的绒毛或突起越少，伸展范围也越小，而对照组细胞表面的绒毛突起丰富且向周围伸展。结论：NO可以减少骨肉瘤细胞株表面的绒毛突起，使其侵袭和转移能力下降。     

咖啡因、顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究咖啡因，顺铂诱导骨肉瘤细胞株（OS-732）细胞凋亡的作用。探讨咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机制。方法 骨肉瘤细胞株（OS-732）经单纯细胞培养，与咖啡因，顺铂，咖啡因和顺铂联合作用各72h后，分别采用流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡比例，通过细胞内Rh123荧光强度的测定分析线粒体跨膜电位△ψm的变化，并应用电子显微镜观察细胞凋亡的形态变化。结果 骨肉瘤细胞株（OS-732）分别经单纯培养72h,与5.0mmol/L的咖啡因作用72h，与10.0μg/ml的顺铂作用72h，与咖啡因（5.0mmol/L）与顺铂（10.0μg/ml）共同作用72h后，FCM分析显示细胞凋亡比例分别为2.50%,10.62%,31.62%,57.44% ;后三者导致线粒体跨膜电位△ψm明显下降，分别为26.45% ,17.82%,38.26%。透射电镜观察显示典型的细胞凋亡特征性变化；细胞皱缩，胞膜结构保持完整，胞浆空泡化明显，胞核固缩，染色质浓缩并边缘化。表现为新月形胞核。结论 咖啡因，顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡，咖啡因和顺铂联合使用，可使诱导细胞凋亡的作用明显增强。咖啡因诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

阿霉素冲击诱导人骨肉瘤多药耐药细胞模型

目的：建立人骨肉瘤细胞多药耐药亚系。方法：采用ADM间断冲击法诱导骨肉瘤细胞，并用免疫荧光、MTT及ABA法检测肿细胞的耐药特征。结果：本实验建立了6株多药耐药细胞亚系MG－63／R1－63／R1－6。用免疫荧光术可以检测到P-gp的表达，MTT、ABA法显示各亚系细胞的多药耐药性明显增加，并且维拉帕米可以拮抗P-gp的作用。结论：MDR1／P170在多药耐药的特性上起着至关重要的作用，而且这些骨肉瘤多药耐药细胞亚系为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法打下基础。     

Matrix metalloproteinases as diagnostic (MMP-13) and prognostic (MMP-2, MMP-9) markers of prostate cancer

Previous studies have detected high levels of matrix metalloproteinases (MMPs) in metastatic prostate cancer. In this study, we recruited 40 patients with prostate cancer (PCa): 20 presented organ-confined carcinoma and 20 had metastatic cancer. We also recruited 40 subjects for control groups, 20 with benign prostate hyperplasia (BPH) and 20 healthy males with similar characteristics. All of the patients were monitored at the beginning (time 0) and after 90 days. We analyzed the plasma concentrations of MMP-2, MMP-9, MMP-13, TIMP-1 and the enzyme activity of MMP-2 and MMP-9,using specific ELISA tests. The plasma concentrations of MMP-2, MMP-9 and MMP-13 were higher in PCa patients with metastasis than in the other groups, and in these patients decreased markedly after therapy began. For MMP-2 and MMP-9, greater differences were observed in enzyme activity than in plasma concentrations. TIMP-1 was reduced in PCa patients with metastasis, even if the intergroup differences were not statistically significant. Our results suggest that the plasma concentration and activity of MMPs, in association with PSA determination, could play a role in diagnosis, monitoring therapy and evaluating malignant progression in PCa.     

手术切除加化疗治疗多次复发的骨肉瘤

本文报告了５例反复多次复发的骨肉瘤患者，均为男性，年龄１４－２４岁。原发灶位于股骨下端者３例，位于胫骨上端２例。３例胸片阴性者行肢体截肢术加化疗。２例胸片示肺部直径１．５ｃｍ孤立性转移灶，化疗１周后行截肢术，化疗２周后肺叶切除术，术后化疗３个疗程。     

Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (GM-CSF) Induces the Osteoblastic Differentiation of the Human Osteosarcoma Cell Line SaOS-2

The Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor (GM-CSF) is a hematopoietic growth factor that regulates the in vitro and in vivo proliferation and differentiation of hematopoietic cells through the interaction with a specific heterodimeric receptor complex (GM-CSFR), consisting of an alpha and a beta chain with molecular weights of 80 and 120 KDa, respectively. We have studied the expression of the GM-CSFR (alpha chain) on the surface of the human osteosarcoma cell line SaOS-2 and the in vitro effects of different concentrations (10, 100, and 200 ng/ml) of GM-CSF on GM-CSFR expression and the biological activity of SaOS-2 cells. Our data show that SaOS-2 cells express GM-CSFR and that GM-CSF can down-regulate the expression of its own receptor on these cells. Furthermore, to evaluate the biological effects of GM-CSF on SaOS-2 cells, we have investigated cell proliferation and differentiation of these cells treated with different doses of the growth factor through: (1) a morphological analysis of typical osteoblast differentiation markers such as osteopontin and BSP-II; (2) measurement of alkaline phosphatase (ALP) activity; (3) production of bone ECM components (collagen I, fibronectin, tenascin, and laminin); (4) production of interleukin-6 (IL-6) and osteocalcin in the culture medium. The results show that the in vitro treatment of SaOS-2 cells with recombinant human GM-CSF causes a decreased cell proliferation and an increased production of osteopontin, BSP-II, ALP, IL-6, and most but not all ECM components. These findings suggest that GM-CSF can regulate proliferation and differentiation of osteoblast-like SaOS-2 cells and could also play an unexpected role in the maturation of bone tissue.