一种新型去细胞猪主动脉支架的构建和评价

目的:探索超声波联合曲拉通X-100制备猪升主动脉去细胞支架的方法及效果.方法:从体重相近的中华实验猪制备新鲜主动脉标本150份,随机分为5组:空白对照组、超声波(90 kW)联合曲拉通X-100组、超声波(135 kW)联合曲拉通X-100组、超声波(180 kW)联合曲拉通X-100组和曲拉通X-100组,通过组织学及电镜观察、生物力学性能测定、免疫组织化学法检测层黏连蛋白和纤维连接蛋白的蛋白表达变化等方法,分析比较各组去细胞的效果.结果:超声波联合曲拉通X-100组可完全去除动脉内膜细胞,组织形态、生物力学性能等保持良好,层黏连蛋白和纤维连接蛋白的保存明显优于传统的化学去细胞方法.结论:超声波联合曲拉通X-100组去细胞效果优于传统化学去污剂,是理想的制备猪动脉去细胞支架的方法.     

同种与异种心脏瓣膜的生物力学及免疫反应的比较

目的：通过检测同种及异种瓣膜生物力学、瓣膜组织MHC－Ⅱ分子表达及钙盐沉积程度等免疫学指标，比较同种与异种心脏瓣膜之间的生物力学以及免疫排斥反应。方法：将低温保存的猪主动脉瓣叶组织分为2份，1份埋置于4只小香猪皮下，作为同种移植组；另1份埋置于4只家兔皮下，作为异种移植组。两组动物在相同的条件下饲养4周，检测埋置后两组主动脉瓣叶组织的生物力学指标、钙化程度以及MHC－Ⅱ的表达水平。结果：两组瓣膜的生物力学指标无统计学差异（ P ＞0．05）；同种移植组瓣膜的钙盐含量明显低于异种移植组（ P ＜0．05），同种移植组瓣膜MHC－Ⅱ的表达水平也明显低于异种移植组（ P ＜0．05）。结论：异种瓣膜的生物力学与同种瓣膜相比，具有一定程度的相似性；而异种瓣膜移植后排斥反应比同种瓣膜移植后排斥反应程度重，可能与异种移植瓣膜组织发生钙化和表达MHC－Ⅱ增多有关。     

经单宁酸处理脱细胞猪心脏瓣膜性能及形态学研究

目的：对比加单宁酸和传统的去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及性能差别,为构建组织工程心脏瓣膜提供实验依据。方法：应用两种方法处理6～7月龄猪主动脉心脏瓣膜。光学显微镜、透射电镜观察脱细胞基质改变、DNA含量测定。结果：两种方法处理后,显微镜检和透射电镜见单宁酸-去氧胆酸钠法对基质破坏较少;两组均可以完全脱去瓣膜细胞。结论：经单宁酸处理能更好地保护去除瓣叶组织细胞外基质,提高其性能。     

胰蛋白酶法和Triton—X100法去除瓣膜细胞的效果比较

目的比较胰蛋白酶法和Triton—X100法去除异种或同种心脏瓣膜上细胞的效果。方法选取新鲜猪主动脉瓣膜片分别置入0．05％胰酶溶液和0．25％Triton-X100溶液中处理48h，并以未经处理的新鲜瓣膜片作对照，行光镜及电镜观察．并作热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率测定。结果光镜和电镜下均显示，胰酶法和Triton-X100法均彻底去除了主动脉瓣膜上的细胞成分，但Triton—X100法对瓣膜支架结构的损伤较大。热皱缩温度、断裂强度和断裂拉伸率在新鲜瓣膜组和胰酶组间无显著性差异，但Triton—X100组与新鲜瓣膜组及胰酶组相比均有下降。结论胰酶法去除猪主动脉瓣膜细胞彻底．保持了瓣叶支架结构，优于Triton—X100法。     

注射用丹参多酚酸联合吡拉西坦治疗缺血性脑病的临床观察

目的：探讨应用注射用丹参多酚酸注射液联合吡拉西坦对缺血性脑病的临床效果。方法将56例患者中,随机分为观察组和对照组各28例,对照组采用注射用丹参多酚酸注射液（天津天士力医药）等常规疗法;治疗组在常规疗法用丹参多酚酸0．13 g加吡拉西坦40 mg;14天为一个疗程。结果治疗组在治疗有效率、显效率及入院后7天及15天神经行为评分与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论因此联合应用治疗缺血性脑病较传统单一用药临床疗效更满意。     

复方丹参、右旋糖酐及尼莫通联合治疗外伤性脑梗死的临床效果探讨简

目的：探讨复方丹参、右旋糖酐及尼莫通联合治疗外伤性脑梗死（ PTCI）的临床效果。方法将72例颅脑损伤患者随机分为两组,各36例,均采用常规治疗和右旋糖酐及复方丹参联合治疗,观察组在此基础上加用尼莫通治疗,比较治疗后两组格拉斯哥昏迷评分（ GCS）、神经功能缺损评分（ NIHSS）及临床效果。结果两组治疗前GCS及NIHSS差异均无统计学意义（ P ＞0．05）;治疗后两组GCS及NIHSS均有所改善,观察组改善情况优于对照组（ P ＜0．01）;用药1个月后,观察组总有效率为97．2％,高于对照组的77．8％（ P ＜0．05）。结论复方丹参、右旋糖酐及尼莫通联合治疗PTCI疗效显著,可有效改善患者神经功能及预后。     

骨髓间充质干细胞和猪去细胞瓣膜支架构建组织工程瓣膜

目的 探讨运用组织工程技术以骨髓间充质干细胞和去细胞猪心脏瓣膜支架构建组织工程心脏瓣膜的方法.方法 体外培养、扩增自体骨髓间充质干细胞并鉴定,接种于以曲拉通-脱氧胆酸钠、RnaseⅠ和DnaseⅠ去细胞的猪心脏瓣膜支架上,形成细胞材料复合物,体外培养7 d,将该复合物移植于裸鼠腹腔,4周后行组织学检测.结果 骨髓间充质干细胞具有与成纤维细胞相似的生物学特性,表达ASMA,Vimentin抗原,去细胞瓣膜去细胞彻底,骨髓间充质干细胞可在支架表面良好生长,形成表面光滑的细胞层,分泌细胞外基质,生长好.在裸鼠体内可继续扩增,形成多层细胞.结论 运用组织工程技术以骨髓间充质干细胞和去细胞猪心脏瓣膜可生成初级组织工程瓣膜.     

心脏瓣膜置换联合心脏肿瘤切除18例围手术期的护理

目的探讨心脏瓣膜置换联合心脏肿瘤切除病患的围手术期护理情况。方法选取中南大学湘雅医院心胸外科2012年1月～2013年1月收治的心脏瓣膜置换联合心脏肿瘤切除18例患者作为研究对象,随机平均分为观察组与对照组（n=9）,对照组患者采取常规性的护理措施,观察组在实行常规性护理的基础上给予针对性的护理。结果观察组总有效率为88．89％,对照组为66.67％,2组差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论对心脏瓣膜置换联合心脏肿瘤切除围手术期的患者进行针对性的护理,有助于提高治疗效果,有效缓解患者不适感,值得在临床上广泛运用。     

丹参多酚酸盐对猪急性心肌梗死后心肌细胞凋亡和心功能的影响

目的：观察丹参多酚酸盐对猪急性心肌梗死后心肌细胞凋亡及心功能的影响。 方法：苏中幼猪21只,随机分为模型组和低、高剂量丹参多酚酸盐组。3组均经开胸结扎冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型,造模成功后当日．高剂量丹参多酚酸盐组给予400mg丹参多酚酸盐加250 mL 5％葡萄糖生理盐水静脉滴注;低剂量丹参多酚酸盐组给予200mg丹参多酚酸盐加250 mL 5％葡萄糖生理盐水静脉滴注;模型组给予等体积的5％葡萄糖生理盐水静脉滴注。1次／d,连续给药7d。造模后4周,行核素门控心肌灌注显像评价各组动物心功能;处死动物,取心脏标本做石蜡切片,原位缺口末端标记法染色,高倍镜下计数心肌细胞凋亡指数。 结果：高、低剂量丹参多酚酸盐组动物梗死周边缺血区的,心肌细胞凋亡指数均明显下降,高剂量丹参多酚酸盐组与模型组比较。差异有统计学意义（P〈0．05）。心肌梗死后4周行核素门控心肌灌注显像,3组动物的梗死区均可见放射性稀疏区,但高、低剂量丹参多酚酸盐组放射性稀疏区较模型组明减显小。高剂量丹参多酚酸盐组心肌灌注得分与模型组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;高剂量丹参多酚酸盐组动物的左室射血分数也高于模型组（P〈0．05）。 结论：静脉维持应用丹参多酚酸盐,能够减少猪急性心肌梗死后心肌细胞凋亡,促进梗死心脏心功能的改善,发挥心脏保护作用。     

复方丹参注射液和甲基泼尼松龙联合治疗周围神经损伤的实验研究

目的探讨联合应用复方丹参注射液和甲基泼尼松龙（methylprednisolone，MP）对周围神经损伤的治疗效果和意义。方法采用52只SD大鼠造成急性坐骨神经损伤，随机分为4组，每组13只，分别给予复方丹参注射液（丹参组）、MP（MP组）、二药联合应用（联合组）及生理盐水（对照组）治疗，损伤后1个月，比较治疗后不同治疗组神经传导速度及光镜下形态学变化。结果单位视野下神经纤维数量及神经传导速度3个治疗组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；丹参组同MP组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；MP组，丹参组与联合组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论复方丹参与甲基泼尼松龙对神经再生有积极效果，复方丹参注射液与甲基泼尼松龙在治疗周围神经损伤时具有协同作用。     

具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架的制备

目的制备具有良好细胞相容性的脱细胞血管支架材料，为构建组织工程血管奠定基础。方法用含有脱氧胆酸钠、SDS、EDTA的低渗液和等渗液以及核酸酶对猪的胸主动脉进行脱细胞处理．使用HE、Movat五色法、DAPI染色及电镜观察处理结果。以MTT法分析脱细胞溶液的细胞毒性，通过种植内皮和平滑肌细胞，分析支架的细胞相容性。结果上述方法使用的脱细胞溶液细胞毒性低；经该法处理后，血管的细胞成分完全去除，胶原纤维、弹性纤维、糖蛋白等主要基质成分充分保留，组织结构完整，内皮细胞和平滑肌细胞可以在上面黏附生长，形成完整的细胞层。结论利用脱氧胆酸钠、SDS、EDTA和核酸酶联合消化的方法．可制备出基质成分充分保留、细胞相容性优良的脱细胞血管支架．适于构建组织工程血管。     

猪主动脉组织工程瓣膜制备的初步研究

目的：初步探索猪主动脉组织工程瓣膜的制备方法。方法：经胰酶－EDTA、表面活性剂、核酸酶处理，去除猪主动脉瓣的细胞成分，测定瓣叶去细胞前、后的生物力学特性，并在其表面种植BAECs。结果：猪主动脉瓣膜中的细胞成分能完全被去除，获得完整无细胞的纤维网状支架，瓣叶去细胞前、后的断裂强度和断裂伸长率无明显变化，瓣膜近端存留的主动脉壁中的细胞一半被去除；种植的BAECs在去细胞瓣膜表面、主动脉内膜形成一连续的细胞层。结论：猪主动脉瓣膜去细胞后获得的纤维支架适宜血管内皮细胞的生长，可以用来构建组织工程瓣膜。     

人脐静脉内皮细胞用于构建组织工程心脏瓣膜的实验研究

目的：以人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)为种子细胞，体外构建组织工程心脏瓣膜(TEHV)，并对其分泌纤溶物质——组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-1)的作用进行观察。方法：获取并扩增HUVECs，种植在猪脱细胞主动脉瓣叶上，体外静态构建TEHV。观察内皮细胞的形态学变化和生长状况。收集瓣膜培养液，采用发色底物法检测瓣膜内皮细胞分泌的t-PA和PAI-1活性。结果：以猪脱细胞主动脉瓣叶作支架，HUVECs做种子细胞，体外成功构建TEHV，种植的HUVECs在瓣膜表面长成一层连续的细胞层，生长状态良好。瓣膜表面的内皮细胞能够分泌纤溶物质t-PA和PAI-1。结论：HUVECs种植在猪脱细胞瓣膜支架上可以构建TEHV，且瓣膜内皮细胞能够分泌t-PA和PAI-1。     

2种去细胞方法制备大鼠脱细胞脊髓支架效果的对比研究

目的比较脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶2种脱细胞方法制备脱细胞的同种异体脊髓支架的效果。方法取成年SD大鼠胸段脊髓2 cm,运用冻融+化学萃取的组织工程学方法(脱氧胆酸钠+Triton X-100和脱氧胆酸钠+DNA+RNA酶)处理大鼠脊髓组织,对处理后的脊髓支架分别进行HE染色,髓鞘染色和扫描电镜观察。结果2种方法均较为完全地脱去了细胞和髓鞘成分,脊髓横断面上呈网状结构,未见细胞成分存留,纵切面上呈互相交错的管状通路;未见轴突、髓鞘和细胞核。结论采用冻融+化学萃取的2种组织工程学方法均可制备出理想的天然脊髓支架,该支架与脊髓三维组织结构具有高度相似性,有望作为脊髓损伤后桥接物和神经组织工程种子细胞的支架。     

Inactivation of the scrapie agent by pronase

Scrapie agent derived from infected mouse brain was partially purified by agarose-polyacrylamide gel electrophoresis. The preparation was subjected to treatment with RNase A, DNase I, pronase, sodium dodecyl sulfate and sodium dodecyl sulfate-pronase combination. Almost total inactivation of scrapie infectivity resulted when the partially purified scrapie agent was treated with sodium dodecyl sulfate-pronase combination whereas the treatment with sodium dodecyl sulfate or pronase alone reduced the infectivity by about 98%. No significant reduction of scrapie infectivity was observed with either RNase A or DNase I treatments. These results confirm that the transmission of scrapie cannot be achieved in the absence of a protein component.     

磷酸肌酸钠对瓣膜置换术患者心肌缺血再灌注损伤的治疗作用

目的观察磷酸肌酸钠对二尖瓣或主动脉瓣置换术患者心肌缺血再灌注(I-R)损伤的治疗作用。方法 40例行二尖瓣或主动脉瓣置换术患者,随机分为治疗组(n=20)和对照组(n=20),治疗组在主动脉开放后10min注入磷酸肌酸钠1g(用20mL生理盐水溶解),术后1～5d每天静脉输注磷酸肌酸钠1g(用100mL生理盐水溶解),对照组注入等量生理盐水。观察和记录两组患者体外循环时间、主动脉阻断时间、体外循环辅助时间、术后呼吸机支持时间、心脏自动复跳情况,以及术后多巴胺和肾上腺素的使用情况。分别于术前、术后1d,术后5d采集患者颈内静脉血,测定肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌钙蛋白I(cT-nI)浓度。结果两组体外循环时间、主动脉阻断时间、术后呼吸支持时间以及心脏自动复跳率方面比较差异均无统计学意义(P>0.05);治疗组体外循环辅助时间短于对照组(P<0.05);治疗组术后24h和48h使用肾上腺素的例数少于对照组(P<0.05)。两组CK-MB和cTnI在术后1d较术前明显升高(P<0.05),治疗组CK-MB和cTnI在术后1d和5d明显低于对照组(P<0.05)。结论磷酸肌酸钠主动脉开放后给药结合术后1～5d连续给药对二尖瓣或主动脉瓣置换术患者的心肌I-R损伤具有一定的治疗作用。     

深低温保存同种活性带瓣主动脉临床应用长期效果

目的观察改良法深低温保存的同种带瓣主动脉临床使用的长期效果并对该保存方法进行评价。方法30例法洛四联症病人分为两组，A组病人肺动脉功能发育良好，B组病人肺动脉发育不良。使用1989～1997年采用改良两步法深低温保存的同种活性带瓣主动脉标本（平均保存时间289d），行右室流出道重建术，临床使用6～12年后，应用心脏超声观察其反流、狭窄和钙化的情况。结果A组15例病人中肺动脉反流1例，肺动脉狭窄1例；B组15例病人中肺动脉反流3例，肺动脉狭窄1例，三尖瓣反流1例。30例病人超声检查显示同种血管及瓣膜均无钙化，活动良好。结论改良两步法保存的带瓣主动脉临床应用具有良好的远期效果。     

Aortic and mitral valve replacement with retrograde perfusion in the beating heart

Objective To estimate the value of aortic valves and combined mitral valve replacement wit h retrograde perfusion in beating hearts.Methods Continuous retrograde coronary sinus perfusion with beating hearts was used in 8 3 patients undergoing aortic valve or aortic valve combined with mitral valve re placement, without application of cardioplegia. After aortic valve replacement, the retrograde perfusion was changed to antegrade perfusion for mitral valve re placement or correction of the other deformities (group A). Cold blood cardiopl egia solution (15℃) was infused at intervals in 20 cases (group B). The follow ing parameters were tested: lactate, ET, CTn-T and MDA in blood; myocardial ult ra-structure; and cardiac rhythm and cardiac output (CO).Results All biochemical values increased after cardiopulmonary bypass (P&lt;0.05-0.01 ). Empty and beating heart sinus rhythm was maintained in group A. Myocardial ultrastructure did not change significantly. The pump was stopped smoothly as t he surgical procedure finished. No postoperative low cardiac output syndrome or arrhythmia was observed. Eight-one patients recovered smoothly, two died from renal failure or infective shock. When the pump stopped, all patients in group B were supported by 5-10 μg·kg(-1)·min(-1) dopamine. Transie nt pacing was used in 9 patients. One patient died from low cardiac output synd rome. Conclusion This method is a good myocardial protection which simulates physiologic status. It is applicable to aortic valve and combined mitral valve replacement of patie nts with large heart or heart failure and long time aortic cross-clamping. Ide al clinical effect can be achieved.     

双源CT血管成像在先天性主动脉瓣叶畸形中的诊断价值

目的探究双源CT血管成像在先天性主动脉瓣叶畸形中的诊断价值。方法选取2013年4月-2015年4月期间在我院诊断为先天性主动脉瓣叶畸形的患者100例,采用随机数字表法随机分成两组,其中观察组患者50例,对照组患者50例,观察组采用双源CT血管成像进行检测,对照组采用经胸超声心动图检测,选取检测的CT原始图像数据皆上传到工作站。对检测的原始数据再进行矢状位,冠状位以及虚拟内镜的相关技术处理,对主动脉瓣叶畸形的表现类型,瓣膜增厚情况,是否有钙化,卷曲,左心室增大以及其他合并畸形等现象。对患者主动脉最大径,左心室的舒张末期以及主动脉瓣膜的厚度进行分析。结果研究结果发现,两组患者各项指标相比均无明显差异(P0.05)。结论双源CT血管成像在先天性主动脉瓣叶畸形中的有着明显的诊断价值,其与超声心动图检测结果基本一致,临床上能够准确诊断先天性主动脉瓣叶畸形,因其操作简单,准确性高,对患者伤害小,可以推广普及使用。