成釉细胞瘤组织中釉原蛋白基因的表达

目的 :研究釉原蛋白基因在良恶性成釉细胞瘤中的表达 ,为判断成釉细胞瘤细胞分化程度寻找有效指标。方法 :收集存档的良恶性成釉细胞瘤标本 72例 ,其中良性 5 5例 (包括滤泡型 1 8例 ,丛状型 2 0例 ,棘皮瘤型 1 1例和颗粒细胞型 6例 ) ,恶性 1 7例 ,用原位杂交方法检测釉原蛋白基因在肿瘤组织中的表达 ,以 1 2例牙胚标本作阳性对照。结果 :釉原蛋白mRNA阳性表达位于肿瘤性上皮细胞胞浆内 ,5 5例良性肿瘤中 ,4 2例呈阳性表达(76 .4 % ) ,各组织学类型间阳性表达率差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,恶性 1 7例有 2例呈阳性表达 (1 1 .8% ) ,其阳性表达率显著低于良性成釉细胞瘤 (P <0 .0 1 )。结论 :釉原蛋白基因可以作为判断成釉细胞瘤细胞分化程度的一个特异性指标。     

骨形成蛋白体外对培养的人牙髓组织的诱导作用

骨形成蛋白可促进牙髓细胞增殖的诱发修复性牙本质形成，作应用体外组织培养技术，分别通过光镜和透射电镜观察了牛骨形成蛋白对体外培养的人牙髓组织的诱导作用，结果发现，培养３ｄ后可见增殖的星形细胞，其胞浆少，细胞小器不发达，培养７ｄ后，可见透明基质中埋有一些软骨样细胞，该细胞胞浆丰富，细胞小器发达，并含有丰富的分泌小泡，说明骨形成蛋白可促进牙髓细胞从低分化状态向高分化状态分化。     

人釉原蛋白基因的扩增及其真核表达克隆的构建

目的 构建人釉原蛋白基因真核表达克隆。方法 从胚龄20周的引产胎儿牙胚中提取总RNA，RT-PCR法扩增人釉原蛋白编码区基因，重组到真核表达载体PcDNA3．1中，经酶切和DNA序列分析验证。结果 经RT-PCR扩增后，得到大小约570bp的特异性产物，与预期的人釉原蛋白mRNA编码区碱基长度一致，重组克隆PcDNA3．1-AMG的测序结果显示，与GenBank中的人釉原蛋白基因(AMELX)序列仅在第485位碱基发生错配(G→C)，但不影响氨基酸组成。结论 本研究成功的构建了人釉原蛋白基因真核表达克隆，为进一步研究牙周组织再生的基因治疗奠定了基础。     

大鼠牙胚发育中釉原蛋白的表达

0 引言 牙釉质是由一种特殊的、来源于原始口腔上皮的上皮细胞-成釉细胞分泌的. 牙齿的上皮细胞是以一种特殊的时空方式,分化成有一定功能的成釉细胞,它与来源于外胚间充质的成牙本质细胞的分化有密切的关系[1]. 釉原蛋白是一族基质相关蛋白,由成釉细胞在形成牙釉质时合成和分泌. 釉原蛋白具有非常复杂的生物学功能,迄今为止其确切的功能还不清楚[2],我们对大鼠牙胚发育的不同时期釉原蛋白的表达进行定位,为今后进一步研究釉原蛋白的生物学功能、釉质的生物矿化、细胞的分化奠定基础.     

大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白含量在空间和时间上的变化

目的:研究随着大鼠牙胚的发育，釉原蛋白(Am)在空间和时间上的变化。方法：以重组、纯化的大鼠釉原蛋白为抗原。混入完全/不完全弗氏佐剂，免疫新西兰大白兔；用双向免疫扩散法到抗体效价，将获得的多克隆抗血清经硫酸胺初步纯化后，用Western blot和免疫组化检测大鼠牙胚Am的组织表达特异性。结果：Western blot显示：在大鼠牙胚组织总蛋白中有特异性表达，而在肝、脑、肾组织中没有表达。免疫组化检测，在成釉细胞和发育早期的釉基质中有Am的表达，而在成牙本质细胞和成熟牙釉质、牙本质中无表达。结论：釉原蛋白的表达具有严格的空间和时间依赖性，在牙胚发育早期高表达而在发育后期和已矿化期表达低或无表达。     

1,25-二羟维生素D3对猪成釉细胞釉原蛋白和成釉蛋白分泌的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]对体外培养的猪成釉细胞釉原蛋白(AMEL)及成釉蛋向(AMBN)分泌的影响.方法:原代培养猪成釉细胞,取第2代细胞12瓶,分为4组,每组3瓶.对照组不作加药处理,其余各组分别加入1×10-10、1×10-8及1×10-6mol/L的1,25-(OH)2D3,并分别于加药后1、3及5 d取出1瓶,采用Western blot方法检测AMEL及AMBN的表达.结果:猪成釉细胞AMEL和AMBN的表达在不同浓度组间(F=359.688、619.718、117.412、859.364和49.099、705.946、338.824、119.352,P均<0.001)与不同作用时间组间(F=789.133、116.071、196.509和307.327、657.313、762.749,P均<0.001)差异均有统计学意义.其中AMEL的表达随作用时间延长和药物浓度的增加而增强,AMBN的表达随作用时间的延长增强,随药物浓度的增加而减少.结论:1,25-(OH)2D3可能通过调节AMEL及AMBN在釉质中的相对含量影响釉质的矿化过程.     

人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的 构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白.方法 利用限制性内切酶EcoR I和Sal I将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定.选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm.经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm.结果 重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误.在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46 000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别.结论 成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm.大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础.     

人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白。方法利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm。经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别。结论成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm。大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础。     

正畸力作用下人牙髓组织中神经生长因子的表达

目的检测正畸力作用下人牙髓组织中神经生长因子（nerve growth factor,NGF）的表达与分布,探讨NGF在正畸加力初期疼痛中的作用及机制。方法20例采用拔除上颌双侧第一前磨牙进行固定矫治的患者随机分为5组,分别作为正常对照组,正畸加力1d、3d、7d、15d组,在受力相应时段对双侧上颌第一前磨牙进行疼痛强度问卷调查后拔除并制备石蜡标本,采用免疫组化SABC法进行染色,计算机图像分析系统检测阳性细胞的平均光密度值（average optical density,AOD）及面密度值（area density,AD）。结果1d组测试牙有轻度疼痛,3d组疼痛敏感程度最强;对照组中NGF染色呈弱阳性,加力1d组牙髓中NGF即有较高水平表达,加力3d组牙髓NGF染色呈强阳性,加力7d后NGF表达明显减弱,加力15d后表达恢复到正常水平;NGF的表达强度（AOD）与疼痛强度呈显著正相关（r=0．868,P〈0．01）。结论在正畸加力初期牙髓组织中NGF表达有所增强,且表达强度与疼痛强度密切相关。NGF可能参与了正畸加力初期疼痛过敏的调节。     

颌骨造釉细胞瘤中骨形成蛋白基因表达的原位杂交及免疫组化研究

利用骨形成蛋白（ＢＭＰ）单克隆抗体、ＢＭＰ多克隆抗体及地高辛甙元标记的ＢＭＰ１、ＢＭＰ２Ａ、ＢＭＰ３的ｃＤＮＡ探针，分别进行了４０例颌骨造釉细胞瘤中ＢＭＰ基因表达的原位杂交和免疫组化研究。结果发现，３种ＢＭＰ某因在造釉细胞瘤中均有过量表达，尤以ＢＭＰ２Ａ最为显著；与原位杂交结果相反，免疫组化显示，４０例造釉细胞瘤均为阴性。因此，ＢＭＰ基因的过量表达可能与造釉细胞瘤的发生有关，造釉细胞瘤中ＢＭＰ的产量可能较少，或其结构发生了改变。     

Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用

目的：研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法：28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓（Matrilin-4组）,右侧用含磷酸盐缓冲溶液（PBS）的胶原蛋白海绵盖髓（PBS组）,双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28 d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。结果：HE染色,3 d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7 d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14 d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14 d呈逐渐增强趋势,28 d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14 d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14 d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高（P<0.01）。结论：Matrilin-4对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。     

结缔组织生长因子盖髓剂对牙髓组织形态学的影响及其意义

目的: 研究大鼠牙髓机械损伤经结缔组织生长因子(CTGF/CCN2)覆盖于损伤牙髓处后不同时间点大鼠牙髓的组织形态学变化,阐明其作用机制。方法: 选择20只Wistar大鼠,平均分为5组,随机选取一组为正常组(不做任何处理),其余4组(3、7、14和28 d组)每只大鼠在双侧上颌第一磨牙备洞,左侧为CCN2盖髓剂的实验组,右侧为PBS对照组。分别于3、7、14和28 d处死大鼠并取其牙齿标本,经固定、脱钙、切片和HE染色,观察各标本中牙髓组织的形态学变化。结果: 对照组大鼠3 和7 d时穿髓孔下方炎症较实验组明显;14 d时炎症反应减轻,有散在的修复性牙本质形成;28 d时形成坏死病灶。实验组大鼠3 d时穿髓孔下方聚集大量炎细胞,血管扩张明显;7 d时炎症减轻,淋巴细胞相对于对照组少;14 d时已无明显炎细胞存在,并形成连续完整的钙化桥;28 d时形成大量修复性牙本质。结论: 牙髓组织损伤后,CCN2参与了组织结构的重建,提示CCN2是一种良好的盖髓剂。     

解旋酶DDX41在人牙髓组织及牙髓细胞中的表达

目的研究解旋酶DDX41在人牙髓组织和细胞中的表达,为深入探讨其在龋病及牙髓病天然免疫应答过程中的作用奠定
基础。方法应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学和免疫组织化学技术对人牙髓组织和牙髓细胞中DDX41的
表达和定位进行分析。结果RT-PCR结果显示DDX41 mRNA在人牙髓细胞中有显著表达;免疫细胞化学和免疫组织化学染
色结果显示DDX41在牙髓细胞的胞浆和胞核中皆有表达,但胞核中的表达水平较低;在牙髓组织中,DDX41主要在牙髓组织
表面的成牙本质细胞的胞浆和胞核中皆有表达。结论人牙髓组织中的成牙本质细胞作为牙髓免疫的效应细胞之一,在龋病和
牙髓炎的免疫反应过程中,细胞内可能存在DDX41/STING依赖的TBK1-IRF3-IFN-β信号通路的活化。
     

脉冲Nd∶YAG激光对犬牙活髓切断术后组织修复的影响

目的观察Nd∶YAG激光照射狗牙活髓切断术后断面的牙髓组织变化,了解Nd∶YAG激光照射条件与牙髓反应的关系。方法动物的牙分成四组,每组3颗牙。一组为对照,另三组切髓后激光照射断面,条件分别为1W、2W、3W的输出能量,时间均为5s,各组均用Dycal盖髓剂盖髓。分别于3、7、21d处死动物,组织切片光镜观察。结果接受2W输出能量激光照射的牙,术后早期,创伤牙髓的愈合优于对照组;术后21d有程度不同的牙本质桥形成,根部牙髓无明显异常,组织学疗效评价均成功。大能量Nd∶YAG激光用于切髓术有较强的损伤作用。结论适当剂量的Nd∶YAG激光照射具有一定的促进创伤愈合作用。     

光固化复合树脂对牙髓影响的实验研究

目的 评价光固化复合树脂修复纯种大白兔牙体时对牙髓的影响。方法 对照组（Ｎ）分为４个小组,分别用４种光固化复合树脂充填;实验组（Ｐ）也分为４个小组,氢氧化钙垫底＋同法光固化复合树脂充填,在显微镜下观察各组标本的组织切片。结果 （１）在一定的有效牙本质厚度时,光固化复合树脂修复可引起牙髓炎症。（２）不同品牌的复合树脂卢的牙髓炎症反应程度不同。（３）氢氧化钙垫底能够有效地保护牙髓。结论 光固化复合树脂作为一种新型的修复材料,在医疗实践中应密切观察牙髓的变化。     

猴牙牙髓对高强度复合树脂的反应

作者观察了猴牙牙髓对新研制Bis-GMA树脂体系和氮化硅填料的复合树脂的反应,观察期为3d,1月和3月.结果表明:高强度复合树脂充填无基底中度洞和深洞时,32例中有造牙本质细胞变化者13例,有牙髓轻度充血者3例,有炎症者3例,对牙髓有轻微和中度刺激;充填垫基底深洞15例中,有造牙本质细胞变化者7例,有轻度充血者3例,对牙髓刺激轻微,基本无损害.建议用高强度复合树脂充填窝洞,应垫基底,保护牙髓.     

体外培养人牙髓细胞的初步实验观察

目的 经过人牙髓细胞的培养,获得足够量的传代细胞,为进一步的实验提供基础;观察人牙髓细胞的形态、结构。方法 组织块法、酶消化法联合应用体外培养人牙髓细胞;应用倒置相差显微镜、透射电镜观察人牙髓细胞的形态与结构。结果 体外培养人牙髓细胞成功率低;人牙髓细胞呈成纤维细胞形。结论 培养的人牙髓细胞维持了体内牙髓细胞的形态结构,可以用来进行牙髓生物学、牙科材料毒理学等研究。     

雌激素和孕激素在牙髓病损组织中的受体表达

目的通过对牙髓病损相关组织中的雌孕激素受体的检测，探讨在这些组织中是否存在性激素受体，为研究牙髓相关疾病及牙体修复材料提供理论依据。方法应用ABC法对20颗健康牙髓作为对照组及14例牙髓息肉、20例根尖囊肿和24例根尖肉芽肿作为实验组做ER、PR检测。结果在受检的男女各10颗牙髓中，男性ER阳性为4例，占40％，女性ER阳性为5例，占50％；男性PR阳性为6例，占60％，女性PR阳性为3例，占30％。而和牙髓相关的其他病变的组织中几乎无表达。结论正常牙髓也可能是性激素的靶组织，但相关病损组织可能不是性激素的靶组织。这些疾病和性激素的相关性有待于进一步的探讨和研究。     

奥硝唑合剂治疗牙体牙髓病的临床观察

目的 评价奥硝唑合荆对牙体牙髓病的临床疗效.方法 109例牙体牙髓病患者随机分成两组:治疗组(56例),给予奥硝唑、碘仿、地塞米松合剂做根管治疗;对照组(53例)给予常规根管治疗,观察两组的疗效.结果 两组经过治疗后,治疗组有效率明显高于对照组(p<0.05).结论 奥硝唑合剂治疗牙体牙髓病效果明显,值得临床推广.