DNA疫苗诱导健康小鼠细胞免疫及HBV转基因小鼠抗-HBs产生

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ疫苗系采用分子克隆技术构建的编码病毒蛋白性抗原Ｓ或Ｃ区基因真核表达质粒 ,经肌注等途径转染宿主细胞进行复制、转录 ,并表达和分泌病毒抗原 ,分别通过局部组织抗原递呈细胞 (ＡＰＣ)的ＭＨＣⅡ类及宿主细胞膜上ＭＨＣⅠ类分子进行递呈 ,整个过程同病毒感染的自然过程近似 ,因此能更有效地诱导特异性的体液及细胞免疫应答 ,有利于ＨＢＶ感染的防治。在ＨＢＶＤＮＡ疫苗成功诱导健康小鼠体液免疫实验基础上 ,现应用编码ＨＢＶ包膜中蛋白 (前Ｓ2 Ｓ)基因表达质粒单独或辅以人白细胞介素融合蛋白基因表达质粒免…     

丙型肝炎病毒E1，E2/NS1，NS5蛋白基因在大肠杆菌内的表达及其产物的初步应用

目的在体外表达及纯化ＨＣＶ不同功能区的病毒蛋白，用于研究ＨＣＶ各功能区抗体的临床意义。方法将ＨＣＶＥ１，Ｅ２／ＮＳ１，ＮＳ５区的部分基因片段克隆到表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中ＭＢＰ编码基因的下游，在大肠杆菌中进行表达。结果表达的融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，ＭＢＰ－ＮＳ５的分子量分别为５７０００、６５０００、６２０００，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ分析表明这些融合蛋白具有ＨＣＶ的抗原活性。将这三种融合蛋白纯化后作为抗原检测了丙型肝炎患者血清９５份，其中抗－ＨＣＶＥ１阳性率为１０．５％，抗－ＨＣＶＥ２／ＮＳ１为６３．２％，抗－ＨＣＶＮＳ５为５３．７％。结论本实验表达的ＨＣＶ融合蛋白在ＨＣＶ感染的血清学诊断中具有一定的价值。     

包膜糖蛋白序列分析鉴定丙型肝炎病毒宫内感染

目的从分子水平鉴定丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）宫内感染的可能性，为确定ＨＣＶ垂直传播提供更直接的依据。方法分别用免疫分析法和逆转录－聚合酶链反应检测婴儿和母亲的血清抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ，对母婴ＨＣＶＲＮＡ阳性的血清作ＨＣＶ包膜糖蛋白Ｅ２高可变区（Ｅ２ＨＶ）序列分析和比较。结果１１例ＨＣＶ感染的母亲所生的婴儿有６例生后脐血和静脉血抗ＨＣＶ阳性，５例于１～５个月阴转，另１例持续阳性达１３个月；５例于生后ＨＣＶＲＮＡ阳性，３例于１～６个月自然转阴，２例持续阳性分别达９个月和１３个月；对２例持续ＨＣＶＲＮＡ阳性的婴儿和其母亲Ｅ２ＨＶＲ序列分析发现，生后母婴间的氨基酸同源性高达９３．３３％，而２例母亲间同源性６２．２２％。结论丙型肝炎可以发生母婴传播，并可能为宫内感染。     

丙型肝炎病毒核心基因免疫研究

目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫用于预防和治疗ＨＣＶ感染的可行性和有效性．方法将ＨＣＶＣ基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３质粒ＣＭＶ启动子的下游，在证实其可以在小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０（Ｈ２ｄ）中表达之后，将重组质粒注射ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ２ｄ）小鼠股四头肌，ＥＬＩＳＡ检测血清中抗体产生水平；３ＨＴｄＲ掺入法测定免疫小鼠淋巴细胞ＨＣＶＣ抗原特异性增殖能力，４ｈ５１Ｃｒ释放法检测免疫小鼠细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬｓ）体外杀伤功能．结果免疫小鼠２０只，初次免疫２ｗｋ后，血清中均出现了ＨＣＶＣ抗体，且增加免疫剂量可提高抗体滴度；淋巴细胞增殖指数为６１０，明显高于对照组（Ｐ＜００１），ＣＴＬｓ体外特异性杀伤率为６３１％，也高于对照组（Ｐ＜００１）．结论ＨＣＶＣ基因免疫不仅可以诱导机体产生特异性的体液免疫，而且产生特异性的细胞免疫，它可能是防治ＨＣＶ的有效方法．     

乙型肝炎病毒变异对其特异性CTL反应的影响

特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）反应是人体清除ＨＢＶ的主要机制，与临床结局密切相关，了解病毒变异对ＣＴＬ反应的影响尤为重要。 １．ＣＴＬ表位区内的变异：ＣＴＬ通过识别ＨＢＶ抗原特异性表位而清除病毒，ＨＢＶ编码的蛋白产物上都有这种表位。表位区内的变异可能引起（１）与ＨＬＡ分子结合的病毒抗原肽“错位变异”，抗原提呈失败；（２）ＣＴＬ不能识别变异的表位；（３）变异性肽配体与ＣＴＬ受体结合，使ＣＴＬ分化信号发生改变而失去对靶抗原的杀伤作用。但ＨＢＶ可表达多种抗原性、且变异绝大多数不在表位区内，个别ＣＴＬ…     

中国地区HCV株包膜区cDNA序列变异性分析

目的　研究国内不同地区ＨＣＶ包膜基因区变异。方法　对国内不同地区慢性丙型肝炎患者的１３株 ＨＣＶ采用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增ＨＣＶ包膜基因区（Ｅ１、 Ｅ２／ＮＳ１）片段，对其中的１００５ｂｐ的ｃＤＮＡ进行测序，并与 国内外株进行变异性分析。结果　国内ＨＣＶ株比较，同型（Ⅱ）间该区核苷酸和氨基酸的同源性分别介于７６．４２％～ ９７．１１％和７５．２２％～９３．１５％，不同型（Ⅲ）间分别为６２．２９％～６３．３８％和５１，２９％～６０．００％；国内与国际同型株比较，同型 （Ⅱ）间分别为７３．７３％～８７．７６％和７５．８２％～８８．０９５％，不同型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）间分别为６１．４９％～８１．４９％和４９．３５％～７８．２１％；国 内外１８株ＨＣＶ的ＨＶＲ１区同源性仅为３６．１１％～７５、３１％和２０．８０％～６２．９６％，发现两个新的较高变异区（第２５０～２５７ 位和第４４３～４６５位氨基酸）。结论　ＨＣＶ包膜区序列分析同型间同源性较高，异型间同源性较低；南北地区有差 异，国内外差异更大；最大的变异在ＨＶＲ１，并发现两个新的较高变异区。     

HCV感染后C区不同表位的抗体反应性研究

采用ＨＣＶＣ区不同表位抗原研制的试剂盒，检测１４例首次ＨＣＶ感染者不同时期的１２９份系列血清中抗体，重组表达的ＨＣＶＣ区抗原及合成肽均与系列血清抗体有较好的反应性，ＨＣＶＣ区不同表位的抗体反应可以同时出现或先后出现，其动态变化规律并不一致，含ＨＣＶＣ区亲水和疏水部分重组抗原研制的试剂，其早期抗体检出率显著地高于仅选部分亲水区抗原包被试剂的检出率，提示重组高效表达的ＨＣＶＣ区抗原的输血后Ｃ型肝炎患进     

北京地区46例Ⅱ/1b型HCV高变区1的序列变异研究

目的研究北京地区Ⅱ／１ｂ型丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）包膜蛋白Ｅ２／ＮＳ１高变区１（ＨＶＲ１）序列变异规律及意义。方法应用逆转录巢式ＰＣＲ技术从４６例北京地区Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ感染病人血清中扩增了ＨＣＶ部分包膜区基因片断（ｎｔ１１１９～１２５８）,纯化后直接采用双脱氧链末端终止法进行序列分析。结果北京地区Ⅱ型ＨＣＶＨＶＲ１位于氨基酸（ａａ）３８４－４０８位,与有关文献报道（３８３－４１０或４１４）略有差异。ＨＶＲ１序列与ＨＣＶ－Ｊ、台湾株、河北株、ＨＢ－１１相应序列比较,核苷酸同源性依次为４４０％～６６．７％（平均５７．７％）,４８．０％～７２．０％（６０．０％）,６０．０％～８５．３％（６９．８％）和５６．０％～８１．３％（６８．２％）,氨基酸同源性依次为２０．０％－５６．０％（３８．２％）,３２．０％～６４．０％（４５．７％）,３６．０％～７６．０％（４９．８％）和４０．０％～７６．０％（５５．６％）。本组ＨＶＲＩ内发现６个较保守的氨基酸位点：３８５位Ｔｈｒ,３８９,３９０,４０６位Ｇｌｙ,４０１位Ｓｅｒ,４０３位Ｐｈｅ。结论对ＨＶＲ１序列变异规律及生物学意义的进一步研究有助于ＨＣＶ疫苗的发展。     

血清丙型肝炎病毒感染指标及序列变异的动态研究

目的探讨动态观测ＨＣＶ感染指标及序列变异的意义。方法ＥＬＩＳＡ方法检测抗ＨＣＶＩｇＧ、ＩｇＭ,ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ,ＰＣＲ产物直接测序。结果６例感染ＨＣＶ的血透析患者抗ＨＣＶＩｇＧ的表现类型分为持续阴性及持续阳性两种;抗ＨＣＶＩｇＭ有四种表现：一过性阳性、间隙性阳性、持续阴性及持续阳性;ＨＣＶＲＮＡ检测多为间断阳性;同一患者不同时期感染的ＨＣＶ株Ｅ２／ＮＳ１区序列间存在差别,且ＨＶＲ１区基因变异与有无抗体生成有关。结论抗ＨＣＶＩｇＧ、ＩｇＭ、ＨＣＶＲＮＡ的动态检测对说明体内有无病毒存在,疾病有无慢性化倾向有重要的意义。ＨＣＶＥ２／ＮＳ１区基因变异对提示病毒逃避机体免疫清除,疾病向慢性化方向发展有指导意义。     

山东地区输血后丙肝患者HGV感染状况及HGV部分核酸序列测定

应用ＲＴ－ＰＣＲ法检测庚肝病毒（ＨＧＶ）ＲＮＡ,并对阳性扩增的产物采用ＰＣＲ片段直接克隆法测定。结果从８６例输血后丙型肝炎（ＰＴＨ－Ｃ）患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性者３１例（３６．０％）,其中１例ＨＧＶＮＳ５区部分核苷酸序列与美国原始株和另１例日本株核苷酸同源性比较分别为８６．０％和８４．０％。证实山东地区ＰＴＨ－Ｃ２存在着ＨＧＶ感染和ＨＧＶ／ＨＣＶ混合感染,但是否存在不同亚型或ＨＧＶＲＮＡ阳性