Fabry病及其酶替代疗法

Fabry病是X性连锁隐性遗传性疾病，又称α-半乳糖苷酶缺乏症，是由于先天性α-半乳糖苷酶A缺乏所致，属于溶酶体贮积病的一种。1898年由Anderson和Johann Fabry各报告1例故名AndersonFabry病，简称Fabry病。Fabry病特征性临床表现为弥漫性皮肤血管角质瘤和发作性肢体疼痛，本病后期常出现。肾脏、心脏和脑血管等器官的进行性损害。Fabry病近年之所以引起人们的关注，     

基因型相同而表现型不同的Fabry病一家系报道△

目的报道一个具有相同α-半乳糖苷酶A突变基因型而临床表现型不同的家系。方法使用二代测序对一个具有多种心律失常的患者进行筛查寻找基因突变,并对家属进一步验证确认。结果该家系中,先证者经历一次心源性休克,且出现多种心律失常,包括室性心动过速、短PR综合征、心房扑动、心房颤动、窦性心动过缓。家族中有1例患者表现为类似的短PR综合征,余患者均有不同的临床表现。DNA测序显示,该家系所有患者皆有α-半乳糖苷酶A错义突变(G43D)。该基因突变既往描述将导致法布里病。结论 GLA基因突变可导致多种临床表型,即使在同一家系相同基因型的条件下,其临床表现的个体差异仍较大。     

硫化氢通过SIRT1抗内皮细胞衰老

目的探讨外源性硫化氢在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老中的作用及分子机制。方法用25μmol/L H2O2诱导HUVEC衰老,通过检测β-半乳糖苷酶计算细胞衰老率。检测不同浓度(15、30、60及120μmol/L)的硫氢化钠作用下内皮细胞衰老标志物β-半乳糖苷酶的表达,Western blot分析沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达。结果 HUVEC经25μmol/L H2O2处理1 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.2%±1.30%;经60μmol/L硫氢化钠干预48 h后,β-半乳糖苷酶阳性细胞率显著降低,为4.6%±1.14%,两组相比差异显著(P<0.05);与对照组比较,60μmol/L硫氢化钠干预48 h后SIRT1蛋白表达显著上调(P<0.05),而用SIRT1抑制剂(NAM)可减弱硫氢化钠此作用(β-半乳糖苷酶阳性细胞率为12.0%±1.58%)。结论硫化氢能通过上调SIRT1表达抵抗H2O2诱导HUVEC衰老。     

钩藤总生物碱对D-半乳糖诱导的内皮细胞衰老的干预

目的探讨钩藤总生物碱保护血管内皮细胞、抑制血管内皮细胞衰老的作用。方法采用D-半乳糖诱导的大鼠主动脉内皮细胞建立衰老模型,扫描电镜技术观察衰老血管内皮细胞的形态,β-半乳糖苷酶染色法测定衰老血管内皮细胞发生率以间接反映β-半乳糖苷酶表达,PCR-ELISA法测定衰老血管内皮细胞端粒酶活性。结果钩藤总生物碱可以改善血管内皮细胞形态、降低内皮细胞中β-半乳糖苷酶表达和端粒酶活性相对表达量(P<0.05)。结论钩藤总生物碱具有抑制内皮细胞衰老、保护血管内皮的效用。     

Fabry病一例报道并文献复习

目的：探讨Fabry 病的临床表现、诊断及鉴别诊断，提高临床医师对Fabry病的认识，降低漏诊率。方法：报道1例罕见的Fabry病肾损害，结合文献对该病的临床表现、诊断、鉴别诊断及治疗和预后进行探讨。结果：患者为中年男性，发病年龄为30岁，临床表现主要为肾脏损伤及周围神经病变，伴有尿毒症家族史，中性粒细胞测α-半乳糖苷酶示酶活性：0nmol/mg/hr，基因突变：p.H125T（c.373C>T），最终确诊Fabry病。患者曾至多家医院就诊，均未明确病因，漏诊率高。结论：Fabry病属于遗传性肾脏疾病，为临床罕见性疾病，容易漏诊，确诊需仔细的询问病史、肾脏病理检查、测定血清α-半乳糖苷酶水平及基因诊断。     

肝病病人血清糖苷酶酶谱的变化

用微量分光光度法测定了正常人、肝细胞癌(HCC)和其它肝病患者血清α-L-岩藻糖苷酶、N-乙酰氨基-β-D-葡萄糖苷酶、N-乙酰氨基-β-D-半乳糖苷酶和α-甘露塘苷酶活性,结果表明:HCC 患者血清四种糖苷酶活性都高于正常人,升高的四种糖苷酶之间密切相关,但与 AFP 无关;一些肝脏良性疾病也可有某种糖苷酶活性升高,肝炎患者都伴有血清转氨酶升高和其它肝功能的异常。提示:血清糖苷酶酶谱的研究有利于HCC 的诊断。     

人参皂甙Rg3对血管平滑肌细胞衰老的影响及机制

目的探讨人参皂甙Rg3对D-半乳糖诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)衰老的影响及机制。方法取SD大鼠胸主动脉中层,分离并原代培养VSMC,选取3~6代VSMC,通过D-半乳糖共孵育的方法诱导细胞衰老,β-半乳糖苷酶染色和透射电镜鉴定衰老VSMC;VSMC随机分成对照组、D-半乳糖组、Rg3高浓度组、Rg3低浓度组,Western blot方法检测p16、p21和p53蛋白的表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果与对照组比较,D-半乳糖组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显升高[(58.67±2.52)%vs(4.67±0.58)%,P<0.05]。电镜下表现为细胞核膜内折,细胞线粒体肿胀,脂褐素堆积;p16、p21和p53蛋白表达水平明显升高(P<0.05),细胞周期停滞在G0/G1期。与D-半乳糖组比较,Rg3低浓度组和Rg3高浓度组β-半乳糖苷酶阳性细胞明显减少,p16、p21和p53蛋白表达水平明显降低,G0/G1期细胞数明显减少(P<0.05)。结论人参皂甙Rg3可抑制VSMC衰老,其机制可能部分通过抑制细胞生长周期p16INK4a/Rb、p53-p21Cip1/Waf1信号通路来实现。     

睾酮对心肌成纤维细胞表型转化的干预研究

目的 观察氧化应激对心肌成纤维细胞(CF)表型转化的影响以及睾酮的干预作用,初步探讨睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制.方法 差速贴壁法培养雄性昆明白乳鼠心肌成纤维细胞, 用β-半乳糖苷酶瓤色检测细胞的衰老,MTT法检测细胞增殖能力,采用免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞的典型标记-α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA).结果 H2O2刺激下β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加,心肌成纤维细胞增殖率降低,α-SMA免疫化学染色出现明显强阳性;睾酮在3.0×10-9、3.0×10-8和3.0×10-7mol/L 3种浓度下均具有延缓H2O2诱导的以上效应,氟他胺(Flu)能部分阻断睾酮的各种保护作用.结论 睾酮通过受体机制可以逆转H2O2诱导的心脏成纤维细胞表型的转化,这可能是睾酮抗心脏老化过程中心肌纤维化的机制之一.     

Fabry病合并心脏受累的诊治进展

Fabry病是由编码溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A的GLA基因突变引起的X染色体连锁隐性模式遗传的溶酶体贮积症.绝大多数Fabry病患者合并心脏受累,出现包括心肌肥厚、传导障碍、心律失常、瓣膜病变、心力衰竭等复杂并发症,其中心脏性猝死是Fabry病患者死亡的首要原因.生物标志物水平测定及基因检测是目前诊断Fabry病的主...     

Fabry病1例报道并文献复习

正Fabry病又称Anderson-Fabry综合征,1898年皮肤科医生Anderson和Johann Fabry各首先报告1例,故名Anderson-Fabry disease,简称Fabry病,是一种X染色体连锁遗传的α-半乳糖苷酶缺乏性疾病~[1]。该病临床罕见,容易漏诊,本文报告1例,并结合文献复习如下。患者男性,40岁,因"体检发现尿异常10年,乏力伴手指末端疼痛1年"入院。患者于10余年前体检发现蛋白尿、血尿,曾在多家医院门诊治疗,并自     

人脐静脉内皮细胞衰老过程中细胞膜钠泵α亚单位基因表达的变化

目的探讨体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老过程中,细胞膜表面钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变。方法提取原代HUVEC,体外传代培养,第1代起分组干预。实验分对照组(未干预)和干预组(D-半乳糖10 g/L干预),按细胞传代的不同代数,观察第2、5和8代细胞形态,于不同群体倍增数(PD)行β-半乳糖苷酶染色初步判定细胞衰老,利用免疫细胞荧光染色法、实时定量PCR法和Western b1ot法检测各组细胞膜表面钠泵α1、α2、和α3亚单位mRNA及蛋白的表达水平。结果钠泵α1、α2和α3亚单位mRNA及蛋白表达水平随PD增加而降低(P<0.01);与对照组比较,干预组同一PD钠泵α2和α3亚单位mRNA和蛋白表达降低(P<0.01),而2组α1亚单位表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论细胞膜表面钠泵α亚单位mRNA及蛋白表达水平的失衡,可能是HUVEC复制性衰老的分子机制之一;D-半乳糖诱导可能构建HUVEC亚急性衰老模型。     

巴戟天对D-半乳糖致衰老大鼠心肌细胞肌球蛋白和肌动蛋白基因表达的影响

目的 探讨补肾益气中药巴戟天对衰老心肌细胞肌球蛋白和肌动蛋白基因表达的影响及其可能机制.方法 以新生24h内SD大鼠心脏组织为材料,采用胶原酶消化法分离并培养心肌细胞,用8 mg/ml的D-半乳糖诱导细胞2d并常规培养5 d制得心肌细胞衰老模型,并用巴戟天处理,观察作用.实验分为三组:对照组、模型组、巴戟天组.采用倒置显微镜观察细胞形态,生化方法检测β-半乳糖苷酶活力,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测肌球蛋白重链基因α-MHC和β-MHC mRNA表达,Western印迹方法检测肌动蛋白的蛋白表达.结果 ①与正常组相比,模型组细胞β-半乳糖苷酶活力显著性升高,细胞活力显著性降低,肌球蛋白重链α-MHC mRNA表达下降,肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达升高;②巴戟天组与模型组相比较,一定程度上改变了衰老心肌细胞的形态变化,β-半乳糖苷酶的活力降低,细胞活力升高,肌球蛋白重链α-MHC mRNA表达上调,肌球蛋白重链β-MHC mRNA表达下调.α-actin蛋白表达在各用药组并未表现出显著性差异.结论 巴戟天能改善衰老心肌细胞α-MHC mRNA表达下调程度和β-MHC mRNA表达的上调程度.α-actin的表达保持恒定.     

金属蛋白涂层支架用于小型猪冠状动脉质粒介导下转基因研究

目的 :评价在质粒介导下 ,金属蛋白涂层支架向血管内局部转基因的可行性、效率和选择性。　　方法 :金属支架由 316 L不锈钢丝编织而成 ,其涂层是通过把支架放入有交联剂的明胶溶液中浸泡而成。基因载体为Pc DNA2质粒 ,并携带有β-半乳糖苷酶标记基因 ,该基因编码核特异性β-半乳糖苷酶。首先将蛋白涂层支架分别固定在3.0 mm或 3.5 mm经皮冠状动脉腔内成形术球囊上并在浓度为 8μg/μl的基因原液中浸泡 3分钟 ,然后通过 8F大腔引导导管将支架送入小型猪冠状动脉前降支中段 (转基因组 ,n=3) ,另外把没有浸泡过基因的支架也送入小型猪冠状动脉前降支中段 (对照组 ,n=3)。在支架植入后 7天处死动物。β-半乳糖苷酶表达由 X- Gal染色评估。　　结果 :所有转基因动物均有基因表达。转基因表达出现在内膜、中层和外膜。中层平滑肌细胞转染率为 3.0 %。远处器官和对照组冠状动脉均未显示核特异性β-半乳糖苷酶阳性表达。　　结论 :蛋白涂层支架在质粒介导下向血管内转基因有效、可行 ,因此 ,它有可能成为冠状动脉腔内成形术后再狭窄基因治疗的有效转基因系统。     

D-半乳糖诱导心肌细胞非酶糖基化对钙调节蛋白的影响

目的 研究D-半乳糖诱导衰老的心肌细胞中的非酶糖基化反应,及其对心肌细胞内钙调节蛋白水平的影响. 方法 实验用5 g/L D-半乳糖干预培养心肌细胞建立衰老模型.显微镜下观察心肌细胞的形态和搏动情况.以β-半乳糖苷酶染色观察细胞衰老,ELISA法检测心肌细胞晚期糖基化终产物(AGEs)的含量,采用western blot检测肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA,心脏主要是SERCA2a)及受磷蛋白(PLN)的含量. 结果 D-半乳糖诱导的心肌细胞内β-半乳糖苷酶染色阳性率显著高于正常对照组[(75.6±4.9)%和(17.15±2.9)%,P＜0.01)];细胞内AGEs较正常对照组明显增高[(702.58±32.16)pg/ml和(93.22±26.14)pg/ml,P＜0.01];SERCA2a含量明显下降与正常对照组比值为0.39±0.05(P＜0.01);PLN含量明显下降与正常对照组比值为0.27±0.03(P＜0.01);同时伴有心肌细胞形态和搏动的异常. 结论 D-半乳糖可通过心肌细胞的非酶糖基化诱导的心肌细胞老化,同时降低心肌细胞内的SERCA2a、PLN蛋白含量,影响心肌细胞的舒缩活动.     

Fabry心肌病的诊断与治疗进展

法布里病（Fabry）是一种罕见的X染色体连锁遗传性疾病, 由于a-半乳糖苷酶A( alphagalactosidase A, GLA, 一种溶酶体酶)基因发生突变或缺失,引起体内GLA部分或全部缺乏,造成其代谢底物三己糖酰基鞘脂醇( globotriaosylceramide, Gb3)在人体各器官、组织蓄积,引起多个系统损害,其中心血管系统受累常见,主要表现为心肌肥厚、瓣膜损害、收缩/舒张功能减低,心律失常等,这些病变与患者心力衰竭、心源性猝死等密切相关。为了提高临床医生对Fabry病患者心脏受累表现的认识和诊治,本文将对Fabry 心肌病诊断与治疗的新进展作一综述。     

肉苁蓉总苷对D-半乳糖所致衰老模型小鼠免疫功能的影响

目的　研究肉苁蓉总苷对 D-半乳糖致衰老小鼠抗衰老作用的免疫学机制。方法　通过 3H- Td R掺入法测定淋巴细胞转化能力、中性红试验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、免疫荧光法进行淋巴细胞亚群的检测、放免法测定外周血 IL- 2含量、微量 NAG酶释放法测定 NK细胞活性。结果　 D-半乳糖致衰小鼠免疫功能明显下降 ,表现为淋巴细胞转化能力、外周血 IL - 2含量、CD4 T细胞和 CD8 T细胞含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能和 NK细胞活性均明显降低 (P<0 .0 5) ;肉苁蓉总苷能提高模型小鼠淋巴细胞转化能力、外周血 IL - 2含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性、CD4 T和 CD8 T细胞含量 (P<0 .0 5)。结论　肉苁蓉总苷明显增强 D-半乳糖致衰老小鼠的免疫机能 ,使其恢复或接近了青年小鼠状态 ,具有延缓衰老的作用     

刺五加苷对D-半乳糖致衰老模型大鼠免疫功能的影响

目的 研究刺五加苷对D-半乳糖(D-gal)致衰老模型大鼠免疫功能的影响.方法 以不同浓度刺五加苷作用D-gal致衰老模型大鼠后,计算脏器指数,MTT比色法测定T淋巴细胞增殖功能,ELISA法测定白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度.结果 刺五加苷改善D-gal致衰老大鼠免疫功能具有浓度依赖性.结论 刺五加苷能改善衰老大鼠免疫功能,延缓免疫衰老.     

直链烷基苯磺酸钠对小鼠皮肤组织老化的促进作用

目的探讨直链烷基苯磺酸钠(LAS)对小鼠皮肤组织衰老的影响。方法将50只健康昆明种雄性小鼠,随机分成5组,每组10只。各组分别为正常对照组、LAS低、中、高剂量组(LAS 150、300、600 mg/L)及D-半乳糖衰老模型组。正常对照组及LAS各剂量组分别用蒸馏水及不同剂量的LAS涂抹小鼠的背部剃毛处,连续涂抹60 d,衰老模型组小鼠每日在颈背部皮下注射5%D-半乳糖,连续注射60 d。取涂抹部位皮肤进行Masson及β-半乳糖苷酶染色;检测皮肤匀浆中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;测定皮肤组织中羟脯氨酸(Hyp)含量。结果与正常对照组相比,LAS各剂量组及衰老模型组小鼠皮肤组织变薄,胶原纤维减少,纤维排列杂乱、松散、模糊;β-半乳糖苷酶表达程度明显增高;MDA含量明显增加(P<0.01),SOD、GSH-Px活性及Hyp含量均明显降低(P<0.01)。结论 LAS可促进小鼠皮肤组织的老化。     

外源性基因在血管球囊损伤后新生内膜中的表达

目的：应用重组腺病毒载体介导的β-半乳糖苷酶基因（LacZ）标记基因,探讨外源性基因在股动脉血管球囊损伤后,新生内膜中的表达。方法：用犬的股动脉内皮损伤模型,4周后经犬颈外动脉插管至股动脉内皮损伤处,并导入重组腺病毒载体介导的LacZ标记基因。转基因7天后,处死动物。β-半乳糖苷酶表达由x-Gal染色评价。经显微镜观察：在血管球囊损伤后,新生内膜中所见的蓝染细胞即为β-半乳糖苷酶表达阳性。结果：β-半乳糖苷酶表达出现在新生内膜、部分中膜和部分修复的内皮细胞。血管损伤后,新生内膜中平滑肌细胞转染率为100％。对照血管和远处脏器未显示β-半乳糖苷酶的表达。结论：在重组腺病毒载体的介导下,外源性基因可以在新生内膜中高效率地表达,新生内膜中的平滑肌细胞为基因治疗的靶细胞。     

α-半乳糖苷酶A活性检测对Fabry病筛查和诊断的意义

测定100名体检者与1例Fabry病患者的外周血粒细胞和血浆中的d-半乳糖苷酶A(α-GalA)活性.结果显示,100名受试者外周血粒细胞与血浆中的α-GalA活性平均值分别为(51.97±15.24)nmol·h-1·mg-1和(148.08±26.30) nmol·h-1·ml-1;其血浆中α-Gal A活性与外周血粒细胞α-Gal A活性呈正相关(r=0.533,P＜0.01);Fabry病患者外周血粒细胞与血浆中α-Gal A活性分别为1.05 nmol· h-1·mg-1和10.06 nmol·h-1·ml-1,均明显低于所测定人群酶活性范围下限.提示血浆与外周血粒细胞α-GalA活性均可用于Fabry病的筛查和诊断.