孤儿核受体Nur77通过转录激活功能调控巨噬细胞脂质沉积

目的:探讨孤儿核受体Nur77调控巨噬细胞脂质沉积与其转录激活功能的关系。方法:建立稳定表达GFP、GFP-Nur77、GFP-Nur77/ΔDBD和GFP-Nur77/ΔTAD c DNA的小鼠巨噬细胞RAW264.7单克隆细胞系,40μg/ml氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激24 h后,油红O染色定性观察细胞内脂质沉积,液相色谱-质谱联用法(LC-MS)定量检测细胞内胆固醇酯,荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测CD36和ABCA1 mRNA水平的变化,流式细胞仪检测CD36蛋白表达,Western blot方法检测ABCA1蛋白表达。结果:与对照GFP-RAW264.7相比,高表达Nur77能够显著减少ox-LDL诱导引起的巨噬细胞内脂质沉积,同时降低CD36的mRNA及蛋白表达,上调ABCA1的mRNA及蛋白表达。但GFP-Nur77/ΔDBD RAW264.7和GFP-Nur77/ΔTAD RAW264.7细胞内胆固醇都明显升高,并伴随CD36的mRNA及蛋白表达的降低和ABCA1的mRNA及蛋白表达的升高。结论:孤儿核受体Nur77通过减少脂质摄取和增加脂质排出而减轻巨噬细胞内脂质沉积,这一作用与Nur77 DNA结合能力以及转录活性有关。     

孤儿核受体Nur77参与AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块的形成

目的:研究孤儿核受体Nur77在AopE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块形成中的作用。方法:AopE-/-小鼠左肾动脉和左颈总动脉联合部分结扎建立颈动脉易损斑块模型,采用HE染色观察斑块病理学改变,免疫荧光染色结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察斑块中Nur77蛋白的表达。同时,体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)及其主要成分7-酮胆固醇(7-ketocholesterol,7-KC)或者游离胆固醇(FC),以及炎症介质(LPS、IL-1β)等条件刺激下,应用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测Nur77蛋白表达变化。结果:AopE-/-小鼠颈动脉易损斑块局部有Nur77蛋白高表达,而oxLDL及其组成成分(7-KC和FC)以及某些炎症介质(如LPS、IL-1β等)均能在RAW264.7细胞中诱导Nur77蛋白表达上调。结论:孤儿核受体Nur77可能在动脉粥样硬化易损斑块发展进程中发挥着重要作用。     

孤儿核受体Nur77对氧化型低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞系分泌炎症因子的影响

目的观察孤儿核受体Nur77对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症因子的影响。方法建立稳定转染GFP-Nur77质粒的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,并以稳定转染绿色荧光蛋白（GFP）基因的细胞系RAW 264.7作为对照。将转染的细胞与ox-LDL（40 mg/L）共同孵育24 h后,采用ELISA法检测炎症因子TNF-α、IFNγ-、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和IL-6的表达。结果经ox-LDL刺激后,不同质粒DNA转染的两种细胞中,IFNγ-、TNF-α、MMP-9和MCP-1的浓度均升高（P<0.05）;但GFP-Nur77-RAW 264.7细胞的增长水平明显低于GFP-RAW 264.7细胞（P<0.05）。ox-LDL刺激前,GFP-RAW 264.7细胞分泌的4种炎症因子（TNF-α、IFN-γ、MMP-9和MCP-1）的浓度,分别为（19.00±1.69）ng/L、（99.10±3.09）ng/L、（0.14±0.02）ng/L和（23.96±3.57）ng/L;ox-LDL刺激后,分别上升为（27.22±0.38）ng/L、（549.90±1.81）ng/L、（0.45±0.06）ng/L和（49.31±3.66）ng/L。ox-LDL刺激前,GFP-Nur77-RAW 264.7和GFP-RAW 264.7细胞分泌的4种炎症因子的浓度无统计学的差异性。ox-LDL刺激后,4种炎症因子的浓度分别上升为（18.34±1.06）ng/L、（320.56±1.27）ng/L、（0.20±0.03）ng/L和（38.92±4.46）ng/L。而两种细胞（CTFP-Nur77-RAW 264.7细胞与GFP-RAW 264.7细胞）分泌IL-6的浓度未见显著差异。结论RAW 264.7细胞中Nur77表达的上调,能够显著减少ox-LDL诱导的炎症因子（IL-6除外）分泌,这可能是孤儿核受体Nur77心血管保护作用的重要机制之一。     

孤儿核受体Nur77与肺部疾病

Nur77作为NR4A孤儿核受体超家族的一员,可被多种激素、炎症反应和生长因子诱导表达,具有复杂的生物学功能,参与细胞的增殖、分化和凋亡过程.其中值得注意的是Nur77可通过由细胞核向细胞质移位介导一种新的细胞凋亡机制.大量研究表明Nur77与多种肺部疾病发病机制关系密切,如呼吸机过度通气引发的肺部炎症性损伤,镉中毒诱发的肺组织细胞凋亡和肺动脉高压血管平滑肌细胞增殖的负反馈调节机制等.此外,Nur77还与肺癌的发生发展有关,同时也参与维甲酸的抗肺癌机制.因此,本文就Nur77及其与肺部疾病的关系作一综述.     

与动脉粥样硬化密切相关的清道夫受体

清道夫受体是一类结构多样化的糖蛋白受体，具有广泛的配体谱和功能。已知清道夫受体与动脉粥样硬化、宿主防御、细胞粘附、细胞增殖以及细胞凋亡等均有不同程度的关系。已经发现的清道夫受体分为A、B、C、D、E、F、G几大类型，其中清道夫受体A型（SR-AI，SR-AII）和清道夫受体B型（SR-BI，CD36）研究的较多，并且已被证明与动脉粥样硬化密切相关。SR-A和CD36被认为是主要的致动脉粥样硬化受体；而SR-BI作为高密度脂蛋白受体参与胆固醇酯的逆转运过程，是重要的抗动脉粥样硬化的受体。本文主要综述这几类清道夫受体的结构、功能、信号转导、表达调控以及以它们为靶点进行的药物研究。     

蛋白磷酸化对胞核因子-kB活化的调节

ＣＤ３６抗原是一种细胞膜糖蛋白;它既是粘附分子,又是清道夫受体,参与包括动脉粥样硬化在内的许多生理和病理过程。本文介绍ＣＤ３６抗原的生物学特性及其在动脉粥样硬化发生中的作用。     

熊果酸抑制动脉粥样硬化巨噬细胞吞噬脂质作用

目的观察熊果酸(UA)对动脉粥样硬化Wistar大鼠巨噬细胞吞噬脂质作用的影响,并对其机制进行探讨。方法动脉粥样硬化造模实验分为两组:干预治疗组和模型组,均为8周龄健康成年雌性Wistar大鼠(体重200～250 g),干预治疗组给予20 mg/d UA后,取Wistar大鼠股动脉和腹主动脉行HE染色制作病理切片,观察巨噬细胞吞噬脂质形成泡沫细胞,比较泡沫细胞形成及分布的差异。结果干预治疗组给药后总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组Wistar大鼠细胞学检测比较,干预治疗组和模型组Wistar大鼠给药前股动脉内膜明显增厚,两组均观察到有脂质沉积、泡沫细胞、少量红细胞和纤维组织增生,内膜坏死脱落,伴有炎性细胞浸润。给药后干预治疗组Wistar大鼠股动脉内膜纤维细胞减少甚至消失,平滑肌增生,沉积脂质减少,单核巨噬细胞增生。结论 UA可以通过抑制巨噬细胞吞噬脂质,减少泡沫细胞的形成,促进平滑肌增生和血管的修复,进而抑制动脉粥样硬化的进展。     

阿托伐他汀对THP-1巨噬细胞CD36表达的影响

目的研究阿托伐他汀(atorvastatin)对THP-1巨噬细胞B类清道夫受体CD36表达的影响。方法用5!mol/L阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞孵育不同时间;用不同浓度的阿托伐他汀与THP-1巨噬细胞共同孵育24h,采用RT-PCR与Westernblotting分别检测THP-1巨噬细胞CD36mRNA与蛋白质的表达。结果阿托伐他汀使THP-1巨噬细胞CD36mRNA与蛋白质的表达下调(P<0.05),且时间与剂量呈依赖关系。结论阿托伐他汀能抑制THP-1巨噬细胞CD36的表达。     

小鼠腹腔巨噬细胞清道夫受体活性的影响因素

本实验采用油红Ｏ染色和细胞图像分析法定量研究了ＮＩＨ小鼠腹腔巨噬细胞在不同培养环境下对氧化型低密度脂蛋白（ｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＯＬＤＬ）的摄取。结果显示：预先以含５％的牛血清白蛋白的ＲＰＭＩ１６４０无脂培养或５０ｍｇ·Ｌ－１ＯＬＤＬ处理后分别使巨噬细胞摄取ＯＬＤＬ增加了ｇ·ｔ－１的卡介苗处理后分别使ＯＬＤＬ的摄取量下降了４６％和２６％。１００ｍｇ·Ｌ－１的ＳｉＯ２处理后的结果与对照组无显著性差异。表明低脂环境和ＯＬＤＬ对清道夫受体活性的诱导作用，高ＬＤＬ环境和卡介苗抑制清道夫受体活性。     

地拉卓对THP-1由来巨噬细胞清道夫受体-B(CD36) mRNA表达的影响

目的 探讨地拉卓(dilazep,DZ)是否影响巨噬细胞清道夫受体(ScR)-B(CD36) mRNA表达过程.方法 利用人类单核细胞株(THP-1)由来巨噬细胞,通过Northern印迹方法观察DZ对巨噬细胞ScR-B(CD36) mRNA表达过程以及表达后的影响.结果 巨噬细胞ScR-B(CD36)mRNA表达随DZ浓度的增加而减弱;DZ对巨噬细胞ScR-B(CD36) mRNA表达后水平并无影响.结论 DZ的这种对巨噬细胞ScR-B(CD36) mRNA的表达过程具有抑制作用但对ScR-B(CD36) mRNA表达后水平并无影响的机制可能对动脉粥样硬化的形成早期具有保护作用而无治疗作用.     

Expression of class A scavenger receptor inhibits apoptosis of macrophages triggered by oxidized low density lipoprotein and oxysterol

The class A macrophage scavenger receptor (MSR-A) is a multifunctional trimeric glycoprotein involved in innate immune response as well as the development of lipid-laden foam cells during atherosclerosis. The MSR ligand, oxidized low density lipoprotein (oxLDL), is known to be cytotoxic to macrophages and other cell types. This study examined whether MSR mediates or modulates oxLDL-induced apoptosis. Treatment with oxLDL and its cytotoxic oxysterol, 7-ketocholesterol (7-KC), reduced viability and increased DNA fragmentation in human THP-1 cells, Chinese hamster ovary cells, and mouse peritoneal macrophages. However, cell death and DNA fragmentation were markedly diminished in the phorbol ester-differentiated MSR-expressing THP-1 cells and Chinese hamster ovary cells, with stable expression of MSR-AI after cDNA transfection when exposed to the same concentrations of oxLDL and 7-KC. Moreover, treatment with oxLDL and 7-KC induced much greater death and DNA fragmentation in MSR-A-deficient peritoneal macrophages compared with wild-type macrophages. Thus, MSR-A does not act as a receptor responsible for the apoptotic effect of oxLDL, and instead, expression of this receptor confers resistance of macrophages to the apoptotic stimulation by oxLDL and its cytotoxic lipid component. These results suggest that by preventing apoptosis, MSR-A may contribute to the long-term survival of macrophages and macrophage-derived lipid-laden foam cells in atherosclerotic lesions.     

血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1与动脉粥样硬化相关研究进展

<正>在形成动脉粥样硬化的过程中,氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是重要因素。血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)是ox-LDL的新型受体,能特异性结合、吞噬、降解ox-LDL,使血管内皮的功能异常,并通过促进脂质沉积、基质降解、细胞凋亡参与了动脉粥样硬化的     

The heparin-bound fraction of human lipoprotein-deficient serum inhibits endocytic uptake of oxidized low density lipoprotein by macrophages

We recently demonstrated that bovine lactoferrin, a cationic whey protein from bovine milk, interacts with the negative charges of modified low density lipoproteins (modified LDL) such as acetylated LDL (acLDL) and oxidized LDL (oxLDL), which markedly interferes with their endocytic uptake by rat peritoneal macrophages (Kajikawa M, Ohta T, Takase M, Kawase K, Shimamura S, Matsuda I. Biochim Biophys Acta 1994;1213:82–90). In the present study, we examined whether human lipoprotein-deficient serum (LPDS) might contain protein(s) that could inhibit the endocytic uptake of oxLDL by mouse macrophages. We fractionated LPDS by heparin affinity chromatography and found that the cellular binding of oxLDL to mouse macrophages and subsequent endocytic uptake were inhibited by 50%–60% with the heparin-bound fraction, whereas the heparin-unbound fraction had no effect. Similar results were obtained in the experiments with acetylated LDL. Sephacryl S-300 gel-filtration chromatography of a mixture of oxLDL and the heparin-bound fraction revealed that a 150-kDa protein was associated with oxLDL. These results indicate that the electrostatic interaction of oxLDL with some component(s) of the heparin-bound fraction might interfere with the endocytic uptake of oxLDL by the macrophage scavenger receptor.     

氧化修饰低密度脂蛋白作为抗原被树突状细胞递呈的实验研究

目的探讨氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)是否能作为抗原被树突状细胞(DC)直接递呈给淋巴细胞。方法以贴壁法从人外周血分离单核细胞,加入500IU/ml的rhGM-CSF和500IU/ml的rhIL-4,培养6d后加入LPS(20ng/ml)、LDL(10μg/ml)、ox-LDL(10μg/ml),作用48h,以流式细胞仪检测DC表型(CD14、CD86和HLA-DR)的变化,与同种异体T淋巴细胞以1∶5和1∶10的比例行混合淋巴细胞增殖反应,培养4d,以MTT法检测增殖反应。结果ox-LDL10μg/ml可促进DCCD86和HLA-DR的表达,有效激发同种异体淋巴细胞反应。结论ox-LDL可在体外作为抗原被DC递呈,ox-LDL和DC均可能参与致动脉粥样硬化(AS)的特异性免疫反应。     

葛根素对巨噬细胞表达C-反应蛋白的影响

目的:观察葛根素对巨噬细胞分泌和表达C-反应蛋白(CRP)的影响。方法:将人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞与不同浓度的葛根素进行培养,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)方法分别检测巨噬细胞CRP基因和蛋白质表达。结果:葛根素对人单核细胞系THP-1来源的巨噬细胞CRP及其蛋白质表达呈浓度依赖性,随着葛根素的浓度的增加,CRPmRNA及其蛋白质表达逐渐减少。结论:葛根素可以通过调节巨噬细胞表达CRP途径,发挥稳定动脉粥样硬化斑块的作用。     

氧化型低密度脂蛋白丙二醛总抗氧化能力与冠状动脉粥样硬化的关系

目的测定冠状动脉粥样硬化(AS)患者血中氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(TAOC)水平并探讨其与AS之间的关系。方法分别用ELISA法、硫代巴比妥法和Fe3+/Fe2+化学法对52例AS患者及30例对照组血中OX-LDL、MDA和TAOC进行检测,并与其冠脉造影结果比较。结果AS患者血中OX-LDL、MDA水平明显高于对照组(P<0.05),且多支冠脉病变患者高于单支病变,冠脉狭窄程度高患者二项指标更高;TAOC浓度明显低于对照组(P<0.05),且多支冠脉病变患者低于单支病变,冠脉狭窄程度高者TAOC浓度更低。OX-LDL、MDA浓度与TAOC浓度呈显著负相关(r1=-0.71,r2=-0.67,P<0.05)。结论OX-LDL、MDA明显升高与AS的发生与病变程度和范围有关,TAOC的检测可为AS抗氧化治疗提供重要依据。