结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

目的了解结直肠癌组织C-erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织,分别用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和免疫组织化学法(IHC)检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44.2%和74.4%,差异具有统计学意义(P=0.004)。癌组织和癌旁组织中C-erbB-2蛋白过度表达率分别为67.4%和27.9%,差异具有统计学意义(P=0.000)。C-erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C-erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C-erbB-2蛋白表达水平呈显著相关(r=0.331,P=0.03)。结论结直肠癌中C-erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C-erbB-2蛋白过度表达中起一定作用,有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。     

Ⅰ型钙黏蛋白基因异常甲基化及其功能蛋白表达与肺癌的相关性

目的 探讨Ⅰ型钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因甲基化及其功能蛋白表达与肺癌的相关性.方法 分别提取基因组DNA、总RNA和总蛋白,用半定量荧光甲基化特异PCR(MSP)、巢式逆转录PCR(nRT-PCR)和免疫印迹法(WB)检测30例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例肺良性疾病对照肺组织中CDH1甲基化、mRNA相对表达和上皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)表达情况,并对部分表达阴性标本用免疫组化法进行验证.结果 半定量荧光MSP检测CDH1启动子甲基化相对比值,癌组织为0.13%～450.67%、中位数33.61%,癌旁组织为0.00%～177.02%、中位数18.04%,远癌组织为0.00%～51.68%、中位数13.69%.经配对秩和检验分析癌与癌旁组织和远癌组织中CDH1甲基化程度差异有统计学意义(Z分别为-2.355和-3.527,P分别为＜0.05和＜0.01).nRT-PCR检测CDH1 mRNA表达的相对比值,癌组织为1.33±0.48,癌旁组织为1.61±0.55,远癌组织为1.93±0.45、肺良性疾病对照肺组织为2.09±0.09,经方差分析,癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(F=9.081,P＜0.01).WB结果显示,癌组织E-cad阳性率为36.7%(11/30)、癌旁组织为70.0%(21/30)、远癌组织为96.7%(29/30),经确切概率法分析癌与癌旁和远癌组织的差异有统计学意义(X2分别为6.70、24.30和7.68,P均＜0.01).而肺良性疾病对照肺组织阳性率为100%(5/5).结论 肺癌患者癌组织CDH1启动子发生甲基化后,可抑制该基因的转录,进而影响E-cad蛋白的表达,CDH1异常甲基化与肺癌的发生有相关性.     

人原发性肺癌组织中TSLC1基因甲基化检测及意义

目的探讨TSLC1基因启动子区甲基化状态与人原发性肺癌发生发展之间的关系方法采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对53例人原发性肺癌组织(肺癌组)、24例肺良性病变组织(良性病变组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行TSLC1基因5’-CpG岛甲基化状态检测。结果肺癌组、癌旁组和肺良性病变组的TSLC1基因甲基化率分别为35.8%(19/53)、13.3%(2/15)、0.0%(0/24),三组相比差异有统计学意义(P<0.05);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.2%(2/11)。TSLC1基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TSLC1基因启动子区甲基化与肺癌的发生关系密切,可能出现在肺癌发生的早期阶段。     

乳腺癌组织及癌旁组织HER2基因CpG岛甲基化水平及其mRNA表达的研究

目的探讨乳腺癌组织及癌旁组织人类表皮生长因子受体2(HER2)基因CpG岛甲基化率和HER2mRNA表达的差异。方法收集经病理确诊的50份乳腺癌组织和对应的癌旁组织样本,采用焦磷酸测序法、实时聚合酶链反应(PCR)和免疫组化法分别检测HER2启动子CpG岛甲基化率、HER2 mRNA表达和HER2蛋白表达。结果 HER2阳性乳腺癌组织HER2 mRNA相对表达量高于HER2阴性癌组织(P0.05),但HER2启动子CpG岛甲基化率差异无统计学意义(P0.05)。HER2阴性乳腺癌组织HER2基因启动子CpG岛甲基化率显著高于对应的癌旁组织(P0.05),而HER2 mRNA表达则低于对应的癌旁组织(P0.05)。HER2阳性的乳腺癌组织与其对应的癌旁组织之间以及HER2阳性与阴性癌旁组织之间,HER2基因启动子CpG岛甲基化率和HER2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论在HER2阴性的乳腺癌癌旁组织中,HER2基因启动子CpG岛的低甲基化可能是HER2 mRNA高表达的机制之一。     

结直肠癌C-erbB-2基因启动子CpG岛甲基化状态及其与C-erbB-2蛋白表达的关系

目的了解结直肠癌组织C—erbB-2基因启动子区CpG岛甲基化状态、C-erbB-2蛋白表达水平及两者之间的关系。方法取经病理确诊的43例结直肠癌组织和相应癌旁组织，分别用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和免疫组织化学法（IHC）检测C-erbB-2启动子区CpG岛的甲基化和C-erbB-2蛋白表达水平。结果癌组织和癌旁组织中C—erbB-2启动子区CpG岛甲基化率分别为44．2％和74．4％，差异具有统计学意义（P=0．004）。癌组织和癌旁组织中C—erbB-2蛋白过度表达率分别为67．4％和27．9％，差异具有统计学意义（P=0．000）。C—erbB-2蛋白表达水平与肿瘤分期相关。结直肠癌组织C—erbB-2启动子区CpG岛甲基化状态与C—erbB-2蛋白表达水平呈显著相关（r=0．331，P=0．03）。结论结直肠癌中C—erbB-2基因启动子区CpG岛的低甲基化可能在C—erbB-2蛋白过度表达中起一定作用，有望成为有用的肿瘤分子诊断标记和治疗靶点。     

肺癌诊断中血浆中多基因联合甲基化检测的价值

目的:探讨肺癌诊断中血浆中多基因联合甲基化检测的价值。方法:选取80例肺癌患者的资料作为研究组,选取80例健康体检者为对照组,比较两组多基因检测及甲基化状态。结果:肺癌组织的CDH13、RASSF1A、RUN3基因甲基化率高于癌旁组织甲基化率(P<0.05)。研究组患者的CpG岛甲基化表型阳性率高于对照组(P<0.05)。结论:血浆中多基因联合甲基化检测在肺癌早期诊断中有重要意义。     

胃癌中多基因甲基化状态及其表达的研究

目的了解胃癌中p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因启动子CpG岛的甲基化状态,并探讨基因异常甲基化与mRNA表达的关系及其意义。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测12例胃癌患者癌组织及其相应的癌旁正常组织中5种基因的甲基化状态,以12例胃镜活检的正常胃组织作为对照,采用RT-PCR方法相应检测了5种基因的mRNA表达水平。并分析每种基因甲基化程度与表达水平之间的关系。结果胃癌组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为41.7%、8.3%、58.3%、33.3%和58.3%,相应的癌旁正常组织中,p16、E-cadherin、Runx3、DAPK和CHFR基因的甲基化率分别为8.3%、0.0%、8.3%、8.3%和16.7%,且75%的胃癌组织中至少有一种基因甲基化,显著高于癌旁正常组织25%(P<0.05),而健康对照组织中无基因甲基化,在甲基化的胃癌组织中均无p16、E-cadherin和DAPKmRNA表达,而癌旁正常组织、非甲基化的癌组织中均有其表达。结论胃癌中多基因启动子CpG岛高甲基化是一个频繁的事件,并且基因启动子高甲基化与其mRNA表达缺失有关,这可能参与了胃癌的发生发展。     

膀胱癌组织中上皮细胞钙依粘连蛋白基因启动子区CpG岛甲基化状态的分析

目的探讨膀胱癌中肿瘤抑制基因上皮细胞钙依粘连蛋白(E-cadherin)启动子区CpG岛的甲基化状态及其与mRNA表达的关系.方法收集30例新鲜的膀胱癌组织及其癌周正常组织;采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化状态;采用逆转录PCR检测E-cadherin基因的mRNA表达.结果 E-cadherin基因在膀胱癌组织中的甲基化阳性率(43.3%)显著高于在癌周正常组织中的甲基化阳性率(6.7%,P＜0.01);在复发性膀胱癌中的甲基化阳性率(64.7%)显著高于在原发性膀胱癌中的甲基化阳性率(15.4%,P＜0.05);在不同分级、分期膀胱癌中的差异无显著性.13例异常甲基化的膀胱癌组织中有10例未检测到CDH1 mRNA的表达,而13例未甲基化膀胱癌组织中有2例未检测到,二者差异有显著性(P＜0.01).结论 E-cadherin在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,但与膀胱癌的临床分期和病理分级无显著相关性,提示其可能参与了膀胱癌的发生;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能成为判断膀胱癌复发的指标之一;E-cadhenn基因CpG岛的过甲基化可能是造成E-cadherin mRNA不表达的原因之一.     

非小细胞肺癌患者外周血黑色素瘤抗原基因启动子去甲基化模式的研究

目的探讨外周血黑色素瘤抗原基因启动子区CpG岛去甲基化的状态在肺癌诊断和预后评估中的价值。方法用甲基化特异性PCR(MSP)检测49例非小细胞肺癌患者外周血MAGE-A1、MAGE-A3基因启动子区CpG岛去甲基化的状态,分析与临床参数的关系,每例患者进行24个月的随访。结果 49例非小细胞肺癌患者分别有26例(53.1%)外周血MAGE-A1启动子区CpG岛启动子呈去甲基化状态,24例(49%)MAGE-A3启动子区CpG岛呈去甲基化状态;22例肺结核、15例肺脓肿、34例肺炎和30例健康体检者外周血标本均呈现甲基化(100%)。MAGE-A1、MAGE-A3启动子区CpG岛启动子去甲基化模式均与肺癌是否转移、TNM分期相关,与患者年龄、性别和肺癌组织学分型无关。24个月的随访结果显示,肺癌组MAGE-A1、MAGE-A3启动子区CpG岛启动子呈去甲基化模式患者较呈甲基化患者预后不良。结论 MAGE基因启动子区CpG岛去甲基化的状态可作为检测肺癌患者外周癌细胞的标记物,同时,检测结果有助于对肺癌患者的预后进行判断。     

膀胱移行细胞癌A激酶锚定蛋白12基因转录表达与其启动子区甲基化状态的相关性

目的 探讨膀胱移行细胞癌组织中A激酶锚定蛋白12(A-kinase anchoring protein 12,AKAP12)基因mRNA表达水平和基因启动子区CpG岛甲基化程度及其与临床病理参数之间的关系.方法 用荧光定量逆转录PCR(FQ-RT-PCR)和甲基化特异性PCR(MSP)检测30份膀胱移行细胞癌组织及其癌旁组织中AKAP12基因mRNA的表达水平及其启动子区CpG岛甲基化状态.并用亚硫酸盐修饰后PCR产物进行克隆测序.结果 在30份膀胱移行细胞癌患者组织标本中,AKAP12在癌组织中表达下调比率为73.3%(22/30),在病理Ⅱ和Ⅲ级膀胱移行细胞癌中下调比率明显高于Ⅰ级(P=0.02).MSP检测结果显示,膀胱移行细胞癌甲基化比率为53.3%(16/30),且与膀胱移行细胞癌TNM分期(r=0.52,Pn=0.03)和病理分级(r=0.61,Pn=0.01)有明显的相关性.结论 AKAP12基因启动子区出现的异常甲基化可导致其在膀胱移行细胞癌中的表达沉默,且与膀胱移行细胞癌的发生有关.     

CDH1基因甲基化与食管鳞癌的关系

目的 探对食管鳞癌组织中CDH1基因启动子区甲基化的表达状况及其与烟酒史、肿瘤家族史的关系.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测食管鳞癌中CDH1基因启动子区甲基化情况.结果 食管鳞癌、癌旁及正常组织CDH1基因的甲基化阳性率分别为51.6％(32/62)、22.6％(14/62)和0(0/18).癌与癌旁组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(P＜0.01);癌和正常组织比较,甲基化阳性率差异有统计学意义(x2=15.484,P＜0.01);癌旁与正常组织间差异无统计学意义(x2 =3.487,P＞0.05).食管鳞癌CDH1基因甲基化情况与其性别、年龄、烟酒史和上消化道肿瘤家族史比较差异均无统计学意义(均P ＞0.05).结论 CDH1基因启动子区甲基化与食管鳞癌发生关系密切,在食管鳞癌中是一常见的表观遗传学事件.CDH1基因甲基化可能是一个独立的危险因素.     

慢性髓系白血病患者CD34^＋CD38^-细胞水平JunB和CDHB基因启动子区域的甲基化状态研究

慢性髓系白血病（CML）是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损。为了探讨正常人和CML患者CD34＋CD38-细胞水平JunB和CDH13（cadherin-13）基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34＋CD38细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR（RT—PCR）检测JunB和CDH13基因的表达情况。结果表明：JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34＋CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87．5％（7／8）和50％（4／8）,明显高于正常人（P〈0．05）。CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低（2^-△△CT分别为1／5．21和1／10．63）。结论：在CML患者骨髓CD34＋CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义。     

肺癌中结肠多发性腺瘤样息肉基因启动子1A序列甲基化模式的研究

目的 探寻结肠多发性腺瘤样息肉（APC）基因启动子1A序列中肺癌甲基化位点及其存在模式。方法 用甲基化序列特异性引物，对阳性控制样品（CB＋）、阴性控制样品（CB-）、13份正常肺组织及19份肺癌组织进行APC基因启动子1A序列甲基化特异性扩增（MSP），其扩增产物直接测序和进行克隆测序分析。结果 在19份肺癌组织中，APC基因启动子1A序列的707、714、719和726位点发生高甲基化，甲基化率分别为95％（18／19）、74％（14／19）、74％（14／19）和74％（14／19），与正常肺组织比较，差异均有统计学意义（P〈0．001）。而679和687位点甲基化发生率均为11％（2／19），与正常肺组织甲基化发生率（0／13）接近（P〉0．05）。结论 在APC基因启动子1A序列中存在CpG胞嘧啶二核苷酸特定甲基化模式，其对肺癌早期诊断可能有重要意义。     

非小细胞肺癌血清8个抑癌基因启动子CpG岛甲基化的联合检测及意义

目的：探讨非小细胞肺癌患者血清中8个抑癌基因启动子C pG岛甲基化的联合检测在诊断非小细胞肺癌患者中的意义,以期提高非小细胞肺癌早期无创检出率,提升治愈率。方法选取62例非小细胞肺癌患者设为肺癌组,选取30例肺部良性疾病患者作为对照组,选取16例健康者作为健康组,取3个组研究对象的血清采取癌基因测序法检测8种基因启动子区域甲基化情况,比较3个组研究对象的上述指标,分析上述指标的变化和3个组研究对象不同临床状态的相关性。结果肺组结肠腺瘤性息肉病基因（A PC ）、钙粘蛋白13（CD H 13）、死亡相关蛋白激酶基因（DAPK）、人类O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）、RAS相关区域家族 F2（RASSF2）、人类Runt相关转录因子3（RUNX3）、RAS相关区域家族1A （RASSF1A）和TMS1/ASC基因甲基化检出率均明显高于对照组,组间比较差异具有统计学意义（P＜0．05）,非小细胞肺癌患者血清中抑癌基因8个指标联合检测敏感性达到93．54％,特异性达到90．3％,敏感性明显高于所有单项检测和4个指标联合检测。结论 A PC、CD H 13等8个抑癌基因异常甲基化状态的联合检测可以明显提高非小细胞肺癌患者抑癌基因甲基化的检出率。该8个基因异常甲基化有望成为非小细胞肺癌辅助诊断和预后判断的分子标记,并有可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点,从而提高临床对非小细胞肺癌患者的诊治水平。     

胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与幽门螺杆菌感染及肿瘤生物学特性的关系

目的建立甲基化特异性聚合酶链式反应方法检测组织中钙黏附分子（CDH1）的甲基化程度;探索CDH1启动子的甲基化与幽门螺杆菌（HP）感染及与肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移之间的关系。方法采用热转化甲基化特异性聚合酶链式反应法检测2008年1月-2009年12月共40例胃癌手术标本中CDH1的启动子甲基化情况,并回顾性地分析CDH1的启动子甲基化与HP感染、肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移等肿瘤生物学特性的统计学关联。结果胃癌组CDH1基因甲基化阳性率高于对照组（67．5％、12．5％,P〈0．05）。胃癌组中低一未分化肿瘤组CDH1基因甲基化阳性率高于高．中分化肿瘤组（80．6％、22．2％,P〈0．05）;胃癌组中HP阳性患者的CDH1基因甲基化率高于HP阴性患者（78．1％、25．0％,P〈0．05）;而胃癌组中CDH1基因甲基化阳性率与患者性别、肿瘤浸润程度、淋巴转移及远处转移无明显关系（P〉0．05）。结论CDH1基因甲基化可能参与了胃癌的发展过程,并且CDH1基因甲基化可能导致了肿瘤分化程度的降低。CDH1基因甲基化与胃癌患者的HP感染之间可能存在密切关系,提示HP感染可能参与了抑癌基因甲基化失活及肿瘤演变的发展过程。     

CDH11基因在肾细胞癌中的甲基化状态及其临床意义研究

目的检测CDH11基因启动子在肾癌中的甲基化情况,并分析甲基化与临床病理特征的关系。方法通过甲基化特异性PCR（MSP）检测CDH11基因在5株肾细胞癌细胞系、1株正常肾细胞系、46例肾细胞癌组织、23例癌旁肾组织,以及10例非肾实质肿瘤正常。肾组织中的甲基化状态。将甲基化情况与患者I临床资料联系,进行统计学分析。结果CDH11在5株肾癌细胞系中,有3株出现甲基化,甲基化率为60％;在人正常肾细胞系中未检测到甲基化。CDH11在肾癌组织中的甲基化率为45．7％（21／46）,显著高于癌旁肾组织（26．1％,6／23）及非肾实质肿瘤正常肾组织（0,（3／10）,差异具有统计学意义（P〈0．05）。肾细胞癌各分期间及各分级间,癌组织中CDH11基因甲基化检出率无统计学意义（P〉0．05）;左侧肾癌与右侧肾癌相比,癌组织CDH11基因甲基化率差异无统计学意义（P〉0．05）;男性肾癌患者与女性肾癌患者相比,肾癌组织中CDH1基因甲基化率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肾细胞癌组织中CDH11基因甲基化率显著高于癌旁正常肾组织及非肾实质肿瘤正常肾组织,且癌组织中CDH11基因甲基化率与临床病理资料如肿瘤分期及分级无显著相关性,提示CDH11基因甲基化是。肾细胞癌发生中的早期频发事件,可能是。肾细胞癌独特的基因甲基化谱成员之一,并在肾细胞癌的早期诊断上发挥作用。     

DNA甲基化对TIG1基因在急性白血病中表达的影响

本研究探讨急性白血病细胞中抑癌基因T1G1的表达及其甲基化状态。应用实时荧光定量PCR（real—timeQuantitativePCR，RT—QT—PCR）的方法，检测53例急性白血病（acuteleukemia，AL）患者及20例正常对照者（nom—alcontrols，NC）的TIG1表达情况，并通过甲基化特异性PCR（methylation—sepecificPCR，MS—PCR）检测TIGl基因的甲基化状态。应用去甲基化试剂处理KG-1a、U937和I（562细胞株，观察其基因转录水平和甲基化状态之间的关系。结果表明，TIG1mRNA在NC中高表达，而在AL患者中低表达；AL患者中TIG1的异常甲基化率高达75％（40／53例），而在正常标本中不发生甲基化；在初治AL中，发生甲基化的患者TIGj的表达水平明显低于未甲基化的患者；Kg-1a、U937和K562细胞株TIG1基因启动子CpG岛均存在过甲基化，应用去甲基化试剂处理后，TIG1基因启动子CpG岛甲基化程度降低，T1G1的表达都得到了恢复，并且TIG1的表达随着5-Aza—CdR浓度增加而增高。结论：TIG1基因表达的减少与急性白血病的发病有关，而甲基化是导致TIG1基因转录沉默的重要机制之一。     

CDH13基因在食管癌细胞株EC1和EC109中的甲基化研究

目的:探讨食管癌细胞中CDH13基因启动子区甲基化状态,以及5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)作用对CDH13基因甲基化状态及其表达的影响。方法:5-Aza-CdR处理前后分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测食管癌细胞EC1和EC109中CDH13基因启动子区甲基化状态,Western blot检测CDH13蛋白表达水平的变化。结果:CDH13基因在EC1中呈半甲基化,在EC109中呈完全甲基化。5-Aza-CdR可逆转食管癌细胞中CDH13基因甲基化,恢复其蛋白的表达。结论:CDH13基因异常甲基化可能是其在食管癌中失活的重要方式,应用5-Aza-CdR可逆转甲基化状态,并恢复CDH13表达。     

宫颈癌中FHIT基因CpG岛甲基化检测意义

目的探讨宫颈癌患者中脆性组氨酸三联体基因（fragile histidine triad,FHIT）CpG岛甲基化状态及其在宫颈癌诊断中价值。方法采用甲基化特异性PCR技术检测45例宫颈癌组织及血浆中、10例正常宫颈组织中FHIT基因CpG岛甲基化状态。结果 FHIT基因在宫颈癌组织及血浆中CpG岛甲基化率分别为55.6%和35.6%,正常宫颈组织中未检测出FHIT基因CpG岛甲基化,宫颈癌组织及血浆中CpG岛甲基化改变与正常对照比较差异有统计学意义（P〈0.05）;癌组织中FHIT基因甲基化发生率与年龄、病理分级、临床分期间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 FHIT基因CpG岛甲基化检测在宫颈癌早期诊断中有一定价值。