读者来信

<正> 编辑同志:你们好。贵刊1990;3(2):98刊登了苏州读者陈秀英的“IgG抗体筛检和交叉配血时,自身血清能代替牛血清白蛋白吗?”一文,提出了对自身血清和30%人血清白蛋白分别配制红细胞悬液,不能代替20～30%牛血清白蛋白(BSA)作胶体介质试验这一问题后,引起了大家的重视。最近我们看到《上海免疲学杂志》1992;12(1)∶41刊登的安微省芜湖市中心血站孙爱农等的“人血清,菠萝酶等对IgG类血型抗体检测敏感性的比较”一文,实验     

利用自体血清培养人外周血内皮祖细胞

背景:传统方法培养人外周血来源内皮祖细胞操作复杂,费用大,细胞获得率较低。目的:利用自体血清培养人外周血来源内皮祖细胞,并鉴定其功能。方法:采用密度梯度离心法从人外周血分离得到单个核细胞,体外培养分化为内皮祖细胞。按培养基条件不同分为EGM-2MV组、添加自体血清组(M199+体积分数10%自体血清+胰岛素样生长因子)、添加胎牛血清组(M199+体积分数10%胎牛血清+血管内皮细胞生长因子+碱性成纤维细胞生长因子+胰岛素样生长因子+表皮生长因子)。观察内皮祖细胞增殖、迁移能力;采用细胞形态观察、双荧光染色法及流式细胞仪等技术对培养的内皮祖细胞进行鉴定。结果与结论:培养第7天,EBM-2MV组和添加自体血清组细胞增殖能力和迁移率都优于添加胎牛血清组(P<0.05)。每组细胞经结合Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素双色荧光染色鉴定后双阳性率>80%,免疫细胞化学检测显示每组细胞CD133,CD34和KDR的表达均为阳性。证实在M199培养液中添加自体血清是一种简单、高效的培养内皮祖细胞方法。     

梯度血清递减体外培养人脐带间充质干细胞

背景：人脐带间充质干细胞的扩增与培养条件密切相关,而含体积分数10%-20%胎牛血清的培养基可促进细胞生长。目的：建立梯度血清递减扩增培养脐带间充质干细胞的培养技术。方法：采用胶原酶Ⅱ消化分离获得脐带间充质干细胞悬液,并通过贴壁培养进行纯化,细胞贴壁后采用梯度血清递减方法,即第1代80%含血清培养基,20%无血清培养基;第2代50%含血清培养基,50%无血清培养基;第3代20%含血清培养基,80%无血清培养基;第4代100%无血清培养基。另一种传代中始终采用含体积分数10%胎牛血清的α-MEM完全培养液。用流式细胞仪检测细胞的表面标记,进行成骨诱导试验,同时与经典的含10%胎牛血清的α-MEM培养体系进行比较。结果与结论：梯度血清递减培养法与经典α-MEM培养体系所获得的细胞在扩增能力、细胞形态、免疫表型等方面相似。细胞在两种培养体系中均能保持良好的分化潜能。但梯度血清浓度法培养间充质干细胞可使用更少量胎牛血清,提高临床应用安全性。     

人淋巴细胞表面钙调素结合位点的证实

目的　证实人淋巴细胞表面有钙调素结合位点存在。方法　用 10nm胶体金标记重组人钙调素 ,与人淋巴细胞反应后 ,用透射电镜观察。结果　实验组 (金标记钙调素 )淋巴细胞表面可见散在金颗粒 ;对照组 (用金标记BSA代替金标记钙调素或淋巴细胞预先用未标记钙调素封闭后再与金标记钙调素反应 )细胞表面未见金颗粒。结论　用免疫金标记透射电镜观察证实 ,人外周血淋巴细胞表面有钙调素结合位点存在     

ELISA法检测干细胞溶液中残留牛血清白蛋白含量

目的检测胎牛血清白蛋白（Fetalbovineserumalbumin,BsA）在脐带源间充质干细胞溶液的含量以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中的残留情况的适用性,并通过改进培养条件和增加清洗次数以进一步减少BSA等异源蛋白在脐带源间充质千细胞溶液内的残留。方法运用定量EuSA方法检测了脐带源间充质干细胞溶液中BSA的含量,并探讨改进培养方式与增加清洗次数等方法对干细胞溶液中残留的BSA含量的影响。结果对细胞清洗次数的增加能够有效减少BsA等异源蛋白的残留,并且采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。结论通过检测BSA以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中残留情况具有适用性;并且增加清洗次数能有效地降低BSA的残留量;采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。     

一种测定人体白细胞干扰素的全血技术

本文报导了一种测定干扰素的简便全血技术。该法原用于测定γ-干扰素的产生,现同样能应用于α-干扰素的研究。测定时用10毫升注射器从健康成人取得肝素血,以不同比例与含有谷氨酰胺和抗菌素的RPMI 1640培养液混和。也可用Hank′s平衡盐液(HBSS)代替1640培养液,但必须补充5%胎牛血清。为得到完全无血清的试验系统,将血与培养基混合物用无血清的1640培养基洗3次,然后分别加入96孔的组织培养板孔内,在5%CO_2和95%空气的环境下孵育24小时。分别取不同剂量的PHA、ConA、葡萄球菌肠毒素(SEA)、新城鸡瘟病毒、Ⅰ型WAL株单纯疱疹病毒和OKT-3(一种抗T细胞的单克隆抗体)加入培养物中作为干扰素诱生剂,并比较其诱生干扰素的能力。血清标本用1640培养基作3倍稀释(1∶3,1∶9,1∶27……),在96孔板内     

混合淋巴细胞培养在骨髓移植供体选择中的作用

混合淋巴细胞培养(MLC)是传统的配型骨髓移植(BMT)供受体主要组织相容性复合体(MHC)的重要方法。但近年来,随着分子生物学和PCR技术的发展,出现了许多新的配型HLA的基因学方法。利用这些方法,学者们对MLC配型HLA及选择BMT供体的作用进行了研究。认为MLc。在有血缘关系的同胞问BM~I"供体选择中尚有一定的作用,而在无关供体的选择时,MLC可被省略而为PCR-SSCP(单链构象多态性分析)、PCR-F(指纹)等方法代替。     

血清浓度和培养基对人γδT细胞增殖、表型和杀伤活性的影响

目的研究血清浓度和培养基对人γδT细胞增殖、表型和杀伤活性的影响。方法采用AIMV培养基,添加不同浓度胎牛血清对γδT细胞进行培养,比较细胞增殖、表型和杀伤活性。在此基础上,采用不同培养基(AIMV、Op Tmizer)对γδT细胞进行培养,比较细胞增殖、表型和杀伤活性。自动细胞计数仪检测γδT细胞数;流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表型;CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胃癌SGC-7901的杀伤效应。结果采用AIMV培养基,无血清条件下细胞无法生长,添加5%或10%胎牛血清(FBS)培养,细胞增殖优于添加1%FBS(P=0.024和P=0.006)或10%NBS(P=0.043和P=0.006),具有统计学意义,杀伤活性不具有统计学差异;采用Op Tmizer培养基,无血清及添加1%FBS培养均优于添加5%FBS的AIMV培养基,其中,1%FBS与AIMV5%FBS组相比具有显著性差异(P=0.030)。结论 Op Tmizer培养基比AIMV培养基更适用于临床过继免疫治疗用γδT细胞的无血清培养。     

吡哆胺修复糖基化终产物诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的实验研究

目的　观察吡哆胺 (PM)对糖基化终产物 (AGEs)诱导的脾淋巴细胞DNA损伤的修复情况。方法　采用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术 ,根据AGEs BSA浓度的不同所致离体小鼠脾淋巴细胞的DNA损伤进行研究 ,并对PM修复AGEs BSA诱导的DNA损伤不同时点的修复能力作了分析。结果　① 5 0、10 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率与阴性对照组比较无显著性差异 (P >0 0 5 )。 2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mLAGEs BSA组脾淋巴细胞DNA迁移率明显高于阴性对照组 (P <0 0 1) ,且两者呈正相关 (r=0 95 6 3)。②以能引起明显DNA断裂剂量 (2 0 0、4 0 0、80 0 μg/mL)的AGEs BSA作用小鼠脾淋巴细胞 ,PM最佳修复时点为 2h。结论　AGEs可引起离体脾淋巴细胞DNA链损伤 ,并存在一定的剂量 反应关系 ;PM对此有修复作用     

人脐血树突状细胞体外无血清培养

树突状细胞(dendritic cell,DC)作为体内功能最强的抗原递呈细胞,已试用于肿瘤的免疫治疗,但多数实验室培养DC的体系中包含血清,使其临床应用受到限制。本研究以人脐血为来源,建立了无血清培养DC体系,以期将来用于临床。首先,用rhGM-CSF加rhTNF-α,进行有血清液体悬浮培养,14天后,从(1±0.5)×10~4/ml CD34~ 细胞或(5±2)×10~5/ml单个核细胞中,总细胞数扩增5倍,DC分别占(25±5)％和(17±5)％。第二,以无血清培养基代替有血清培养基,培养21天,(2±1)×10~6/ml单个核细胞没有数量的扩增,DC占(7±2)％。最后,对上述培养体系,在第5天(有血清培养基)或第12天(无血清培养基)后加入rhIL-4,DC产率及细胞总数均未增加。本研究结论:①根据液体悬浮培养中观察到粒、巨噬细胞和DC的混合集落及DC小丛,证实DC与粒、巨噬细胞有共同祖先,均来源于CD34~ 造血干/祖细胞;②脐血单个核细胞虽较CD34~ 细胞产生DC的比率稍低,但分离方便,花费少;③无血清体系的培养效果不如有血清体系,培养所需时间也长,细胞产率也低,有待进一步完善;④未证实rhIL-4能增加DC产率。     

胎盘催乳激素的乳胶免疫测定法

检测孕妇血清人胎盘催乳激素(HPL)可估价胎盘功能。测定方法有多种。近来,利用抗体包被乳胶颗粒凝集法代替放射标记法,试剂无放射性,测定均一,快速,可以自动化。作者利用平底微量反应板及读数仪对HPL 进行乳胶凝集定量测定,与商品放射免疫测定法相关良好。试剂:(1)甘氨酸缓冲盐水(GBS):每升含0.17mol NaCl,0.1mol 甘氨酸和40mg 叠氮钠。用8mol/L NaOH 调节pH 至9.2。(2)GBS—HSA:每升GBS 含1克的人血清白蛋白(HSA)。(3)GBS—BSA—T;每升GBS 含10克牛血清白蛋白     

人脐带血间充质干细胞分离培养体系的优化筛选

背景:目前所报道的脐带血间充质干细胞体外培养条件不尽相同,尚缺乏统一标准,且培养效率较低.目的:拟对人脐带血间充质干细胞的分离方法、培养条件进行优化筛选.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-05/2008-04在中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院中心实验室完成.材料:35份脐带血标本来源于北京协和医院妇产科顺产或剖宫产胎儿.方法:应用淋巴细胞分离液法、羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法分别从脐带血中获得单个核细胞.细胞接种后,应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12、L-DMEM和MesencultTM不同培养基,在不同体积分数胎牛血清(5%,10%,20%)、不同细胞接种密度(5×106,1×107,5×107,1×108)下进行细胞培养.细胞传至第3代诱导成骨,行Von Kossa染色.主要观察指标:不同分离方法、培养基、胎牛血清浓度、种植密度分离培养细胞的效果,脐带血间充质干细胞表面标记的表达及成骨情况.结果:与淋巴细胞分离液法比较,羟乙基淀粉沉降法、羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法获得的单个核细胞数量明显增多(P＜0.05,P＜0.01),羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法细胞原代培养时间显著短于另2种方法(P＜0.01).应用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或MesencultTM培养基,T25培养瓶中细胞接种密度为5×107时,培养效率高于其余各种条件组合(P＜0.01).贴壁细胞表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45,CD90及CD133,经成骨诱导培养21 d后Von Kossa染色可见黑色矿化结节.结论:应用羟乙基淀粉沉降与淋巴细胞分离液两步分离法可以获得较多数量的脐带血单个核细胞,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12或Mesencult TM培养基、细胞接种密度为5×107时可以提高脐带血间充质干细胞的培养效率.     

甲功五项化学发光免疫分析的基质效应对临床测值的影响

目的探究甲功五项化学发光免疫分析的基质效应对临床测值的影响。方法探究T3、T4、FT3、FT4、TSH项目的牛血清、马血清、山羊血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水、正常人血清、甲减人血清的基质效应对临床测试的影响。结果用不同基质对同一份高值血清进行倍比稀释,T3项目中的牛血清、水解明胶、BSA基质效应较为明显,T4项目中的牛血清、马血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水基质效应明显,FT3项目中的牛血清、水解明胶、BAS、PBS、生理盐水基质效应明显,FT4项目中的牛血清、马血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水基质效应明显。结论使用甲减人血清对T3、T4、FT3、FT4、TSH项目高值血清进行稀释,甲亢人血清在促甲状腺激素稀释中取得了良好的稀释效果。     

混合淋巴细胞配养用于选择非亲属骨髓移植供体的评价

通过435例非亲属骨髓移植(BMT)病人的HLA配型对混合淋巴细胞配养(MLC)在HAL-D区配型的作用和预测移植物抗宿主病(GVHD)的能力进行了评价。所有的供受体都进行了HLA-A、B、DR抗原的血清学分型和MLC配型,并利用PCR/SSOP的方法分别对DRB1、B3、B4、B5,DQB1和DPB1等位基因进行了基因分型。有244/435对HLA-A、B、DR血清学分型一致的BMT供受体获得成功的MLC试验和DRB1分型,其中的208对为HLA-A、B、DR血清学分型和DRB1基因分型都一致,另外的36对为HLA-A、B、DR血清学     

冬虫夏草复方制剂对小鼠免疫排斥功能的影响

目的:通过检测复方冬虫夏草制剂(复方CS)对小鼠混合淋巴细胞培养(MLC)白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响,观察复方CS对小鼠免疫排斥反应的作用。方法:用同种异体的小鼠脾淋巴细胞作MLC,培养3d后,加入复方CS,设立未加药物组和环孢素A(CsA)组为对照,6d后用流式细胞仪检测IL-2、IL-10的表达,并进行方差分析。结果:复方CS组中IL-2的表达明显低于未加药物组(P<0.01),而IL-10的表达则显著升高(P<0.01)。复方CS组IL-2的表达高于CsA组(P<0.05),而IL-10的表达则较之为低(P<0.05)。结论:复方CS有较好的免疫抑制作用,但较CsA弱。复方CS中昆明山海棠的使用量可低于单味药以减轻毒副作用。     

中性粒细胞与淋巴细胞比值联合血清CEA、CA199和CA724检测在早期胃癌筛查中的应用

目的 探讨中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合血清CEA、CA199和CA724检测在早期胃癌筛查中的应用价值。方法 收集100例早期胃癌患者(早期胃癌组)、100例胃良性病变者(良性组)和100例健康体检者(健康组)的临床资料。比较3组NLR、血清CEA、CA199和CA724水平,并通过受试者工作特征(ROC)曲线分析单独及联合指标检测的准确性、敏感度及特异度。结果 早期胃癌组的NLR、血清CEA、CA199和CA724水平高于良性组和健康组(均P<0.05);良性组NLR和CA724水平高于健康组(均P<0.05)。联合检测区分早期胃癌患者和健康体检者的准确性为90.2%,敏感度为89%,特异度为83%;联合检测区分早期胃癌和胃良性病变的准确性为84.3%,敏感度为78%,特异度为86%。结论 NLR和CA724水平与胃的病变程度有关;NLR联合血清CEA、CA199和CA724检测能提高早期胃癌筛查的准确性、敏感度和特异度,可为临床筛查提供参照。     

血清CEA及CA199水平升高在良恶性疾病中的分布特征

目的探讨血清癌胚抗原(CEA)、糖链抗原(CA)199水平升高在良恶性疾病中的分布特征及其鉴别诊断价值。方法回顾性分析血清CEA与CA199水平均升高的509例确诊患者临床资料,采用SPSS18.0软件对相关数据进行统计学分析。结果 509例患者中,良性疾病患者占22.79%,恶性患者占77.21%,且两组间CEA、CA199水平比较差异有统计学意义(P0.05)。不同良性疾病患者间CEA水平比较差异无统计学意义(P0.05),肺癌、肠癌、胃癌、乳腺癌患者CEA水平高于胰腺癌患者(P0.05),肺癌和肝癌患者CA199水平低于胰腺癌患者(P0.05)。以10ng/mL、90U/mL分别作为CEA、CA199的分界值,良恶性疾病患者间二者水平比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论良性疾病可导致血清CEA、CA199水平升高,而CEA≥10ng/mL或CA199≥90U/mL对良恶性疾病的鉴别有一定的辅助诊断价值。     

一种适合肝细胞生长的无血清培养基

背景:寻找一种既能适合细胞生长又避免添加血清的培养基迫在眉睫,无血清培养应运而生。目的:探索一种适用于C3A细胞生长的无血清培养基,为肝细胞用于临床治疗以及生物人工肝走入临床奠定基础。方法:分别用无血清培养基、完全培养基和基础培养基培养C3A细胞,观察细胞的生长状态,绘制细胞生长曲线和活力曲线,全自动生化分析仪测定上清中谷丙转氨酶漏出量、尿素含量,放射免疫分析法检测白蛋白分泌量,实时荧光定量PCR检测基因水平的变化情况。结果与结论:3种培养基培养的细胞生长良好,无血清培养基组与完全培养基组细胞密度在培养周期内,除第7天以外差异无显著性意义(P>0.05)。培养第4~7天,其他两组明显高于基础培养基组(P<0.05);无血清培养基尿素合成水平>完全培养基>基础培养基(P<0.05)。Real-time qPCR显示,无血清培养基组相对于完全培养基组仅CK18、CK19和HNF4α基因表达量下降(P<0.05)。说明实验研制了一种适合于肝细胞(C3A)生长的无血清培养基,与传统血清培养能达到同样的效果。     

香烟提取物损伤人脐静脉血管内皮细胞及阿托伐他汀的干预

背景:吸烟是诸多血管缺血性疾病如动脉硬化闭塞、血栓闭塞性脉管炎等疾病的重要危险因素,但其确切机制尚不清楚.目的:探讨香烟提取物对人脐静脉内皮细胞的影响以及阿托伐他汀对该作用的干预.方法:将体外培养的人脐静脉内皮细胞分为3组,分别以含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基对照组、体积分数10%胎牛血清+10%香烟提取物的DMEM培养基、含体积分数10%胎牛血清+10%香烟提取物+10 μmol/L阿托伐他汀的DMEM培养基培养.结果与结论:香烟提取物组人脐静脉内皮细胞形态较对照组不规则,存活率、细胞上清液中的一氧化氮水平和细胞一氧化氮合酶活性降低(P < 0.05);香烟提取物+阿托伐他汀组使人脐静脉内皮细胞形态改善,存活率、细胞上清液中的一氧化氮水平和细胞一氧化氮合酶活性升高(P < 0.05).说明阿托伐他汀能拮抗香烟提取物对血管内皮细胞的损伤作用,其机制可能与内皮细胞的生长、一氧化氮合成酶活性及一氧化氮释放有关.     

microRNA-192在晚期糖基化终产物诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化中的作用

目的探讨microRNA-192(miR-192)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人腹膜间皮细胞上皮-间叶转化(EMT)的调控作用。方法人腹膜间皮细胞、转染miR-192抑制物后人腹膜间皮细胞和转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞在含AGEs的培养基培养72 h,以M199培养基和含80 m M BSA的M199培养基为对照,然后运用实时荧光定量PCR法检测miR-192和mRNA的表达情况,运用蛋白质印迹法检测蛋白的表达情况。结果在AGEs刺激后,人腹膜间皮细胞miR-192、胶原蛋白I(Collagen I)mRNA、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05),而E-钙黏蛋白(E-cadherin)mRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05)。与转染miR-192抑制物阴性对照的人腹膜间皮细胞相比,转染miR-192抑制物的人腹膜间皮细胞miR-192、Collagen I mRNA、α-SMAmRNA和蛋白表达水平显著下降(P0.05),而E-cadherin mRNA和蛋白表达水平显著上升(P0.05)。结论 AGEs可能通过上调miR-192表达诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192抑物可能通过下调miR-192表达阻止AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT。miR-192在AGEs诱导人腹膜间皮细胞EMT中起重要调控作用。