Ri质粒人参转化系统的建立及鉴定

目的 :建立人参毛状根转化体系。方法 :利用含有Ri质粒的发根农杆菌Agrobacterium rhizogenes感染人参Panax ginseng进行毛状根诱导 ,利用PCR技术及TLC分析方法对毛状根进行鉴定。 结果 :首次从人参带叶幼茎处诱导出毛状根 ,用激素和AS(乙酰丁香酮 )处理可提高转化率并缩短转化时间。毛状根在无激素B5培养基上生长并失去向地性 ,月增长倍数可达 50倍 (鲜重 )。PCR分析证实农杆菌Ri质粒含有rolC序列 (564bp)的T DNA已整合到人参转化株的染色体组中 ,TLC分析证明T DNA特异的表达产物冠瘿碱在转化细胞中合成。人参毛状根中人参总皂苷含量为 2.486% (干重 ) ,而人参原药材总皂苷含量为 1.403% (干重 )。结论 :人参毛状根生长迅速 ,皂苷含量高于原药材 ,该体系的建立为利用生物技术工业化生产人参活性成分奠定了基础。     

发根农杆菌Ri质粒及在药用植物中的应用

近年来，随着西药抗药性及药源性疾病的增加，化学合成药由于合成困难，使得天然植物成为药用原料的主要来源之一，但由于盲目挖掘等原因，药用植物资源日渐匮乏，人工栽培品种又面临着品质退化等问题，植物中药用成分含量低，大规模提取会破坏生态平衡，用植物细胞培养的方法由于基因不稳定，需添加外源激素，不安全，大规模工业生产困难，使得从植物中获得药用产品受到很大限制？     

Ri质粒转化植物用于生产天然活性成分的研究进展(Ⅰ)

Ｒｉ质粒子转化植物产生的发根生长迅速，能合成与原植物相同或相似的次生代谢物，在生产植物天然活性成分方面具有广阔的应用前景，作者对Ｒｉ质粒的分类及转化植物的机制，发根农杆菌感染植物的方法及发根的产生与鉴定，发根培养物的特点等方面作了较详细的综述。     

仙鹤草对人肝癌HepG2细胞凋亡作用研究

目的：探讨仙鹤草丙酮提取物正丁醇层对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的仙鹤草丙酮提取物正丁醇层作用于体外培养的HepG2细胞,MTY法检测细胞生长抑制率,应用FCM检测细胞凋亡率。应用FCM检测细胞内活性氧的变化。结果：仙鹤草可显著抑制HepG2细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。结论：仙鹤草丙酮提取物正丁醇层能诱导细胞发生凋亡;细胞内活性氧的增加可能是其作用机制。     

人参皂苷次生代谢产物的合成研究

目的:在体外对人参皂苷Compound K的次生代谢产物棕榈酸酯(PM1)进行合成研究.方法:运用化学方法进行合成实验,使用硅胶柱色谱及高效液相色谱等方法进行分离,得到棕榈酸酯(PM1).结果:鉴定了棕榈酸酯(PM1)的化学结构,同时利用液相色谱测定了其转化率.结论:首次在体外合成了人参皂苷Compound K的次生代谢产物棕榈酸酯(PM1),合成产物平均转化率为27.59%.     

Ri质粒转化植物生产天然活性成分的研究进展(Ⅱ)

综述了影响发根生长和次生代谢产物合成的因素，用生物反应器培养植物发根的方法，提高发根次生代谢物含量的措施，以及发根培养物的次生代谢产物。     

桑寄生对培养的人HepG2细胞葡萄糖消耗作用的影响

目的：研究桑寄生对培养人HepG2细胞的葡萄糖消耗作用，初步探讨桑寄生的降糖作用机理。方法：采用人的培养的HepG2细胞，检测24h后培养液中葡萄糖的消耗量，用MTT法监测细胞增殖的情况。结果：桑寄生在高糖状态下可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加，对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用。结论：促进外周组织的葡萄糖代谢、提高肝细胞对胰岛素的敏感性可能是桑寄生防治2型糖尿病的作用机理之一。     

Ri质粒转化植物用于生产天然活性成分的研究进展(Ⅰ)

Ri质粒转化植物产生的发根生长迅速，能合成与原植物相同或相似的次生代谢物，在生产植物天然活性成分方面具有广阔的应用前景。作者对Ri质粒的分类及转化植物的机制，发根农杆菌感染植物的方法及发根的产生与鉴定，发根培养物的特点等方面作了较详细的综述。     

桑寄生对培养的人HepG2细胞葡萄糖消耗作用的影响

目的:研究桑寄生对培养人HepG2细胞的葡萄糖消耗作用,初步探讨桑寄生的降糖作用机理。方法:采用人的培养的HepG2细胞,检测24h后培养液中葡萄糖的消耗量,用MTT法监测细胞增殖的情况。结果:桑寄生在高糖状态下可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加,对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用。结论:促进外周组织的葡萄糖代谢、提高肝细胞对胰岛素的敏感性可能是桑寄生防治2型糖尿病的作用机理之一。     

人参皂苷Rg3及其代谢产物在大鼠体内组织分布研究

目的:建立人参皂苷Rg3和其代谢产物人参皂苷Rh2在大鼠各组织中的含量测定方法,探讨它们在大鼠各组织中的分布情况。方法:采用交叉给药设计,应用高效液相色谱法测定Wistar大鼠单次单剂量灌胃人参皂苷Rg3(50 mg/kg)后的各组织中人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2的浓度,从而计算出其在大鼠各组织中分布情况。结果:灌胃给予人参皂苷Rg3后,人参皂苷Rg3在大鼠各脏器中均能检出人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2,但是除了肝脏外,人参皂苷Rh2在各组织中的含量明显低于人参皂苷Rg3。结论:人参皂苷Rg3口服灌胃后,人参皂苷Rg3和人参皂苷Rh2均分布于大鼠各组织中,而肝脏和胃是人参皂苷Rg3主要代谢器官。     

甘草Ri质粒转化及不同理化因子对甘草毛状根生长的影响

目的:研究甘草毛状根的诱导及外界因子对其生长的影响。方法:用发根农杆菌Agrobacterium rhizo-genesLBA9402和R1601感染甘草Glycyrrhiza uralensis外植体。结果:2种发根农杆菌均能诱导甘草产生毛状根,LBA9402比R1601表现出较强的对甘草的感染能力,下胚轴的转化率高于子叶。在WP培养基上毛状根生长最快。光照对毛状根生长有抑制作用。毛状根中5种黄酮类化合物的总量比愈伤组织中高1.5倍,其中甘草查耳酮含量是愈伤组织中的15.5倍。结论:本实验所建立的甘草毛状根培养系统,为研究甘草毛状根大量培养生产黄酮类化合物奠定了基础。     

人参毛状根合成人参皂苷培养条件的优化

目的：对影响人参(Panax ginseng)状根生长及人参皂苷合成的培养条件进行了研究。方法：比较了不同培养基上人参毛状根和人参皂苷的含量变化。结果：人参毛状根在MS IBA0．5mg／l的培养液里预培养72h后，再转入MS基本培养液培养，经过6周的培养，人参总皂苷含量达到5．190％，人参皂苷(Re Rg)含量达到了0．3271％，人参毛状根干重增加98．74倍。结论：确定了最佳的培养基和培养条件，为工业化再生产提供了基础。     

黄连中胆碱的分离及其对小檗碱在HepG2 细胞中糖代谢作用的影响

目的:分离黄连亲水性成分,研究其对小檗碱在HepG2细胞中糖代谢作用的影响。方法:黄连亲水性部位高速逆流色谱制备后,硅胶柱色谱法进行分离。MTT法检测HepG2细胞活力,试剂盒检测细胞消耗的葡萄糖。结果:首次从黄连水溶性组分中分离出胆碱。在实验浓度范围内,胆碱能显著增强小檗碱促进细胞吸收葡萄糖的能力,并显著改善小檗碱对细胞生长抑制的影响。与同剂量的小檗碱相比,100 mg.L-1胆碱与38 mg.L-1小檗碱混合后,细胞对葡萄糖的消耗增加34%,存活率上升到75%。结论:胆碱在增强小檗碱促进细胞吸收葡萄糖和减小小檗碱对细胞的毒副作用方面存在显著协同作用。     

PhaseoloidesideE诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,探讨phaseoloideside E(PE)的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法,检测不同浓度的PE处理48 h后对HepG2细胞的细胞毒性效应;应用光学显微镜、荧光显微镜观察PE处理下的细胞形态学变化;用DNA琼脂糖凝胶电泳技术检测凋亡,并用免疫印迹法检测PE对凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2表达水平的影响。结果:PE对HepG2细胞的生长有明显的细胞毒性效应;直接形态显微观察及Hoechst 33258荧光染色皆可见典型的凋亡细胞形态学特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示给药组出现明显的DNA梯状凋亡带,而对照组没有出现梯状条带;免疫印迹结果显示PE可以增加Bax表达并减少Bcl-2表达。结论:PE能够诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提示PE诱导的Bax,Bcl-2蛋白的表达水平变化可能与它的凋亡诱导效应紧密相关。     

藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对肝癌 HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制及凋亡的影响.方法:采用血清药理学方法制备藤茶总黄酮、二氢杨梅素、环磷酰胺(CTX)含药血清以及对照血清,作用于肝癌HepG2细胞,MTT法检测各种血清对HepG2细胞增殖的影响;倒置相差显微镜观察各种含药血清作用后肝癌HepG2细胞的形态学变化;AnnexinV/7AAD双标记法流式细胞术检测早期细胞凋亡的情况.结果:MTT法和显微镜观察显示藤茶总黄酮和二氢杨梅素20%含药血清能不同程度抑制HepG2细胞增殖,可致细胞形态学改变;AnnexinV/7AAD双标记法检测显示藤茶总黄酮20%含药血清可促肝癌HepG2细胞早期凋亡,但二氢杨梅素20%含药血清对肝癌HepG2细胞早期凋亡没有影响.结论:藤茶总黄酮能抑制肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其产生早期凋亡.     

二氢姜黄素对油酸诱导的非酒精性脂肪肝体外模型的预防作用与机制研究

目的研究二氢姜黄素对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的预防作用与机制。方法 HepG2细胞经0.5 mmol/L油酸(OA)与二氢姜黄素(0、5、10、20μmol/L)同时处理24 h后,检测细胞内三酰甘油(TG)、活性氧自由基(ROS)、一氧化氮(NO)含量以及细胞对荧光D-葡萄糖同系物(2-NBDG)的摄取能力;采用RT-qPCR和Western blotting方法检测细胞中糖脂代谢与氧化应激相关基因固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1C)、Patatin样磷酯酶结构域蛋3(PNPLA3)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)、蛋白激酶B(AKT)和核转录因子Nrf2(Nrf2)的mRNA与蛋白表达量。结果与对照组相比,OA处理组细胞内TG、ROS及NO含量明显上升,对2-NBDG的摄取能力降低,SREBP-1C和PNPLA3的mRNA及蛋白表达上调,PPARα、PI3K、pAKT/AKT和Nrf2的蛋白表达下调;与OA处理组相比,OA+二氢姜黄素组细胞内TG与NO含量降低,对2-NBDG的摄取能力升高,SREBP-1C和PNPLA3的mRNA与蛋白表达下调,PPARα、PI3K和Nrf2的蛋白表达及pAKT/AKT上调。结论二氢姜黄素对体外NAFLD细胞模型的预防作用机制包括:通过抑制脂合成关键基因(SREBP-1C和PNPLA3)及诱导脂氧化关键基因PPARα的表达,预防肝细胞脂堆积;通过上调PI3K的表达及pAKT/AKT水平,缓解胰岛素抵抗,促进肝细胞对葡萄糖的摄取;通过上调Nrf2的表达量,降低细胞内NO含量,缓解肝细胞的炎症反应及氧化损伤。     

青钱柳提取物对HepG2 2.2.15细胞HBsAg和HBeAg表达的影响

目的研究青钱柳提取物体外抗乙肝病毒作用。方法青钱柳用75%乙醇提取后按溶剂极性萃取,获得的三氯甲烷部位经柱层析得到Fr.2组分。体外培养HepG2 2.2.15细胞,MTT法检测青钱柳提取物Fr.2组分对HepG22.2.15细胞的细胞毒作用,用ELISA法检测HepG2 2.2.15细胞培养液中HBsAg和HBeAg的表达。结果青钱柳提取物Fr.2组分对HepG2 2.2.15细胞无明显的细胞毒作用。与对照组比较,Fr.2组分对HBsAg和HBeAg的表达均有显著性抑制作用(P<0.01或0.05)。结论青钱柳提取物体外具有较强的抗乙肝病毒作用。     

齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的：采用高浓度胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型,观察齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法：用CCK-8法筛选齐墩果酸作用于HepG2细胞的实验浓度,然后用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的齐墩果酸（0.1、1、10、100μmol·L-1）、吡格列酮（10μmol·L-1）干预,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量。结果：1不同浓度齐墩果酸对HepG2细胞增殖无明显影响。2与对照组比较,高浓度胰岛素作用24 h后,模型组葡萄糖消耗量明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,齐墩果酸组HepG2细胞葡萄糖消耗量随浓度增加而增加,成一定的量效关系,浓度为10μmol·L-1和100μmol·L-1时葡萄糖消耗量显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结论：齐墩果酸能改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

青藤碱对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的:研究青藤碱对人肝癌HepG2细胞增殖的影响及其机制。方法:以不同浓度青藤碱处理体外培养的A549细胞,采用MTT法检测24h、48h、72h后HepG2细胞的增殖状态;流式细胞仪测定青藤碱处理过的细胞凋亡、细胞周期分布及凋亡率,相对定量RT-PCR测定Cox-2mRNA的表达、Western blot检测细胞凋亡相关基因Cox-2的表达。结果:青藤碱能显著抑制人肝癌HepG2细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性。青藤碱处理组细胞早期凋亡率较对照组升高,呈时间剂量依赖性。相对RT-PCR结果显示其能下调HepG2细胞Cox-2mRNA的表达。Western blot检测Cox-2蛋白表达明显抑制。结论:青藤碱在体外能有效抑制肝癌细胞增殖。     

真菌诱导子对人参毛状根皂苷生物合成和生长的影响

目的 :考察真菌诱导子对人参毛状根的生长和人参皂苷生物合成影响。方法 :提取黄瓜炭疽病菌Colletorichumlagnarinm、青菜炭疽病菌Phomafiltrate、棉花枯萎病菌Fusariumoxysponum、黑曲霉Asperillusniger中的真菌诱导子与人参毛状根共培养 ,应用HPLC及比色法对培养物中总苷及几种单体皂苷进行分析测定。结果 :真菌诱导子不但能影响人参毛状根总苷的合成量 ,也能使某些单体皂苷消失或增加 ,如培养液中黑曲霉多糖诱导子增加到 20mg·L^-1浓度时 ,使总苷含量增加到 3.649% ,而单体皂苷中Rg₁和Re未检出 ,Rg₂ 和Rb₁的含量则有明显增加 ,并可促进人参毛状根的生长。结论 :真菌诱导子对人参毛状根某些皂苷的合成具有特异性 ,同时也影响人参毛状根的生物量。培养过程中通过外源性诱导子的添加 ,有利于人参毛状根次生代谢产物的定向积累。