超声联合紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株A2780/DDP增殖和凋亡的影响

目的:探讨超声联合紫杉醇微泡对人卵巢癌细胞A2780/DDP细胞的增殖和凋亡的影响。方法:将人卵巢癌细胞株A2780/DDP随机分为5组:对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、紫杉醇微泡组和紫杉醇微泡+超声组。采用噻唑蓝(Methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测作用24、48 h和72 h后卵巢癌细胞的增殖活性,并用Hochst 33258和TUNEL染色法检测细胞凋亡情况。结果:MTT法检测显示紫杉醇微泡+超声组24、48 h和72 h抑制率分别为(37.20±2.01)%、(51.60±2.10)%和(57.47±2.85)%,明显高于其他各处理组(P<0.05);Hochst 33258和TUNEL染色均显示紫杉醇微泡+超声组凋亡率最高,作用24 h后的凋亡率为(46.10±4.15)%,明显高于其余各组(P<0.05)。结论:超声联合紫杉醇微泡能明显抑制人卵巢癌细胞A2780/DDP的增殖和诱导其凋亡。     

OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用

目的 研究卵巢癌特异性结合肽（OSTP）及联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长及凋亡的影响.方法 体外培养卵巢癌A2780细胞,随机分为4组：溶剂对照组（1640和0.1％ DMSO组）、OSTP组、紫杉醇组、OSTP联合紫杉醇组.采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）检测OSTP对A2780细胞生长的影响;用Annexin-V-FITC和PI双染法标记A2780细胞,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT法检测OSTP以不同浓度作用于卵巢癌A2780细胞时,可对该细胞的生长起到抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现：不同浓度的OSTP（20、40、80、160、320μmol/L）对A2780细胞的凋亡率分别7.88％、8.348％、8.727％、9.393％和10.68％,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,提示OSTP可诱导细胞凋亡.OSTP和紫杉醇联合应用,在不同的预处理组（加OSTP80μ mol/L 0、3、6、12h）后再加紫杉醇10μmol/L作用48h,结果发现细胞凋亡率分别是39.40％、53.09％、48.18％和45.62％,均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值,且差异有统计学意义（P ＜0.001）.提示OSTP能增强紫杉醇诱导的卵巢癌A2780细胞凋亡作用.结论 OSTP对卵巢癌A2780细胞有生长抑制及凋亡作用,尤其是OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,对于探讨和开发OSTP作为靶向化疗增敏剂治疗卵巢癌有良好的应用前景.     

载多西紫杉醇脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌细胞增殖和凋亡影响的初步研究

目的：初步研究载多西紫杉醇脂质微泡（docetaxel-loaded lipid microbubbles,LDLM）联合超声靶向微泡破裂（ultrasound targeted microbubbles destruction,UTMD）对人SMMC-7721肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法：体外培养人SMMC-7721细胞,确定适宜的多西紫杉醇浓度,细胞分为6组,比较各组的细胞增殖抑制率、超微结构改变、凋亡率和细胞周期分布。结果：载药微泡+超声组的细胞增殖抑制率明显高于其他组,与其他各组相比差异有统计学意义（P=0.000）;电镜下观察载药微泡+超声组的凋亡细胞最多;流式细胞仪检测结果显示载药微泡+超声组的细胞凋亡率最高（P=0.000）,LDLM+US组G0/G1期细胞比例明显减少,为（0.79±0.27）%（P=0.000）,G2/M期细胞比例升高最明显,为（90.54±0.48）%（P=0.000）。结论：LDLM联合UTMD可抑制人SMMC-7721细胞的增殖、促进其凋亡,为后续进一步从蛋白、基因层面探索其作用的机制奠定了重要基础。     

过氧化氢联合低频超声波诱导卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的研究

目的探讨过氧化氢联合超声波诱导人卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的效果。方法体外培养人卵巢癌A2780/DDP细胞,MTT法研究过氧化氢对卵巢癌A2780/DDP细胞生长抑制情况,选择过氧化氢对A2780/DDP细胞作用的合适作用参数;实验分为对照组,0.5 W/cm2、30 s超声组,10μmol/L过氧化氢组,10μmol/L过氧化氢联合0.5 W/cm2、30 s超声组;不同因素作用A2780/DDP细胞24 h后,Hoechst33258染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测各处理因素作用A2780/DDP细胞的凋亡率;Western blot检测各组细胞caspases-9蛋白表达量的改变。结果对照组,0.5 W/cm2、30 s超声组和10μmol/L过氧化氢组无明显凋亡改变,而10μmol/L过氧化氢联合0.5 W/cm2、30 s超声组与对照组之间比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论过氧化氢联合超声波能增强诱导人卵巢癌A2780/DDP细胞凋亡的作用。     

载多烯紫杉醇脂质微泡增强人胰腺癌BxPC3细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

制备载多烯紫杉醇脂质超声微泡,并研究其联合超声靶向微泡破裂技术（UTMD）对人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,为临床应用载多烯紫杉醇超声造影剂治疗胰腺癌提供理论依据。方法 采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的脂质超声微泡,检测其粒径、zeta电位、载药量、包封率等性质,MTT法检测IC50,CCK-8法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并与单纯多烯紫杉醇药物组、多烯紫杉醇药物+超声组等进行比较。结果 载多烯紫杉醇超声微泡平均粒径1.6 μm,微泡的包封率为64.2%,平均载药量为16.1%;载多烯紫杉醇脂质微泡组的细胞毒性作用强于其他各组（P<0.01）,细胞凋亡率高于其他各组（P<0.01）;载多烯紫杉醇脂质微泡组G2/M期细胞增多,与其他组比较差异有统计学意义（P<0.01）。 结论 载多烯紫杉醇脂质微泡联合UTMD能够增加G2/M 期细胞阻滞,增强对BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;载多烯紫杉醇脂质微泡有望成为一种治疗胰腺癌的新型药物载体。     

超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对卵巢癌A2780/DDP细胞生物学活性影响及其机制研究

目的 探讨超声辐照携带miR-520c-3p和miR-132微泡对卵巢癌A2780/DDP细胞生物学活性影响,并进行机制研究。方法 将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为A组(空白对照)、B组(微泡造影剂+超声辐照)、C组(miR-520c-3p mimics+miR-132 negative control+微泡造影剂+超声辐照)、D组(miR-132 mimics+miR-520c-3p negative control+微泡造影剂+超声辐照)、E组(miR-520c-3p mimics+miR-132 mimics+微泡造影剂+超声辐照),48h后收集细胞。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-520c-3p、miR-132表达水平以及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)信使核糖核酸(mRNA)相对表达量,蛋白免疫印迹法测定GPC3和Hippo信号通路蛋白相对表达量。MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果 与A组和B组比较,C组和E组miR-520c-3p表达水平显著上调,D组和E组m...     

超声靶向介导载CD-TK双自杀基因的微泡对肺癌的治疗作用

目的：制备载胞苷脱氨酶-胸腺嘧啶激酶 （colicytocinedeaminase-thymidinekinase,CD-TK）双自杀基因的超声微泡,检测其对肺癌的杀伤效应。方法：制备载CD-TK双自杀基因的微泡,观察形态和大小,用碘化丙啶染质粒,观察荧光和计算微泡与基因的结合率。培养肺癌H1299细胞系和建立肺癌裸鼠模型,随机分为对照、超声（ultrasound,U）+微泡（microbubble,M）+CD-TK、U+M+CD-TK+5-FC（5- fluorcytosine,5-氟胞嘧啶）、U+M+CD-TK +GCV（ganciclovir,丙氧鸟苷）、U+M+CD-TK +5-FC+GCV 5组,每组1×107个细胞。微泡转染H1299肺癌细胞,24 h后观察细胞绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）荧光表达情况,测定细胞GFP转染效果和每组24 h细胞凋亡和周期。体内动物实验,每组6只裸鼠,对照组注射200 μL PBS,其余各组尾静脉注射等量的载CD-TK双自杀基因的微泡。观察微泡的显影,同时在肿瘤部位超声辐照转染基因,每组按实验分组连续腹腔注射5-FC、GCV 一周,每周记录每只裸鼠肿瘤的最长径和最短径,计算并记录肿瘤的体积变化。第5周取裸鼠肿瘤标本。免疫荧光测TdT（TUNEL法）和PCNA的表达,评估肿瘤组织细胞凋亡和增殖情况。结果：成功制备出载CD-TK双自杀基因的微泡,无毒前药5-FC和GCV联合载CD-TK双自杀基因的超声微泡治疗效果明显,有促进凋亡[凋亡率（28.45±1.75）%]、抑制增殖作用[S期（61.40±4.31）%],疗效明显优于对照组及单药组（5-FC组P=0.002和GCV组P=0.012,对照组P=0.000）。双药联合超声辐照载基因微泡组的肿瘤体积最小、质量最小、凋亡细胞最多、增殖受抑制最明显。结论：无毒前药5-FC+GCV联合微泡载CD-TK双自杀基因能促进肺癌细胞凋亡,抑制其增殖,对肺癌有明显杀伤作用。     

稳定过表达XAF1基因对A2780卵巢癌细胞生物学功能的影响

目的 构建稳定过表达XAF1基因A2780卵巢癌细胞株,并观察XAF1基因对卵巢癌细胞增殖、凋亡、细胞周期及对紫杉醇敏感性的影响。方法 分别将质粒pcDNA3.1（+）和pcDNA3.1（+）-XAF1转染至卵巢癌细胞A2780,通过质粒抗性标记（遗传霉素G418）筛选得到阴性对照细胞株（A2780/Negative control, A2780/NC）和稳定表达XAF1的细胞株（A2780/XAF1）;通过行细胞克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖及对紫杉醇的敏感性,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡。结果 成功构建了稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1,细胞形态无明显变化;与A2780/NC相比,A2780/XAF1克隆形成能力能力更低（P= 0.0016）,细胞贴壁后第1天和第3天增殖活性更低（P=0.009,0.0035）,两组细胞的细胞周期分布差异存在统计学意义（P< 0.0001）,两两比较结果显示A2780/XAF1组G2-M期细胞百分比显著增加（P<0.001）。在无凋亡刺激、无血清培养及紫杉醇诱导下,A2780/XAF1的凋亡率均比A2780/NC更高（P<0.001）;在不同紫杉醇浓度作用下,A2780/XAF1的增殖活性均显著低于A2780/NC（P<0.001）,且A2780/XAF1的紫杉醇半数抑制浓度显著低于A2780/NC。结论 成功构建稳定表达XAF1的卵巢癌细胞A2780/XAF1;XAF1调控卵巢癌细胞A2780的增殖、凋亡及细胞周期,并增加了卵巢癌对紫杉醇的敏感性。     

LHRHa靶向紫杉醇脂质体的制备及体外抗肿瘤作用

目的：制备促黄体激素释放激素类似物（Luteinizing hormone releasing hormone analogues,LHRHa)靶向紫杉醇脂质体（Paclitaxel liposomes,PTX-Lipo）,研究其在体外增强紫杉醇（Paclitaxel,PTX）对卵巢癌A2780/DDP细胞的抑制作用。方法：采用薄膜超声法制备PTX-Lipo与LHRHa靶向紫杉醇脂质体（LHRHa-Paclitaxel liposomes,LHRHa-PTX-Lipo）,用透射电镜考察脂质体形态;高效液相色谱法测定2种PTX-Lipo的包封率;激光共聚焦法通过卵巢癌A2780/DDP细胞对4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑荧光素的摄取检测来反映细胞对NBD-Lipo与NBD-LHRHa-Lipo的摄取情况;MTT法及细胞克隆形成实验检测LHRHa-PTX-Lipo体外对卵巢癌细胞的生长抑制情况。-结果：制备LHRHa-PTX-Lipo的平均粒径123.4 nm,包封率在90%以上;A2780/DDP细胞对NBD-LHRHa-Lipo组的荧光摄取明显高于NBD-Lipo组;LHRHa-PTX-Lipo对A2780/DDP细胞的生长及克隆形成抑制明显高于PTX组及PTX-Lipo组（P＜0.05）。结论：采用薄膜超声法制备的LHRHa-PTX-Lipo可使药物在靶部位聚集,增强药物对卵巢癌细胞的抑制作用。     

2种人卵巢癌细胞乏氧耐药模型的比较研究

目的：采用二氯化钴（cobaltous chloride,CoCl2）化学诱导法构建人卵巢癌细胞株A2780和SKOV3的乏氧耐药模型,并比较二者耐药特性。方法：（1）体外培养的A2780和SKOV3细胞分别加入不同浓度CoCl2培养液作用12、24、48、72 h,采用MTT法检测其增殖活性及对紫杉醇的耐药倍数;（2）采用150 μmol/L CoCl2培养液作用24 h构建乏氧环境,RT-PCR检测常氧和乏氧条件下乏氧诱导因子（hypoxia inducible factor,HIF）1α mRNA的表达情况。结果：２种细胞的增殖抑制率与CoCl2呈剂量-时间依赖关系（A2780组：F=1 165.416,P＝0.000;SKOV3组：F=2 802.394,P＝0.000）。随着CoCl2浓度的增加,A2780和SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数增加（F=7 842.711,P＝0.000）;在相同CoCl2浓度作用下,SKOV3细胞对紫杉醇的耐药倍数明显高于A2780（50 μmol/L组：t=-48.287,P＝0.000;100 μmol/L组：t=-263.205,P＝0.000;150 μmol/L组：t=-143.305,P＝0.000）。150 μmol/L CoCl2作用24 h,2种细胞耐药倍数分别为（9.84±0.11）和（21.08±0.08）,并出现稳定的HIF-1α mRNA表达,其中SKOV3细胞HIF-1α mRNA的表达增加量明显高于A2780细胞（t=-5.573,P＝0.000）。结论：CoCl2化学诱导法可成功建立卵巢癌细胞乏氧耐药模型,其耐药倍数与细胞类型有关。在相同条件下,SKOV3细胞株乏氧耐药模型较A2780更易建立,是乏氧耐药逆转研究较为理想的细胞株。     

茶多酚联合顺铂对肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响

目的 观察茶多酚（TP）、顺铂（DDP）及两者联合对人肺癌细胞A549 增殖和凋亡的影响,探 讨TP 联合DDP 联合影响A549 细胞生长的机制。方法 人肺癌细胞A549 经TP、DDP 单独或联合处理后, 将A549 细胞分成TP 组、DDP 组、TP 联合DDP 组（TP+DDP 组）及空白对照组,MTT 法检测细胞增殖 情况,Annexin V/PI 双染流式细胞术分析细胞凋亡,Western blot 检测细胞中p-AKT 和p-ERK1/2 的表达。 结果 TP 组、DDP 组及TP+DDP 组细胞增殖率分别为（91.0±3.6）%、（84.3±5.0）% 和（70.3±4.2）%, TP+DDP 组的细胞增殖率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组;流式细胞 术示TP 组细胞凋亡率无明显影响,TP+DDP 组凋亡率与DDP 组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;DDP 组细胞中p-AKT、p-ERK1/2 蛋白表达降低,TP 联合DDP 组中p-AKT、p-ERK1/2 的蛋白表达与DDP 组 比较,差异有统计学意义（P <0.05）,TP+DDP 组低于DDP 组。结论 TP 与DDP 联合用药可增强DDP 的抑 制增殖和促进凋亡作用,其机制可能与下调AKT 的表达和ERK1/2 蛋白的磷酸化有关。     

载多烯紫杉醇脂质微泡增强人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的制备载多烯紫杉醇脂质超声微泡,并研究其联合超声靶向微泡破裂技术(UTMD)对人胰腺癌BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法采用机械振荡法制备载多烯紫杉醇的脂质超声微泡,检测其粒径、zeta电位、载药量、包封率等性质,MTT法检测IC50,CCK-8法检测细胞毒性作用,流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并与单纯多烯紫杉醇药物组、多烯紫杉醇药物+超声组等进行比较。结果载多烯紫杉醇超声微泡平均粒径1.6μm,微泡的包封率为64.2%,平均载药量为16.1%;载多烯紫杉醇脂质微泡组的细胞毒性作用强于其他各组(P<0.01),细胞凋亡率高于其他各组(P<0.01);载多烯紫杉醇脂质微泡组G2/M期细胞增多,与其他组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论载多烯紫杉醇脂质微泡联合UTMD能够增加G2/M期细胞阻滞,增强对BxPC3细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;载多烯紫杉醇脂质微泡有望成为一种治疗胰腺癌的新型药物载体。     

硫化氢对顺铂诱导近端肾小管 上皮细胞凋亡的干预研究

目的 探讨硫化氢H2S 对顺铂（DDP）诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预作用。方法 研究分 为阴性对照组、DDP 组、DDP+ 硫氢化钠NaHS 组。DDP 组：DDP 浓度为0、1、2、5、10、20 和40 mg/L ； DDP+NaHS 组：NaHS 浓度分别为0、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 和2.0 mmol/L，加DDP（20 mg/L）共同作用。噻唑蓝 （MTT）实验：DDP 组、DDP+NaHS 组与人近端肾小管上皮细胞株（HK-2 细胞）共同培养，24 h 后测光密度（OD） 值。NaHS（0.5 和1.0 mmol/L）加DDP（20 mg/L）与HK-2 细胞共同培养24 h。4，6- 联脒-2- 苯基吲哚（DAPI）， Annexin V-FITC/PI 染色通过显微镜观察各组细胞的形态学改变。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测各组细胞 凋亡率。结果 MTT 实验：0、1、2、5、10 和20 mg/L DDP 浓度的OD 值分别为（0.270±0.064）、（0.229±0.022）、 （0.198±0.024）、（0.189±0.069）、（0.188±0.030） 和（0.165±0.012），OD 值随DDP 浓度上升逐渐下降， 在 20 mg/L 低于阴性对照组（P <0.05）。20 mg/L DDP 加浓度分别为0.2、0.4、0.5、0.8 和1.0 mmol/L NaHS 的OD 值分别为（0.173±0.051）、（0.186±0.023）、（0.259±0.050）、（0.263±0.033） 和（0.268±0.098）， 以 上与浓度为20 mg/L DDP 的OD 值（0.153±0.017）比较，差异有统计学意义（P <0.05）。DAPI、Annexin VFITC/ PI 染色荧光显微镜显示，对照组HK-2 细胞平均凋亡细胞数为（4.230±1.015），20 mg/L DDP 影响下 为（35.020±6.079），两者差异有统计学意义（P <0.05），DDP 组高于阴性对照组。DDP+NaHS 组在0.5 和 1.0 mmol/L 的平均凋亡细胞分别为（22.550±2.912） 和（9.780±2.063），差异有统计学意义（P <0.05）， DDP+NaHS 组低于DDP 组。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测，阴性对照组HK-2 细胞凋亡率（5.167± 0.612）%，在20 mg/L DDP 影响下，为（31.598±1.014）%，细胞凋亡率增加（P <0.05）。合用NaHS 凋亡减 少，在0.5 和1.0 mmol/L 的凋亡率为（18.375±2.239）% 和（11.636±1.233）%，差异有统计学意义（P <0.05）， DDP+NaHS 组低于DDP 组。结论 NaHS 对DDP 导致的近端肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用。     

IL-17A促进卵巢癌顺铂耐药的体外机制探讨

目的:探究IL-17A促进卵巢癌顺铂（DDP）耐药的体外机制。方法:应用流式细胞术分析外源性rhIL-17A对DDP诱导的A2780（顺铂敏感卵巢癌细胞株）和OVCAR3（顺铂耐药卵巢癌细胞株）细胞的凋亡和周期分布变化的影响,并以IL-17RAmAb进行相应的阻断实验。结果:rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的凋亡无显著影响;但可显著降低DDP对A2780和OVCAR3细胞的毒性作用（P<0.05）,以IL-17RAmAb进行阻断实验可部分消除rhIL-17A对DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞凋亡的阻滞作用（P<0.05）。rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的周期分布无显著影响;但可显著抑制 DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞周期阻滞（P <0.05）,使A2780和OVCAR3细胞的G0/G1期比例增加,G2+S期比例减少。结论: IL-17A可通过IL-17RA抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡,同时可抑制DDP诱导的卵巢癌细胞周期阻滞,从而加剧以DDP为基础的卵巢癌化疗耐药性。     

XIAP基因与耐紫杉醇卵巢癌细胞A2780/Taxol耐药关系的研究

目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因与卵巢癌对紫杉醇耐药的相关性。方法 以5、10、20、40、80、160、320 ng/mL的紫杉醇处理卵巢癌紫杉醇敏感细胞A2780和耐药细胞A2780/T,噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的抑制率（IR）, 逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、蛋白质印记（Western blot）检测紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后XIAP基因和蛋白的表达;将A2780/T细胞分为空转染组（转染空载体质粒）、小干扰RNA（siRNA）-XIAP（siRNA-XIAP）组（转染siRNA-XIAP质粒）、非特异性转染组（转染非特异性质粒）、空白对照组（不转染质粒）,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞XIAP基因和蛋白的表达,并加入含不同质量浓度的紫杉醇（0、1 000、1 500、2 000、2 500 ng/mL）,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 不同质量浓度紫杉醇处理后,A2780细胞IR随紫杉醇质量浓度的增加而增高（P<0.05）,A2780/T细胞IR无明显变化。紫杉醇100 ng/mL处理A2780和A2780/T细胞后,A2780细胞XIAP mRNA的表达低于紫杉醇未处理组（P<0.05）,A2780/T细胞中XIAP mRNA的表达与紫杉醇未处理组差异无统计学意义(P>0.05),但A2780/T细胞XIAP mRNA和蛋白表达均高于A2780紫杉醇处理组（P均<0.05）;siRNA-XIAP组XIAP mRNA和蛋白的表达均低于其他各组（P<0.05）,在紫杉醇2 000 ng/mL及2 500 ng/mL作用下,siRNA-XIAP组凋亡率高于其他各组（P<0.05）。结论 卵巢癌对紫杉醇耐药与XIAP基因的高表达有关,特异性的siRNA可通过降低XIAP的表达,促进细胞凋亡,增加耐药癌细胞对紫杉醇的敏感性。     

DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂对人肝癌HepG2细胞凋亡及增殖的影响

目的 探讨DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术对人肝癌HepG2细胞凋亡以及Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5蛋白表达的影响。方法 体外培养HepG2细胞并分为9组：空白对照组（Con）,药物组（Drug）,药物联合超声组（Drug+US）,空白微泡组（MBs）,空白微泡联合超声组（MBs+US）,载药微泡组（DLLM）,载药微泡联合超声组（DLLM+US）,DR5介导的靶向载药微泡组（DR5-DLLM）,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组（DR5-DLLM+US）。Drug、Drug+US、DLLM、DLLM+US、DR5-DLLM、DR5-DLLM+US组中的多烯紫杉醇以IC50的药物浓度（5 nmol/L）给药,Con组加入0.5 mL生理盐水,超声以0.5 W/cm2的声强辐照45s,分组处理后,继续培养细胞24 h,分别用CCK-8、TUNEL、流式细胞术检测各组细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,并检测Bcl-2、NF-κB、Caspase-8、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 与其他组相比,DR5介导的靶向载药微泡联合超声组对HepG2细胞的增殖抑制作用、凋亡诱导作用和G2/M细胞周期阻滞作用更强（P<0.001）,且该组的Bcl-2 和 NF-κB mRNA 和蛋白表达水平明显降低（P<0.001）,而 DR5 和 Caspase-8 的 mRNA 和蛋白表达水平明显升高（P< 0.001）。结论 DR5介导的载多烯紫杉醇靶向脂质微泡联合超声靶向微泡破裂技术可通过下调Bcl-2和NF-κB表达、上调Caspase-8和DR5表达,从而增强对人肝癌HepG2细胞周期阻滞、细胞增殖抑制和细胞凋亡诱导作用,因此有望成为一种新型、有效的肝癌超声靶向治疗方法。     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞耐药性和髓样分化因子88关系的研究

目的：研究卵巢癌亲本A2780细胞与卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol生物学特性及与髓样分化因子（Myeloid dif－ferentiation factor 88,MyD88）的关系。方法：应用CCK-8法检测A2780细胞和A2780/Taxol细胞的耐药性和耐药指数,采用流式细胞法检测A2780和A2780/Taxol细胞的细胞周期。应用罗丹明123（Rhodamine 123,Rh123）排出实验测定P-糖蛋白（P-gly－coprotein,P-gp）表达。应用Western blot检测A2780和A2780/Taxol细胞中P-gp的表达情况。应用细胞免疫化学检测A2780和A2780/Taxol细胞中MyD88、P-gp的表达情况。结果：A2780与A2780/Taxol相比,A2780/Taxol生长缓慢,呈G1期阻滞;CCK-8结果显示A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50为（36.81±2.05） μg/ml,A2780细胞对紫杉醇的IC50为（1.40±0.18） μg/ml;两者的耐药指数（Resistance index,RI）为26.35。Rh123排出实验显示A2780/Taxol平均荧光强度显著降低。Western blot检测发现A2780/Taxol的P-gp表达比A2780明显升高（P<0.05）。细胞免疫化学检测发现A2780/Taxol中的P-gp和MyD88表达明显高于A2780细胞。结论：A2780/Taxol细胞株具有明确的耐药性,紫杉醇耐药与MyD88的表达密切相关,该细胞株可用于卵巢癌紫杉醇耐药的基础研究。     

超声联合微泡对比剂在宫颈癌SiHa细胞低浓度顺铂化疗中的增敏作用

目的研究超声联合微泡对比剂SonoVue增强宫颈癌SiHa细胞对低浓度化疗药物顺铂敏感性的作用。方法将SiHa细胞培养后分为空白对照组（Control）、超声微泡空化组（MEUS）、低顺铂浓度组（顺铂IC25）、低顺铂浓度联合空化组（顺铂IC25+MEUS）。选用机械指数（MI）0.5、频率4MHz超声波联合对比剂SonoVue处理MEUS组及顺铂IC25+MEUS组的SiHa细胞。处理24h后,用CCK-8法检测细胞增殖活性,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Control组凋亡率为（0.855±0.427）%,MEUS组凋亡率为（1.019±0.309）%,差异无统计学意义（P＞0.05）;而顺铂IC25+MEUS组凋亡率为（8.453±0.265）%明显高于顺铂IC25组凋亡率（4.340±0.271）%（P＜0.001）。结论机械指数0.5、频率4MHz时,超声联合对比剂SonoVue并不会引起细胞的凋亡;但加入顺铂后,超声联合微气泡显著增强了宫颈癌SiHa细胞对顺铂的敏感性,具有化疗增敏作用。     

Flavopiridol联合顺铂对人U2-OS细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Flavopiridol（FP）联合顺铂（DDP）对人骨肉瘤细胞株（U2-OS）的增殖及凋亡的作用。方法将不同浓度的FP(0、50、100、200、400、1000nmol·L^-1)分别与人U2-OS细胞共同培养24、48h后,采用MTT法检测U2-OS细胞增殖,以确定FP作用48h的半数抑制浓度（IC50）;采用Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡的形态学改变;采用流式细胞术测定U2-OS细胞凋亡率。然后将培养后的U2-OS细胞分为4组:空白对照组、单用FP组、单用DDP组、联合用药组（FP+DDP组）,每组设5个复孔,分别加入0.1%DMSO、FP（IC50）、DDP、FP（IC50）+DDP处理,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 FP对人U2-OS细胞的增殖抑制作用呈现浓度依赖性,作用48h的IC50值为340nmol·L^-1,Hoechst33258染色后细胞出现明显的核固缩、核浓聚等凋亡改变,随着FP浓度的增加,流式细胞术检测细胞凋亡率升高。FP+DDP联合作用于人U2-OS细胞,随着时间的增加抑制率逐渐增大（P<0.05）;与FP和DDP单独用药组比较,抑制率、凋亡率及周期阻滞差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 FP可明显抑制人U2-OS细胞增殖并诱导凋亡,联合顺铂对人U2-OS细胞的增殖抑制及凋亡促进具有协同作用。     

异丙酚对卵巢癌进展和顺铂敏感性的影响及机制

目的 探讨异丙酚对卵巢癌进展及顺铂(DDP)敏感性的影响及机制。方法 取对数生长期的卵巢癌细胞A2780和耐DDP卵巢癌细胞A2780/DDP,分别与异丙酚(0、1、5、10及20 mg/L)和DDP(0、5、10、20、40及80μmol/L)进行孵育,采用CCK-8法观察A2780和A2780/DDP细胞存活率;取对数生长期的A2780和A2780/DDP细胞分为Control组(等量培养基)、异丙酚组(10 mg/L异丙酚)、DDP组(10μmol/L DDP)、异丙酚+DDP组(10 mg/L异丙酚+10μmol/L DDP),克隆形成实验观察细胞克隆数,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-XL(Bcl-xl)单克隆抗体、细胞凋亡调节因子(Bim)及活化半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)表达,Transwell检测各组A2780和A2780/DDP细胞的侵袭;裸鼠移植瘤实验观察各组肿瘤生长情况。结果 A2780、A2780/DDP细胞活力随异丙酚和DDP浓度升高均下降,A2780/DDP细胞系半抑制浓度(IC_...