姜黄素通过TGF-β1信号通路抑制人肺泡横纹肌肉瘤细胞株PLA-802的机制研究

目的:观察姜黄素对人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RMS)细胞株PLA-802的抑制作用,以及对细胞内TGF-β1/Smad 4的表达的影响,探索姜黄素抑制RMS细胞生长的机制。方法:体外培养人RMS细胞株PLA-802,并用不同浓度的姜黄素作用不同的时间。用MTT检测姜黄素对PLA-802细胞生长情况的影响,用流式细胞术检测细胞周期的变化情况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞内TGF-β1和Smad 4的mRNA和蛋白水平的表达。结果:MTT结果显示姜黄素显著降低了PLA-802细胞的存活率(P<0.05)。流式细胞结果表明姜黄素明显降低了S期而增加了G1期(P<0.05)。而TGF-β1和其下游因子Smad4的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到姜黄素的抑制,且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论:姜黄素发挥其抑制PLA-802细胞的作用可能是通过抑制TGF-β1信号通路,这将为临床治疗肺泡RMS提供新的思路。     

EGCG对PLA-802细胞中TGF-β1和Smad4的抑制作用

目的观察表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3gallste,EGCG)对人横纹肌肉瘤细胞株PLA-802细胞内TGF-β1/Smad4mRNA和蛋白水平的表达的影响,探索EGCG抑制横纹肌肉瘤细胞生长的机制。方法体外培养人横纹肌肉瘤细胞株PLA-802,并用不同浓度的EGCG作用不同的时间,用RT-PCR和Westernblot分别检测细胞内TGF-β1和Smad4的mRNA和蛋白水平的表达。结果 TGF-β1和其下游因子Smad4的mRNA和蛋白水平的表达明显受到EGCG的抑制,且这种抑制作用呈浓度-时间依赖性(P<0.05)。结论 EGCG可能通过抑制TGF-β1信号通路,发挥其抑制PLA-802细胞生长的作用,这或许将为临床治疗横纹肌肉瘤提供新的思路。     

姜黄素对肝星状细胞转化生长因子β1及受体和I、III 型胶原mRNA表达的影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞（HSC）增殖、转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体、下游信号通路及效应的影响。方法 培养HSC细胞,给予不同浓度姜黄素处理,采用MTT比色法检测HSC细胞增殖;Hoechst 33342染色检测姜黄素对HSC凋亡的影响;采用免疫细胞化学法检测Smad3、Smad7蛋白表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测TGF-β1及其I、II受体（TβRI、TβRII）和I、III型胶原（Col-I、Col-III）mRNA的表达。结果 姜黄素能抑制HSC细胞增殖,诱导HSC细胞凋亡,免疫组化结果显示姜黄素能抑制HSC表达Smad3,并提高Smad7表达,RT-PCR结果显示姜黄素使HSC细胞TGF-β1及其I、II受体、Col-I、Col-III mRNA表达降低。结论 姜黄素能抑制HSC增殖和活化,抑制TGF-β1及其受体和信号通路,是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

姜黄素对大鼠肝星状细胞中TGF-β调节的NADPH氧化酶4的激活及Smad信号通路的影响

目的：研究姜黄素潜在的抗纤维化作用,以及转化生长因子β( TGF-β)诱导大鼠肝星状细胞( HSC-T6)激活的机制。方法不同浓度的姜黄素(0、5、10、20、40μmol/L)处理HSC-T6后,用MTT法测定其对HSC-T6增殖作用的影响;用RT-PCR法检测其mRNA水平的表达;用Westem blot法检测表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、细胞外基质主要成分α1I胶原(Col1α1)、NADPH氧化酶4(NOX 4)、 Smad 2、Smad 3及其磷酸化的水平。结果40μmol/L的姜黄素组刺激HSC-T648 h后,其抑制率达到最大,显著低于仅TGF-β1刺激组、5、10及20μmol/L姜黄素组( P<0．05)。姜黄素可显著降低激活型HSC-T6的α-SMA、α1I胶原mRNA与蛋白表达,从而可以降低细胞外基质的沉积;有效降低了NOX 4的蛋白水平,减少了活性氧的水平;还明显降低Smad 2、Smad 3的磷酸化程度,呈浓度依赖性。结论姜黄素在体外能够明显地抑制HSC-T6激活,对肝纤维化的发生发展具有一定抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β诱导的NOX4的激活及Smad信号通路有关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β_1信号通路的作用

目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液(STS)对大鼠肺成纤维细胞转化生长因子β1(TGF-β1)Smad信号通路的影响,探讨STS抑制肺成纤维细胞(LFB)增殖、转化的可能机制。方法:体外分离培养大鼠肺成纤维细胞,实验分为3组:①空白对照组;②TGF-β1刺激组;③联合处理组:STS+TGF-β1刺激组,培养48h,待细胞生长同步化后,用MTT法检测丹参酮ⅡA对肺成纤维细胞增殖的影响,用RT-PCR法分析丹参酮ⅡA磺酸钠和TGF-β1作用后肺成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达水平的变化,以及对Ⅰ型胶原mRNA的影响。结果:丹参酮ⅡA磺酸钠在80-640mg/L浓度范围对5μg/L TGF-β1刺激的肺成纤维细胞增殖均具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.05);丹参酮ⅡA磺酸钠在浓度160mg/L时能明显下调TGF-β1刺激的肺成纤维细胞内Smad3 mRNA、Smad3/Smad7 mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达(P<0.05),并能上调Smad7 mRNA表达(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA磺酸钠能抑制LFB的增殖、转化及胶原的合成,机制可能是丹参酮ⅡA磺酸钠下调了大鼠TGF-β1 Smad信号通道的Smad3/Smad7水平,从而抑制LFB的增殖、转化。     

姜黄素对TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响

目的 研究姜黄素对转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞的上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）的作用及可能的机制。方法 选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分为4组：对照（Control）组、TGF-β组（TGF-β5ng/mL）、TGF-β+姜黄素组（TGF-β5ng/mL+姜黄素10μmol/L）、姜黄素组（姜黄素10μmol/L）。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,采用免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt /β-catenin信号通路相关P-GSK3β, GSK3β, β-catenin, c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt /β-catenin抑制剂XAV939（1、2、4 μmol/L）作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明姜黄素对A549细胞的抑制作用呈时间和剂量浓度依赖性,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为12.21±2.60%和21.33±3.25%（P<0.05）;细胞运动迁移及侵袭浸润实验表明TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,而姜黄素对其表现出抑制作用（P<0.05）。免疫荧光实验及免疫蛋白印迹实验表明TGF-β能下调E--钙粘蛋白的表达,上调波形蛋白及N--钙粘蛋白的表达,伴有P-GSK3β,β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,而GSK3β表达无明显变化,而姜黄素表现出对这种现象的一个抑制作用。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT表现出抑制作用。结论 姜黄素可能通过抑制Wnt /β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞EMT。     

TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管癌上皮间质转化中的作用

[目的]探讨TGF-β1/Smad7信号通路在哈萨克族食管鳞癌上皮间质转化(EMT)中的作用及其机制.[方法]运用免疫组织化学方法检测50例哈萨克族食管鳞癌组织及远端对应癌旁组织中TGF-β1与Smad7蛋白的表达.进一步在细胞水平,针对食管鳞癌细胞系Ec9706,基于RNA干扰技术,使用LipofectamineTM 2000试剂转染TGF-β1 siRNA.采用qRT-PCR技术检测TGF-β1及Smad7 mRNA表达水平;Western blot技术检测转染后各组TGF-β1、Smad7以及EMT相关蛋白表达水平;MTT、划痕及流式细胞术等方法检测各组细胞转染后的增殖、迁移、凋亡及周期的变化.[结果]免疫组化检测结果显示,哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜ 0.05);Smad7蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织(P＜0.05).转染TGF-β1 siRNA后,Ec9706细胞中TGF-β1 mRNA和蛋白表达量均降低,Smad7 mRNA和蛋白表达量增加;上皮标志物E-cadherin表达量增加,间质标志物Vimentin表达量降低,同时Ec9706细胞增殖、迁移受到抑制,细胞凋亡增加,细胞周期发生G0/G1期阻滞.[结论]哈族食管鳞癌中存在TGF-β1/Smad7信号通路的激活,食管癌中TGF-β1高表达,抑制了Smad7的表达,从而促进了上皮间质转化过程,进一步促进了食管癌细胞的增殖和迁移,并抑制细胞凋亡,影响细胞周期中的G0/G1期.     

香叶醇对人肝癌细胞株Huh7增殖及TGF-b1/Smad 2信号通路影响研究

目的:探讨香叶醇对肝癌细胞株Huh7增殖及TGF-b1/Smad 2信号通路的影响.方法:不同浓度香叶醇干预体外培养肝癌细胞株Huh7不同时间.MTT检测香叶醇对Huh7细胞生长情况的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,RT-PCR和Western blot分别检测细胞内TGF-b1和Smad 2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况.结果:MTT结果显示香叶醇显著抑制了肝癌细胞的生长.流式细胞结果表明香叶醇明显降低了肝癌细胞S期含量而增加了G0/G1期含量.而TGF-b1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到香叶醇的抑制,且这种抑制作用呈浓度一时间依赖性.结论:香叶醇可能够通过阻断TGF-b1/Smad 2信号通路抑制肝癌细胞生长.     

二氢杨梅素通过TGF-β1/Smad信号通路抑制肝星状细胞活化的作用研究

目的 观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DHM)对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的影响,并探讨TGF-β1/Smad信号通路在其中的作用及机制.方法 以大鼠肝星状细胞株HSC-T6为研究对象,TGF-β1(5 ng/mL)处理2h后,再以不同浓度的DHM处理24h.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞分泌MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ的水平,免疫荧光细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,qRT-PCR法检测MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7的mRNA表达,Western blot检测Smad2/3、p-Smad2/3、Smad7、AMPK、p-AMPK蛋白表达.结果 CCK-8法检测结果显示,40 μmol/L以上DHM单独处理能明显抑制HSC-T6细胞增殖活力,并能显著抑制活化的HSC-T6细胞增殖活力的增加,流式细胞仪检测结果表明,DHM能够明显促进活化的HSC-T6细胞凋亡,TGF-β1能够促进HSC-T6细胞G0/G1期的比例降低、S期和G2/M期的比例增加(P＜0.05),而DHM能够抑制TGF-β1对细胞周期的影响,ELISA检测结果表明,DHM能够显著抑制活化的HSC-T6细胞上清液中TIMP-1和COL-Ⅰ水平增高及MMP-1水平下降(P＜0.05),免疫荧光细胞化学法检测显示,HSC-T6细胞表达HSC活化特定抗原α-SMA,TGF-β1处理后表达增加,而DHM能够抑制α-SMA表达,qRT-PCR结果显示,DHM能够显著影响活化的HSC-T6细胞的细胞外基质相关基因MMP-1、TIMP-1和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、Smad2、Smad3、Smad4、Smad7等的mRNA表达,Western blot检测结果提示,DHM抑制活化的HSC-T6细胞AMPK磷酸化下降、Smad2/3的磷酸化水平升高及Smad7的蛋白表达下降,而AMPK抑制剂Compound C处理后,DHM的作用被显著抑制.结论 DHM能够显著抑制HSC-T6细胞的活化,该作用可能通过促进AMPK的磷酸化并抑制TGF-β1/Smad信号通路介导的细胞外基质产生而实现.     

基于TGF-β/Smads信号传导通路探讨姜黄素抑制前列腺癌DU-145细胞增殖的机理

目的:基于TGF-β/Smads信号传导通路,观察中药提取物姜黄素对人雄激素非依赖性前列腺癌DU-145细胞的影响,从而探讨姜黄素抑制DU-145细胞增值的机理。方法:分别用12.5、6.25以及3.125μmol/L姜黄素作用DU-145细胞48 h后,光镜观察细胞形态变化,以MTT法检测DU-145细胞生长情况,以RT-PCR法检测TGF-β,Smad2,Smad4和Smad7基因表达情况。结果:姜黄素能显著抑制DU-145细胞生长,呈一定的量效关系; RT-PCR法检测DU-145细胞TGF-β,Smad2和Smad4基因表达均不同程度增加,而Smad7的基因表达不同程度减少。结论:姜黄素通过对TGF-β及下游蛋白Smad2、Smad4、Smad7的影响,进而调节TGF-β/Smads信号传导通路,这可能是姜黄素促进DU-145细胞凋亡和抑制其生长的重要分子机制。     

肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的:观察肾康丸对高糖培养大鼠系膜细胞(MC)TGF-β1/Smad信号通路的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的分子作用机制。方法:体外培养大鼠MC,将细胞分为6组,培养72 h后,ELISA法检测MC上清中TGF-β1含量;RT-PCR法检测MC中TGF-β1mRNA表达;Western blot法检测MC中Smad 2、3和7蛋白表达。结果:与正常葡萄糖组比较,高糖组MC上清中TGF-β1含量增加,MC中TGF-β1mRNA表达上调(P<0.01),Smad 2和3蛋白表达增加,而Smad 7蛋白表达降低。肾康丸和开搏通治疗后可以降低高糖诱导的TGF-β1分泌和mRNA表达的增加(P<0.01或P<0.05);减少Smad 2、3蛋白的表达,增加Smad 7蛋白的表达。结论:肾康丸可以抑制高糖激活MC细胞中TGF-β1/Smad信号通路。     

调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌 SiHa细胞自噬基因p62的影响

目的 探究调控TGF-β1/Smad4通路对宫颈癌SiHa细胞自噬基因p62的影响。方法 对数生长期的宫颈癌SiHa细胞加入不同浓度的TGF-β1和SIS3干预24h后收取细胞,分别检测在mRNA及蛋白水平上自噬基因p62表达量的变化。结果 TGF-β1作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高, p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐降低(P<0.05)。SIS3作用SiHa细胞24h后,随着浓度升高,p62 mRNA及蛋白的表达量逐渐增高(P<0.05)。结论 外源性的TGF-β1/Smad4通路激活剂TGF-β1可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量降低,诱导宫颈癌SiHa细胞发生自噬;外源性的TGF-β1 /Smad4通路抑制剂SIS3可使宫颈癌SiHa细胞自噬蛋白p62 mRNA及蛋白的表达量升高,抑制宫颈癌SiHa细胞发生自噬;且随TGF-β1和SIS3浓度的增加,p62表达量出现变化,具有一定的浓度依赖性。     

血管生成素抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化

目的从Smad信号通路途径探讨血管生成素(angiogenin,Ang)对HeLa细胞的促增殖作用机制。方法用不同浓度的重组人Ang刺激HeLa细胞,用蛋白质印迹实验(Western blotting)检测p-Smad2、Smad2的表达情况以及检测TGF-β1刺激的状态下,过表达或低表达Ang Smad通路的变化。MTT法检测TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用,mRNA及蛋白水平检测TGF-β1对Ang表达的影响。结果 Ang能够抑制Smad2的磷酸化。过表达Ang时TGF-β1促进的Smad2的磷酸化也受到抑制,而敲低Ang的表达后促进了TGF-β1诱导的Smad2的磷酸化。TGF-β1能够抑制HeLa细胞增殖,但不影响Ang的表达。结论Ang与TGF-β1对HeLa细胞增殖的作用可能与Smad信号通路相关,并且Ang能够抑制TGF-β1诱导的Smad2的活化。     

羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响

目的 研究羊栖菜多糖对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的影响,探讨其抗肺纤维化作用及机制。方法 将实验分成对照组、TGF-β1组、TGF-β1+不同剂量羊栖菜多糖组（25、50、100μg/ml）,采用MTT法检测细胞增殖,RT-PCR法检测Smad 3、Smad 7、α-SMA、Ⅰ型胶原mRNA的表达,ELISA法检测Ⅰ型胶原蛋白的表达, Western blot法检测α-SMA的表达。结果 TGF-β1能诱导肺成纤维细胞增殖及表达Smad3 mRNA、Smad7 mRNA、Ⅰ型胶原、α-SMA（P < 0.05）。羊栖菜多糖可以不同程度抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞的增殖以及Smad3mRNA、Ⅰ型胶原和α-SMA的表达,且呈剂量依赖性（P < 0.05）,能促进TGF-β1诱导的肺成纤维细胞表达Smad7 mRNA, 呈剂量依赖性（P < 0.05）。结论 在离体细胞,羊栖菜多糖能抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖、分化与表达,其机制可能与其下调Smad3,促进Smad 7表达从而抑制TGF-β/Smads信号通路有关。     

转化生长因子β1基因转染对结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对结肠癌细胞SW480体外增殖的抑制作用.方法:以腺病毒为载体将人TGF-β1基因导入体外培养的人结肠癌细胞株SW480, 应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SW480细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白及mRNA的表达情况.通过MTT法检测转染后细胞增殖的抑制情况.结果:转染hTGF-β1基因后,与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA在细胞中的表达均增强.SW480的增殖受到明显抑制(P<0.05),抑制率为60%～80%.结论:转染hTGF-β1基因对体外培养的结肠癌细胞SW480的增殖有明显抑制作用.     

阿魏酸联合脂肪间充质干细胞调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞凋亡的影响研究

目的 探讨阿魏酸(FA)联用大鼠脂肪间充质干细胞(ADMSCs)调节TGF-β/Smad信号转导通路对肝星状细胞(HSCs)凋亡的影响.方法 实验将HSCs分为4组:空白组、FA组、ADMSCs组、FA+ADMSCs组.流式细胞术检测各组HSCs的凋亡率;qRT-PCR检测HSCs中TGF-β1、Smad2、Smad3和Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测HSCs中TGF-β1和Smad7蛋白、Smad2/3磷酸化(p-Smad2/3)表达变化.结果 与其他3组比较,FA+ ADMSCs中HSCs凋亡率明显升高(P＜0.05);TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达明显下降,Smad7 mRNA表达明显升高(P＜0.05);TGF-β1蛋白、p-Smad2/3表达明显降低,而Smad7蛋白表达明显升高(P＜0.05).结论 FA能增强ADMSCs对HSCs中TGF-β1表达的下调作用,进而导致下游p-Smad2/3活性下降及Smad7表达升高,从而参与促进细胞凋亡.     

姜黄素对大鼠肾间质成纤维细胞中小分子RNA-21及纤维化相关因子表达的影响

目的探讨姜黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)中小分子RNA-21(miR-21)及纤维化相关因子表达的影响。方法将NRK49F细胞分为正常组、模型组、姜黄素组。模型组以TGF-β1(10μg/L)诱导NRK49F细胞活化,姜黄素组以高、中、低浓度(20、10、5μmol/L)干预24 h和72 h。免疫荧光方法及高内涵成像分析设备检测并分析NRK49F细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化;RT-PCR方法检测NRK49F细胞中miR-21及纤维化相关因子COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA表达的变化。结果 TGF-β1作用于NRK49F细胞72 h后,能明显上调细胞中α-SMA蛋白的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素各组的α-SMA蛋白表达明显下调(P0.01、P0.01、P0.05)。TGF-β1作用于NRK49F细胞24 h后,能明显上调细胞中miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素高、中浓度组可明显抑制miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01或P0.05);姜黄素低浓度组可明显抑制COL1A1、COL3A1、α-SMA mRNA的表达(P0.01),对miR-21、smad3 mRNA的表达有下调的趋势。结论姜黄素能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK49F细胞中纤维化相关因子的基因及蛋白表达,其作用与下调miR-21的表达相关。     

脂氧素A4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE⁃12的保护作用

目的：探讨脂氧素A4（LipoxinA4, LXA4）对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护作用及机制。方法：体外传代培养MLE-12细胞,随机分为：空气组、高氧组、高氧+LXA4组、高氧+转化生长因了（TGF）-β1中和抗体组、高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组。倒置相差显微镜下观察各组MLE-12形态学变化;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、肌腱蛋白C（tenascin-C）、TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平。Western blot检测TGF-β1/Smads信号（TGF-βR1、Smad2、Smad3、Smad4、p-Smad2 和p-Smad3）蛋白表达。结果：①细胞形态：高氧组MLE-12明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数增多,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似;②细胞外基质（extracellular matrix,ECM）mRNA表达：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的collagenⅠ和tenascin-C mRNA的表达量升高（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组作用最为显著（P < 0.05）;③TGF-β1/Smads信号mRNA和蛋白含量：LXA4和TGF-β1中和抗体能抑制高氧介导的TGF-βR1、TGF-βR2和Smad3的mRNA水平以及下调TGF-β1/Smads信号相关蛋白的表达量（P < 0.05）,其中高氧+LXA4+TGF-β1中和抗体组细胞的表达量下调最为显著（P < 0.05）。结论：LXA4对高氧损伤肺泡Ⅱ型细胞系MLE-12的保护可能与调控TGF-β1/Smads信号以及collagenⅠ和tenascin-C的表达有关。     

姜黄素对转化生长因子-β诱导的A549细胞上皮间质转化的影响

目的研究姜黄素对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肺腺癌A549细胞上皮间质转化(EMT)作用及可能机制。方法选取体外培养肺腺癌A549细胞采用MTT法检测姜黄素细胞抑制率。实验分对照组、TGF-β组(TGF-β5ng/m L)、TGF-β+姜黄素组(TGF-β5ng/m L+姜黄素10μmol/L)、姜黄素组(姜黄素10μmol/L)。采用Transwell细胞迁移及浸润实验检测各组的运动迁移和侵袭浸润的能力,免疫荧光和Western印迹法实验检测各组EMT相关标记物E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达水平与Wnt/β-catenin信号通路相关P-GSK3β、GSK3β、β-catenin、c-Myc蛋白以及Snail蛋白表达水平,同时检测Wnt/β-catenin抑制剂XAV939(1、2、4μmol/L)作用后EMT表达情况。结果 MTT实验表明,10μmol/L姜黄素作用A549细胞24h和48h时,细胞增殖抑制率分别为(12.21±2.60)%和(21.33±3.25)%(P0.05);TGF-β能显著促进细胞的运动迁移和侵袭浸润,下调E-钙黏蛋白的表达,上调波形蛋白及N-钙黏蛋白的表达,伴有P-GSK3β、β-catenin和c-Myc的表达增加以及Snail蛋白表达增加,GSK3β表达无明显变化,而姜黄素可以抑制TGF-β的作用(P0.05)。同时,XAV939对TGF-β诱导的EMT也有抑制作用。结论姜黄素可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来抑制TGF-β诱导的A549细胞上皮间质转化。     

白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的 观察白藜芦醇对体外培养的病理性瘢痕成纤维细胞及TGF-β1/Smads信号通路的影响.方法 不同浓度白藜芦醇处理病理性瘢痕成纤维细胞后,应用扫描电镜观察其形态学变化;MTT法检测其增殖状况;分别用反转录聚合酶链反应和免疫荧光细胞化学染色法检测其TGF-β1/Smads信号通路中相关蛋白TGF-β1,Smads mRNA和蛋白的表达.结果 病理性瘢痕成纤维细胞经白藜芦醇干预后,在形态学上可见到典型的凋亡特征;MTT法检测结果显示,各不同药物浓度组与对照组相比,OD值均偏低,差异有统计学意义(P＜0.05);TGF-β1,Smad 2、3、4 mRNA和蛋白表达降低,而Smad 7 mRNA和蛋白表达增加,并且呈剂量依赖关系,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05).结论 白藜芦醇能通过下调TGF-β1,Smad 2、3、4表达并上调Smad 7表达,来达到其抑制瘢痕组织成纤维细胞增殖并诱导其凋亡的作用.