淡豆豉和黑豆乙醇提取物的促成骨细胞增殖活性及HPLC-MS分析

目的比较分析淡豆豉和黑豆乙醇提取物促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性及二者的化学成分。方法采用MTT法对淡豆豉和黑豆的乙醇提取物进行促大鼠颅骨成骨细胞增殖活性的研究,并通过高效液相色谱-质谱联用技术对二者化学成分进行比较分析。结果淡豆豉和黑豆的乙醇提取物对大鼠成骨细胞的促增殖率分别可达到36.5%和28.2%,其主要有效成分为异黄酮类化合物,经液质联用分析共鉴定出15个黄酮类成分。结论黑豆发酵成淡豆豉后的成分变化主要体现在由苷类成分脱糖转化为苷元,含有量显著增加的大豆苷元和染料木素两种苷元主要由丙二酰大豆苷(大豆苷元-G-M)和丙二酰染料木苷(染料木素-G-M)脱丙二酰基和葡萄糖转化而来。     

芪贞慢咽宁颗粒的质量标准研究

目的建立芪贞慢咽宁颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱法对制剂中的黄芪、女贞子进行鉴别,采用高效液相色谱法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷、木蝴蝶苷B的含量。用C18柱(4.6mm×250 mm,5μm)。毛蕊异黄酮葡萄糖苷:流动相为乙腈-0.1%甲酸(16∶84),检测波长260 nm。特女贞苷:流动相为乙腈-水(18∶82),检测波长224 nm。木蝴蝶苷B:流动相为甲醇-0.1%磷酸(38∶62),检测波长276 nm。结果黄芪、女贞子的薄层色谱特征斑点分离清晰,阴性无干扰。毛蕊异黄酮葡萄糖苷、特女贞苷、木蝴蝶苷B分别在0.053 4~1.067 1μg,0.193~3.865μg,0.064 6~1.292μg线性关系良好,回收率分别为99.22%、97.50%、101.17%,RSD分别为0.99%、1.65%、1.10%。结论该方法操作简便、准确可靠、专属性强,可用于芪贞慢咽宁颗粒的质量控制。     

淡豆豉关键质量指标的确定及标准修订

目的:拟根据淡豆豉的质量问题,选择适合的质量控制指标,采用生药鉴定学、薄层鉴别、含量测定等方法,开展淡豆豉质量标准研究工作,为淡豆豉药材质量标准的提升和完善提供参考。方法:采用传统生药鉴定方法,对淡豆豉及其伪品的性状特征进行比较,找出具有鉴别专属性的性状特征,修订淡豆豉的性状鉴别项;对淡豆豉标准薄层鉴别中的展开剂进行优化,建立专属性强的薄层鉴别方法;根据淡豆豉发酵前后的成分差异,以能体现发酵程度的大豆苷元、染料木素为指标,建立含量测定方法,以Agilent SB C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱为固定相,以乙腈-1%冰醋酸(25∶75)为流动相,流速为1 mL·min~(-1),柱温为40℃,检测波长为260 nm。结果:建立的性状鉴别项,能从种脐特征区分伪品黑芸豆;建立的薄层鉴别方法也能有效地区分伪品;选择的大豆苷元、染料木素作为含量测定指标,可以有效地区分正伪品及未发酵品,考虑到不同发酵工艺的差异造成的含量差异,建议淡豆豉中染料木素、大豆苷元的总量不得少于0.040%。结论:建立的性状鉴别项、薄层鉴别项和含量测定方法能够更好地控制淡豆豉质量,可为2020年版《中华人民共和国药典》关于淡豆豉药材质量标准的修订提供参考。     

鸡矢藤的薄层色谱鉴别方法研究及应用

目的:建立鸡矢藤薄层色谱鉴别方法。方法:采用硅胶G薄层板,以氯仿-甲醇-冰醋酸-水(10∶4∶1∶1)为展开剂,鸡矢藤苷为对照品,采用薄层色谱法对不同品种和不同产地鸡矢藤药材进行定性鉴别。结果:鸡矢藤薄层色谱中,在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点。结论:该方法准确、简便,可为鸡矢藤药材的质量控制提供参考。     

大豆加工品大豆黄卷和淡豆豉的质量评价

目的对不同品种大豆(黑豆、青豆、黄豆、褐豆)为原料加工的大豆黄卷和淡豆豉进行含量测定,分析大豆黄卷和淡豆豉的实验室加工品和市售品中异黄酮含量的差异,为大豆黄卷和淡豆豉的制备研究及临床用药提供科学依据。方法以不同品种大豆为原料加工大豆黄卷和淡豆豉,采用紫外分光光度法测定总黄酮含量,使用HPLC法对药材中大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷含量进行测定。采用C_(18)色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-1%醋酸溶液为流动相,进行梯度洗脱,检测波长260 nm,柱温30℃,流速1.0 ml·min~(-1)。结果黄豆加工成的大豆黄卷中结合型糖苷大豆苷和染料木苷总量最大,含量范围为0.1090%～0.1431%,黑豆加工成的淡豆豉中游离型苷元大豆苷元和染料木素总量最大,含量范围为0.0937%～0.1628%。结论黄豆适宜加工成大豆黄卷,黑豆适宜加工淡豆豉,这也是市售品大豆黄卷和淡豆豉质量参差的原因。     

蒙药材细叶铁线莲薄层鉴别和含量测定方法研究

目的以芹菜素和芹菜素-7-O-β-D-(-6"-p-香豆酰基)-葡萄糖苷为指标性成分,建立蒙药材细叶铁线莲的薄层鉴别和含量测定方法。方法薄层鉴别采用硅胶G薄层板,以氯仿-甲醇-甲酸(4∶0.5∶0.2)为展开剂,3%三氯化铝乙醇溶液显色,置紫外灯(365nm)下检视。含量测定采用ODS填充的色谱柱,乙腈-2%醋酸水溶液(30∶70)为流动相,335nm下测定。结果薄层色谱方法斑点清晰,专属性强。HPLC含量测定法,芹菜素和芹菜素-7-O-β-D-(-6"-p-香豆酰基)-葡萄糖苷均在0.05~1.60μg线性良好(r=0.9999),平均回收率分别为100.3%(RSD为0.33%)和100.5%(RSD为0.29%),在6批次药材中的含量分别为0.181~0.368 mg·g-1和0.819~2.030 mg·g-1。结论此方法可有效鉴别细叶铁线莲,准确测定药材中芹菜素和芹菜素-7-O-β-D-(-6"-p-香豆酰基)-葡萄糖苷的含量,为该药材的质量控制提供方法和依据。     

黄芪注射液定性定量方法的改进

目的改进黄芪注射液薄层色谱(TLC)鉴别方法和黄芪甲苷测定方法。方法 TLC方法中增加黄芪对照药材和毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷对照品指标。定量测定方法中,采用高效液相色谱仪-蒸发光散射器(HPLC-ELSD)直接测定样品。色谱柱为C18色谱柱,流动相为甲醇-水(70∶30)。结果可增加黄芪对照药材和毛蕊异黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷对照品两个鉴别对照。黄芪甲苷进样量在0.404μg～16.16μg范围内线性关系良好(r=0.998 5);平均回收率(n=9)为98.6%,RSD为1.9%。结论该方法专属性强,灵敏度高,简便快速,准确可靠。     

结肠炎散质量标准研究

目的:建立肠炎散的质量标准。方法:以盐酸小檗碱为对照品,正丁醇-冰醋酸-水(5∶1∶1)为展开剂对其中黄连药材进行薄层色谱鉴别;以防风为对照药材,三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂对其中防风药材进行薄层色谱鉴别;以延胡为对照药材、延胡索乙素为对照品,正己烷-氯仿-甲醇(7.5∶4∶1)为展开剂对其中延胡药材进行薄层色谱鉴别;采用反相高效液相色谱法测定主药黄连中盐酸小檗碱含量,色谱条件:Hypersil C18柱(4.6mm×50mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钾溶液(55∶45)为流动相;检测波长:265nm。结果:薄层色谱斑点清晰,重现性好,阴性对照无干扰;HPLC理论板数以盐酸小檗碱计算为4100,线性范围0.021-0.1μg,r=0.999 6,平均回收率为100.21%(RSD为0.49%)。结论:本法简便准确,重现性好,可用于该制剂的质量控制。     

超高效液相色谱串联质谱法检测葛花中异黄酮

目的建立超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法,检测葛花中异黄酮成分。方法葛花经乙醇提取和乙酸乙酯纯化,HPLC分析采用Diamonsil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(2∶1∶2)为流动相,体积流量为0.5 m L/min,检测波长为264 nm,柱温为25℃,进样量10μL,质谱检测设定为负离子模式。结果得到7种异黄酮成分,MS鉴定为大豆苷、大豆苷元、鸢尾苷、鸢尾苷元、染料木黄酮、印度黄檀苷和鸡豆黄素。结论 HPLC-MS/MS法检测葛花异黄酮,具有高灵敏度和选择性,方法准确可靠。     

淡豆豉中豆豉多糖、大豆异黄酮的超声提取及含量检测

目的:提取中药淡豆豉中大豆异黄酮和豆豉多糖,并分别检测两种活性成分的含量。方法:采用超声提取大豆异黄酮和豆豉多糖;聚酰胺薄膜层析定性、HPLC定量检测大豆异黄酮;硫酸-苯酚法显色,在紫外分光光度计下对豆豉多糖的含量进行检测。结果:实验结果表明,聚酰胺薄膜层析法最佳展开剂系统为甲醇∶醋酸∶水(18∶1∶1)。HPLC最佳流动相:甲醇∶乙酸∶水(12∶1∶10),染料木苷、大豆苷元和染料木素在20 min内分离良好。中药淡豆豉含有染料木苷1076.8μg/g、大豆苷元310.48μg/g、染料木素141.93μg/g、豆豉多糖0.91%。结论:精密度实验和加样回收实验均RSD<3%,证明检测方法及结果准确、可靠。     

RP-HPLC制备色谱法分离淡豆豉中高纯度异黄酮苷元

淡豆豉经大孔树脂柱色谱初步分离纯化,采用RP-HPLC制备色谱法,乙腈-水-冰醋酸(35∶ 65∶ 1,v/v/v)为流动相,流速3.0 ml/min,检测波长260 nm.结果表明,在30 min内快速分离到大豆素、大豆黄素和染料木素,产物纯度均达到99%以上.     

大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定

目的建立一种测定大豆发酵制品——淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在271nm波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为9．884mg／g，加样回收率为99．3％，相对标准偏差为2．1％。结论方法简便、准确、重现性好，可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。     

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??OBJECTIVE To study the chemical constituents and their proliferation activity on rat osteoblasts of Semen Sojae Praeparatum. METHODS The compounds were isolated by chromatography on silica gel column,MCI and sephadex LH-20 column. Their structures were elucidated by spectral analysis. The proliferation test was performed by using rat osteoblasts with MTT assays in vitro. RESULTS Twelve compounds were obtained and identified as daidzin(1), daidzein(2),genistein(3), genistin(4), glycitein(5), glycitin(6),apigenin(7), ??-sitosterol(8), stigmasterol(9), campesterol(10), syringaldehyde(11), syringic acid(12), respectively. CONCLUSION Compounds 5-11 are isolated from Semen Sojae Praeparatum for the first time. The five isoflavones show proliferation activity on rat osteoblasts, and aglycones proved to show better activity than glycosides.
     

淡豆豉与黑豆提取物抗癌细胞增殖作用及4种异黄酮成分的含量测定

目的:探讨淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌MCF-7细胞增殖的调节作用,并检测提取物中4种异黄酮成分的含量。方法:MTT法观察淡豆豉和黑豆提取物对乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖率的影响,Annexin/PI法流式细胞仪分析检测细胞的早期凋亡,高效液相色谱法检测淡豆豉和黑豆提取物中4种异黄酮成分大豆苷、染料木苷、大豆苷元和染料木素的含量变化。结果:淡豆豉和黑豆提取物对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用且诱发癌细胞凋亡,但高浓度淡豆豉提取物的抑制癌细胞增殖作用明显高于黑豆(P0.05)。淡豆豉提取物中大豆苷、大豆苷元和染料木素的含量显著高于黑豆提取物(P0.01),但染料木苷的含量未见明显变化。结论:淡豆豉提取物与黑豆相比具有较强的抑制癌细胞增殖作用,淡豆豉中含量较高的异黄酮成分大豆苷、大豆苷元和染料木素,可能是其较强的抗癌细胞增殖作用的物质基础。     

淡豆豉抗菌活性及化学成分分析

目的:研究传统发酵中药淡豆豉的抗菌活性及化学成分。方法:淡豆豉80%乙醇提取物用适量蒸馏水混悬,依次用石油醚、乙酸乙酯及水饱和正丁醇萃取,得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分及水层,利用体外抗菌法筛选和追踪抗菌活性部分,采用硅胶柱色谱等方法及制备HPLC对抗菌活性最强部分进行分离纯化,得单体化合物,并根据化合物的理化性质和1H-NMR,13C-NMR,MS等波谱数据鉴定其结构。结果:淡豆豉80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分显示最强的抗菌活性,该有效部分对呼吸道致病菌及其他常见致病菌均显示较强的抗菌活性,正丁醇萃取部分和石油醚萃取部分次之。从乙酸乙酯萃取部分分离得到18个化合物,鉴定了其中11个化合物的化学结构,分别为大豆素(1),大豆苷(2),染料木素(3),染料木苷(4),黄豆黄素(5),黄豆黄苷(6),胡萝卜苷(7),胸腺嘧啶(8),腺嘌呤(9),尿嘧啶(10),尿苷(11)。结论:淡豆豉80%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部分抗菌效果明显。化合物1～6为异黄酮类;化合物7～11为首次从该药材中分离得到。     

发酵中药淡豆豉概述及新型食用豆豉应用研究

淡豆豉由豆豉演变而来,是我国发酵中药和药食同源中药的代表,具有养生保健的优势,被广泛应用于医药及食品领域。随着现代生物医药领域的发展及肠道相关研究的不断深入,肠道菌群与慢病的相关性被逐渐探明,淡豆豉因具有优质益生元的健康属性而备受关注,同时也为豆豉等大豆发酵食品带来了良好的发展契机。综述了淡豆豉的研究概况,并梳理了以淡豆豉药理药效和传统发酵工艺思路为参考的新型食用豆豉研究进展,以期为开发出兼具安全与美味的新型食用豆豉等大众接受度高的大豆健康产品及相关应用研究提供参考。     

《伤寒论》栀子豉汤治湿热证议

凡《伤寒论》中用栀子豉汤的情况,均是在医家误治之后所作的弥补措施。误治的形式有下法,兼有汗法、吐法。误治后的症状多表现在心中、心下、胸中、胃中,常表现为热、(虚)烦。烦是热的表现,属气,栀子启下焦阴气于上,淡豆豉使气分邪热向上向外透达,两药合用,轻清宣透,“解陈腐郁热”“宣陈腐郁结”,使胸膈郁热从上而解。现代药理学研究证实,栀子豉汤的作用对象以消化器官为主,主要作用为护肝、保胃、抗炎、调整肠道菌群,其治疗机制与中医理论扶正祛邪相似,病位也契合《伤寒论》栀子豉汤的主治,为阳明胃。故栀子豉汤方义重在疏利气机,清透湿热,所治病位在脾胃,兼有心、肺、肝。其疏利清透的方义,符合湿热证中湿浊之邪蒙蔽上焦的治法,故栀子豉汤为治湿热之方。     

优化HPLC法测定淡豆豉中大豆异黄酮的含量

目的:优化淡豆豉中大豆异黄酮的高效液相色谱含量测定方法。方法:采用色谱柱为Agilent Hyper-sil C18(4.0 mm×250 mm 5,μm),流动相为甲醇-0.09%醋酸(48:52),流速1.0 mL.min-1,测定波长为254nm,检测温度为25℃的色谱条件测定。结果:线性范围:大豆苷40.6～203μg(r=0.9998),染料木苷11.15～55.75μg(r=0.9926),大豆苷元12.05～60.25μg(r=0.9933),染料木素5.5～27.5μg(r=0.9946)。测定精密度:大豆苷RSD=1.59%,染料木苷RSD=1.7%,大豆苷元RSD=0.8%,染料木素RSD=1.6%。大豆异黄酮总量24h稳定性RSD=1.49%,重复性RSD=1.06%,加样回收率:大豆苷为(99.24±3.77)%,染料木苷为(99.66±5.82)%,大豆苷元为(99.41±4.33)%,染料木素为(99.06±7.09)%。结论:本法简便、可靠、灵敏,可作为大豆异黄酮的质量控制方法。     

HPLC法同时测定21种中药饮片中4种黄曲霉毒素的含量

目的:对21种中药饮片中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2进行含量测定,了解中药饮片的质量状况。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-柱后碘衍生法进行含量测定,Waters Sunfire C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温35℃,以甲醇-乙腈-水(33∶12∶55)为流动相,流速1.0 mL/min。荧光检测器激发波长λex=360 nm,发射波长λem=450 nm。以0.05%碘溶液为衍生溶液,衍生化泵流速为0.3 mL/min,衍生化温度为70℃。结果:21种中药饮片中,只有胖大海、酸枣仁、大枣、全蝎、淡豆豉、牛蒡子、千金子7个品种未检出黄曲霉毒素;4批柏子仁、6批薏苡仁全部检出黄曲霉毒素,检出率均为100%,其中3批柏子仁的黄曲霉毒素含量超出法定标准限量,不合格率75%;2批薏苡仁的黄曲霉毒素含量超出法定标准限量,不合格率33%。桃仁、陈皮等其余12个品种亦检出黄曲霉毒素,但含量未超出法定标准限度。结论:虽然黄曲霉毒素检测成本较高,但为保证用药安全、减少用药风险,对中药饮片进行合理的黄曲霉毒素监督检测具有必要性。     

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??OBJECTIVE To establish the fingerprint of the extract from Semen Sojae Praeparatrm fermented by different preparation, to investigate the effects on the proliferation in rat osteoblasts, and to analyze the spectrum-effect relasionship. METHODS The fingerprint of alcohol extract from Semen Sojae Praeparatrm fermented by one functional bacteria for 6, 12, 18 h and 1-7 d(H6, H12, H18 and D1~D7) were established by HPLC, and the proliferation of each extract on rat osteoblasts was measured by MTT. The spectrum-effect relasionship was analyzed by grey relation analysis. Qualitative analysis was performed by HPLC-DAD-MS for analysis of major active components in alcoholic extract. RESULTS Alcoholic extract of Semen Sojae Praeparatrm fermented by different preparation was demonstrated to show similar proliferative activity at the concentration of 100 ??g??L^-1. Semen Sojae Praeparatrm fermented for 4 d led to the osteoblasts proliferation rate of 43.6%. On the basis of UV and mass spectral analysis,sixteen flavonoids were tentatively characterized.The glycitein had the highest correlation with pharmacodynamics, genistin, glycitin and daidzin also show higher correlation than the other chromatography peaks. The proliferation were promoted significantly after the treatment with glycitein, genistin, and daidzin (10^-9-10^-6 mol??L^-1) by the verification experiment. CONCLUSION Fermentation time of 4 d is more appropriate. The results of grey relational analysis and the activity in vitro of glycitein, genistin and daidzin mutually support each other, which confirms the scientificness of the spectral-effect relationship analysis in this study. The substance basis of anti-osteoporosis effect in the pure bacterial fermented soybean and natural fermented soybean are basically the same.