维甲酸致大鼠胚胎神经管畸形的组织形态学观察

目的 利用维甲酸制作先天性神经管畸形的动物模型已获得公认，但对于其导致神经组织错构瘤的发生却未见报道。本实验利用维甲酸口服制作大鼠神经管畸形动物模型，观察其出现神经组织畸胎瘤、脊髓裂开、脊柱裂等畸形形态学特点，探讨其发生机制。方法 利用成熟未孕的Wistar大鼠，在妊娠10dN经胃管注入维甲酸，诱导产生神经管畸形动物模型，分别在妊娠15d、17d、19d时剖宫取出胎鼠，进行实体观察、畸形统计，同时对神经管畸形进行病理形态学研究。对照组仅给予橄榄油，剖宫时间及观察项目同致畸组。结果 维甲酸致畸组共获得胎鼠99只，48．3％(48／99)孕鼠胚胎肉眼观察出现腰骶部显性脊柱裂。在48只显性脊柱裂胎鼠中，分别取不同胎龄(15d、17d、19d)各3只脊髓裂开的畸形胎鼠共9只，做石蜡切片，全部同时见到表现为多个神经管紊乱排列、骶尾部增生肿物，提示神经组织错构瘤的发生。结论 维甲酸可以干扰神经发育，导致脊柱裂、脊髓裂开和神经错构瘤的发生。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯诱导小鼠尿道下裂及对阴茎TGF-β1表达的影响

目的 用邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)诱导建立先天性尿道下裂小鼠模型,研究DEHP对胎鼠阴茎内转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.探讨尿道下裂发生机制.方法 C57BL/6孕鼠随机分为4组:玉米油对照组、DEHP低、中、高剂量组(i00、200、500 nag·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12d至17d(GD12～17)持续经口灌注给药.测量GD19雄性胎鼠体重、肛门至尿道口距离(AGD),通过尿道管型(UC)检测尿道解剖组织结构,比较尿道发育情况.应用免疫印迹(Western blot)检测胎鼠阴茎内TGF-β1蛋白量的表达水平.结果 DEHP成功诱导出尿道下裂小鼠动物模型,中、高剂量组AGD及前尿道较对照组明显缩短(P<0.001).实验组阴茎内TGF-β1蛋白表达水平随DEHP剂量增加而逐渐上升.结论 DEHP成功诱导建立先天性尿道下裂小鼠模型,胎鼠阴茎内TGF-β1蛋白异常表达可能是尿道下裂的发生机制之一.     

转化生长因子β1及其Ⅰ、Ⅱ型受体在早产大鼠高氧肺损伤后肺组织中的表达变化和意义

目的 探讨转化生长因子β1(TGFβ1)及其Ⅰ、Ⅱ型受体（TβRⅠ，TβRⅡ）与高氧肺损伤发生，发展的关系。方法 应用免疫组化法结合图象分析处理系统研究TGFβ，TβRⅠ、TβRⅡ在早产大鼠高氧肺损伤肺组织中的免疫表达。结果 TGFβ1,TβRⅠ、TβRⅡ广泛分布于空气组早产大鼠肺组织，而在高氧组中表达明显增加，早产大鼠高氧后病理改变呈轻-中度肺纤维化和明显的肺泡发育阻滞。结论 TGFβ1,TβRⅠ，TβRⅡ在早产大鼠高氧肺损伤中具有重要作用。过度表达的TGFβ1可能通过其受体TβRⅠ、TβRⅡ参与调控肺纤维化和肺发育。     

地骨髓转化生长因子-β1与巨核细胞转化生长因子-β1Ⅲ型受体变化在特发性血小板减少性紫癜发病中的意义

目的探讨骨髓转化生长因子-β（TGF-β1）及巨核细胞转化生长因子（TGF-β1）Ⅲ型受体（TGF-β1 RⅢ）变化在特发性血小板减少性紫癜（ITP）发病中的意义。方法收集急性ITP 28例（AITP组）、慢性ITP 16例患儿（CITP组）和20例相对正常儿童骨髓；采用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞；ABC-ELISA法检测TGF-β1水平；原位杂交法检测TGF-β1 RⅢ mRNA表达情况。结果AITP组与CITP组骨髓TGF-β1水平及巨核细胞TGF-β1 RⅢ mRNA表达均明显高于对照组（P〈0．05），且CITP组明显高于AITP组（P〈0．05）。结论检测ITP患儿骨髓TGF-β1水平及巨核细胞TGF-β1 RⅢ表达情况对于研究ITP发病机制及早期分型有重要参考价值。     

福辛普利对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察血管紧张素酶抑制剂（ACEI）-福辛普利（FOS）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肾小球系膜细胞（GMC）转化生长因子-β（TGF-β1）蛋白及mRNA表达的影响，探讨FOS延缓肾小球硬化机制。方法按经典方法体外培养大鼠GMC，转种培养后分为对照组、LPS组、LPS＋FOS组。采用ELISA法测定GMC培养上清6、12、24hTGF-β1蛋白水平，荧光半定量RT-PCR法检测TGF-β1mRNA表达。结果LPS诱导组GMC分泌TGF-β1蛋白及mRNA表达均高于对照组，LPS＋FOS组GMC分泌TGF-β1及mRNA表达较LPS组明显下降。结论FOS从蛋白和mRNA两个水平均对体外培养大鼠GMC产生TGF-β1有明显抑制作用，提示FOS抑制GMC产生TGF-β1可能是延缓肾小球硬化的重要作用机制之一。     

骨髓转化生长因子-β1与巨核细胞转化生长因子-β1Ⅲ型受体变化在特发性血小板减少性紫癜发病中的意义

目的探讨骨髓转化生长因子-β1(TGF-β1)及臣核细胞转化生长因子(TGF-β1)Ⅲ型受体(TGF-β1RⅢ)变化在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病中的意义。方法收集急性ITP28例(AITP组)、慢性ITP16例患儿(CITP组)和20例相对正常儿童骨髓;采用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离骨髓巨核细胞;ABC-ELISA法检测TGF-β1水平;原位杂交法检测TGF-β1RⅢmRNA表达情况。结果AITP组与CITP组骨髓TGF-β1水平及巨核细胞TGF-β1RⅢmRNA表达均明显高于对照组(P<0.05),且CITP组明显高于AITP组(P<0.05)。结论检测ITP患儿骨髓TGF-β1水平及巨核细胞TGF-β1RⅢ表达情况对于研究ITP发病机制及早期分型有重要参考价值。     

碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子β1在心肌纤维化各时期的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及转化生长因子β1(TGF-β1)在血管紧张素Ⅱ(AngII)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)纤维化不同时期的表达,及其可能作用。方法采用胰酶消化法和差速贴壁法分离1~3日龄新生SD大鼠的心脏CFs,将培养的第2~4代CFs随机分为实验组和对照组。对照组培养时不加干预药物;实验组用Ang II(10-6 mol/L)诱导CFs纤维化;培养12、24、48、72 h后,采用ELISA法测上清液胶原含量,采用RT-PCR法检测bFGF及TGF-β1的mRNA表达;Western Blot法检测bFGF及TGF-β1的蛋白表达。结果与对照组相比,实验组CFs的bFGF、TGF-β1 mRNA及蛋白的表达逐渐增高,在不同时间点的差异有统计学意义(P0.05),且均与上清液胶原呈正相关(r=0.881~0.932,P均0.05);bFGF与TGF-β1mRNA及蛋白的表达呈显著正相关(r=0.967、0.947,P均0.05)。结论 bFGF与TGF-β1可能协同促进心肌纤维化的发生发展。     

胚胎期骨髓间充质干细胞移植对先天性脊柱裂大鼠脊髓NGF和BDNF的表达及细胞凋亡的影响

目的 研究胚胎期骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)移植对显性脊柱裂胎鼠脊髓组织中神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达及细胞凋亡的影响.方法 建立全反式维甲酸致畸的显性脊柱裂大鼠模型,妊娠16d通过胎仔外科与显微注射相结合的方法将BMSC移植入胎鼠脊髓缺损部位,待胎鼠成活至妊娠21 d取脊髓,免疫荧光染色检测移植BMSC后脊髓缺损部位NGF和BDNF的表达,同时TUNEL染色法检测细胞凋亡的变化.结果 显性脊柱裂胎鼠BMSC移植后脊髓内BDNF、NGF的表达增强,而且BMSC移植区表达升高最显著,TUNEL染色显示BMSC移植组细胞凋亡明显减少.结论 胚胎期BMSC移植后改变脊柱裂病变区微环境,可能通过上调神经营养因子的表达,抑制细胞凋亡,从而促进脊柱裂神经损伤的修复.     

维生素E拮抗邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯尿道发育毒性的实验研究

目的 探寻维生素E(Vitamin E,VitE)对邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexy1)phthlate,DEHP]所致大鼠尿道发育毒性的拮抗作用及其可能机制.方法 GD12(gestation day12)SD孕鼠随机分为4组,每组20只:玉米油对照组、DEHP组(500 mg·kg-1·d-1)、DEHP(500mg·kg-1·d-1)+VitE(200mg·kg-1·d-1)组和VitE组(200mg·kg-1·d-1).各组分别于母鼠孕期12～19d(GD12～19)持续经口灌注给药.各组分别留取10只孕鼠让其正常分娩,出生第一天,即对新生大鼠计数,并在解剖显微镜下测量雄性新生鼠的肛门生殖器距离(anal genital distance,AGD)并称体重;雄性仔鼠70日龄时逐个检查尿道下裂的发生情况.余孕鼠在GD19d行破宫产取仔代鼠,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA的表达水平.DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)检测胎鼠阴茎尿道上皮细胞凋亡情况.结果 各组TGF-β1mRNA表达水平分别为:正常组为0.63±0.07、DEHP组为0.96±0.12、DEHP+VitE组为0.65±0.07、VitE组为0.62±0.06,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组TGF-βR3mRNA表达水平分别为:正常组为0.47±0.10、DEHP组为0.75±0.10、DEHP+VitE组为0.49±0.09、VitE组为0.46±0.09,DEHP组表达明显较其他各组增高(P＜0.05).各组胎鼠阴茎凋亡指数分别为:正常组为(30±2.0)%、DEHP组为(8.8土1.1)%、DEHP+VitE组为(28.9±1.6)%、VitE组为(29.6±2.0)%,DEHP组凋亡细胞数较其他各组相比明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).导致大鼠尿道下裂的发生.VitE可降低DEHP上调的胎鼠阴茎TGF-β1,TGF-βR3 mRNA表达水平,恢复胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡水平.结论 VitE对DEHP所致尿道发育毒性具有拮抗作用,其机制可能与调控TGF-βs及胎鼠阴茎尿道上皮细胞的凋亡有关.

Abstract：

Objective To study the therapeutic effects of Vitamin E (VitE) on urethral development toxicity induced by di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP). Methods From gestational day 12 to gestational day 19 (GD 12-19) , the timed-pregnant Sprague-Dawley (SD) rats were fed with the eiwith 20 in each group: DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group. The control rats were fed with corn oil. Ten pregnant rats of each group delivered full-term infant rats. The male infant rats were counted, and the anal genital distance (AGD) and body weight were measured. Hypospadias morbidity was also counted on male rats after 17 postnatal days. In the rest 10 pregnant rats of each group, fetuses were harvested on GD19. Semi-quantitive RT-PCR was used to measure mRNA expression of TGF-β1 and TGF-βR3. TUNEL staining was used to measure cell apoptosis in the fetus' genital tubercles. Results Hypospsdias was observed in male rat after 17 postnatal days. The TGF-β1 mRNA of the control group, DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group is 0. 63 ± 0. 07,0. 96±0. 12, 0. 65 ±0. 07, and 0. 62± 0. 06, respectively. The TGF-βR3 mRNA of the control group,DEHP group, DEHP + VitE group, and VitE group was 0. 47 ± 0. 10, 0. 75 ± 0. 10, 0. 49 ± 0. 09,and 0. 46 ± 0. 09, respectively. The TGF-β1 mRNA and TGF-βR3 mRNA was up-regulated in the fetus of DEHP group (P＜0. 05). Cell apoptosis rate in fetus' genital tubercles on GD19 of the control group, DEHP group, DEHP + VitE, and VitE group was 30% ± 2. 0%, 8. 8% ± 1.1%, 28. 9% ±1.6%, and 29. 6% ± 2. 0%, respectively. Cell apoptosis rate was significantly reduced in the fetus of DEHP group (P＜0. 01). In the GD19 fetus treated with VitE, hypospadias morbidity, the TGF-β1 and TGF-βR3 mRNA expressions were significantly decreased. And cell apoptosis rate was significantly increased. Conclusions Vitamin E ameliorates the urethral development toxicity induced by DEHP via regulating TGFβs expression and cell apoptosis in rat fetus.     

孕鼠叶酸缺乏对新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构及转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏对新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路的影响。方法成熟雌性Sprague-Dawley大鼠36只,随机分为实验组和对照组(各18只),分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与雄性大鼠交配。取新生大鼠肺组织标本,采用透射电子显微镜观察新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞超微结构,采用实时荧光定量PCR法检测新生大鼠肺组织中TGF-β1、Smad2和Smad3的mRNA表达水平。结果 1.叶酸缺乏组新生大鼠肺泡Ⅱ型细胞胞质内含较多絮状物,板层小体和细胞器难见。对照组肺泡Ⅱ型细胞胞质内的板层小体发达,且板层小体染色深,结构清晰、致密,胞质内可见发达的线粒体等细胞器。2.叶酸缺乏组新生大鼠肺组织TGF-β1及Smad3 mRNA表达低于对照组,差异均有统计学意义(Pa<0.05),叶酸缺乏组新生大鼠肺组织Smad2 mRNA表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论叶酸缺乏可影响子代肺泡Ⅱ型细胞结构改变,并可能通过影响TGF-β1/Smads信号通路延缓或阻碍肺组织发育。     

转化生长因子β2在发育性髋关节发育不良患儿关节囊的分布和表达

目的：探讨发育性髋关节发育不良（DDH）患儿和非DDH儿童TGF-β2在关节囊的免疫组化分布规律与水平差异,并比较TGF-β2在mRNA水平的表达差异,以探索髋关节松弛的原因。方法：选取性别相同、年龄相近的8对DDH（发育性髋关节脱位）患儿与非DDH儿童进行配对研究,采用S-P法免疫组化技术和半定量RT-PCR技术检测关节囊中TGF-β2的分布规律与水平差异,以及mRNA水平的差异。结果：分泌TGF-β2的成纤维细胞于贴近关节侧的滑膜层呈强阳性表达,内部纤维层阳性表达细胞稀疏,强度减弱。DDH组与对照组配对比较,纤维层中有阳性成纤维细胞百分比及局部染色的灰度值较对照组明显减少,差异有统计学意义,P<0.01。DDH组关节囊TGFβ2 mRNA的表达较对照组减少,差异有统计学意义,P<0.05。结论：DDH患儿的髋关节松弛很可能与关节囊中TGF-β2的分布减少和表达异常有关。［中国当代儿科杂志,2010,12（8）：641-644］     

先天显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白谱差异性分析

目的 采用2-D/质谱电泳方法,比较孕17d正常组胎鼠和全反式维甲酸诱导的显性脊柱裂胎鼠羊水蛋白表达谱的变化,筛查先天性显性脊柱裂相关羊水标记物.方法 孕10d大鼠,采用全反式维甲酸胃管灌饲的方法建立先天显性脊柱裂动物模型24只(脊柱裂组),正常对照组9只(正常组).孕17d晨,麻醉孕鼠,显微镜下获取每个胎囊的羊水及胎鼠,并检查胎鼠畸形情况.提取羊水蛋白质,merck试剂盒去除高丰度白蛋白和IgG,行2-D、胶体染色、图像扫描分析及质谱检测,Western-blot进一步验证2-D结果.结果 鉴定出6种蛋白质(其中1种蛋白质可能对应多个蛋白点):甲胎蛋白(AFP)、转铁蛋白(transferrin,TF)、信号识别颗粒受体B亚基(srprb)55kDa、srprb 77kD、α-1抗蛋白酶及载脂蛋白A4(Apo A4).其中,Apo A4和Srprb 77 kDa在脊柱裂组表达下调,而TF、Srprb 55 kDa和a-1抗蛋白酶在脊柱裂组表达上调.46个蛋白质点被鉴定为AFP及其片段,11个AFP蛋白点在脊柱裂组表达降低,35个蛋白点在脊柱裂组表达升高.通过Western-blot共发现69 kDa、52 kDa、36 kDa、24 kDa和14 kDa 5种分子量的AFP片段,其中69 kDa的AFP在脊柱裂组和正常组含量均为最高.脊柱裂组与正常组比较,AFP上调42％,而Apo A4下调44％,组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本研究发现羊水中6种蛋白质与显性脊柱裂畸形发生有关,进一步研究这些差异表达蛋白,可以为了解脊柱裂的发病机制和产前诊断提供实验依据.     

转化生长因子-β1诱导新生大鼠肺成纤维细胞增殖的细胞周期调控研究北大核心CSCD

目的探讨转化生长因子（TGF）-β1刺激下细胞周期调控对肺成纤维细胞增殖的影响,了解支气管肺发育不良（BPD）的发病机制。方法对出生1 d新生大鼠的肺成纤维细胞进行分离、纯化和鉴定,将原代肺成纤维细胞经TGF-β1刺激后,应用免疫组织化学及Western blot技术检测周期蛋白依赖性激酶-2（CDK2）及p27的蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测CDK2及p27的mRNA表达,并同时应用CCK8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果对鉴定后的新生大鼠肺成纤维细胞进行TGF-β1刺激后,可以观察到原代成纤维细胞的CDK2蛋白及mRNA表达增加,并伴p27蛋白及mRNA水平下降;CCK8显示吸光度值增高,增殖明显,S期细胞所占比例同时增加,G0/G1期逐渐减少。0、10 μg/L的TGF-β1刺激后S期细胞所占比例分别为4.63%、67.09%,G0/G1期为83.67%和67.09%。10 μg/L的TGF-β1刺激12 h和48 h后S期细胞所占比例分别为7.64%、9.11%,G0/G1期为73.99%和59.81%。随着TGF-β1水平增加（0 μg/L、5 μg/L及10 μg/L）,CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加;并且相同水平TGF-β1刺激,随着时间的延长（10 μg/L的TGF-β1刺激12、24、48 h）,CDK2蛋白及mRNA表达进一步增加,48 h较对照组增加显著（P〈0.05和〈0.01）,p27蛋白及mRNA水平随之进一步下降,48 h较对照组增加显著（均P〈0.01）。结论TGF-β1能够使新生大鼠肺原代成纤维细胞CDK2/p27表达失衡,加速细胞周期进程,使成纤维细胞过度增殖。     

TGF-β1、VEGF在儿童原发性肾病综合征中的表达及其临床意义

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）和血管内皮生长因子（VEGF）与儿童原发性肾病综合征（PNS）蛋白尿的关系及其在不同病理类型肾组织中的表达差异,探讨PNS蛋白尿的可能发生机制及导致肾纤维化的影响因素。方法应用ELISA法测定正常对照组与NS组患儿血清TGF—β1、VEGF水平,比较两指标与蛋白尿、肾病不同病理类型间的关系及两者间的相关性;应用免疫组化法检测不同病理类型PNS与正常肾组织中TGF—β1、VEGF的蛋白表达,并比较其差异。结果①蛋白尿阳性NS组,其血清TGF—β1、VEGF水平均分别较对照组和蛋白尿阴性组显著增高（P〈0．05）,两指标间呈正相关（r=0．4305）。②在不同病理类型中,局灶节段硬化性肾炎（FSGS）组血清TGF—β1水平显著高于微小病变型肾病（MCNS）组、系膜增生型肾小球肾炎（MSPGN）组及对照组（P〈0．01）。③FSGS及MSPGN组血清VEGF水平较MCNS组与对照组显著增高（P〈0．05）。④TGF-β1、VEGF在病变肾组织中阳性表达面积均显著高于对照组（P〈0．05）。⑤TGF—β1的蛋白表达强度在MCNS、MSPGN、膜性肾病（MN）、FSGS4组中呈逐渐增强趋势,其中FSGS组TGF—β1表达较无纤维化组明显增强（P〈0．05）;而VEGF蛋白表达强度在不同病理类型之间以及有无间质纤维化之间差异无显著性（P〉0．05）。结论①血清TGF—β1、VEGF水平与PNS蛋白尿的产生有关,且与肾脏病理损害类型有关;②NS患儿肾组织均存在TGF-β1、VEGF蛋白表达增强,尤以TGF—β1表达增强为著,且表达强度可能与小管间质纤维化程度有关。     

内皮细胞损伤在马兜铃酸肾病中的作用及其机制

目的 通过观察马兜铃酸-I(AA-I)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖、凋亡、分泌、转分化的影响,探讨其与共刺激分子CD40/CD40L、转化生长因子-β1(TGF-β1)/TGF-βⅡ型受体(TGF-βⅡR)的关系.方法 应用不同刺激浓度的AA-I作用于HUVEC,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪(FCM)检测AA-I对HUVEC增殖和凋亡的影响; FCM检测血管内皮细胞的标志分子血管内皮生长因子受体(Flk1),共刺激分子CD40L、促纤维化细胞因子TGF-βⅡR表达的变化;Western blot法测定肌成纤维细胞的标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、CD40、TGF-β1表达的变化;酶联免疫吸附法检测HUVEC分泌TGF-β1的变化.结果 不同浓度AA-I作用于HUVEC培养96 h后,高浓度AA-I导致细胞增殖受到抑制,各刺激浓度均可导致凋亡,Flk1表达下调、α-SMA表达上调,共刺激分子CD40/CD40L、TGF-β1/TGF-βⅡR 表达增加,明显促进TGF-β1的分泌(P<0.05),上述实验数据改变均呈明显的剂量相关性.结论 AA-I不仅能够抑制内皮细胞增殖,促进其凋亡,并能使其向平滑肌样细胞转化和纤维化.     

维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响

为探讨维甲酸对高氧暴露下新生大鼠肺组织中Ⅰ型胶原含量的影响。将生后2d的SD大鼠随机分为4组：（1）空气 生理盐水组；（2）高氧 生理盐水组；（3）高氧 地塞米松组；（4）高氧 维甲酸组。（2），（3）和（4）组持续暴露于85%O2中，于生后14d采用免疫组化和原位杂交方法对肺组织中Ⅰ型胶原蛋白，转化生长因子βⅠ，Ⅱ型受体，肺组织中Ⅰ型胶原mRNA行定位，半定量检测，作HE染色行辐射状肺泡计数，结果显示，与高氧 生理盐水组相比，高氧 维甲酸组辐射状肺泡计数显著增加，肺组织中Ⅰ型胶原蛋白表达明显增强，而Ⅰ型胶原基因表达和转化生长因子βⅠ，Ⅱ型受体表达显著减弱，阳性表达明显改变的分布主要在支气管上皮细胞，肺泡上皮细胞和肺内间质细胞，提示维甲酸通过对Ⅰ型胶原mRAN转录后调控和调节Ⅰ型腾的蛋白的降解而啬 肺内胶原含量，从而起到逆转高氧对肺发育抑制作用。     

肝细胞生长因子在哮喘大鼠气道内的表达及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对其表达的影响

目的探讨哮喘大鼠发病过程中,肝细胞生长因子(HGF)在其气道内表达的变化及血管紧张素II受体AT1拮抗剂对其表达的影响。方法清洁级SD大鼠48只,随机分为正常对照组、卵蛋白(OVA)激发3 d组、OVA激发2周组、OVA激发4周组、OVA激发4周后使用AT1受体拮抗剂组、OVA激发4周后使用盐水对照组。观察OVA激发的不同时间、药物干预后哮喘大鼠气道的病理改变;免疫组化方法观察HGF、血管紧张素II(AngII)、转化生长因子(TGF)-β1表达的变化。结果HGF在OVA激发3 d即明显高于正常对照组(P<0.05),OVA激发2周HGF在气道中的表达水平最高,OVA激发4周时下降;AngII、TGF-β1表达水平随OVA激发时间的延长而持续上升;使用AT1受体拮抗剂后,气道HGF表达水平有所上升,而AngII、TGF-β1均下降,同时哮喘大鼠的气道重塑有所改善。结论HGF在哮喘发病过程中起保护作用,AngII、TGF-β1对HGF具有负向调节作用,AT1受体拮抗剂在一定程度上可提升内源性HGF表达,改善哮喘大鼠的气道重塑。     

丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的抑制作用

目的 探讨丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化的作用及可能机制.方法 雄性SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组和丹参酮ⅡA组.假手术组仅找到输尿管,不行结扎术.模型组结扎大鼠左侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型.丹参酮ⅡA组术前24 h经腹腔注射丹参酮ⅡA,剂量为1.5 mg/(kg*d),手术操作同模型组.术后第10天取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察其肾间质病理改变.免疫组织化学法检测其肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原的蛋白表达与定位.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3者mRNA水平.结果 输尿管结扎术后第10天梗阻侧出现明显的肾间质纤维化,肾组织TGF-β1、α-SMA和Ⅰ型胶原的蛋白及mRNA表达均显著增加(Pa<0.01).经丹参酮ⅡA治疗后,肾间质纤维化程度减轻,肾组织TGF-β1、α-SMA及Ⅰ型胶原表达均下调(Pa<0.05).结论 丹参酮ⅡA对大鼠肾间质纤维化有明显的抑制作用,其机制可能与下调TGF-β1表达,抑制成纤维细胞增殖和表型转化,减少胶原沉积有关.     

维甲酸诱导大鼠脊髓脊膜膨出动物模型的建立及相关蛋白表达的研究

目的 探索利用全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠胎鼠脊髓脊膜膨出(MMC)建立神经源性膀胱(NBD)的大鼠动物模型,并观察相关病理表现及蛋白表达.方法 探索在不同给药时间及不同ATRA剂量下,大鼠胎鼠MMC的发生情况,得到最佳诱导致畸时间及ATRA剂量,建立动物模型;所得胎鼠分为MMC组(胎鼠出现MMC,不合并其他严重畸形)、RA组(胎鼠外观正常,无明显畸形)、OIL组(母鼠同期灌胃2ml橄榄油,得到正常胎鼠).观察该模型胎鼠相关组织的病理表现,并通过免疫组化方法测定脊髓组织GFAP、膀胱组织α-SMA、膀胱tubulin-β-Ⅲ和nNOS表达情况.结果 在母鼠孕10d(E10)以120 mg/kg的剂量灌胃ATRA能获得最佳建模效果;MMC组胎鼠脊髓组织病理表现存在异常,膀胱组织病理表现基本正常;MMC组胎鼠脊髓组织GFAP蛋白表达(5.5±1.6)×1 04,较RA组的(2.5±2.0)×104增加,膀胱组织α-SMA蛋白无明显差异,MMC组膀胱组织tubulin-β-Ⅲ和nNOS蛋白表达分别为(22.4±2.7)×104、(16.1±4.1)×104,较RA组的(28.4±8.3)×104、(25.6±7.1)×104减少.结论 ATRA能诱导大鼠胎鼠产生MMC,得到MMC相关NBD动物模型;其MMC胎鼠具有典型的脊髓损伤表现,尽管膀胱肌层发育正常但存在明显的神经分布异常.     

氯沙坦片对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1及结缔组织生长因子的影响

目的 观察糖尿病肾病（DN）大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）在肾组织中的表达，检测尿液中两者的水平。观察氯沙坦片对肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达及尿液中水平的影响。方法 Wistar大鼠摘除右肾后，注射链脲菌素制造DN大鼠模型。随机分为糖尿病肾病实验组和氯沙坦治疗组。于第6、12周用免疫组织化学法检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白质的表达，ELISA法检测尿液中两者水平。结果 与治疗组相比，实验组12周时尿液TGF-β1、CTGF水平、肾间质纤维组织相对面积显著增加，肾组织TGF-β1、CTGF蛋白质的表达显著升高（P均〈0．01）；肾小球系膜基底膜相对面积扩大（P〈0．05）。与6周相比，实验组12周时尿液TGF-β1、CTGF水平，肾间质纤维组织相对面积显著增加。肾组织内TGF-β1、CTGF蛋白质的表达亦明显升高（P均〈0．01）；治疗组12周肾小球TGF-β1蛋白质的表达升高（P〈0．05），肾小管TGF-β1蛋白质的表达明显升高（P〈0．01）。肾组织内TGF-β1蛋白与CTGF蛋白的表达呈显著正相关（r=0．85P〈0．01），尿液中两者排泄量亦呈明显正相关（r=0．76P〈0．01）。结论 TGF-β1、CTGF蛋白在DN大鼠肾组织表达及尿液中的排泄显著升高。氯沙坦可减轻肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达，减少两者尿液中的排泄，具有肾保护作用。