神经生长因子对新生大鼠HIBD后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的:应用新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,观察神经生长因子对海马区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax的影响,探讨其神经保护作用的分子生物学机制. 方法:72只大鼠随机分为对照组、HIBD组和NGF治疗组. 应用改良RICE法制作大鼠HIBD模型,TUNEL法检测各组动物海马区细胞凋亡数,免疫组化染色观察Bcl-2, Bax蛋白的表达. 结果:与假手术组相比,新生大鼠HIBD后海马区存在不同程度的细胞凋亡,Bcl-2表达轻度升高,Bax表达明显升高. 与HIBD组比较,NGF治疗后,凋亡细胞减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.01),Bax表达下降(P＜0.01). 结论:HIBD后,新生大鼠海马区细胞存在细胞凋亡,NGF治疗增强Bcl-2表达,减少损伤基因Bax表达,抑制细胞凋亡,具有脑保护作用.     

新生大鼠缺氧缺血时脑皮质Fas-L的变化

目的: 探讨缺氧缺血脑损伤时脑皮质Fas-L蛋白表达的变化.方法: 建立新生儿缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型并设假手术组作为对照,根据检测需要,在缺氧、缺血后24 h,3 d,7 d应用免疫组织化学SP法测定脑皮质Fas-L蛋白表达情况.结果: 左脑皮质Fas-L蛋白表达阳性率假手术组、实验组24 h依次为8.04±3.50,120.20±6.10 ; 3 d依次为8.20±3.10,87.6±5.90; 7 d依次为8.01±2.80,8.32±2.90.实验组与假手术组比较,在第7天时,差异无显著性(P＞0.05);24 h,3 d时明显增多,差异显著(P＜0.05).结论: 新生大鼠HIBD后24 h,3 d,7 d结扎侧脑皮质,Fas-L蛋白开始表达增高,后降低.     

脑红蛋白在大鼠脑皮层缺血半影区表达的变化

目的:研究大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层脑红蛋白(neuroglobin,NGB)的表达.方法:采用免疫组化结合阳性细胞计数测定损伤后不同时间皮层缺血半影区NGB变化.结果:与假手术组比较,缺血半影区NGB阳性神经元呈先升后降的趋势.结论:NGB对缺血性脑损伤有适应性保护作用.     

缺血再灌注对大鼠睾丸脑红蛋白表达的影响

目的探讨大鼠睾丸缺血再灌注对脑红蛋白（neuroglobin,NGB）表达的影响及意义。方法48只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组,建立大鼠睾丸缺血再灌注模型,分别于缺血再灌注后3、6、12、24、48、96h脱颈处死大鼠,提取睾丸组织,常规HE染色进行形态学观察,应用实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测NGB的表达变化。结果大鼠睾丸缺血再灌注性损伤后睾丸生精细胞水肿,96h后可见细胞层数减少,排列紊乱,管腔内精子细胞减少。NGB在睾丸缺血再灌注后表达升高,其中mRNA水平6h组和48h组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）,蛋白水平6h组、12h组和96h组与正常对照组相比差异显著（P〈0．05）。结论NGB在大鼠睾丸缺血再灌注后表达升高可能对睾丸损伤有一定的保护作用。     

脑红蛋白的神经细胞保护机制研究概况

氧是机体新陈代谢和维持生存的必要因素，人们很早就知道血红蛋白（Hb）和肌红蛋白（Mb）是机体氧的转运与储存、线粒体耗氧产能及清除多余氧等过程中的关键物质。而对高耗氧的脑组织，人们一直都未能发现能够促进神经系统氧利用的关键分子。脑红蛋白（Ngb）是德国科学家Burmester T等在2000年首次发现的存在于人和小鼠脑组织内，功能上类似于肌红蛋白的携氧球蛋白。含量虽低，仅占脑组织蛋白的0．01％左右，但与脑的氧供应密切相关，在分子水平上调节脑组织氧的供应状态，     

新生大鼠缺氧缺血后不同部位脑组织中Par-4基因的表达

目的：观察Par-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后，不同脑组织中的表达。方法：制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT-PCR检测脑缺氧缺血后不同时间点海马组织、大脑额叶皮质及小脑中Par-4的mRNA表达的改变，利用Western blot检测在缺氧缺血24h后，海马组织大脑额叶皮质和小脑中Pat-4蛋白表达量的改变。结果：①海马组织和大脑额叶皮质中的Pat4 mRNA在脑缺氧缺血后2h已明显升高，至6h已达高峰。而小脑未见表达；②在新生大鼠脑缺氧缺血24h后，海马组织及大脑额叶皮质中Pat-4蛋白表达量显著升高，并且海马组织中Par-4蛋白表达量高于大脑额叶皮质中Par-4蛋白表达量。而小脑未见其蛋白表达。结论：缺氧缺血对新生大鼠不同脑组织中Par-4基因表达影响不同，Pat-4可能参予了缺氧缺血对新生大鼠海马组织和大脑额叶皮质的致病过程。     

海马脑片氧糖剥离模型中血晶素对脑红蛋白表达的影响

目的:观察血晶素(Hemin)对海马脑片氧糖剥离(Oxygen/glucose deprivation,OGD)模型的保护作用及其对脑红蛋E(Neuroglobin,Ngb)表达的影响.方法:取新生8-10d SD大鼠,制备厚约400um海马脑片,培养2周后筛取完好无特异荧光着色的脑片,随机分为3组:正常培养对照组(HOTC),单纯缺氧缺糖组(OGD),预加Hemin再缺氧缺糖组(Hemin+OGD).除HOTC组外,其余各组在5%CO2、95%N2的混合气体中培养1.5 h,其后恢复培养24 h.冰冻连续冠状切片,分别作尼氏染色、Ngb 的免疫组织化学染色.应用免疫组织化学染色和图像分析处理技术观察海马脑片Ngb蛋白表达,并观察神经元形态学改变.结果:OGD组锥体细胞发生坏死,锥体细胞数量明显减少;Hemin+OGD组坏死较前者轻,锥体细胞数较前者多.OGD组海马脑片中形态结构正常的阳性细胞少,多数阳性神经元结构模糊、肿胀,Ngb的表达强于HOTC组,二者相比有显著性差异(尸<0.05)Hemin+OGD组海马脑片中大部分细胞形态结构正常,少数阳性神经元结构模糊、肿胀,Ngb蛋白的表达较HOTC组和OGD组明显增强(P<0.01).结论:血晶素可减轻海马脑片缺糖缺氧性损伤,其机制可能与其诱导神经元表达Ngb密切相关.     

电针治疗对缺氧缺血新生大鼠海马组织超微结构的影响

目的：探讨电针治疗对缺氧缺血新生大鼠脑组织超微结构的影响。方法：9只出生7d的Wistar大鼠,随机分为3组。假手术对照组不进行缺氧处理,缺氧缺血组制备成缺氧缺血模型,电针治疗组于缺氧缺血模型制备成功后,电针针刺“百会”、“大椎”两穴。常规饲养22d后,取海马区脑组织制成超薄切片,电镜观察其超微结构变化。结果：缺氧缺血组海马区脑组织神经元及神经胶质细胞损伤明显,缺氧缺血后电针治疗组神经组织超微结构与假手术对照组差异无统计学意义,而受损程度明显轻于缺氧缺血组。结论：电针具有促进缺氧缺血大鼠脑组织损伤修复的作用。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧后新生大鼠海马神经元增殖的影响

目的：探讨氦氖激光穴位照射疗法对缺血缺氧新生大鼠脑损伤后海马神经元增殖的影响。方法：7d龄健康Wistar大鼠72只随机分成4组：假手术组、缺血缺氧组、缺血缺氧激光穴位照射组、缺血缺氧激光非穴位照射组。制备新生大鼠缺血缺氧脑损伤模型,激光穴位照射组选择“百会”和“大椎”穴位给予氦氖激光照射．激光非穴位照射组选择腹部非穴位部位进行激光照射,常规饲养22d后处死,处死前经腹腔注射5-溴-2-脱氧脲嘧啶(BrdU)标记增殖细胞。取左侧脑做组织切片,HE、Nissl染色以及采用抗BrdU抗体和神经上皮蛋白(Nestin)抗体进行免疫组织化学染色。结果：激光穴位照射组与其他组比较海马神经元胞体内尼氏体丢失较少,神经元坏死减轻,海马齿状回BrdU标记的免疫阳性细胞数增加,海马CA1区Nestin免疫阳性细胞数增高。结论：激光穴位照射对海马神经元有保护作用,促进了海马神经元的增殖。     

原代培养神经元细胞缺氧损伤后脑红蛋白表达研究

目的探讨皮层神经元细胞缺氧损伤后脑红蛋白的表达。方法构建C57BL／6胎鼠皮层神经元原代培养的细胞缺氧模型,联合MTT微量酶反应比色法、Real—TimePCR、免疫荧光染色及Western Blot等方法,观察缺氧后细胞形态学、细胞生存率、NgbmRNA及蛋白表达情况。结果原代培养皮层神经元缺氧4h后细胞生存率明显下降,NgbmRNA及蛋白表达升高,8h达高峰,此后逐渐稳步下降,至缺氧24h仍高于对照组。结论缺氧损伤可诱导原代培养皮层神经元NgbmRNA及蛋白的表达。     

新生大鼠脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA及蛋白的表达

目的 观察μ-calpain基因及蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)脑组织中的表达情况,探讨其在HIBD发生中的作用.方法 7日龄新生SD大鼠随机分为假手术对照组及HIBD后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h各组,采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察μ-calpain mRNA及蛋白随时间变化的表达情况.结果 HIBD后6 h损伤侧脑组织μ-calpain mRNA开始增高,24 h达到高峰(P＜0.05),48～72 h下降,但是仍然高于对照组(P＜0.05);μ-calpain蛋白的活性在HIBD后6～12 h表达增高(P＜0.05),24 h达到高峰(P＜0.01),48～72 h仍处于较高水平(P＜0.05).结论 μ-calpain mRNA及蛋白在HIBD新生鼠脑中表达增高,可能参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.     

新生大鼠缺氧缺血脑组织水肿及水通道蛋白-4的表达变化

目的 探讨新生SD大鼠缺氧缺血不同时间点脑组织水肿及水通道蛋白-4 (AQP-4) 表达的功能意义。 方法 健康3 d龄SD大鼠60只, 分为对照组 (12只) 和缺氧缺血脑损伤模型 (HIBD)组 （48只)。HIBD 组行右侧颈总动脉结扎后,分为吸入80 mL/L O2+920 mL/L N2 4 h、8 h、16 h、24 h 四个亚组,每组12只大鼠。对照组仅行假手术, 不予右颈总动脉结扎和缺氧缺血。HIBD各亚组分别于持续缺氧缺血4 h、8 h、16 h、24 h后处死动物,对照组于手术后12 h处死。取脑组织分别进行HE染色观察脑组织病理改变、脑含水量测定、实时荧光定量PCR检测大脑海马AQP-4 mRNA表达。 结果 HE染色示:随着缺氧缺血时间延长,右脑神经细胞与胶质细胞肿胀进行性加重,24 h组神经细胞溶解损伤明显,胶质细胞稀疏变性。HIBD 组右侧大脑持续缺氧缺血8 h、16 h和24 h脑组织含水量均较对照组增加, 差异有统计学意义 (P<0.05);实时荧光定量PCR显示右脑海马AQP-4 mRNA表达较对照组减少 (P<0. 05)。 结论 新生大鼠缺氧缺血后脑组织水肿,海马AQP-4表达下调,提示AQP-4与脑组织水肿有关。     

川芎嗪对新生鼠缺血缺氧脑损伤FOS蛋白表达的影响

目的：研究实验性大鼠缺血缺氧脑损伤（HIBD）时FOS蛋白的表达及川芎嗪对FOS蛋白表达的作用。方法：采用7日龄SD新生鼠结扎左侧颈总动脉并进行缺氧，制备HIBD模型，应用免疫组化方法观察川芎嗪对HIBD新生鼠海马和皮质部位FOS蛋白表达的影响。结果：生理盐水对照组海马、皮质部位FOS表达明显增强；经川芎嗪干预后，HIBD新生鼠海马、皮质FOS蛋白表达均显著降低（P＜0．05）。结论：提示川芎嗪可抑制缺血缺氧脑损伤FOS蛋白的表达，对HIBD具有保护作用。     

脑红蛋白在人体组织细胞的定位分布及意义

目的探讨脑红蛋白(NGB)在人体组织细胞的定位分布及其意义。方法用免疫组织化学SP法检测NGB在人体不同组织细胞的分布和定位。结果NGB主要分布在人体中枢神经系统和周围神经系统的神经细胞内,在某些内分泌组织和生殖系统亦有分布。NGB免疫反应阳性物质主要定位于细胞质中。结论NGB在人体神经组织、内分泌组织和生殖系统的表达提示NGB对这些组织的氧利用及功能活动有重要作用。     

大鼠脑创伤后皮质Bax蛋白表达及神经细胞凋亡对运动功能影响的实验研究

近年来 ,分子生物学研究发现 ,大脑皮质作为脑损伤后易损区 ,伤后出现神经细胞延迟性死亡 ,从而出现长期运动功能障碍。目前 ,国内外有关这一领域的研究大多局限于缺血性脑损伤 ,而有关脑创伤后这一领域的确切机制尚无全面的报道。因此 ,本研究利用Ｍａｒｍａｒｏｕ重型闭合性颅脑损伤模型[1] ,采用免疫组织化学、原位细胞凋亡检测及ＮＳＳ评分对大鼠脑创伤后神经细胞凋亡以及运动功能障碍的相关机制进行探讨 ,同时应用美洛宁进行治疗 ,以期为临床治疗颅脑创伤患者提供新的理论基础和治疗途径。1　材料与方法1.1　实验动物分组　取成年健康…     

大鼠脑创伤后海马区p53蛋白表达对神经细胞凋亡影响

目的 :从分子生物学水平 ,进一步深入研究颅脑创伤后神经细胞延迟性死亡的机制 ,探讨美洛宁对大鼠脑创伤后的影响 ,为临床治疗颅脑创伤提供一定的理论基础 .方法 :采用重型闭合性颅脑创伤模型 .利用免疫组化及原位凋亡检测 ,动态观察大鼠颅脑创伤后海马区p5 3蛋白的表达及神经细胞凋亡 .结果 :假手术组及正常对照组海马CA2区未检测出 p5 3蛋白的表达及凋亡阳性细胞 .创伤组大鼠伤后 3h海马CA2区出现 p5 3蛋白表达 ,2 4h (A =0 .14 9± 0 .0 16 )达高峰 ,72h即有所下降 ;伤后 2 4h ,海马CA2区即出现少量凋亡阳性细胞 ,于 16 8h (2 9.2± 4 .7/HP)达高峰 ,336h凋亡阳性细胞下降 .美洛宁组的 p5 3蛋白表达高峰 (A =0 .10 6±0 .0 17)及细胞凋亡的高峰 (2 1.0± 4 .6 /HP)较创伤组明显下调 .结论 :脑创伤后 p5 3蛋白表达增加可能造成神经细胞凋亡 ,美洛宁能够减少脑创伤后 p5 3蛋白表达 ,抑制神经细胞凋亡 .     

新生大鼠缺血缺氧后脑组织TLR-4基因的表达

目的观察TLR-4基因在新生大鼠脑缺氧缺血后脑组织中的表达。方法制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型。利用RT—PCR方法检测脑缺氧缺血后脑组织TLE-4mRNA的表达。结果TLR-4在脑缺氧缺血后6h已明显升高,至12h已达高峰,较假手术组和正常对照组比较,差异有统计学意义。结论TLB-4基因可能参与了新生大鼠缺血缺氧后的炎症损伤过程。     

氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响

目的：探讨氦氖激光穴位照射对缺血缺氧新生大鼠海马组织超微结构的影响。方法：9只新生Wistar大鼠,随机分为3组：假手术组、缺血缺氧组、激光穴位照射组,每组3只。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不缺氧,后2组均制作缺血缺氧模型,缺血缺氧组动物不加任何治疗,激光穴位照射组于缺血缺氧后2d,采用氦氖激光穴位照射。常规饲养22d后,取海马区脑组织电镜下观察其超微结构的变化。结果：假手术组海马区神经细胞结构清晰,细胞核膜光滑,胞浆内细胞器丰富,结构完整;缺血缺氧组神经细胞胞体水肿,核膜模糊,细胞器明显减少;激光穴位照射组神经细胞水肿减轻,核膜较清晰,细胞器较丰富。结论：氦氖激光穴位照射具有减轻缺血缺氧对大鼠海马组织超微结构损伤的作用。     

17β-雌二醇对缺氧缺血性脑病新生大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响

目的 观察17β-雌二醇(17β-E2)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型脑细胞凋亡及血清sFas、sFasL水平的影响.方法 将7日龄SD大鼠75只随机分为假手术组、HIBD组以及HIBD E2组,每组25只.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)分别测定血浆sFas、sFasL的含量,TUNEL法检测脑细胞凋亡率.结果 HIBD E2组与HIBD组相比,CA1区的凋亡细胞数明显减少,尤其在24 h最明显;sFas、sFasL水平在各个时间点均明显降低,尤其在48 h最明显(F=2.37～21.02,q=2.32～8.34,P<0.05、0.01).结论 腹腔内给予17β-E2可明显减少HIBD模型鼠海马CA1区细胞凋亡,sFas、sFasL水平呈明显回降.     

早期干预对宫内缺氧缺血大鼠脑功能及神经生长相关蛋白表达的影响

目的 通过建立宫内缺氧缺血大鼠动物模型，研究早期干预能否促进脑组织内神经生长相关蛋白(GAP-43)表达以影响受损脑功能的修复。方法 依照“延迟剖宫”方法建立缺氧缺血脑损伤(HIBD)大鼠模型．另一侧未结扎血管的子宫内胎鼠作为对照组。根据随机分组原则，分为HIBD干预组、HIBD非干预组、正常干预组、正常非干预组，每组15只。干预组采用早期视触听觉刺激和丰富环境的早期干预方法，于术后24h开始至生后28d。非干预组常规饲养，不予以干预。而后采用跳台测试、脑电图检测大鼠脑功能；尼氏染色观察脑组织病理学变化；免疫组织化学方法测定脑组织GAP-43表达水平。统计学检验采用SPSS 11．0统计软件包进行处理。