氯化钆对内毒素刺激后小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响

目的观察氯化钆(GdCl3)对内毒素刺激后的小鼠巨噬细胞来源的细胞系RAW264.7细胞Toll样受体(TLRs)表达的影响。方法RAW264.7细胞分为空白组、内毒素处理组(LPS组)及GdCl3处理组(GdCl3组),采用流式细胞仪检测TLR2/4蛋白表达情况;用逆转录PCR(RT-PCR)法分析细胞中TLR2/4mRNA表达的变化;用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α的水平。结果与LPS组相比,不同浓度的GdCl3作用于RAW264.7细胞后,其TLR2/4蛋白和基因的表达以及TNF-α的表达水平均明显下降,在观察浓度范围内以2000μmol/L时最明显,TLR2/4蛋白:200μmol/L时为(70.2±1.28)%/(66.7±2.59)%,400μmol/L时为(64.9±1.43)%/(60.4±1.25)%,2000μmol/L时为(47.4±0.98)%/(32.1±0.74)%,其与LPS组的(94.4±1.76)%/(95.7±0.87)%比较,P<0.01;TLR2/4mRNA(A值):200μmol/L时为(76.42±2.76)/(101.72±3.14),400μmol/L时为(75.60±3.76)/(89.65±5.17),2000μmol/L时为(64.22±4.67)/(78.44±4.88),其与LPS组的(127.64±3.25)/(119.82±5.59)比较,P<0.05,P<0.01;TNF-α:200μmol/L时为(2540±77)pg/ml,400μmol/L时为(2041±106)pg/ml,2000μmol/L时为(1020±220)pg/ml,其与LPS组的(4688±127)pg/ml比较,P<0.01。结论GdCl3能明显抑制内毒素引起的RAW264.7细胞Toll样受体的表达及相应炎症因子的生成。     

重症急性胰腺炎大鼠脾脏巨噬细胞Toll样受体4的表达及分泌细胞因子水平的变化

目的 观察重症急性胰腺炎（SAP）大鼠脾脏巨噬细胞（sMΦ）T0u样受体4（TLR4）基因表达及分泌细胞因子水平的变化。方法 建立大鼠SAP模型，分别于6、12、24、72h分离sMΦ，观察sMΦ静息状态下和经1mg／L脂多糖（LPS）刺激后分泌肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6、白细胞介素（IL）-10水平的变化，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测sMΦ TLR4mRNA表达。结果 予LPS刺激后，对照组sM（I）分泌TNF-α、IL-6和IL-10水平显著升高，分别由（1．1844±0．3490）μg／L、（214．14±33．41）ng／L、（20．26±3．71）ng／L升至（9．3110±1．9962）μg／L、（519．01±52．64）ng／L和（55．43±6．28）ng／L，TLR4 mRNA表达亦由0．9091±0．2763明显升高至2．1944±0．6098；而模型各亚组分泌TNF-α和IL-6水平较刺激前无明显变化，同时TLR4 mRNA表达出现不同程度下调，且各指标均明显低于对照组。结论 SAP大鼠sMΦ对内毒素耐受的发生与TLR4 mRNA表达下调有关。     

异丙酚对LPS诱导中性粒细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素(LPS)诱导中性粒细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 健康志愿者6名,年龄20～35岁,各采集外周静脉血样50 ml,加入20 U/ml肝素抗凝,分离提纯中性粒细胞,制备细胞悬液,然后随机分为6组,每组6皿:对照组(C组)不给予任何药物,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养12 h;异丙酚脂质溶剂intralipid组(I组)、异丙酚组(P组)和LPS组(L组):分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)、异丙酚(终浓度为5 μg/ml)或LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育12 h;intralipid+LPS组(IL组)和异丙酚+LPS组(PL组)先分别加入intralipid(终浓度为5 μg/ml)或异丙酚(终浓度为5 μg/ml)后,置于37℃、5%CO_2培养箱中孵育20 min,然后加入LPS(终浓度为1μg/ml),置于37℃、5%CO_2培养箱孵育12 h.采用流式细胞仪测定中性粒细胞膜TLR2和TLR4的表达;采用荧光定量PGR检测中性粒细胞膜TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达;采用ELISA法测定培养上清液TNF-α和IL-8的浓度.结果 与C组比较,I组和P组TLB2和TLR4的表达、1NF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),L组和IL组TLR2和TLR4的表达上调,L组TNF-α和IL-8L-8的浓度升高,IL组IL-8浓度升高(P<0.05);与L组比较,IL组TLR2和TLR4的表达、TNF-α和IL-8L-8的浓度差异无统计学意义(P>0.05),PL组TLR2和TLR4的表达下调,TNF-α和IL-8L-8的浓度降低(P<0.05).各组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 异丙酚可下调LPS诱导的中性粒细胞TLR2和TLR4的表达,从而抑制炎性反应.     

异丙酚对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4 mRNA表达的影响

目的 观察异丙酚对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹腔巨噬细胞Toll样受体-4（TLR-4）mRNA表达的影响，探讨异丙酚抑制LPS诱导白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF—α）产生的机制。方法 雄性Wistar大鼠32只，处死后分离腹腔巨噬细胞，随机分为4组（n=8）：A组（阴性对照组）；B组LPS（终浓度为1μg／ml）／加入巨噬细胞中；C组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为1μg／ml）加入巨噬细胞中；D组LPS（终浓度为1μg／ml）＋异丙酚（终浓度为5μg／ml）加入巨噬细胞中。细胞培养12h后。用ELISA方法检测培养上清液中IL-6、TNF-α的浓度，用RT-PCR方法检测TLR-4mRNA的表达水平。结果 与A组相比，B组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平均增加，C组IL-6、TLR-4m RNA水平升高（P〈0．01）；与B组相比，C组、D组IL-6、TNF-α和TLR-4m RNA水平降低（P〈0．05或〈0．01）。结论 异丙酚通过下调TLR-4m RNA的表达水平，从而一定程度上抑制了LPS诱导大鼠腹腔巨噬细胞，TNF-α和IL-6的产生。     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚对内毒索性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA和Toll样受体2(TLR2)mRNA表达的影响.方法 健康SD大鼠60只,雌雄不拘,体重200～220g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n=12),对照组(C组)、LPS组和低、中、高剂量盐酸戊乙奎醚组(P1组～P3组).C组腹腔注射生理盐水2ml;LPS组腹腔注射LPS 8mg/kg;P1组～P3组分别腹腔注射LPS 8 mg/kg和盐酸戊乙奎醚0.3、1.0和3.0 mg/kg.给药结束后6 h时开胸,心室取血,并取肺组织,采用ELISA法测定血清TNF-α和Ib-6的浓度,RT-PCR法测定肺组织TLR4 mRNA和TLR2 mRNA 的表达水平,并观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,LPS组、P1组～P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均升高(P<0.05);与LPS组比较,P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05),P1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与P1组比较,P2组和P1组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达均降低(P<0.05);P2组和P3组血清TNF-α、IL-6浓度和肺组织TLR4 mRNA、TLR2 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).P2组和P3组肺组织病理学损伤程度明显轻于LPS组.结论 盐酸戊乙奎醚可通过下调肺组织TLR4 mRNA和耵JR2 mRNA的表达,降低炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

盐酸戊乙奎醚对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4mRNA和Toll样受体2mRNA表达的影响

Objective To investigate the effect of penehyclidine (PHCD) on Toll-like receptor 4 (TLR4)mRNA and Toll-like receptor 2 (TLR2) mRNA expression in the lung tissue in rats with acute lung injury induced by lipopolysaccharide (LPS) .Methods Sixty healthy SD rats of both sexes weighing 200-220 g were randomly divided into 5 groups ( n = 12 each) :control group (group C) , LPS group and P1-3 groups. Acute lung injury was induced by intraperitoneal (IP) LPS 8 mg/kg in LPS and P1-3 groups. PHCD 0.3, 1.0 and 3.0 mg/kg were given IP after LPS administration in P1-3 groups. The animals were anesthetized at 6 h after IP LPS. Blood samples were collected for determination of serum TNF-α and IL-6 concentrations ( by ELISA) and then sacrificed, the lungs were immediately removed for determination of TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression (by RT-PCR), and microscopic examination. Results LPS significantly increased TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and IL-6 concentrations. PHCD 1.0 or 3.0 mg/kg significantly inhibited LPS-induced increase in TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and serum TNF-α and ILr6 concentrations.The lung histopathologic damage was significantly ameliorated in P2 and P3 groups as compared with group LPS.Conclusion PHCD can protect the lungs against LPS-induced acute lung injury through inhibiting TLR4 mRNA and TLR2 mRNA expression in the lung tissue and reducing the inflammatory response.     

脂多糖通过Toll样受体对雄性生殖功能的影响

生殖道感染是影响男性生育的重要因素之一,然而其机制尚未完全明了。最近研究认为病原体模式识别受体之一Toll样受体(TLRs)及其诱导的信号通路在炎症导致雄性不育过程中发挥着重要作用。脂多糖(LPS)作为革兰阴性菌细胞壁组成成分,可以通过TLRs诱导相应的炎症反应。众多研究表明,TLRs在雄性生殖道广泛表达,并且LPS可通过TLRs诱导生殖道炎症反应,影响雄性生殖功能。本文就LPS通过其相关受体TLRs通路诱导生殖道炎症,影响睾丸、附睾功能及精子质量,导致雄性生殖功能受损的机制进行综述。     

手术创伤后Toll样受体4/髓样分化蛋白-2的表达

目的研究手术创伤对Toll样受体4(TLR4)/髓样分化蛋白2(MD2)表达的影响及其临床意义。方法设计自身配对实验,采集12例手术患者外周静脉血;用密度梯度离心法和黏附洗脱法分离单核细胞,用流式细胞仪检测单核细胞TLR4和MD2的表达;血浆脂多糖(LPS)、血浆TNFα和IL10,以及血浆TLR4和MD2含量分别用鲎试剂法、放免法和ELISA法检测。结果单核细胞TLR4和MD2在术后第1～3天显著上调表达(P<0.01),两者具有显著相关性;围手术期血浆LPS在正常范围波动(<50μg/L),血浆TNFα在各时间点差异无统计学意义(P>0.05);血浆IL10于术后第3天显著升高(P<0.01);血浆MD2在术后第3～5天显著升高(P<0.01),而TLR4仅在第3天轻度升高(P>0.05)。结论手术创伤早期可导致TLR4/MD2上调表达,致机体敏感性增强;此后血浆抑制性介质IL10和MD2升高并产生免疫抑制效应。这种双向性变化可能是大手术后全身炎症反应综合征(SIRS)和脓毒症发生的分子机制之一。     

内毒素受体及跨膜信号转导研究进展

内毒素是革兰氏阴性菌的主要毒性成分，可引发机体的炎症级联反应，被公认为是导致全身炎症反应综合征、脓毒症、严重休克、多脏器功能衰竭的主要致病因子。深入研究内毒素的受体和信号转导可望为脓毒症等危重病人的治疗提供新思路。     

一氧化氮对重症急性胰腺炎肺损伤Toll样受体2/4表达的影响

目的 观察一氧化氮（NO）对重症急性胰腺炎（SAP）肺损伤Toll样受体（TLR）表达的影响。方法 动物分为假手术组、胰腺炎组、氯喹（CQ）治疗组和L-精氨酸（L-Arg）治疗组；实时荧光逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肺组织TLR2／4mRNA表达。结果SAP大鼠肺组织TLR2／4表达明显增高（3h：0．787±0．751、1．512±1．794E-2：6h：1．086±1．738、2．097±3．735E．2；12h：1．113±6．141、2．957±2．620E-2），肺损伤加重（P〈0．05或P〈0．01）。以CQ抑制肺组织中TLR2／4表达后（3h：0．313±5．491E-2，0．005±1．419E-3；6h：0．488±7．442E．2，0．010±1．518E-3；12h：0．883±8．911E-2，0．024±2．760E-3），肺损伤减轻（P〈0．05或P〈0．01）。给予L-Afg治疗后，肺组织NO浓度明显升高，TLR2／4表达降低（0．656±3．972 E-2，1．501±6．111 E-2；0．260±0．891 E-2，0．732±5．135 E-2；0．126±0．914 E-2，0．414±1．678E-2），肺损伤程度减轻（P〈0．05或P〈0．01）。结论 肺组织内TLR2／4表达在SAP肺损伤中明显上调，肺组织损伤加重；NO可以明显抑制SAP肺组织TLR2／4表达从而减轻肺组织损伤。     

拮抗Toll样受体4的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用

目的观察拮抗Toll样受体4（TLR4）的表达对内毒素血症小鼠肾脏损伤的保护作用以及对细胞核因子-κB（NF-κB）p65的影响。 方法采用内毒素（LPS）诱导的小鼠急性肾功能衰竭模型,并应用TLR4单克隆抗体进行干预,观察TLR4单克隆抗体对内毒素血症小鼠的肾脏组织学、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、胱抑素C、白细胞介素（IL）-1β、IL-6水平以及肾组织中TLR4及NF-κB水平的影响。 结果与模型组比较,TLR4单克隆抗体能够明显改善内毒素血症小鼠肾脏组织病理学损害;降低血清中Cr、BUN、胱抑素C、IL-β和IL-6水平（t = 7.20、7.86、9.99、8.79、3.92,P均< 0.05）,并且降低肾组织中TLR4及NF-κB p65水平（t = 20.94、11.21,P均< 0.05）。 结论TLR4单克隆抗体能够保护内毒素血症小鼠肾脏组织损伤,其作用机制可能与调节TLR4/NF-κB信号转导通路有关。     

肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义.方法 以野生型小鼠C3h/Heouj及TLR4缺失小鼠C3h/Hej复制全肝脏缺血再灌注损伤模型,分别于缺血20 min再灌注1 h,6 h时经支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)获取肺泡巨噬细胞和肺泡灌洗液,采用免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞表面TLR4的表达,并以鲎试剂内毒素检测试剂盒和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灌洗液中内毒素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.同时检测肺组织湿/干重比值、肺组织髓过氧化物酶(myeloperosidase,MPO)的含量以及计算肺组织学评分.结果 (1)与假手术组小鼠相比,野生型小鼠(C3h/Heouj)在缺血再灌后各时间点肺泡巨噬细胞Toll样受体4蛋白表达升高,6 h强于1 h,且支气管肺泡灌洗液中TNF-α的水平明显升高,肺组织湿/干重比值持续升高,MPO的含量持续增加(P＜0.05).(2)与C3h/Heouj小鼠相比,C3h/Hq组小鼠在再灌注后支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量明显降低(P＜0.05),肺损伤明显减轻(P＜0.05),肺组织湿/干重比值及MPO的含量明显下降(P＜0.05).(3)各组小鼠缺血再灌注后1 h肺泡灌洗液中内毒素水平与假手术组相比,差异无统计学意义(P＜0.05),而在6 h时则明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠全肝缺血再灌注过程中,肺泡巨噬细胞表面Toll样受体4激活,并与肺功能损伤有关.     

腹腔感染所致多器官损害与Toll样受体2基因表达的关系

目的　探讨Toll样受体 2 (TLR2 )基因表达与严重腹腔感染所致多器官损害的关系。方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)模型造成脓毒症。将 80只大鼠随机分为正常对照组 (n =10 )、假手术组 (n =10 )和脓毒症组 (n =6 0 ) ,留取肝、肺、肾及小肠组织检测TLR2和肿瘤坏死因子 α(TNF α)mRNA表达 ,同时测定血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、肌酐 (Cr)及肺组织髓过氧化物酶(MPO)、小肠组织二胺氧化酶 (DAO)活性。结果　CLP后 2～ 6h肝、肺、肾及小肠组织TLR2mR NA表达迅速增多 (P <0 .0 1) ,12h达高峰 (P <0 .0 1) ,分别为 0 .818± 0 .0 14 ,0 .95 5± 0 .0 31,0 .82 0± 0 .0 45 ,0 .885± 0 .0 18,并持续至伤后 72h。相关分析结果显示 ,肝、肺、小肠中TLR2与TNF α基因表达呈显著正相关 (P <0 .0 5 0 .0 1) ,肾组织内TLR2与TNF α基因表达无明显相关(P >0 .0 5 ) ;肝、肺、肾、小肠组织中TLR2基因表达分别与ALT、MPO、Cr、DAO水平显著相关。结论　严重腹腔感染可导致多种组织TLR2mRNA持续表达 ,其改变与多器官损害密切相关。     

右美托咪啶对老年患者术后认知功能和围术期单核细胞Toll样受体2和Toll样受体4表达的影响

目的 探讨右美托咪啶对老年患者术后认知功能和围术期单核细胞Toll样受体2(TLR2)和TLR4表达的影响.方法 择期手术治疗的腰椎间盘突出症和腰椎骨折患者45例,年龄≥65岁,体重53～72 kg,ASA分级Ⅰ或Ⅱ级,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=15):对照组(Ⅰ组)和不同剂量右美托咪啶组(Ⅱ组和Ⅲ组).麻醉诱导结束后静脉输注右美托咪啶负荷剂量1.0μg/kg,输注时间15 min,然后以0.5μg/·kg-1·h-1(Ⅱ组)或1.0 μg·Jg-1·h-1(Ⅲ组)的速率静脉输注至术毕,Ⅰ组给予等容量生理盐水.于麻醉诱导前(T1)、手术开始1.5 h(T2)、术毕(T3)和术后24 h(T4)时取静脉血样,检测外周血单核细胞TLR2及TLR4的表达.分别于术前1d和术后7d时采用简易精神状态量表评分和韦氏成人记忆量表及智力量表评价认知功能,记录术后认知功能障碍的发生情况.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组和Ⅲ组术后认知功能障碍发生率降低,T2～T4时单核细胞TLR2和TLR4表达下调(P＜0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组术后认知功能障碍发生率降低,T～T4时单核细胞TLR2和TLR4表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪啶可预防老年患者POCD的发生,其机制与抑制单核细胞TLR2和TLR4的表达有关.     

TLR2/4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤肝脏的表达及意义

目的观察Toll样受体2／4蛋白在小鼠全肝缺血再灌注损伤中肝脏的表达，并分析其与肝功能损伤的关系。方法通过夹闭BALB／c小鼠肝门，复制小鼠全肝缺血再灌注损伤模型。采用Western blot方法定量检测缺血肝叶中TLR2／4蛋白的表达变化，并检测门静脉血浆丙氨酸氨基转移酶（pALT）、肿瘤坏死因-α（TNF-α）及门静脉血清内毒素（endotoxin，EN）水平。结果与假手术组（sham-operated group，SH组）相比：（1）全肝缺血20min并行再灌注后，缺血再灌注组（ischemic／reperfusion group，I／R组）血清ALT在再灌注1h即明显升高，且在再灌注3h时较1h时明显升高；（2）I／R组缺血肝脏TLR2／4蛋白的表达（OD值）明显升高，TLR2蛋白的表达在再灌注3h较1h明显高；而TLR4蛋白的表达以再灌注1h时水平最高。（3）I／R组中门静脉血清TNF-α在再灌注1h即开始高，在再灌注3h达高峰。（4）门静脉血清内毒素水平明显升高（与SH相比，P〈0．01），但I／R组在不同灌注时间点之间无显著性差异（P〉0．05）。结论TLR2／4蛋白表达的上调参与了小鼠全肝脏缺血再灌注中肝脏的损伤。     

门静脉高压症脾功能亢进脾巨噬细胞Toll样受体2、4 mRNA表达变化的研究

目的 检测门静脉高压症(PH)脾亢脾和正常脾巨噬细胞(Mφ)中Toll样受体2、4(TLR2、4) mRNA的表达差异,为进一步深入探讨Toll样受体在PH脾亢发生中的作用奠定基础.方法 选取门静脉高压症脾亢患者(均为慢性乙型肝炎患者)的手术切除脾脏(12例)为实验组,外伤性脾破裂患者的手术切除脾脏(4例)为正常对照组.贴壁培养法分离纯化脾脏组织Mφ,荧光定量PCR法对Mφ表面Toll样受体2、4 mRNA的表达进行检测,并将两组结果进行统计学分析比较.结果 与正常脾脏相比,PH脾亢脾Mφ TLR2、4 mRNA的表达水平明显增强(TLR2:2.29±0.55 vs 1.06±0.53,P <0.05;TLR4:2.32±0.41 vs 1.01±0.14,P <0.01).结论 PH脾亢脾Mφ TLR2、4的mRNA表达水平明显升高,与蛋白水平免疫组化的结果一致,进一步支持了"内毒素血症→脾脏Mφ Toll样受体活化→Mφ吞噬破坏血细胞增多"是PH脾亢发生可能机制的观点.     

一种简便的小鼠腹腔巨噬细胞内毒素耐受模型的建立

内毒素（LPS）耐受是生物在进化过程中形成的一种适应性防御机制,它可以使机体避免对LPS刺激的持续性反应,在感染性休克和脓毒症机体防御机制的建立中具有重要的作用。探讨LPS耐受建立的机制有助于深入认识机体的抗炎调节机制,可为与LPS介导的失控炎症反应性疾病的防治提供新的思路和依据。     

肠源性内毒素水平与肝脏Toll样受体4表达在大鼠重症急性胰腺炎肝损伤中变化

目的:探讨肠源性内毒素(ET)与肝脏Toll样受体4(TLR4)表达在重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的关系.方法:48只Wistar大鼠随机均分为模型组和对照组,模型组用逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠法制作SAP模型,对照组行假手术.两组分别于术后3,6,12h随机各取8只大鼠,收集胰腺、肝脏组织及外周动脉血,行病理学检查,检测血淀粉酶(AMY),谷丙转氨酶(ALT)和ET水平,并用Western blot法检测肝脏TLR4表达.结果:与对照组比较,模型组胰腺与肝脏病理学评分、血AMY,ALT,ET水平,以及肝组织TLR4蛋白表达水平均明显升高(均P＜0.05),且各指标均随时间不断升高;对照组各指标在各时间点上无明显变化(均P＞0.05);模型组肝脏TLR4蛋白表达水平与血ET呈明显正相关(r=0.863,P＜0.01).结论:SAP时血ET水平升高与肝脏TLR4蛋白的表达上调存在相关性,两者的相互作用可能参与了SAP肝损伤的机制.     

性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。