桑黄灵芝UE-1多糖抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达

目的观察桑黄灵芝UE-1多糖对人卵巢癌细胞(H08910)和人肝癌细胞(SMMC-7721)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的抑制作用。方法在体外用不同浓度UE-1多糖(0,100,200 mg/L)处理H08910细胞和SMMC-7721细胞后,应用免疫细胞化学染色方法分别检测MMP-2和MMP-9表达。结果 UE-1多糖作用后的H08910细胞和SMMC-7721细胞,MMP-2和MMP-9表达均明显受抑制,并具一定的量效关系。结论桑黄灵芝UE-1多糖在体外可抑制肿瘤细胞基质金属蛋白酶的表达,为其抗肿瘤侵袭作用提供实验依据。     

肝癌细胞株SMMC-7721中CD147和MMP-9的表达及意义

目的研究肝癌细胞系SMMC-7721中CD147与基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达及意义。方法用流式细胞仪检测正常肝细胞L-02与肝癌细胞SMMC-7221中CD147的表达；用免疫组化法检测两种细胞产生的MMP-9的表达。结果正常肝细胞L-02中CD147表达阴性，SMMC-7721中CD147表达呈强阳性（阳性率为98．1％）；MMP-9在正常肝细胞及肝癌细胞中均有表达，但在肝癌细胞中表达明显增高。结论肝癌细胞系SMMC-7721中CD147与MMP-9表达明显增高，与肝癌的侵袭转移潜能有关。     

缺氧通过刺激胸腺基质淋巴细胞生成素分泌促进宫颈癌细胞体外侵袭

目的:探讨缺氧诱导宫颈癌细胞体外侵袭的可能调节机制。方法:用ELISA法分析常氧和缺氧培养对宫颈癌细胞株HeLa和CaSki细胞的胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)分泌水平及TSLP对侵袭相关分子基质金属蛋白酶-2(matrix metalloprotein-2,MMP-2)、MMP-9和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)表达水平的影响。Matrigel侵袭实验分别检测重组TSLP、缺氧和TSLP中和性抗体对宫颈癌细胞侵袭力的影响。结果:与常氧环境相比,缺氧培养下HeLa、CaSki细胞TSLP分泌水平显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。重组TSLP(100ng/mL)体外刺激显著促进HeLa、CaSki细胞的侵袭力(P0.001),并促进其分泌MMP-2、MMP-9和IL-8(P0.01)。缺氧培养可显著促进HeLa、CaSki细胞的侵袭力(P0.001);TSLP中和性抗体(5μg/mL)能抑制HeLa、CaSki细胞侵袭(P0.05),且可明显抑制缺氧对HeLa、CaSki细胞侵袭力的促进作用(P0.05)。结论:缺氧可通过促进宫颈癌细胞分泌TSLP,促进宫颈癌细胞体外侵袭。     

模拟气腹对肝癌SMMC-7721细胞侵袭的影响

目的：通过体外模拟气腹环境,观察不同压力CO2对肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响。方法：建立体外气腹模型,将人肝癌细胞株SMMC-7721分别在5mmHg、10mmHg、15mmHg不同压强CO2气腹环境及常规培养环境中暴露2h,然后继续常规培养。用Transwell侵袭小室检测细胞体外侵袭能力的变化;黏附试剂盒及免疫细胞化学方法检测不同时间点细胞黏附能力及基质金属蛋白酶9（MMP-9）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达。结果：肝癌SMMC-7721细胞侵袭、黏附能力及MMP-9蛋白表达在15mmHg组中比在对照组中显著提高（P〈0.05）;VEGF蛋白表达在10mmHg组和15mmHg组中比在对照组中均显著提高（P〈0.05）;细胞黏附表达及MMP-9、VEGF蛋白表达在CO2气腹作用后逐渐升高,36h达高峰,随后下降。结论：较高压力CO2气腹环境对肝癌SMMC-7721细胞的侵袭能力有显著促进作用,可能与CO2气腹显著促进肝癌SMMC-7721细胞MMP-9及VEGF蛋白表达有关。     

Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭及PITPNM3表达的影响

目的探究Mfn-2沉默对肝癌细胞侵袭的影响及其潜在的分子机制。方法用Mfn-2-siRNA和siRNA转染SMMC-7721细胞,为Mfn-2-siRNA组和siRNA组,以未经转染的细胞作为对照组。转染48 h后,采用荧光倒置显微镜检测转染效率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SMMC-7721细胞中Mfn-2的表达情况,Transwell小室检测SMMC-7721细胞侵袭能力,免疫组化和Western blot检测SMMC-7721细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和磷脂酰肌醇转移蛋白3(PITPNM3)蛋白表达情况。结果荧光倒置显微镜检测结果显示,转染效率约85%;siRNA组SMMC-7721细胞中Mfn-2 mRNA的表达水平与对照组相比无显著差异(P0.05),Mfn-2-siRNA组SMMC-7721细胞中Mfn-2 mRNA的表达水平显著低于对照组(P0.05);siRNA组SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和PITPNM3的表达水平与对照组相比无显著差异(P0.05),Mfn-2-siRNA组SMMC-7721细胞侵袭能力、以及MMP-2和PITPNM3的表达水平显著高于对照组(P0.05)。结论 Mfn-2沉默能够增强肝癌细胞SMMC-7721的侵袭能力,推测这一作用是通过上调MMP-2和PITPNM3的表达水平实现的,上述结果为肝癌的治疗和靶向药物的开发提供了一定理论基础。     

姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响

目的探讨姜黄素对体外培养SMMC-7721人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法选用SMMC-7721人肝癌细胞进行体外培养至对数生长期,以5～160μmol/L姜黄素(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L)分别处理SMMC-7721人肝癌细胞24、48、72h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验测定细胞的生长抑制率;流式细胞仪检测不同浓度药物对细胞周期及凋亡率的影响。结果 MTT显示姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞增殖抑制率随药物浓度增加及作用时间延长有升高趋势,呈时间剂量依赖性。流式细胞术显示,随着浓度的升高细胞凋亡率提高,但姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞并不发生周期阻滞作用。结论姜黄素对SMMC-7721人肝癌细胞的生长有显著的抑制作用,并能诱导其凋亡,但不产生周期阻滞作用。     

丙泊酚对人骨肉瘤细胞增殖、侵袭及整合素聚集的影响及机制分析

目的 研究丙泊酚对人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭及整合素聚集的影响,并分析其作用机制。方法 体外培养人骨肉瘤细胞,将其分为5组,分别是:空白对照组(不做处理,CK组)、阴性对照组(用脂肪乳处理,NC组),丙泊酚低、中、高浓度组(低:60. 0μg/L;中:100. 0μg/L;高:120. 0μg/L),根据各组浓度设置选择对数期细胞将丙泊酚加入6孔板进行干预,各组处理时长均为72 h。MTT(四氮唑盐)法检测细胞增殖、细胞克隆形成实验检测细胞的生长与克隆形成、Transwell法检测细胞的迁移与侵袭、Western blot(蛋白免疫印记)法检测丙泊酚对人骨肉瘤细胞相关蛋白表达的影响;免疫荧光检测整合素蛋白α5β1的表达。结果 培养12 h、24 h,48 h,72 h后,相比于CK与NC组,低、中、高浓度的丙泊酚组人骨肉瘤细胞吸光值明显减少(P 0. 05),并呈现浓度依赖性(P 0. 05),且随着丙泊酚作用时间的延长,人骨肉瘤细胞增值率显著降低(P 0. 05)。人骨肉瘤细胞的克隆、迁移及侵袭数目、迁移与侵袭相关蛋白纤维连接蛋白(NF蛋白)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白9(MMP-9)、高迁移率族盒蛋白4(SOX4)以及整合素蛋白α5β1的表达水平在不同不浓度丙泊酚组中均明显低于CK与NC组,并呈现浓度依赖性(P 0. 05)。结论 丙泊酚对人骨肉瘤细胞的增殖、侵袭及整合素聚集具有抑制作用,抑制机制可能是下调SOX4蛋白的表达,且在本研究浓度及作用时间范围内,其作用效果随剂量和时间的增加而增强。     

慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰上清液及血清中基质金属蛋白酶的表达

目的检测慢性阻塞性肺疾病（COPD）不同时期患者诱导痰上清液及血清中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TI MP-1）浓度,分析其与COPD病情变化的关系。方法选择COPD缓解期组、COPD急性加重期（AECOPD）组和正常对照组各20例,采用双抗夹心酶联免疫吸附测定法检测各组受试者诱导痰上清液及血清中MMP-9、TI MP-1的浓度。结果AECOPD组和COPD缓解期组诱导痰上清液及血清MMP-9浓度均高于正常对照组,诱导痰上清液MMP-9（612.2±58.9）μg/L、（401.5±45.7）μg/L vs（186.2±77.4）μg/L（P〈0.01）,血清MMP-9（221.7±30.4）μg/L、（203.0±33.5）μg/Lvs（131.4±44.5）μg/L（P〈0.01）;AECOPD组诱导痰上清液及血清MMP-9浓度均高于COPD缓解期组（P〈0.01）。AECOPD组和COPD缓解期组诱导痰上清液及血清TI MP-1浓度均高于正常对照组,诱导痰上清液TI MP-1（859.3±101.0）μg/L、（356.4±92.1）μg/L vs（97.1±54.2）μg/L（P〈0.01）,血清TI MP-1（213.2±27.2）μg/L、（149.9±20.1）μg/L vs（84.1±14.0）μg/L（P〈0.01）;AECOPD组血清TI MP-1浓度均高于COPD缓解期组（P〈0.01）。AECOPD组和COPD缓解期组诱导痰上清液及血清MMP-9/TI MP-1比值均低于正常对照组（P〈0.01）;AECOPD组血清MMP-9/TI MP-1比值低于COPD缓解期组（P〈0.01）。结论COPD不同时期诱导痰及血清中MMP-9、TI MP-1含量不同,提示存在蛋白酶/抗蛋白酶失衡机制。     

金雀异黄素抗人肝癌SMMC-7721细胞侵袭作用的研究

目的 研究金雀异黄素用于抑制肝癌浸润、转移的可能性。方法 用Western blot法检测人肝癌SMMC-7721细胞在金雀异黄素作用下侵袭能力的改变。结果 金雀异黄素可降低SMMC-7721细胞的侵袭能力,抑制MMP-2、MMP-9、NF-κB的分泌,促进TIMP-2的分泌。结论 金雀异黄素通过调控人肝癌细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-2、NF-κB表达,在一定程度上可以抑制人肝癌细胞的浸润与转移。     

多核白细胞弹性蛋白酶对人角膜基质细胞MMP-2、MMP-9表达的影响

目的观察多核白细胞弹性蛋白酶与白细胞介素-1α对人角膜基质细胞表达的MMP-2、MMP-9的影响,进而探讨角膜溃疡的发生机理。方法体外培养人角膜基质细胞,在培养液中添加或不添加多核白细胞弹性蛋白酶或白细胞介素-1α,培养5天,通过明胶酶谱分析的方法测定培养上清中的MMP-2和MMP-9的表达。结果体外培养的人角膜基质细胞无任何刺激下可释放MMP-2;白细胞介素-1α可加强并激活MMP-2的表达,同时可诱导MMP-9前体的释放;多核白细胞弹性蛋白酶在白细胞介素-1α诱导下可完全激活前体MMP-9转化为活化形式。结论多核白细胞弹性蛋白酶和白细胞介素-1α协同作用参与角膜溃疡的发生。     

异丙酚对内毒素诱导肺损伤MMP-2和MMP-9的影响

目的:研究异丙酚对急性肺损伤时基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响。方法:健康SD大鼠30只随机分为3组:对照组经股静脉注射生理盐水;内毒素组经股静脉注射内毒素5 mg／kg后泵注生理盐水;异丙酚组经股静脉注射内毒素5 mg／kg后泵注异丙酚10 mg.kg1.h1。采取经股静脉注射内毒素复制肺损伤模型(5 mg/ kg)。4 h后放血处死动物,对气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清和BALF中的MMP-2、MMP-9的活性。结果:内毒素组白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞均明显高于其他两组(P<0．01)。异丙酚组白细胞总数明显高于对照组(P<0．01),巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞高于对照组(P<0．05);内毒素组血清和BALF中的MMP-2、MMP-9均明显高于其他两组(P<0．01),异丙酚组血清的MMP-2高于对照组(P<0．05)。结论:异丙酚可产生与抑制MMP-2、MMP-9活性相关的肺保护作用。     

MMP-2，TIMP-2，MMP-9的表达与胃癌侵袭转移的关系

目的检测胃癌组织以及癌旁胃组织中MMP．2、TIMP．2、MMP．9的表达差异,并分析其对胃癌侵袭转移能力的影响及其可能机制。方法将97例胃癌组织以及89例癌旁胃组织制作成组织芯片,用免疫组织化学半定量的方法检测MMP-2、TIMP-2、MMP-9在胃癌组织及癌旁胃组织中的表达程度并分析其与临床病理参数的关系。结果MMP-2、TIMP-2、MMP-9在89例胃癌组织和配对的癌旁胃组织中的表达均有显著差异（P〈O．01）,其中MMP-2在胃癌组织的表达大于其在癌旁非肿瘤胃组织,而TIMP．2、MMP．9在胃癌组织的表达小于其在癌旁非肿瘤胃组织。MMP-2的高表达率与胃癌组织的临床分期,浸润深度,淋巴结转移显著正相关（P〈0．01）;TIMP．2与胃癌组织的临床分期,浸润深度（P〈0．01）,淋巴结转移（P〈0．05）显著负相关。MMP．9在肠型胃癌的表达要显著高于弥漫型胃癌（P〈O．05）。MMP-2的高表达与TIMP-2的高表达显著负相关（P〈O．01）。结论MMP-2可促进胃癌的侵袭转移,在胃癌组织高表达;TIMP-2抑制胃癌的侵袭转移,在胃癌组织低表达;MMP-2的表达与TIMP-2的表达显著负相关。MMP-9在胃癌组织表达低,．在肠型胃癌中的表达显著高于弥漫型胃癌,与TIMP-2的表达无显著相关性。     

三氧化二砷对K562细胞基质金属蛋白酶-2、9活性的影响

目的探讨三氧化二砷(ATO)对白血病K562细胞株基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)活性的影响。方法用0、0.05、0.40和3.20μmol/L的ATO分别处理K562细胞,培养24、48、72 h后收获细胞,对细胞上清进行明胶酶谱分析。结果①MMP-2、9在K562细胞均有表达,其活性条带在对照组以MMP-2(72 kd)最宽,MMP-9次之,MMP-2(62 kd)最窄。②MMP-2、9经0.05μmol/L ATO处理72 h后差异具有显著性(P<0.05);经0.4、3.2μmol/L的ATO处理后随作用时间延长而抑制现象也逐渐增强,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论ATO可以有效抑制K562细胞MMP-2、MMP-9的活性,但其作用的强度与剂量及作用时间有关。ATO对MMP-2、MMP-9的活性的抑制可能是其抗白血病细胞血管新生的机制之一。     

ARK5、MMP-2和MMP-9在胃癌中的表达及与侵袭转移的关系

目的:探讨ARK5、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在胃癌组织中的表达及与胃癌侵袭转移的关系。方法:免疫组织化学方法检测66例胃癌组织及20例正常胃组织中ARK5、MMP-2、MMP-9的表达;脂质体介导法将ARK5-siRNA转染入胃癌细胞株SGC-7901(siARK5/SGC7901细胞组),以SCRsiRNA转染组(scr/SGC7901细胞组)作为对照组,Western blot检测转染后ARK5、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力。结果:ARK5、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的阳性表达率分别为68%、76%、68%,三者之间差异具有统计学意义(P<0.05);ARK5的表达与胃癌的浸润深度、细胞分化程度、TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无关(P>0.05);转染后siARK5/SGC7901细胞组表达ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白水平降低,体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论:ARK5、MMP-2和MMP-9在组织中的表达有相关性,ARK5与胃癌的侵袭和转移密切相关,可作为判断预后的指标和化学治疗的靶点。     

三氧化二砷对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外作用及可能的机制

目的观察三氧化二砷（As203）在体内外对人肝癌SMMC-7721细胞抗肿瘤作用。方法不同浓度的As203作用于SMMC-7721细胞48h,采用MTT法测定细胞的存活率;荧光显微镜观察细胞形态变化;FITC-Annexinv／P1双标记检测SMMC-7721细胞的凋亡;比色法检测Caspase．3活性变化。用As203在SMMC-7721肝癌细胞荷瘤裸鼠的瘤体内进行注射治疗,观察肿瘤生长变化,12d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重,并通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果As203能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,半数抑制率浓度为（18．17±2．10）μmol／L;显微镜下可见有典型的细胞凋亡形态学改变,As203处理组SMMC-7721细胞凋亡率与对照组相比显著增加,As203可提高SMMC-7721细胞的Caspase-3活性。As203瘤内注射肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤后,能显著抑制肿瘤生长,瘤重的抑制率可达52．37％,免疫组化结果显示As203能明显上调与细胞凋亡相关因子Bax和Caspase．3的表达和下调Bcl-2的表达。结论As203能抑制肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导SMMC-7721细胞凋亡;As203能抑制SMMC-7721细胞的体内致瘤能力。     

急性髓系白血病82例患者VEGF与MMP-2、MMP-9的相关性研究

为了探讨急性髓系白血病（AML）患者中血管内皮生长因子（VEGF）与基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的相互关系及二者在AML中的意义，采用半定量RT—PCR技术检测AML患者与正常人骨髓单个核细胞（MNC）MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA、VEOF mRNA的表达，用明胶酶谱的方法测定原代MNC和HL-60细胞分泌的MMP-2、MMP-9的活性。应用ELISA方法检测AML患者血清中VEGF蛋白的水平，分析VEGF和MMP-2、MMP-9 mRNA之间的关系。结果显示：AML患者MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA与VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白水平呈正相关，缓解期患者和正常对照无相关性；VEGF阳性组发生髓外浸润率明显高于阴性组；VEOF上调HL-60细胞中bcl-2的表达：结论：AML患者中MMP-2，MMP-9的表达和VEGF具有正相关性，VEGF可以上调部分AML患者中MMP-2，MMP-9的表达，VEOF可能与MMP-2，MMP-9共同参与了白血病髓外浸润的发生。     

Effect of hemodialysis on the plasma level of type IV collagenases and their inhibitors

OBJECTIVES: Increased cell expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) was associated with the development of atherosclerosis and osseoarticular tissue destruction in hemodialysis patients. In this study, the pre- and post-HD plasma concentrations of type IV collagenases and their inhibitors in HD patients were examined. DESIGN AND METHODS: Commercial ELISA kits and Zymography techniques were used to assay the parameters in 40 patients pre- and post-HD session. RESULTS: After the hemodialysis process, MMP-9, MMP-2 and TIMP-2 levels were 124 +/- 72, 706 +/- 242 and 248 +/- 90 ng/mL, significantly different from the pre-HD values (187 +/- 148, 759 +/- 304 and 43 +/- 14 ng/mL). TIMP-1 were not affected by HD. Female subjects and patients with chronic glomerulonephritis had higher TIMP-2 than their counterparts (p < 0.05). The effect of gender on MMP-2 levels was interacted with that of membrane types (p < 0.01). CONCLUSION: These results indicated that the hemodialysis process tends to decrease the overall activity of the peripheral plasma MMP system in HD patients.     

寻常型银屑病患者血清MMP-2、IL-18和IL-2的检测及临床意义

目的探讨MMP-2、MMP-9和IL-18在寻常型银屑病发生发展过程中的作用。方法以寻常型银屑病患者共73例(包括进行期48例、静止期25例)和健康对照58例样本为试验材料,采用双抗体夹心酶联免疫技术测定血清中MMP-2、MMP-9和IL-18浓度。结果进行期患者血清MMP-2、MMP-9和IL-18浓度均最高,分别为411.57±123.48ng/mL、681.42±297.31ng/mL和421.73±41.30ng/mL,显著高于静止期组和对照组(P<0.05)。治疗后血清中MMP-2、MMP-9和IL-18浓度分别为273.54±91.85ng/mL、431.65±120.81ng/mL和287.34±19.41ng/mL,均显著低于治疗前水平(P<0.05)。结论 MMP-2、MMP-9和IL-18因子在银屑病的发生、发展过程中起着重要作用,观察其浓度变化对探讨其发病机理,预防和指导用药均有重要的临床价值。     

Resveratrol inhibits tumor necrosis factor-α-mediated matrix metalloproteinase-9 expression and invasion of human hepatocellular carcinoma cells

Resveratrol is an active polyphenol found in red wine that has anti-cancer effects, but the molecular mechanisms of resveratrol on tumor invasion inhibition have not been well documented. The aim of this study was to elucidate the effects of resveratrol on invasion ability of human hepatocellular carcinoma cells and TNF-alpha-mediated MMP-9 expression. The expression activity of MMP-9 was measured by zymography, RT-PCR and western blot analysis. The expression of NF-kappa B was measured by EMSA and western blot analysis. TNF-alpha induced the MMP-9 expression in HepG2 cells. Resveratrol significantly inhibited TNF-alpha-mediated MMP-9 expression in HepG2 cells. NF-kappa B inhibitor induced a marked reduction in MMP-9 expression, and it suggested that NF-kappa B could play an important role in TNF-alpha-mediated MMP-9 expression. Furthermore, resveratrol significantly suppressed TNF-alpha-mediated NF-kappa B expression and invasion of HepG2 cells. Our results showed that resveratrol inhibited TNF-alpha-mediated MMP-9 expression and invasion of human hepatocellular carcinoma cells. The inhibitory effects are partly associated with the downregulation of the NF-kappa B signaling pathway.