青蒿琥酯诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡及其机制

目的探讨青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,对细胞凋亡的影响。方法常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组、青蒿琥酯不同浓度组(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml),对HepG2作用48h后,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,同时采用瑞氏染色法观察细胞凋亡;用RT-PCR检测caspase-3mRNA的表达,采用灰度分析比较表达的变化。结果青蒿琥酯(3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml)处理HepG2细胞48h,呈浓度依赖性诱导细胞凋亡,且当青蒿琥酯浓度在6.25μg/ml以上时,各组凋亡率与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01),瑞氏染色后光镜下可见处理组细胞发生凋亡形态学改变。与对照组比较,各实验组caspase-3的表达显著增加(P<0.01)。结论青蒿琥酯能显著诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与增强凋亡相关基因caspase-3的表达有关。     

Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素耐药与P-gp及MDR1 mRNA无关

目的:探讨XIAP抑制剂Embelin逆转K562/D细胞对柔红霉素(daunorubicin,DNR)耐药的机制以及与P-gp及MDR1 mRNA的关系。方法:应用MTT法检测不同浓度DNR及联合Embelin对K562及K562/D细胞增殖抑制情况的影响;应用Annexin V-FITC/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用Western blot方法检测XIAP、Caspase-3、P-gp、BCL-2及BAX的蛋白表达情况;用RT-PCR检测XIAP、MDR1、BCL-2及BAX的mRNA表达情况。结果:DNR作用于K562与K562/D细胞系24 h的IC_(50)值分别为2.177μg/ml和69.43μg/ml,耐药指数为31.89;分别用浓度为3、10、30、100及300μg/ml的Embelin作用于K562/D细胞系24 h,其增殖抑制率分别为2.70%±1.08%、10.92%±4.89%、28.13%±2.09%、36.56%±3.24%及43.59%±1.16%;用0.1、1、10及100μg/ml DNR联合10μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24 h,细胞增殖抑制率分别为31.92%±3.29%、49.57%±6.87%、55.16%±0.78%和71.94%±3.89%,其IC_(50)值为2.11μg/ml,逆转指数为32.91。用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡率。单独应用0.1μg/ml DNR作用于K562/D细胞系24 h的细胞凋亡率为12.06%±0.95%,而联合10和30μg/ml Embelin作用于K562/D细胞系24 h的细胞凋亡率分别为27.54%±0.59%和39.59%±1.57%;Western Blot结果显示,DNR联合Embelin后,Caspase-3的表达明显下降(P0.05),且用抑制剂Z-VADFMK可以抵消药物联合应用对细胞的增殖抑制作用。同时,XIAP和BCL-2蛋白表达明显下降(P0.05),BAX蛋白表达明显升高(P0.05),而P-gp的表达无改变;RT-PCR结果显示,DNR联合Embelin后,XIAP和BCL-2 mRNA表达明显下调(P0.05),BAX mRNA表达明显上调(P0.05),MDR1 mRNA表达无明显变化(P0.05)。结论:降低XIAP表达有助于增强DNR对K562/D细胞的作用;Embelin逆转K562/D细胞对DNR耐药机制与P-gp及MDR1 mRNA无关。     

汉防己甲素干预K562细胞mdr1基因表达的研究

目的 观察汉防己甲素(TTD)对阿霉素诱导的K562细胞mdr1基因表达的影响,并初步探讨其机制.方法 采用MTT法观察TTD对K562细胞的毒性作用,以0.6μg/ml阿霉素单独作用或0.6μg/ml阿霉素联合不同浓度的TTD(0.5、1.0、2.0μg/ml)作用于K562细胞,用RT-PCR法检测mdr1 mRNA、NF-kB mRNA水平,用流式细胞术检测P-gP的表达情况,用胞内罗丹明123(Rho123)积聚试验检测P-gP的功能.结果 空白对照K562细胞未见明显mdr1 mRNA及P-gP表达(水平分别为0.171±0.012、7.85±0.15),细胞内Rho123平均荧光强度(反映P-gP功能)为711.9±63.6,NF-kBmRNA水平为0.783±0.090;0.6μg/ml阿霉素作用24 h后mdr1 mRNA、P-gP、NF-kB mRNA表达上调为0.428±0.012、73.68±1.84、1.075±0.047,细胞内Rho123平均荧光强度下降为347.8±60.6(P值均＜0.05);2.0μg/ml TTD预作用24 h再与0.6 μg/ml阿霉素联合作用24 h能显著抑制阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达及功能、NF-kB mRNA的上调(分别为0.148±0.006、7.18 ±0.38、799.7±45.8、0.627±0.098)(P＜0.05),而0.5、1.0μg/TTD无明显影响.结论 TTD以浓度依赖性的方式干预阿霉素诱导的mdr1 mRNA、P-gp表达和P-gp功能的上调,其机制可能与TTD抑制了阿霉素诱导的NF-kB的表达有关.     

细胞松弛素D对大鼠脊髓星形胶质细胞水通道蛋白和内向整流性钾通道4.1 基因表达的影响

目的探讨不同浓度细胞松弛素D(CytD)对大鼠脊髓星形胶质细胞骨架重构,水通道蛋白(AQP)1、AQP4 及内向整流性钾通道4.1(Kir4.1)基因表达的影响。方法原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,加CytD 0.05 μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml、0.40μg/ml、0.80 μg/ml 和1.00 μg/ml 共培养2 h、12 h 和24 h。MTT法检测细胞增殖情况;鬼笔环肽联合Hoechst 33342 套染后激光共聚焦显微镜下观察共培养2 h 后细胞骨架重构情况;RT-PCR法检测共培养2 h 时AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达水平。结果细胞生存率随CytD 浓度升高和作用时间延长而减少。CytD 使大鼠脊髓星形胶质细胞微丝发生解聚、弯曲,但极性未失。CytD 0.05μg/ml、0.10 μg/ml、0.20 μg/ml 和0.40 μg/ml 上调AQP1、AQP4 和Kir4.1 mRNA表达。结论适当浓度CytD可以重建星形胶质细胞骨架,上调大鼠脊髓星形胶质细胞AQP1、AQP4和Kir4.1基因表达。     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的 探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用.方法 MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果 2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%.2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升.经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调.结论 大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖.其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关.     

大蒜素对人胃癌MGC803细胞体外作用的研究

目的探讨大蒜素对人胃癌MGC803细胞的作用。方法MTT法检测MGC803细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变和免疫组化SP法检测Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。结果2μg/ml大蒜素作用24h、72h后细胞的生长抑制率为14.01%±2.36%和50.57%±7.01%;浓度8μg/ml时抑制率升为35.42%±5.55%和89.66%±19.92%。2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素作用于MGC803细胞24h后G0/G1期细胞比率明显下降,而G2/M期比率明显上升。经2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml的大蒜素处理后MGC803细胞的bcl-2蛋白表达明显下调,bax蛋白的表达明显上调。结论大蒜素能通过诱导癌细胞周期阻滞于G2/M期来抑制癌细胞的生长增殖。其机制可能与下调bcl-2和上调bax蛋白表达诱导癌细胞调亡有关。     

人锌指蛋白23在原发性肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的 分析hZNF23在人HCC组织及HepG2细胞系中的表达情况,以探讨其与HCC临床病理特征和细胞凋亡的关系.方法 采用实时荧光定量RT-PCR法检测37例HCC患者(按Edmondson分为两组,Ⅰ+Ⅱ级17例,Ⅲ+Ⅳ级20例;按临床分为3组,HCC合并肝硬化和HBV感染组31例,HCC合并肝硬化和HCC合并HRV感染组各3例)癌组织和其癌旁肝组织标本中hZNF23及内参GAPDH mRNA的表达水平,并分析其与HCC临床病理特征的关系;体外培养HepG2细胞后,分为4组(对照组、1.25、2.5和5 μg/ml顺铂组)或6组(对照组、1.25、2.5、5、10和20μg/ml顺铂组).采用四唑盐比色法(MTT)和流式细胞仪膜联蛋白V/碘化丙啶染色法检测与观察HepG2细胞的增殖及凋亡情况;实时荧光定量RT-PCR法检测HepG2细胞在不同浓度的顺铂诱导凋亡后,hZNF23及内参GAPDH mRNA的表达水平.结果 37例HCC患者癌组织及其癌旁组织标本中hZNF23相对表达量分别为8.84(3.59～15.05)和22.20(13.85～42.90),差异有统计学意义(U=259.5,P＜0.01).Edmondson Ⅰ+Ⅱ级HCC组织hZNF23 mRNA相对表达量为12.80(4.80～19.50),高于Ⅲ+Ⅳ级的5.01(2.88～11.68),且差异有统计学意义(U=99.00,P＜0.05);合并肝硬化组为9.92(3.80～15.25),未合并肝硬化组为3.21(2.78～3.60)、合并HBV感染组为9.09(3.72～15.25),无HBV感染组为2.48(1.79～12.10),合并肝硬化组与未合并肝硬化组、合并HBV感染组与未合并HBV感染组比较,其hZNF23 mRNA表达量差异均无统计学意义(U值分别为16.00和24.00,P均＞0.05).顺铂作用于HepG2细胞24 h后,用MTT检测,顺铂明显抑制HepG2细胞增殖;膜联蛋白V/碘化丙啶染色法检测细胞凋亡率依次为(0.9±0.2)%、(4.2±0.3)%、(9.8±4.3)%、(23.0±6.0)%,顺铂显著诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性(F=27.890,P＜0.01).实时荧光定量RT-PCR法检测1.25、2.5、5μg顺铂诱导的HepGR细胞组hZNF23 mRNA相对表达量依次为(10.39±3.08)×10-5、(24.10±2.09)×10-5、(6.90±2.24)×10-4,均显著高于对照组[(9.48±1.80)×10-5,F=6.027,P＜0.01].结论 HCC组织中hZNF23相对表达水平与Edmondson分级密切关联;顺铂对HepG2细胞的凋亡作用可能与hZNF23上调有关.

Abstract：

Objective To detect the expression level of human zinc finger 23 (ZNF23) in hepatocellular carcinoma tissue samples and HepG2 cell lines and investigate the relationship between hZNF23 expression and clinicopathological characteristics of HCC and cell apoptosis. Methods The expression levels of hZNF23 and GAPDH mRNA in 37 cases of HCC were measured by real-time RT-PCR. The association between the expression of hZNF23 and the clinicopathological characteristics of HCC was analyzed. Cultured HepG2 cells were divided into 4 groups ( control group, 1.25 μg/ml , 2.5 μg/ml and 5 μg/ml cisplatin)or 6 groups( control group, 1.25 μg/ml, 2.5 μg/ml, 5 μg/ml, 10 μg/ml and 20 μg/ml cisplatin). MTT method was employed to evaluate cell proliferation. Annexin V-FITC assay was used to assess percentage of apoptotic HepG2 cells. The expression levels of hZNF23 and GAPDH mRNA of HepG2 cells after apoptosis induced by cisplatin with a series of concentrations were measured by real-time RT-PCR.Results The median ( quartile1, quartile 3) expression levels of hZNF23 mRNA in 37 HCC tissue samples and adjacent tissue samples were 8.84 (3.59-15.05), 22.20 ( 13.85-42.90 ), respectively. There was significant difference ( U = 259.5, P ＜ 0.01 ). The median ( quartile1, quartile 3 ) expression levels of hZNF23 mRNA in cancer tissue samples with Edmondson stage Ⅰ + Ⅱ [12.80(4.80-19.50)] was much higher than those in stage Ⅲ + Ⅳ [5.01 ( 2.88-11.68 ), U = 99.00, P ＜ 0.05] The median ( quartile1,quartile 3 ) expression levels of hZNF23 mRNA in patients with and without hepatic cirrhosis were 9.92(3.80-15.25) , 3.21 (2.78-3.60), respectively. The median ( quartile1, quartile 3 ) expression levels of hZNF23 mRNA in HBV infection and non-infection patients was 9.09(3.72-15.25 ), 2.48 (1.79-12.10),respectively. There was no significant difference between groups with and without hepatic cirrhosis and between HBV infection and non-infection groups( U = 16. 00 and 24.00, P ＞0.05 ). MTT assay indicated that cisplatin significantly inhibited HepG2 cells proliferation in a dose-dependent manner. Annexin V-FITC/PI assay showed that HepG2 cells apoptosis rates were (0.9 ± 0.2 ) %, ( 4. 2 ± 0.3 ) %, ( 9.8 ± 4. 3 ) %,(23.0 ± 6.0)%, respectively. Cisplatin significantly induced HepG2 cells apoptosis in a dose-dependent manner( F = 27.89, P ＜ 0.01 ). The expression levels of hZNF23 mRNA in cisplatin groups [( 10.39 ±3.08) × 10-5, (24.10 ± 2.09) × 10-5, (6.90 ± 2.24) × 10-4] were significantly lower than that of the controlgroup[(94.80±1.80) ×10-5, F=6.027, P＜0.01]. Conclusions The expression level hZNF23 mRNA is related to Edmondson stage of HCC. The apoptosis effect of cisplatin on HepG2 cells may be associated with the upregulation of hZNF23.     

氧化低密度脂蛋白对血管平滑肌细胞TLR4和Emilinl表达的影响

目的 观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)TLR4和Emilinl表达的影响及转化生长因子-β(TGF-β)在其中所起的作用.方法 将传至2～4代的大鼠VSMCs,用不同浓度的OX-LDL(20、50、80、100μg/ml)干预,采用RT-PCR检测TLR4和Emilinl mRNA表达变化.另设100μg/ml ox-LDL+TGF-B(0.01、0.1、1、10μg/1)培养24h,采用RT-PCR检测TLR4 mRNA表达.结果 (1)用四种不同浓度梯度的ox-LDL作用后的VSMCs,TLR4和Emilinl在mRNA水平均比空白对照组表达增加,并且呈浓度依赖性.(2)不同浓度TGF-B(0.01、0.1、1、10μg/1)作用后的ox-LDL组(100μg/ml)TLR4 mRNA表达明显下降,且呈浓度依赖性.结论 ox-LDL可诱导大鼠VSMCs TLR4和Emilinl的表达,促进炎症的发展,ox-LDL可通过使VSMCs Emilinl表达增高途径抑制TGF-β的表达,最终达到促进TLR4高表达的目的 .ox-LDL对TGF-β的抑制作用是上调VSMCs TLR4表达的重要途径之一.     

补骨脂素对乳腺癌干细胞的毒性作用及TopoⅡα基因mRNA和蛋白表达水平的影响

目的分析补骨脂素对乳腺癌干细胞的毒性作用及拓扑异构酶Ⅱα(TopoⅡα)基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法以乳腺癌多药耐药细胞株MCF-7/ADR为模型,通过免疫磁珠法对乳腺癌干细胞进行筛选,并观察其生长状态。取细胞生长抑制率≤10%的药物浓度(IC10)≈6μg/ml,细胞生长抑制率≤20%的药物浓度(IC20)≈10μg/ml分别为模型1组、模型2组的用药浓度,另设置对照组(未加入补骨脂素)。根据CCK-8法测定不同浓度(0μg/ml,2μg/ml,4μg/ml,8μg/ml,12μg/ml,16μg/ml,32μg/ml)补骨脂素对乳腺癌干细胞的毒性作用,分别采用免疫印迹法和实时荧光定量PCR法对TopoⅡα蛋白和mRNA的表达情况进行检测。结果于光学显微镜下观察可见乳腺癌干细胞出现球性生长。CCK-8法检测发现,补骨脂素可阻滞乳腺癌干细胞增殖,补骨脂素作用于乳腺癌干细胞2 d后,不同浓度的补骨脂素对细胞毒性作用存在显著差异,随着补骨脂素浓度的升高,其毒性作用明显提升,细胞抑制率明显升高(P 0. 01)。模型1组、模型2组蛋白的表达水平分别为1. 52±0. 15、1. 87±0. 18,较对照组0. 78±0. 09显著升高(P 0. 01),模型2组TopoⅡα蛋白的表达水平较模型1组显著升高(P 0. 01)。模型1组、模型2组mRNA相对表达量分别为2. 13±0. 13、3. 75±0. 24,较对照组1. 00±0. 07显著升高(P 0. 01),模型2组TopoⅡαmRNA相对表达量较模型1组显著升高(P 0. 01)。结论补骨脂素对乳腺癌干细胞具有一定的毒性作用,且具有剂量依赖性的特点,可提高乳腺癌干细胞TopoⅡα蛋白和mRNA表达,使得化疗药物的作用靶点增多。     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达VEGF及PEDF的影响

目的观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的影响,探讨脂联素对糖尿病肾病的保护作用机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:常糖组、高糖A组、B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L,其中以高糖B组作为脂联素干预的对照组);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次分别为2.5μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),作用24 h,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)测定各组细胞VEGF mRNA、PEDFmRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF、PEDF蛋白的含量。结果与常糖组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达升高(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达降低(P﹤0.05);与高糖B组相比,脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及其蛋白表达降低(P﹤0.05),PEDF mRNA及PEDF蛋白表达升高(P﹤0.01)。结论高糖可上调大鼠肾系膜细胞VEGF表达,抑制PEDF的表达;脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达并提高其对PEDF的表达。     

Downregulation of immunomodulator gene expression in LPS-stimulated human polymorphonuclear leukocytes by the proton pump inhibitor lansoprazole

Lansoprazole (LPZ) has anti-inflammatory activity and repairs cells damaged by phagocytic cells. In the present study, we evaluated the effects of LPZ on gene expression, especially that of immunomodulator genes, in human polymorphonuclear leukocytes (PMNs) activated by lipopolysaccharide (LPS). Several concentrations of LPZ (final concentrations, 0–10 μg/ml) were added to the PMNs (1 × 10⁶ cells/ml), which were stimulated with LPS (100 ng/ml) and incubated at 37°C for 1 or 3 h. When LPS-stimulated PMNs were treated with LPZ at ≥5.0 μg/ml for 1 h, mRNA expression levels of CXCR1/2 and TNFα were suppressed in a dose-dependent manner. The gene expression level of CD14 was also downregulated by LPZ at ≥0.1 μg/ml, with expression suppressed to 50% by 10 μg/ml LPZ. However, LPZ at 0.01–5.0 μg/ml had no significant effect on the expression of TLR-4 or CD11b/CD18 mRNA. LPZ at 10 μg/ml downregulated the levels of these mRNAs to 80% and 50%, respectively. On the other hand, when the reaction period was extended to 3 h with the same conditions, all mRNA expression levels were downregulated by ≥0.01 μg/ml LPZ, in a dose-dependent manner. LPZ may suppress the biological functions of PMNs, such as chemotaxis and inflammatory chemokine production.     

EGF诱导肝癌细胞系HepG2增殖及其作用机制

目的观察表皮生长因子（EGF）对肝癌细胞系HepG2增殖的影响,初步探讨C-erbB2在其中的作用机制。方法以不同浓度（0、0.1、1、10、100μg.L-1）EGF作用于肝癌细胞系HepG2,采用MTT法观察EGF对HepG2增殖的影响;采用RT-PCR检测C-erbB2 mRNA的表达变化。结果 EGF能呈剂量依赖方式诱导肝癌细胞系HepG2的增殖;10μg.L-1EGF可显著增强肝癌细胞系HepG2 C-erbB2 mRNA的表达。结论 EGF可诱导肝癌细胞株HepG2的增殖,其机制可能与上调原癌基因C-erbB2的表达有关。     

沙利度胺对AnnexinⅡ基因的调节作用

目的 了解沙利度胺在体外对人多发性骨髓瘤(MM)细胞系RPMI8226、人微血管内皮细胞系HMEC-1中Annexin Ⅱ(AnxA2)基因表达的调节作用,探讨沙利度胺诱发血栓的可能机制.方法 实时荧光定量PCR检测在不同浓度下沙利度胺对两种细胞系AnxA2 mRNA表达的影响,采用流式细胞术、激光共聚焦仪检测不同浓度下沙利度胺对细胞膜表面AnxA2蛋白表达的影响.结果 当沙利度胺浓度为12.5、25.0、50.0 μg/ml时,RPMl8226细胞AnxA2 mRNA表达水平为0.60±0.15、0.33±0.14、0.42±0.16,较对照组(1.07±0.16)降低(P<0.05),HMEC-1细胞AnxA2 mRNA表达水平为0.21±0.20、0.08 ±0.08、0.17±0.16,较对照组(1.16 ±0.24)降低(P<0.05).沙利度胺浓度为12.5、25.0、50.0 μg/ml时,RPMI8226细胞膜表面AnxA2蛋白表达水平为3.39±0.32、2.82 ±0.28、3.21 ±0.23,较对照组(5.53 ±0.32)降低(P<0.05),HMEC-1细胞膜表面AnxA2蛋白表达水平为0.72 ±0.11、0.64 ±0.08、0.67±0.08,较对照组(1.40±0.15)降低(P<0.05).结论 沙利度胺能抑制RPMI8226和HMEC-1细胞AnxA2 mRNA和蛋白表达,可能为其诱发骨髓瘤血栓形成的原因之一.     

糖皮质激素和硼替佐米体外干预多发性骨髓瘤细胞BAFF/APRIL mRNA表达的初步探索

本研究观察糖皮质激素和硼替佐米对U266骨髓瘤细胞株和多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)BAFF/APRIL mRNA表达的影响。分离MM患者BMMNC,对U266骨髓瘤细胞株和BMMNC进行药物干预(单用地塞米松100、200μg/ml,甲基强的松龙100、200μg/ml,硼替佐米0.1μg/ml,以及地塞米松或甲基强的松龙与硼替佐米联用)48小时,收集细胞,进行荧光定量实时PCR检测BAFF/APRIL mRNA表达的水平。采用SPSS 17.0进行统计学分析。结果表明,U266细胞及7例初治的MM患者BMMNC均高表达BAFF/APRIL基因。地塞米松,甲基强的松龙,硼替佐米单独作用于U266细胞或MM患者BMMNC后,BAFF/APRIL基因表达较未干预前降低(p<0.01),其中硼替佐米干预后BAFF/APRIL表达最低(p<0.05)。地塞米松或甲基强的松龙和硼替佐米联用后BAFF/APRIL基因表达较单独干预时低(p<0.01);地塞米松联用硼替佐米时BAFF/APRIL基因表达的抑制强度大于甲基强的松龙和硼替佐米联用的抑制强度(p<0.05)。结论:糖皮质激素和硼替佐米干预后的骨髓瘤细胞BAFF/APRIL基因表达下降,提示糖皮质激素和硼替佐米除了存在已知的糖皮质激素受体和蛋白酶体作用靶点外,可能还存在BAFF/APRIL及其受体这种新的作用靶点。     

HMGB1基因沉默对阿霉素诱导K562/A02细胞凋亡增敏作用的研究

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)基因沉默对白血病细胞耐药逆转的作用.方法 将HMGB1基因特异性干扰RNA(HMGB1 siRNA)导入K562/A02细胞中,通过Western blot和RTPCR方法检测HMGB1基因在转染前后的表达;WST8法检测阿霉素(ADM)对转染前后K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测凋亡细胞百分率;Western blot检测线粒体促凋亡蛋白Smac/DIABLO的释放;采用caspase活性定量检测试剂盒分析caspase-3的活性.结果 ①与未经处理的K562/A02细胞组相比,转染HMGB1 siRNA的K562/A02细胞组HMGB1 mRNA和蛋白水平分别下降86%和71%;②HMGB1基因沉默使K562/A02细胞对ADM的药物敏感性增强,其IC50值从转染前的(4.83±0.08)μg/ml降低到(1.33±0.10)μg/ml,并在ADM浓度为1μg/ml和5μg/ml时,细胞凋亡百分率分别增加27%、32%;③HMGB1基因沉默可促进ADM所致Smac/DIABLO从线粒体向胞浆释放,并增加caspase-3的活性.结论 HMGB1基因沉默能明显增加K562/A02细胞对ADM的敏感性,逆转K562/A02细胞对ADM耐药.     

脂多糖诱导大鼠主动脉内皮细胞表达血管性血友病因子裂解酶的研究

目的 从剂量-效应和时间-效应关系探讨脂多糖(LPS)对大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS-13)mRNA和蛋白表达的影响.方法 采用组织贴块法培养Wistar大鼠的RAECs,1周后按1∶3传代至第4～5代,将细胞分为空白对照组和0.01、0.1、1、5 μg/ml LPS刺激组,分别于12、24、48、72 h用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定内皮细胞ADAMTS-13 mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测上清液内ADAMTS-13蛋白水平.结果 空白对照组有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达.随着LPS刺激浓度增加和刺激时间延长,ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达逐渐下降.与空白对照组(25.22±1.41)比较,0.01μg/ml LPS刺激48 h时ADAMTS-13 mRNA表达(18.78±0.86)即明显下降(P＜0.01);0.1μg/ml和1μg/ml LPS刺激24 h时ADAMTS-13 mRNA表达(23.43±0.63、22.41±0.76)即明显下降(P＜0.05和P＜0.01);5μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13 mRNA表达(20.01±2.47)即明显下降(P＜0.01).与空白对照组[(115.76±2.36)ng/ml]比较,0.01 μg/ml LPS刺激12 h时ADAMTS-13蛋白表达[(113.43±1.07)ng/ml]即明显下降(P＜0.05);至5 μg/ml LPS刺激72 h时ADAMTS-13蛋白表达[(7.63±2.64)ng/ml]降至最低(P＜0.01).结论 RAECs有一定量的ADAMTS-13mRNA和蛋白表达;不同浓度LPS刺激内皮细胞不同时间后ADAMTS-13 mRNA和蛋白表达降低,具有剂量依赖性和时间依赖性.     

β-榄香烯联合热疗和顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞HSP70及耐药基因的影响

目的探讨β-榄香烯联合顺铂和热疗对A549细胞中HSP70、MDR1、Bax/Bcl-2基因表达的影响。方法 15μg/ml和60μg/ml榄香烯分别联合热疗和顺铂处理细胞后,RT-PCR及WesternBlot法检测HSP70-1、MDR1基因mRNA转录和蛋白表达;RT-PCR检测Bax/Bcl-2基因mRNA转录水平。结果各实验组HSP70-1基因mRNA转录水平差异无统计学意义,而各实验组HSP70蛋白表达水平除了37℃下顺铂4μg/ml组、榄香烯15μg/ml、顺铂4μg/ml联合60μg/ml榄香烯组外其余各组均显著升高,差异有统计学意义(t分别=7.48～55.76,P均<0.05);37℃下各实验组MDR1基因mRNA转录多数降低,顺铂4μ/ml联合榄香烯15μg/ml与37℃对照组相比,差异有统计学意义(t=93.38,P<0.05),42℃下顺铂4μg/ml联合15μg/ml榄香烯组与42℃对照组比较,差异具有统计学意义(t=7.99,P<0.05)。各实验组MDR1蛋白表达均较低,与对照组比较,差异无统计学意义;部分实验组Bcl-2基因mRNA水平降低,与对照组比较,差异具有统计学意义(t分别=4.41、3.97、5.11、3.43、4.88、4.52,P均<0.05),而Bax基因mRNA水平未见明显变化。结论 37℃下高浓度榄香烯联合顺铂可能是通过抑制MDR1、Bcl-2等耐药相关基因协同杀伤细胞,而42℃下低浓度榄香烯和顺铂主要是通过抑制Bcl-2基因活性起到协同杀伤效应。     

促血小板生成素在小胶质细胞炎症模型中的表达及与NF-кB的关系

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预小胶质细胞后细胞内NK-кB及促血小板生成素(thrombo-poietin,TPO)的分泌.方法 将BV2细胞分为6组:(1)空白12 h组;(2)LPS 0.5μg/ml 12 h组;(3)LPS 1μg/ml12 h组;(4)空白24 h组;(5)LPS 0.5μg/ml 24 h组;(6)LPS 1μg/ml 24 h组.采用ELISA法检测细胞内NF-кB和TPO的表达;实时荧光定量PCR法检测细胞内NF-кB及TPO mRNA的表达水平.结果 NF-кB和TPO的表达和mRNA均较空白组升高,且12 h组高于24 h组(P<0.05).TPO与NF-кB的表达呈显著的正相关(P<0.01).结论 LPS干预小胶质细胞后NF-кB和TPO表达升高,参与炎症、凋亡和神经元保护等多种调控机制.