筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术。方法采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey（CMA）培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁（TSI）3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁（TSI）试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16SrRNA并与香港海鸥菌HKU1株进行同源性分析。结果在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%（11/92）和0.48%（1/211）。筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%（12/12）。分离的香港海鸥菌16SrRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基。结论本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断。     

深圳市肉类食品空肠弯曲菌的污染情况调查

目的了解我市常见肉类食品中空肠弯曲菌的污染状况,为控制和预防空肠弯曲菌食物中毒提供科学依据。方法在食品污监测点随机抽检肉类食品样品117份,用传统国标法和荧光PCR法进行检测。结果从117份肉类食品中检出4份空肠弯曲菌,阳性检出率为3.4%。结论深圳市肉类食品中存在空肠弯曲菌的污染,如果加工、销售不当,及监督不严,会对群众健康构成潜在威胁。     

应用实时荧光PCR法快速检测从业体检人群肠道致病菌结果分析

目的分析与评价实时荧光PCR法快速筛查从业人员沙门菌、志贺菌的带菌情况。方法收集从业人员肛拭样本,用实时荧光PCR法进行快速筛查,采用常规细菌培养法作为标准方法进行验证和血清分型,分析其灵敏度及特异性。结果在24598份样品中,实时荧光PCR法检出沙门菌阳性18份,志贺菌阳性11份．阳性率分别为0．732‰和0．447‰。通过细菌培养法验证及分型,14份标本确认为沙门菌阳性,阳性率为0．569‰,分布于A、B、C、D、E、F6个群11个血清型;6份标本确认为志贺菌阳性,阳性率为0．244‰,分布于B、C、D3个群5个血清型。实时荧光PCR法筛查沙门菌、志贺菌的灵敏度均为100．00％。特异性均为99．98％。结论与传统细菌培养法相比．实时荧光PCR法简便、快速,可提高检测的灵敏度和特异性,减少工作量,适用于肠道致病菌的快速筛查。     

深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

目的了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品（三文鱼、北极贝）的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据。方法抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份．依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测。结果168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60．12％：菌落总数29份,阳性率为17．26％;致病菌：检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2．98％;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22．62％。沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出。结论冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险。     

荧光定量RT-PCR在流感病毒检测上的应用

目的　探讨实时荧光定量RT PCR检测方法在流行性感冒检测诊断上的意义。方法　收集集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本 16起 2 0 7份和双份血清标本 10 4份 ,应用荧光定量RT PCR检测方法、MDCK细胞培养法和血凝抑制试验进行病原学和血清学检测。结果　 2 0 7份集体暴发疑似流感、SARS患者的咽拭子标本中用荧光定量RT PCR检测 ,阳性 79份。阳性率 38 16 % (79 2 0 7)。MDCK细胞培养 ,16起中有 13起共 14 5份咽拭子有 6 2份标本阳性。阳性率 2 9 95 % (6 2 2 0 7)。两者的阳性率差异有显著意义 (χ2 =8.6 4 ,P <0 0 0 5 )。有 9起 10 4份成功的采集了双份血清 ,经HI试验有 6 4份双份血清与H3N2亚型抗原产生血抑 4倍增长 ,阳性率 6 1 5 4 % (6 4 10 4 )。结论　荧光定量RT PCR方法检测流感病毒能够在 3～ 4h内得出结果、且操作方便、特异性强、灵敏度高。因此我们认为实时荧光定量RT PCR方法 ,可作为一种快速的流感病毒检测诊断方法。     

丙型肝炎病毒抗原检测试剂在临床诊断中的初步应用

本文利用重组丙型肝炎病毒(HCV)多表位复合抗原免疫动物制备抗HCV多克隆抗体,建立HCAgELISA检测方法,对不同的临床样品进行检测,分析不同临床样品HCAg检出率,并与荧光定量PCR结果进行对比。95份HCAb阳性的样品中,51份样品HCAg阳性,阳性率为53.7%;88份重症肝病患者血清中检出HCAg阳性33份,阳性率为37.5%,均明显高于其它样品(P<0.05);73份肝功异常但HCAb阴性血清样品,检出HCAg阳性8份,阳性率为11.0%;HCAg与HCAb之间存在相关性(r=0.5076,P<0.01),HCAg与HCV-RNA符合率为85.7%。HCAg ELISA检测可作为临床HCV诊断的检测指标,为临床早期诊断及治疗预后提供依据。     

肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立特异、敏感、快速检测肝螺杆菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法.方法 针对肝螺杆菌flaB 基因的保守区设计特异性引物和探针,建立肝螺杆菌TaqMan MGB探针实时荧光定最PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性.对2008-2011年期间采集的1081份临床样本中的肝螺杆菌进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测.结果 建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对肝螺杆菌的检测具有高度的特异性,对幽门螺杆菌、空肠弯曲菌、泰泽氏菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测的灵敏度达8.3拷贝.标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.227,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100％.对1081份临床样本进行检测,TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出86份肝螺杆菌阳性样本,而细菌分离培养则仅检出4份阳性.结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从临床样本中检出肝螺杆菌DNA,检测时间仅为2h.结论 研究建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有可靠、特异、敏感的特点,适用于肝螺杆菌的快速检测.     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的 建立检测HBV病毒DNA的荧光定量PCR法（FQ-PCR），并与运用常规凝胶电泳技术观察特异扩增带检测的结果加以比较。方法 合成扩增HBV DNA314bp特异保守序列的1对引物及1条带2个荧光基团的寡核苷酸探针。用PE-5700型定量PCR仪完成PCR反应及产物的荧光定量检测。同是PCR产物经琼脂糖凝胶电泳，EB染色，UVP（凝胶成像仪）检出有314bp带者为阳性或弱阳性。结果 建立了检测HBVDNA的荧光定量PCR技术，用已知HBV阳性模板不同拷贝数的标准溶液测得标准曲线Ct，原始拷贝数在10^5/ml以上者为阳性，用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性，阳性率29.2%；用定量及定性PCR2种方法检测698例血清标本的结果表明：用FQ-PCR技术共检测出204例为阳性，阳性率29.2%；用定性PCR观察到193例有阳性特异带，阳性检出率为27.65%。没有发现用定性PCR检测为阳性而用FQ-PCR检测为阴性者。结论 FQ-PCR检测HBVDNA较普通定性PCR技术具有操作简便，灵敏度更高、减少发生污染可导致假阳性结果的可能性及自动化程度高等优点，值得在临床检验中推广应用。     

新型冠状病毒肺炎病例粪便及咽拭子核酸平行检测结果比对分析

目的:通过平行比对确诊患者咽拭子和粪便样本中SARS-CoV-2核酸检测的阳性率,为实验室诊断提供参考。方法:收集解放军总医院41例确诊住院患者的粪便和咽拭子样本,采用荧光定量PCR方法进行平行检测,比较两种不同类型样本的阳性率和一致性。结果:41例患者中,咽拭子样本共检出9例阳性,占30%,粪便检出5例阳性,占12....     

2017~2018年成都市三区县外环境禽流感监测分析

目的 监测四川省成都市三区县外环境中禽类流行性感冒（禽流感）病毒的分布状况,为人禽流感防控提供参考依据。方法 我中心在2017年5月~2018年5月采用实时荧光定量PCR检测成都市三区县外环境中甲型流感通用病毒,再将阳性标本进行H5、H7、N9和H9分型,采用χ2检验比较定性资料。结果 在497份样本中,甲型流感病毒阳性标本87份,检出率为17.91%;分型实验中,H5、H7、N9和H9分别检出7份、6份、12份和41份,其阳性检出率依次为1.41%、1.21%、2.41%、8.25%,未分型成功23份,占总样本的4.63%。结论 成都市三区县外环境存在禽流感病毒污染,有人感染禽流感风险;需加强对外环境及高危人群禽流感监测,并规范对市场的管理机制,落实消毒和检疫准入等预防措施。     

广州市市售食品沙门菌污染状况及耐药性分析

目的按国家食源性致病菌监测项目要求,对广州市市售食品的沙门菌污染状况以及对抗生素的药物敏感性进行调查。方法采集广州肉菜市场、大型超市、饭店提供的肉、水产品、凉拌菜及沙拉冷饮食品,按国标方法进行沙门菌检测,并用纸片法进行抗生素敏感性测定。结果 413份食品中有41份检出沙门菌,检出率为9.9%,其中生肉类食品的污染状况最为严重,检出率达18.8%,其次是生吃水产品为14.0%,熟肉和凉拌菜较低分别为4.5%和3.9%。在检出的17种血清型中德尔卑沙门菌比例最高为29.3%。对16株抗生素的药敏试验结果显示,对四环素耐药率最高,达61.0%;并且发现有6株多重耐药菌株以及对头孢类耐药的菌株。结论广州市市售食品中存在沙门菌污染,并存在有多重耐药和对头孢类抗生素耐药的现象。     

食物中毒中分离的副溶血性弧菌的分子分型研究

目的运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术研究深圳市罗湖区2005-2007年食物中毒事件中分离获得的49株副溶血性弧菌的分子流行情况。方法样品采用荧光PCR与传统分离培养同时检测,对分离获得的副溶血性弧菌阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）,BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。结果 49株副溶血性弧菌中,有12株不能分型,其余36株副溶血性弧菌分离株大致可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个群,相同血清型的菌株其PFGE型大致相同,同一起食物中毒的菌株间有较高的相关性。结论罗湖区副溶血性弧菌食物中毒存在流行克隆株,PFGE分子分型技术在食物中毒追踪溯源方面有重要提示性作用。     

珠江河口外环境及海（水）产品副溶血弧菌研究

目的了解广州珠江河口地区不同生态环境中副溶血弧菌（Vp）的分布情况,为Vp型污染防控提供可靠的依据。方法根据广州珠江河口地区水网主要特征进行监测,定量分析按照GB/T4789-2003中的方法进行;阳性菌株采用荧光定量PCR法进行毒力基因的检测。结果外环境及海水产品Vp总阳性率为34.10%（671/1968）;水产品的阳性率为47.50%（114/240）,水体总阳性率为27.27%（373/1368）,淤泥和水草等环境样本的阳性率为51.11%（184/360）,大部分（118/120）不携带毒力基因。外环境Vp检出率与水体深度、潮汐、水温、pH、盐度等有关。结论广州珠江河口地区海（水）产品、海水等外环境中Vp污染严重,其中以贝壳类海产品最高,海水中污染率高于其他环境水体。     

深圳市HFRS疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒的基因特征对应性研究

目的 了解深圳市肾综合征出血热(HFRS)疫源地鼠携带汉坦病毒与人感染汉坦病毒二者的病原学特征及联系,为HFRS的防控提供科学依据.方法 收集疑似HFRS病人急性期血清标本,并在相同区域开展笼日法捕鼠,无菌取鼠肺.分别采用ELISA和直接免疫荧光法筛选阳性标本,选择代表性血清标本以及鼠肺标本进行逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested PCR)扩增部分M和S片段及核苷酸序列测定,与国内外的汉坦病毒毒株一起进行同源性比对和系统进化树分析.结果 472份鼠肺经直接免疫荧光检测共获得阳性鼠肺47份,带毒率为9.96%.对60份IgM抗体阳性的血液标本进行RT-nested PCR扩增,检出12份阳性,阳性率为20%.从代表性的8份鼠肺和8份病人血清中提取的标本二者之间M片段核苷酸序列的同源性高达95%以上,S片段之间的同源性高达96.5%以上.其推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%～100%、98.4%～100%.深圳市HFRS疫源地鼠携带的汉坦病毒和人感染汉坦病毒均为汉城型S2亚型.结论 深圳市流行的汉坦病毒为SEO型S2亚型.无论是同一地区的鼠和人之间,还是不同地区的鼠和人之间,汉坦病毒都是具有较高的同源性.     

2008年深圳地区手足口病病原学调查

目的 研究2008年深圳地区手足口病病原体EV71和CoxA16感染情况,为手足口病的防治提供依据.方法 应用RT-PCR技术检测307例手足口病患儿标本病原体EV71、CoxA16基因,将PCR产物测序,并应用ChstaIW2在线分析软件进行序列分析、进化树分析.结果 不同标本中EV71的阳性率分别为:大便标本24.4%(75/307)、咽拭子为7.8%(24/307)、外周血12.5%(1/8);CoxA16的阳性率分别为,大便13.8%(28/203),咽拭子11.0%(20/181),其中EV71和CoxA16同时为阳性的有3份(0.98%);脑脊液标本未检测到EV71和CoxA16.与标准株BrCr序列比对分析,测序的14例标本中,8例的EV71新出现多个位点变异,其中2例标本的A2528G变异导致氨基酸改变,即N595D,1例标本的A2714G变异引起氨基酸改变,即1658V.进化树分析显示,有2例标本的病毒株与anhui毒株亲缘关系较近,与标准株BrCr及深圳株SHH02-6、SHZH02-40、SHZH03-58等亲缘关系较远;而其余12株与上述毒株亲缘关系较远.根据文献报道的EV71基因分型方法分析,测序的14株EV71基因型为C型.结论 在引起2008年深圳手足口病病原体中相当的比例是EV71,且可能部分是anhui病毒株的入侵.     

深圳市福田区华支睾吸虫病流行现状调查

目的了解福田区华支睾吸虫病感染现状和流行特征。方法用血清免疫学筛查，采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法查抗体，同时进行问卷调查与华支睾吸虫感染相关的生活和行为方式。结果全区共调查2176人，华支睾吸虫感染率2．30％，男性为3．02％，女性为1．73％，二者间差异有统计学意义。人群中不同年龄组表现了不同的感染率，最高感染率的年龄组主要分布在30～49岁。73％的被调查者吃过淡水鱼生．55％的家庭刀具、砧板没有生熟分开。结论福田区华支睾吸虫病感染率较高，吃淡水鱼生、生熟混用刀具是感染的主要原因，应加强宣传教育，改变人们不良饮食习惯。     

香港海鸥形菌对理化生因子抵抗力的实验研究

目的了解香港海鸥形菌（LH）对理化生因子的抵抗力。方法用紫外线、高温、干燥、pH、常用多种化学消毒剂及部分抗菌药物处理两株分离于病人的香港海鸥形菌,定量观察其生长情况。结果温度≥56℃即可灭活香港海鸥形菌;紫外线照射30s杀灭率〉90%,照射20min可完全灭菌;菌株在pH〉8.5或〈5.0条件下不能存活,最适生存pH范围为5.5～8.5;在3%以上盐浓度的肉汤中不生长;对化学消毒剂和干燥较敏感,除对2%碳酸氢钠、2%来苏儿、0.1%迭氮钠和70%乙醇有一定耐受力外,其余消毒剂均可在30s内杀灭该菌;香港海鸥形菌在自然干燥后15min即全部死亡;在18种常见抗菌药物中,仅对头孢噻吩、头孢哌酮、氨苄西林、头孢唑啉、头孢他啶、克林霉素耐药,其余均敏感。结论香港海鸥形菌对多数理化生因子抵抗力较弱,常用的消毒剂能够有效杀灭LH。