核转录因子-κB和缺氧诱导因子-1α在大鼠损伤脑组织中的表达变化

目的:探讨核转录因子-κB(NF-κB)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)两种蛋白及其mRNA在脑创伤后脑组织中表达的规律,为法医学损伤时间的推断提供依据。方法:雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组和脑创伤组,分别于颅脑创伤后1、2、4、6、8、10、12、16、18 h和24 h处死,解剖取其脑组织。H-E染色观察大鼠脑组织病理学形态结构的变化,采用免疫组织化学SP法和PCR法分别检测上述两种蛋白和其mRNA在不同损伤时间组的表达及变化规律。结果:NF-κB蛋白的表达在损伤后1 h开始升高,18 h出现表达高峰期,18~24 h出现平台期,损伤组除伤后1 h和2 h组外,其他各组NF-κB阳性表达均显著高于对照组,差异具有统计学意义;NF-κB mRNA于损伤后1 h开始表达,6 h达高峰,持续至24 h,各损伤组NF-κB mRNA水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义;HIF-1α伤后6 h呈阳性表达,随着伤后时间的延长,表达逐渐增强,伤后24 h表达最强,损伤组除伤后1、2、4 h组外,其他各组HIF-1α阳性表达均显著高于对照组,差异具有统计学意义。HIF-1αmRNA于损伤后4 h开始表达,18 h达高峰,持续至24 h,损伤组除1、2 h组外,其他各组HIF-1αmRNA水平均显著高于对照组,差异具有统计学意义。结论:大鼠脑损伤后NF-κB和HIF-1α及其mRNA的表达均随损伤时间变化而变化,具有时序性变化规律,能够成为损伤时间推断的候选因子。     

缺氧诱导因子-1α基因在严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织中的表达

目的观察大鼠严重烫伤延迟复苏后肺组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达变化,探讨其与肺组织损伤的相关性。方法雄性SD大鼠120只,随机分为延迟复苏组（DF,n=60）、即时复苏组（IF,n=50）和正常对照组（NC,n=10）,建立Ⅲ度烫伤面积30％TBSA的模型,分别于伤后1、6、12、24、48和72h取材,采用组织病理学、组织芯片技术、免疫组织化学染色与图象分析技术,观察肺组织病理改变与HIF-1α的表达。结果DF组伤后6—24h肺组织病理损伤严重,IF组相对较轻。HIF-1α的阳性表达位于肺泡上皮细胞胞核,DF组表达明显强于IF组,而NC组表达阴性。HIF-1α表达的灰度值定量分析结果显示：DF组与IF组在伤后72h各时相点表达均升高,与NC组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;DF组在各时相点HIF-1α表达均高于相对应的IF组各时相点,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论严重烫伤延迟复苏后大鼠肺组织HIF-1α的高表达与肺组织的损伤的程度是一致的,推测其参与了严重烫伤延迟复苏后大鼠肺组织的损伤。     

一氧化氮激活应激活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶及p38MAP激酶诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡

目的研究脑缺血区周边组织一氧化氮合酶（NOS）的表达与应激活化蛋白激酶／c—Jun氨基末端激酶（SAPK／JNK）及p38MAP激酶（p38MAPK）激活的关系;探讨一氧化氮（NO）诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡的可能机制。方法采用TUNEL染色法观察脑缺血再灌注不同时段模型鼠缺血区周边组织凋亡的阳性神经元数量;免疫组织化学、蛋白免疫印迹方法检测活化型Caspase-3、神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和SAPK／JNK,p38MAPK及其磷酸化组分的表达。结果再灌注后1h、2h缺血区周边组织nNOS表达明显增强;自1h起iNOS开始表达,12h达到高峰。1hp-SAPK／JNK表达较强,以后逐渐减弱;p38MAPK各时段表达均明显增强,以6h为著,p-p38MAPK表达高峰亦在6h。6h活化型Caspase．3开始表达,12h达到高峰;12h开始出现TUNEL阳性神经元,24h达到高峰。结论缺血区周边组织NOS表达的增强可能通过激活SAPK／JNK及p38MAPK诱导脑缺血再灌注后神经元凋亡。     

HIF-1α、VEGF与大鼠继发性脊髓损伤的相关性研究

建立大鼠脊髓损伤动物模型,分析血管内皮生长因子（VEGF）及缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达与脊髓损伤的相关性及二者之间的相关性,探讨其在继发性脊髓损伤发生发展过程中的作用。方法 健康成熟Wistar大鼠144只,雌雄不限,体质量180 ～ 220 g。随机分为脊髓损伤组和假手术组。假手术组大鼠行椎板切除术,脊髓损伤组大鼠参照Allen法制作脊髓损伤模型。2组分别于术后1、3、6、12、24、48、72、168、336 h对8只大鼠进行Tarlov评分,评分后处死。取损伤区脊髓组织进行HE染色观察脊髓组织病理学变化,免疫组织化学法测定VEGF及HIF-1α表达并对阳性细胞进行计数,做统计学分析和相关性分析。结果 各组动物均存活至实验完成。Tarlov评分结果显示：假手术组大鼠术后各时间点评分变化不明显,脊髓损伤组大鼠术后各时间点评分均较假手术组显著降低（P 〈 0.05）,其中术后24、168 h降低最明显（2.24、2.28）。脊髓损伤组术后1 ～ 6 h,损伤局部脊髓组织结构紊乱、水肿;术后168 h内,损伤区域扩大,大量炎性细胞浸润;术后336 h损伤减轻,但仍可见较多炎性细胞浸润。免疫组织化学检测,假手术组大鼠VEGF 及HIF-1α阳性细胞较少;脊髓损伤组大鼠术后6 h,VEGF及HIF-1α阳性细胞数开始增多,HIF-1α于术后24、168 h出现2次高峰,VEGF于术后168 h出现高峰,各时间点HIF-1α及VEGF阳性细胞数均较假手术组显著增加（P 〈 0.05）。VEGF与HIF-1α表达呈正相关（r = 0.526, P 〈 0.05）。结论 大鼠脊髓损伤后HIF-1α、VEGF表达升高,与继发性脊髓损伤密切相关,其表达规律与损伤时间具有相关性;HIF-1α与VEGF表达呈正相关性。     

大鼠脊髓发育及损伤后NIDD mRNA表达的实验研究

目的：探讨在大鼠发育过程中及急性脊髓损伤后脊髓组织中NIDD （nNOS-interacting DHHC domain-containing protein with dendritic mRNA）mRNA的表达变化及意义。方法：采用改良Allen＇s打击法，咬除T8-10椎板后，造成大鼠脊髓损伤模型，致伤量为10×10g·cm；借助实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫荧光结合的方法，定量、定位研究发育过程中及脊髓损伤后早期大鼠脊髓组织中NIDD mRNA与nNOS mRNA表达的时间和空间分布特征。结果：大鼠发育过程中，胚胎16d的大鼠脊髓中可见NIDD mRNA的高表达，在生后1d，与nNOS共表达于尚未分化成熟的前角，在白质也见NIDD的阳性信号。成年后呈低表达；nNOS mRNA于生后1～3d出现表达高峰；脊髓损伤后NIDD mRNA表达明显增多，在8h到达高峰，分布于脊髓前角、中间带、中央管周围及后角nNOS阳性的神经元，7d恢复至正常水平；nNOS mRNA在损伤后8h达到高峰，1d降低至正常水平。而且，在脊髓损伤后NIDD mRNA与nNOS mRNA二者表达呈正相关。结论：胎鼠脊髓中，NIDD高表达于nNOS阳性细胞，提示其在脊髓组织的发育成熟过程中的作用可能与nNOS相关。脊髓损伤后脊髓组织中NIDD与nNOS表达增多，提示在脊髓损伤的病理过程中，NIDD可能通过调节nNOS的细胞亚定位及活性而发挥一定的生物学作用。     

大鼠局灶性脑缺血—再灌注后尾壳核神经型一氧化氮合酶表达的变化

目的：探讨神经型一氧化氮合酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在大鼠脑缺血后不同时程尾壳核内的变化。方法：应用大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO），结合免疫细胞化学ABC法和图像定量分析技术进行研究。结果：缺血－再灌注早期（0h,1h,6h)尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元数量减少，细胞形态变圆，树突缩短，形态学参数开始下降，缺血－再灌注中期（24h,48h,72h)nNOS阳性神经元数量和形态学参数较前有一过性升高，但随后仍持续降低，缺血－再灌注后期（1W）nNOS阳性神经元数量继续下降，胞体浓缩，树突消失，细胞崩解，形态学参数降到最低，结论：脑缺血－再灌注后尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元损伤较重，持续时间长，后期更为严重，这可能会影响尾壳核功能的恢复。     

急性脊髓挫伤后内皮素-1 mRNA表达变化

目的：观察脊髓损伤（SCI）后内皮素-1（ET-1）mRNA表达的解剖和空间以及含量变化规律。方法：改良Allen's法（50 g-cm）制备急性大鼠脊髓挫伤模型。原位杂交检测SCI前后脊髓组织中ET-1 mRNA。图像分析半定量测定伤区邻近段ET-1 mRNA含量。结果：SCI后损伤邻近段脊髓组织中ET-1 mRNA阳性表达的神经元、胶质细胞与血管内皮细胞数量多于及信号强于对照组，以神经元表达改变为主。除48 h组，伤后各时点脊髓灰质ET-1 mRNA阳性染色的阳性单位与对照组比较差异显著（P<0.05）。伤区脊髓中ET-1 mRNA阳性染色神经元随时间逐渐减少，而胶质细胞阳性表达增加。结论：SCI后脊髓组织中ET-1 mRNA表达上调，提示ET-1参与SCI后病理生理改变。神经元是SCI后脊髓组织中ET-1升高的主要来源。     

大鼠脑干神经元型一氧化氮合酶免疫阳性神经元的分布

目的　观察大鼠脑干神经元型一氧化氮合酶 (nNOS)免疫阳性神经元的分布 ,为探讨nNOS的作用提供形态学资料。方法　用ABC免疫细胞化学方法显示脑干nNOS免疫阳性神经元。结果　大鼠脑干nNOS免疫阳性神经元以中脑和脑桥分布丰富 ,延髓较稀少 ;在中脑 ,nNOS免疫阳性神经元主要分布于中脑水管周围灰质的背侧部、被盖背外侧核、中缝背核、上下丘灰质等部位 ;在脑桥 ,主要分布于被盖背外侧核、脑桥中缝核、被盖脚桥核、蓝斑、臂旁核、斜方体核 ,以及脑桥网状结构 ;与中脑和脑桥相比 ,延髓nNOS免疫阳性神经元较少 ,主要分布于延髓网状结构、三叉神经脊束核和孤束核等核团。结论　分布于脑干内丰富的nNOS免疫阳性神经元可能通过其生成的NO调节其他神经递质的分泌 ,共同参与内脏活动、感觉和运动的传导 ,以及睡眠和觉醒等脑的高级整合功能的调节。     

内皮素-1在烫伤大鼠脑血管损伤中的表达

目的 探讨内皮素-1（ET-1）在烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的表达及其作用。方法应用组织学方法观察8只烫伤大鼠脑基底动脉组织结构的变化；应用RT-PCR测定48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA的表达；应用Western blotting分析48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1的表达；应用放射免疫分析检测48只烫伤大鼠脑基底动脉ET-1 水平的变化。结果 烫伤大鼠脑基底动脉呈现病理学组织结构变化；烫伤后3h大鼠脑基底动脉ET-1 mRNA表达较正常对照组开始升高，6h 达高峰；烫伤后6h大鼠脑基底动脉ET-1 表达较正常对照组增强，12h 达高峰；烫伤后各组大鼠脑基底动脉ET-1水平较正常对照组明显升高，6h 达高峰。结论 烫（烧）伤可诱发大鼠脑血管ET-1表达增加，增加表达的ET-1可能与烫（烧）伤大鼠脑血管损伤的病理发生有关。     

大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞NOS表达与细胞凋亡及复方丹参的保护作用

目的:探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞一氧化氮合酶(NOS)的表达与神经细胞凋亡的关系及中药复方丹参的保护作用.方法:采用大脑中动脉内栓线法造模,应用原位细胞凋亡检测方法观察神经细胞凋亡,用免疫组织化学方法检测大鼠大脑皮层神经细胞nNOS、iNOS的表达并做图像分析.结果:与假手术组比较,脑缺血冉灌注2 h后缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞nNOS、iNOS表达升高,并出现神经细胞凋亡,随着再灌注时间的延长,缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞iNOS表达明显增强,凋亡神经细胞数逐渐增多,至24 h达高峰,但神经细胞nNOS的表达增强不如iNOS表达明显.复方丹参保护组神经细胞nNOS、iNOS的表达和凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组.结论:脑缺血再灌注后缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞nNOS的表达增强,尤其是iNOS的表达显著升高,使NO产生增加可能是介导脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的机制之一,复方丹参具有下调神经细胞nNOS、iNOS表达,减少NO生成,抑制细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞损伤的作用.     

急性缺氧小鼠海马CAl区NOS活力和nNOS蛋白表达的时程变化

目的:观察急性缺氧小鼠海马CAl区一氧化氮合酶(NOS)和神经元型一氧化氮合酶(nNOS) 阳性神经元的时程变化,探讨NO在脑缺氧中的作用并为抗脑缺氧提供依据。方法:复制小鼠急性缺氧模型,采用NADPH-d组织化学和nNOS免疫组织化学方法,研究急性缺氧后不同时程点小鼠海马CAl区NADPH-d 和nNOS阳性神经元数量的变化。结果:与正常对照组相比较,急性缺氧后0.5h组小鼠海马CAl区NADPH-d 和nNOS阳性神经元的数量无明显变化,差异无显著性(P>0.05),3h、6h和12h组逐渐增多并于12h升高达到最高峰,差异有显著性(P<0.05),而于24h后开始降低,48h恢复正常。结论:急性缺氧后早期海马CAl区NOS和nNOS水平明显增多,NO在缺氧所致早期脑损伤中起重要作用。     

mRNA and protein expression and activities of nitric oxide synthases in the lumbar spinal cord of neonatal rats after sciatic nerve transection and melatonin administration

Sciatic axotomy in 2-day-old rats (P2) causes lumbar motoneuron loss, which could be associated with nitric oxide (NO) production. NO may be produced by three isoforms of synthase (NOS): neuronal (nNOS), endothelial (eNOS) and inducible (iNOS). We investigated NOS expression and NO synthesis in the lumbar enlargement of rats after sciatic nerve transection at P2 and treatment with the antioxidant melatonin (sc; 1 mg/kg). At time points ranging from P2 to P7, expression of each isoform was assessed by RT-PCR and immunohistochemistry; catalytic rates of calcium-dependent (nNOS, eNOS) and independent (iNOS) NOS were measured by the conversion of [3H]L-arginine to [3H]L-citrulline. All NOS isoforms were expressed and active in unlesioned animals. nNOS and iNOS were detected in some small cells in the parenchyma. Only endothelial cells were positive for eNOS. No NOS isoform was detected in motoneurons. Axotomy did not change these immunohistochemical findings, nNOS and iNOS mRNA expression and calcium-independent activity at all survival times. However, sciatic nerve transection reduced eNOS mRNA levels at P7 and increased calcium-dependent activity at 1 and 6 h. Melatonin did not alter NOS expression. Despite having no action on NOS activity in unlesioned controls the neurohormone enhanced calcium-dependent activity at 1 and 72 h and reduced calcium-independent catalysis at 72 h in lesioned rats. These results suggest that NOS isoforms are constitutive in the neonatal lumbar enlargement and are not overexpressed after sciatic axotomy. Changes in NO synthesis induced by axotomy and melatonin administration in the current model are discussed considering some beneficial and deleterious effects that NO may have.     

Expression of c-jun in brain stem following moderate lateral fluid percussion brain injury in rats

Expression of c-jun in brain stem following moderate lateral fluid percussion brain injury in rats     

LPS性肺损伤大鼠一氧化氮合酶表达和肺细胞凋亡变化

目的: 观察内毒素性肺损伤过程中肺细胞凋亡和一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的时程性变化及关系,探讨LPS性肺损伤（ALI）的发病机制。方法: 健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组:①对照组：静注等量生理盐水；②模型组(LPS组)：静注LPS复制ALI模型,分别于给药1、3、6、9及12h后采集样品；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肺组织中NOSmRNA表达变化；电镜、流式细胞术检测肺细胞凋亡率；免疫组化法测定Bcl-2和Bax；光镜、电镜观察肺组织病理变化。结果: 与对照组比较，LPS组iNOSmRNA表达随时间延长而增强，给予LPS 3 h后有显著差异(P<0.05)，eNOSmRNA随时间延长而降低，给LPS 3 h时有显著差异(P<0.05)，nNOSmRNA在观察时间内没有变化；光镜和电镜下可见在观察时间内1 h起肺损伤随时间延长加重；流式细胞术显示LPS组凋亡细胞随时间延长增多，9 h达高峰，12 h有所降低；免疫组化结果显示，LPS组随时间延长Bcl-2减少，主要表现在肺上皮细胞，Bax增多；对照组无明显变化。结论: 不同一氧化氮合酶在ALI中表达强度不同；抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax是ALI时调节细胞凋亡的途径之一；一氧化氮合酶可能通过调节Bcl-2和Bax平衡而影响凋亡。     

一氧化氮合酶在坐骨神经夹伤后腓肠肌中的表达变化

目的:探讨外周神经损伤后同侧腓肠肌中3种一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的表达变化及定位。方法:采用H-E染色及Masson三色染色法分析大鼠坐骨神经夹伤后同侧腓肠肌的病理变化,NADPH-黄递酶组织化学研究其总NOS的改变,并利用Western印迹法、免疫荧光双标法,对3种NOS表达变化及定位进行分析。结果:神经夹伤后相应腓肠肌发生了明显的病理变化且总NOS发生改变,3种NOS变化不尽相同,其表达高峰均约在4周左右。nNOS与神经丝标记物NF-200有共定位,iNOS、eNOS则分别在巨噬细胞、血管内皮细胞中有表达。结论:3种NOS在坐骨神经夹伤后相应腓肠肌中表达变化不同,可能对肌肉损伤及再生修复发挥不同作用。     

mTOR activates hypoxia-inducible factor-1α and inhibits neuronal apoptosis in the developing rat brain during the early phase after hypoxia-ischemia

The mammalian target of rapamycin (mTOR) exerts neuroprotective effects under hypoxic or ischemic conditions. To explore whether mTOR participates in neuroprotective signaling through regulation of hypoxia-inducible factor-1α (HIF-1α), vascular endothelial growth factor (VEGF) and neuronal apoptosis in developing rat brain with hypoxia-ischemia (HI), we operated on postnatal day 10 rats by ligating the common carotid artery followed by exposure to systemic hypoxia. Brains were collected at various intervals to detect the expression of mTOR, phosphorylated mTOR (p-mTOR), HIF-1α, VEGF and cleaved caspase 3 (CC3), using immunohistochemistry and Western blot analysis. We also used terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-nick end labeling (TUNEL) to detect neuronal apoptosis. The p-mTOR protein expression increased at 2 h after HI, peaked at 8 h, lasted 24 h, and then dropped to the basal level. Also, the expression of HIF-1α and VEGF was significantly enhanced and peaked at 8 h after HI. Up-regulated expression of CC3 was observed at 2 h, peaked at 24 h, and lasted 72 h after HI. Increased neuronal apoptosis is associated with reduced HIF-1α and VEGF expression. Furthermore, pretreatment with rapamycin, a mTOR specific inhibitor, significantly inhibited HIF-1α and VEGF protein after HI. The expression of CC3 and the number of TUNEL-positive cells were up-regulated at 8 h and down-regulated at 24 h after HI in the rapamycin-treated group. Our findings suggest that mTOR may participate in the regulation of HIF-1α, VEGF and neuronal apoptosis, serving neuroprotective functions after HI in developing rat brain.     

人参皂苷Rb1对大鼠脑缺血再灌注损伤中NAIP表达的影响

目的:观察人参皂苷Rb1对神经元凋亡抑制蛋白(neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP)在脑缺血再灌注损伤中表达的影响,探讨人参皂苷Rb1对缺血性脑病的防治机制.方法:线栓法阻断大鼠大脑中动脉2 h,再灌注3 h～5 d制备脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法标记NAIP阳性细胞,观察人参皂苷Rb1对NAIP阳性细胞数的影响.结果:缺血再灌注后,缺血半暗带内的NAIP阳性细胞表达增加,海马CA 1区等部位的NAIP阳性细胞数量也明显增加,而缺血中心区无NAIP阳性细胞的表达.实验对照组中NAIP阳性细胞数量随再灌注时间延长逐渐升高,12 h达到高峰,至5 d时NAIP阳性细胞数量表达低于正常水平.实验用药组中NAIP阳性细胞数量在2 d时达到高峰,且其高峰值明显高于实验对照组中的高峰值,后随再灌注时间的延长而逐渐下降,至5 d时仍处于较高水平.结论:脑缺血再灌注后,NAIP表达增加是脑组织对损伤的一种保护性反应,其对缺血区周围的神经细胞的保护作用更为明显.NAIP在脑组织中的表达具有一定的时间规律性,并且人参皂苷Rb1可能通过上调NAIP的表达发挥对受损脑组织的保护作用.