GATA-3在大鼠哮喘模型气道炎症中作用的实验研究

目的：探讨GATA-3在Wistar大鼠哮喘模型气道炎症中的作用。 方法： 按常用方法复制大鼠哮喘模型并分为哮喘组(A组)，地塞米松治疗组（D组），反义寡核苷酸治疗组（AS组），无意义寡核苷酸治疗组（NS组）和正常对照组（N组）5组，每组10只。反义寡核苷酸和无意义寡核苷酸经鼻气管内给药，地塞米松腹腔注射给药。HE染色方法观察气道炎症变化。免疫组化方法观察GATA-3阳性细胞数。用RT-PCR方法观察大鼠肺组织GATA-3 mRNA表达。用Western 蛋白印迹法检测肺组织中GATA-3蛋白质表达。 结果： A组GATA-3 mRNA和蛋白质的表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量明显大于N组（P<0.01）。AS组和D组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量及气道嗜酸性粒细胞浸润数量均明显低于A组（P<0.01）。NS组GATA-3 mRNA和蛋白质表达量和嗜酸性粒细胞浸润数量与A组相比差异无显著（P>0.05）。GATA-3的表达与大鼠支气管肺组织中嗜酸性粒细胞浸润数量呈正相关，r=0.995(P<0.01)。 结论： GATA-3反义寡核苷酸能特异性地抑制GATA-3基因的表达，减轻气道炎症反应。GATA-3 在Wistar大鼠哮喘模型效应阶段气道炎症中具有重要作用。     

支气管哮喘患者血清骨桥蛋白和嗜酸细胞趋化因子表达及临床意义

支气管哮喘是慢性气道炎症性疾病,嗜酸性粒细胞在气道炎症反应中起重要作用[1]。现认为细胞因子网络失衡是发病的基础,而Th2细胞因子、嗜酸细胞趋化因子(eotaxin)共同诱导的嗜酸性粒细胞募     

趋化因子RANTES及其受体与哮喘

嗜酸性粒细胞在哮喘变应性炎症发生中作为一种效应细胞 ,参与介导气道内各种炎性细胞的生存、趋化和活化等 ,对气道变应性炎症的发生起重要作用。哮喘患者支气管粘膜的慢性非特异性炎症反应 ,涉及多种炎症介质细胞 ,其中趋化因子家族及其对各种炎症细胞的特异性趋化和激活功能在哮喘非特异性炎症中的作用正受到重视。RANTES(活化正常T细胞表达和分泌的调节物 )是CC类趋化因子 ,RANTES及其受体CCR3、CCR1和CCR5等在诱导嗜酸性粒细胞募集中起到重要作用。本文就CC类趋化因子RANTES及其受体与哮喘的研究进展作一综述     

金黄色葡萄球菌肠毒素对小鼠慢性哮喘模型的抗炎作用

目的：用金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）和肠毒素B（SEB）干预幼年小鼠,观察它们对小鼠慢性哮喘气道炎症的影响以及对气道内相关细胞因子水平的调节作用。方法：实验组中BALB/c小鼠在出生后1周开始腹腔注射0.1 mL SEA或SEB（浓度1 mg/L）,隔天注射,共7次。其它小组注射相同剂量生理盐水对照。BALB/c 小鼠出生后4周建立哮喘模型,实验组和模型组分别在0、7和14 d用卵白蛋白（OVA）腹腔注射致敏,在28 d开始隔天OVA雾化激发哮喘,共7次,末次激发后24-48 h内取支气管肺泡灌洗液（BALF）,进行嗜酸性粒细胞和总白细胞计数,其余BALF离心-70 ℃冻存检测细胞因子,固定肺组织做病理切片分析。结果:SEA组和SEB组小鼠肺组织炎症反应轻于模型组,BALF中嗜酸性粒细胞数量少于模型组 (P＜0.05);SEA、SEB组BALF中Th1细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）高于模型组(P＜0.05);而Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-5（IL-5）和嗜酸性粒细胞趋化因子（eotaxin）均低于模型组(P＜0.01)。结论:早期感染 SEA、SEB可以减少小鼠慢性哮喘支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞的数量,可能通过调节Th1/Th2细胞因子比值减轻气道中的哮喘炎症反应。     

磷脂酰肌醇3激酶对哮喘大鼠气道上皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达的调控作用

目的： 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂wortmannin对哮喘大鼠支气管上皮细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响。方法: 24只成年哮喘大鼠随机分成对照组、哮喘组以及PI3K抑制剂wortmannin干预组。对支气管肺泡灌洗液（BALF）细胞总数及嗜酸性粒细胞进行计数,免疫组织化学检测大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白的表达,RT-PCR检测肺组织iNOS mRNA的表达,分光光度计检测肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量。结果: 哮喘组大鼠BALF细胞总数计数及嗜酸性粒细胞分类均高于对照组;PI3K抑制剂wortmannin干预组BALF嗜酸性粒细胞计数及分类明显低于哮喘组,差异显著。哮喘组肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量高于对照组,PI3K抑制剂wortmannin干预组肺组织PI3K活性、iNOS活性及NO含量低于哮喘组。哮喘组大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白及肺组织iNOS mRNA表达较对照组明显增强,但PI3K抑制剂wortmannin组iNOS蛋白及mRNA表达均明显弱于哮喘组。结论: PI3K可调节哮喘大鼠气道iNOS表达,影响哮喘气道炎症反应。     

趋化因子RANTES及其受体与哮喘

嗜酸性粒细胞在哮喘变应性炎症发生中作为一种效应细胞，参与介导气道内各种炎性细胞的生存、趋化和活化等，对气道变应性炎症的发生起重要作用。哮喘患者支气管粘膜的慢性非特异性炎症反应，涉及多种炎症介质细胞，其中趋化因子家族及其对各种炎症细胞的特异性趋化和激活功能在哮喘非特异性炎症中的作用正受到重视。RANTES(活化正常T细胞表达和分泌的调节物)是CC类趋化因子，RANTES及其受体CCR3、CCRl和CCR5等在诱导嗜酸性粒细胞募集中起到重要作用。本文就CC类趋化因子RANTES及其受体与哮喘的研究进展作一综述。     

小白菊内酯通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年大鼠气道炎症

目的 探讨小白菊内酯（PTL）减轻哮喘幼年大鼠气道炎症的作用机制是否与Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)/白介素（IL）-1β信号通路有关。方法 SD幼年大鼠随机分为对照组、卵清蛋白（OVA）组、PTL（低、中、高）剂量组（1、2、4 mg/kg PTL）和PTL+NLRP3激动剂组（4 mg/kg PTL和100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐）。OVA致敏与激发构建哮喘模型。测定幼年大鼠气道反应性，分类计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞，检测血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，观察肺组织病理学改变，检测肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1βmRNA或蛋白表达。结果 与对照组比较，OVA组幼年大鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量，血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，肺组织炎症评分及肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）;PTL（低、中、高）剂量组可呈剂量依赖性缓解上述改变；而NLRP3激动剂可减弱PT...     

温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠嗜酸粒细胞凋亡和相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响

目的:研究温阳益气平喘方对支气管哮喘大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及相关基因蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:60只SD大鼠随机分为6组,即正常组、模型组、温阳益气平喘高剂量组、温阳益气平喘低剂量组、桂龙咳喘宁组,氨茶碱组,每组10只.除正常组外以卵蛋白致敏并吸入激发法制备大鼠支气管哮喘模型,各治疗组均从第1次哮喘激发开始(造模第3周)至处死前每天灌胃给药,激发并给药4周后处死大鼠.应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡,免疫组织化学检测肺组织Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果:温阳益气平喘方高低剂量组大鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数显著高于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高剂昔组优于氨茶碱组(P＜0.01);肺组织及气道壁中Bcl-2蛋白阳性细胞的比例显著低于哮喘模型组(P＜0.01和P＜0.05),高剂量组优于桂龙咳喘宁和氨茶碱组(P＜0.01);Bax蛋白阳性细胞的比例显著高于哮喘模型组(P＜0.01),高低剂量组优于桂龙咳喘宁组(P＜0.01),高低剂量组优于氨茶碱组(P＜0.01和P＜0.05).结论:温阳益气平喘方可通过调节抑制凋亡基因bcl-2和促进凋亡基因bax蛋白的表达,促进肺内EOS凋亡,减少炎细胞浸润,减轻哮喘气道炎症.     

Eotaxin在过敏性炎症反应中的研究进展

Eotaxin是嗜酸粒细胞趋化因子 ,能选择性诱导嗜酸粒细胞在粘膜组织中的聚集。Eotaxin可由多种细胞分泌 ,与多种细胞因子相互作用形成调控过敏性炎症反应的免疫网络。针对Eotaxin和CCR 3路径可能开发出抗过敏性炎性疾病新药。     

微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究微卡对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响。 方法： 30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及微卡组，每组10只。微卡组每只豚鼠在OVA致敏前10 d肌注22.5 μg微卡。应用TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞的凋亡，免疫组化法检测肺组织Bcl-2蛋白的表达。 结果： 微卡组豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数（23.78±5.42）%显著高于哮喘组（4.56±0.68）%(P<0.01)；肺组织Bcl-2蛋白平均积分吸光度值（1 556.3±492.4）显著低于哮喘组（2 321.9±751.2）（P<0.05）。 结论： 微卡能诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡，可能与其抑制Bcl-2蛋白在哮喘豚鼠肺组织的表达有关。     

过敏性哮喘患儿外周血嗜酸性粒细胞及淋巴细胞CCR3的表达

目的 观察过敏性哮喘患儿外周血嗜酸性粒细胞及淋巴细胞表面趋化因子受体CCR3与CCR5表达的改变。方法 以16例急性发作及25例缓解期过敏性哮喘患儿和20例健康儿童为主要观察对象,用流式细胞术测定外周血粒细胞群及淋巴细胞群中CCR3与CCR5的表达。结果 过敏性哮喘患儿缓解组CCR3~+淋巴细胞亚群百分率[(4.2±1.9)％],尤其是CCR3~+嗜酸性粒细胞百分率[(3.5±1.6)％]较正常组[(3.0±1.3)％,(1.2±0.5)％]明显增高;急性发作组CCR3~+淋巴细胞亚群与嗜酸性粒细胞百分率[(3.5±1.5)％,(2.2±1.0)％]虽也高于正常组,但较缓解组则出现下降。发作组CCR5~+淋巴细胞亚群仅见增高趋势。结论 CCR3~+嗜酸性粒细胞与淋巴细胞亚群异常升高可能为过敏性哮喘患儿免疫系统异常的一个特征性表现;与缓解组比较,发作组CCR3~+嗜酸性粒细胞及淋巴细胞亚群反而降低,可能和该类细胞向炎症部位趋化并参与了过敏性免疫炎症反应有关。     

Eotaxin和CCR3在哮喘豚鼠肺和骨髓组织的表达及调控

目的:通过观察哮喘豚鼠肺和骨髓组织Eotaxin/CCR3表达的变化及糖皮质激素对其影响,探讨哮喘及激素干预的可能机制。方法:用卵白蛋白(OVA)致敏法制备豚鼠哮喘模型,分为正常对照组、哮喘组和激素干预(治疗组)组,瑞氏染色计数骨髓涂片和外周血涂片中白细胞比例,免疫组织化学技术检测骨髓中CCR3的表达;制备豚鼠肺组织病理标本,苏木精-伊红染色,原位分子杂交技术检测肺组织中Eotaxin mRNA,免疫组织化学技术检测Eotaxin在肺组织中的表达。结果:哮喘组骨髓涂片及外周血涂片中嗜酸粒细胞(EOS)比例显著高于对照组及治疗组(P<0.01);与对照组比较,哮喘组肺组织中Eotaxin阳性细胞数与Eotaxin mRNA表达明显增强(P<0.01),且两者呈正相关性(r=0.804,P<0.01)。哮喘组肺组织Eotaxin的表达与EOS的数量呈显著正相关(r=0.795,P<0.01)。哮喘组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例显著高于对照组及治疗组(P<0.01),哮喘组骨髓涂片中CCR3阳性细胞比例和外周血EOS比例呈显著正相关(r=0.736,P<0.05),治疗组与哮喘组比较骨髓中CCR3阳性细胞的比例有显著性下降(P<0.05),但仍高于对照组(P<0.05)。结论:哮喘豚鼠肺组织中Eotaxin和骨髓CCR3表达增强,为EOS从骨髓快速募集到肺组织提供了可能,激素通过下调肺组织Eotaxin及骨髓CCR3的表达,发挥抗EOS性气道炎症的作用。     

转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达

目的:探讨转录因子GATA-3 mRNA在哮喘模型小鼠体内的表达。 方法:建立卵白蛋白（OVA）致小鼠哮喘模型，计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎症细胞总数和分类，评价肺组织炎症细胞浸润；ELISA检测BALF和脾细胞培养上清液中IL-4和IFN-γ浓度；RT-PCR检测脾细胞和肺组织GATA-3 mRNA表达水平。 结果:哮喘组BALF中炎症细胞总数及嗜酸粒细胞百分比明显高于对照组，支气管出现明显炎症细胞浸润、黏液分泌和支气管收缩，BALF和脾细胞培养上清液中IL-4明显高于对照组，肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达水平均明显高于对照组。 结论:哮喘模型小鼠肺组织和脾细胞GATA-3 mRNA表达增加，可能在促进Th2细胞因子合成和介导气道炎症细胞浸润中具有重要作用。     

嗜酸性粒细胞活化趋化因子与支气管哮喘的研究进展

嗜酸性粒细胞活化趋化因子(Eotaxin)是CC趋化因子家族成员之一,由结构性细胞和渗出性炎症细胞产生,是嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和Th2型细胞因子的化学激活趋化剂,通过其受体(CCR3)选择性地诱导嗜酸性粒细胞在肺内黏附、募集和脱颗粒。     

椒目油A2通过抑制EOS浸润和骨髓粒系动员减轻哮喘小鼠气管炎症反应

目的： 观察椒目油A2对哮喘支气管嗜酸性粒细胞（EOS）浸润与CD34+细胞及骨髓粒系动员的影响。方法: 腹腔注射 20% 氢氧化铝［Al(OH)3］+10% 卵蛋白（OVA） 混合液致敏与雾化吸入1% OVA诱发BALB/c 小鼠哮喘模型。在激发10 d并同时给药治疗后,小鼠被处死,瑞氏染色检测肺灌洗液（BALF）炎性细胞及骨髓造血细胞系变化,原位杂交（ISH） 检测肺组织和骨髓白细胞介素-5（IL-5）mRNA和嗜酸性粒细胞趋化因子（EON）mRNA 表达,免疫组化检测肺组织和骨髓中IL-5、EON的蛋白表达,HE和荧光染色观察肺组织炎症细胞浸润和CD34+细胞。结果: 椒目油A2和泼尼松显著地减轻肺组织支气管炎性反应的病变程度如组织肿胀、重构、增生、上皮细胞脱落等,抑制变应源致敏刺激机体所致EOS 增多和浸润, 明显地减少哮喘小鼠气管周围及骨髓中EOS密度,抑制骨髓中幼粒细胞向嗜酸性粒细胞分化,同时支气管区及骨髓中CD34+IL-5、 CD34+IL-5R、 CD34+CCR-3细胞数显著减少,这与肺组织内IL-5、IL-4、GM-CSF等细胞因子水平降低有关。结论: 椒目油A2减轻实验性哮喘小鼠气道炎症反应,其机制可能与其抑制支气管EOS增多和骨髓粒系动员相关。     

地塞米松对哮喘大鼠嗜酸性粒细胞中p53表达的影响

目的： 研究支气管哮喘支气管肺泡灌洗液（BALF）嗜酸性粒细胞中凋亡相关基因p53的表达以及地塞米松对其的作用及其机制。方法： 将36只大鼠随机分为对照组、哮喘组和激素组，并对其BALF的嗜酸性粒细胞进行计数，以免疫印迹法(Western blotting)检测嗜酸性粒细胞中p53的表达。结果： 哮喘组BALF的 总细胞数及嗜酸性粒细胞均高于激素组及对照组（P<0.01）。哮喘组BALF的嗜酸性粒细胞中p53表达弱于激素组和对照组（P<0.01）。结论： 哮喘气道炎症与嗜酸性粒细胞生存增加亦即嗜酸细胞凋亡减少密切相关。糖皮质激素可诱导嗜酸性粒细胞凋亡，其机制可能与促嗜酸性粒细胞凋亡的p53表达有关。     

姜黄素对哮喘大鼠肺组织MMP-9与TIMP-1的表达以及气道重构的影响

目的探讨姜黄素对卵清白蛋白致敏哮喘模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织抑制物-1(TIMP-1)的表达与气道重构的影响。方法 36只清洁级SD雄性大鼠随机分为对照组、哮喘组和姜黄素组,用卵蛋白作为致敏原制备哮喘大鼠模型,对支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,采用动物呼吸机检测各组大鼠气道呼气阻力,HE染色观察各组大鼠肺组织的病理学变化,采用图像分析软件测定肺组织切片中的支气管壁内周长(Pi)、支气管管壁面积(WAt)、支气管平滑肌面积(WAm),Western blot方法检测各组大鼠肺组织MMP-9与TIMP-1的表达。结果姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数、降低哮喘大鼠肺组织的炎性细胞浸润,降低气道炎症,降低WAt/Pi、WAm/Pi的比值(P0.01);肺功能分析结果显示,姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠的呼气阻力(P0.01);Western blot结果显示,姜黄素干预可显著降低哮喘大鼠肺组织MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达(P0.01)。结论姜黄素降低哮喘大鼠气道炎症及气道阻力,减轻哮喘气道重构,可能与降低MMP-9的表达,上调TIMP-1的表达相关。     

嗜酸粒细胞趋化因子、干扰素-γ和内皮素1在支气管哮喘中的临床意义

目的探讨血清嗜酸粒细胞趋化因子（eotaxin）、干扰素-γ（IFN-γ）和内皮素1（ET-1）在支气管哮喘中的临床价值。方法将120例支气管哮喘患者分为哮喘发作期83例、缓解期37例,另选35名健康者作为对照。并将83例哮喘发作期患者按病情程度分为轻度（20例）、中度（47例）和重度（16例）。应用ELISA法对发作期、缓解期哮喘患者以及健康对照者进行血清eotaxin、INF-γ和ET-1水平测定。结果哮喘发作组血清中eotaxin和ET-1高于哮喘缓解组及健康对照组（P〈0.05,P〈0.01）,缓解期血清eotaxin和ET-1水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,而血清水平INF-γ在发作期组低于哮喘缓解组及健康对照组（P〈0.01）。随着哮喘严重程度增加,哮喘患者的血清中eotaxin和ET-1浓度升高,INF-γ水平出现明显降低。重度哮喘与中、轻度哮喘比较,eotaxin、ET-1和INF-γ浓度差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论 eotaxin、IFN-γ和ET-1参与了哮喘的发病过程,并与疾病的严重程度密切相关。     

姜黄素对哮喘小鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶的影响

目的探讨姜黄素对哮喘小鼠气道炎症和肺内诱导型一氧化氮合酶的影响。方法36只BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和姜黄素组,用卵蛋白作为致敏原制备哮喘小鼠模型,对支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞总数及嗜酸性粒细胞计数,硝酸还原酶法检测肺组织iNOS活性及NO含量,免疫组织化学和Western blot方法检测大鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白表达,双抗体夹心法检测肺组织白细胞介素-4(IL-4)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平。结果姜黄素干预可显著降低哮喘小鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞计数与肺组织iNOS活性及NO含量,减轻炎症反应。免疫组织化学和Western blot结果显示,姜黄素组小鼠支气管上皮细胞iNOS蛋白表达显著低于哮喘小鼠(P0.01)。结论姜黄素可降低哮喘小鼠气道炎症及iNOS表达水平,提示姜黄素对于哮喘可能有潜在的治疗作用。