不同低温冷冻预处理对异体神经移植再生影响的实验研究

目的 观察不同冷冻温度下保存的异体神经对周围神经缺损修复的效果.方法 取96只同种属雄性大鼠,其中24只为取材组,72只随机分为对照组(A、B组)和实验组(C、D、E、F组),每组12只.A组为新鲜自体神经移植组,B组为新鲜异体神经移植组,C、D、E和F组分别为经4℃、-50℃、-80℃和-196℃甘油保存3周的神经移植组.术后2周,进行免疫组织化学观察;术后9、16周进行大体观察、光镜检察、电生理测定.结果 术后2周,B组移植段见明显T淋巴细胞浸润,C、D、E组次之,A组及F组末见T淋巴细胞.术后9周及16周,从神经再生效果评价看:A组神经再生效果最好,F组次之,C、D、E组再次,B组最差.结论 在各冷冻组中,以-196℃组神经再生效果最好,接近新鲜自体神经移植组.     

模拟微重力动态培养构建组织工程化软骨修复猪关节软骨缺损研究

目的:通过大型动物实验探讨模拟微重力动态培养系统构建组织工程化软骨修复关节软骨缺损的效果。方法:10~12月龄的五指山猪8头,分别在每头猪髌骨切迹上建立4个软骨缺损模型,左右膝关节各2个缺损,共32个,取缺损位置的软骨组织进行细胞分离培养扩增后复合三维Ⅰ型胶原上,分别置于旋壁式生物反应器与培养板中培养7 d,一方面取适量的样本进行HE染色、DAPI染色检测;另一方面将复合物回植修复猪关节缺损。每头猪关节缺损随机分为4组:微重力动态培养组(A)、普通静态培养组(B)、单纯支架组(C)、空白对照组(D),每个膝关节随机分配两组。术后12周处死实验动物,取实验标本进行核磁共振(MRI)、大体观察及组织学检测。结果:MOCART核磁共振评分:A组为74.37±3.90、B组为66.87±4.96、C组为58.75±3.30、D组为43.12±3.47,差异具有统计学意义(P<0.05);O’Driscoll组织学评分:A组为16.00±1.41、B组为12.37±1.69、C组为8.37±0.83、D组为3.25±1.26,各组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:模拟微重力动态培养模式构建的组织工程化软骨较普通培养更有利于软骨缺损的修复。     

非限制性外支架对兔移植静脉细胞增殖的影响

目的探讨非限制性外支架对兔移植静脉细胞增殖的影响及其防治移植静脉内膜增生的效果。方法新西兰白兔36只,随机均分为支架组（S组）和对照组（NS组）,每只动物均施行颈外静脉颈总动脉移植术,S组在移植静脉外套以非限制性外支架,NS组无外支架。分别于术后1、2、4周取材进行观察,组织切片进行HE染色及α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、PCNA免疫组化染色,光镜下观察移植静脉的病理改变,计算移植静脉内膜、中膜、外膜的PCNA增殖指数。结果HE染色观察见术后1～4周S组和NS组内膜、中膜均逐渐增生,但前者的增生程度均轻于后者。α-SMA免疫组化染色见1周时两组中膜全部细胞均染色阳性,但内膜阳性细胞数相对较少;2～4周S组和NS组内膜均增厚,除管腔表面的内皮细胞外,其余细胞几乎全部为染色阳性的细胞,但S组内膜增厚程度明显轻于NS组。两组内膜和外膜的PCNA阳性率均在2周时达高峰,在2周及4周时,S组内膜阳性率明显低于NS组,而外膜阳性率明显高于NS组（P〈0．05）;两组中膜的PCNA阳性率在1周时达高峰,且1～4周时S组阳性率均低于NS组（P〈0．05）。结论非限制性外支架可抑制移植静脉早期细胞增殖,抑制内膜和中膜增生。     

人脐血间充质干细胞两种移植方法在骨折模型中比较研究

目的观察通过耳缘静脉和骨折局部注射,将人脐血间充质干细胞移植到新西兰兔骨折模型中的移植效果差异,为人脐血间充质干细胞临床应用提供依据。方法建立新西兰兔胫骨横断骨折模型,随机分为经骨折局部移植组(A组)和耳缘静脉移植组(B组)。在骨折模型建立后第3天,A组注射浓度为1×10~7个/ml、经BrdU标记的人脐血间充质干细胞悬液1 ml;B组注射等量经Brd U标记的人脐血间充质干细胞悬液。细胞移植后24、48、72 h观察兔大体情况、取骨折断端组织行免疫荧光显微镜观察、HE染色光镜观察。结果细胞移植后A、B两组大体情况观察无明显差异;A、B两组免疫荧光显微镜均可见Brd U标记的阳性细胞,但A组阳性细胞计数明显多于B组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组HE染色光镜观察,A组炎细胞计数明显多于B组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论人脐血间充质干细胞经耳缘静脉和骨折局部移植均是安全可行的,但经骨折局部注射移植更适合应用于骨折模型而有利于骨创伤修复。     

低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的效果比较

目的 比较低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的疗效。方法 取45只成年雄性SD大白鼠，随机分为A、B、C、D4组。A、B、C组为实验组，每组10只；D组为供体组，15只，切取双侧坐骨神经15mm作为供神经。A组的供体神经在－196℃下保存3周，37℃生理盐水复温后桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；B组用70％酒精浸泡8小时后，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；C组的供体神经不经任何预处理，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段。术后17周进行电生理测定，光镜观察及移植异体神经中段的轴突计数。结果 A、B实验组的电生理测定及移植神经中段的轴突计数结果无显著性差异，光镜下的形态学变化相似。A、B组与C组、电生理测定与移植体中段轴突计数均有显著性差异。结论 两种预处理方法降低异体神经的抗原性具有相似的近期效果。     

颌面部爆炸伤区血管早期吻合的病理学基础

目的：探讨颌面部爆炸伤区血管的组织学改变与早期血管吻合的关系。方法：将犬随机分成A（即时）组、B（72h)组，采用KTY－04型雷管置于犬面颊部引爆致伤，造成软组织洞穿性缺损。分别切除两组颌面部爆炸伤区距创缘不同距离处的血管标本行光、电镜观察，并且行吻合血管的游离皮瓣移植，术后1周－3月切取各血管吻合口处标本观察组织学变化。结果：A组距创缘3cm处的血管内皮细胞大部分脱落，平滑肌细胞变性，动脉内弹力膜大部分消失；5例血管吻合皮瓣移植均失败。B组距创缘3cm处血管内膜较完整，平滑肌细胞基本恢复正常，内弹力膜大部分恢复；15例血管吻合皮瓣移植成功12例。结论：颌面部爆炸伤后3d,伤区外3cm血管开始恢复正常，此时行血管吻合游离皮瓣移植有其病理学基础。     

自体骨髓干细胞经肝动脉移植治疗急性肝损伤的实验研究

目的 评价自体骨髓干细胞经肝动脉移植对兔急性肝损伤模型的治疗效果,了解促肝细胞生长素(pHGF)在干细胞移植治疗中的协同作用.方法 新西兰雄性大白兔15只,皮下注射50%CCl4橄榄油溶液0.8 ml/kg连续4 d制作急性肝损伤模型.模型动物随机分为实验组A(干细胞移植组),实验组B(干细胞移植+pHGF组)和对照组(各5只).实验组经兔双侧胫骨抽取骨髓约5 ml,采用密度梯度离心法分离骨髓干细胞,制成5 ml细胞悬液,透视下经股动脉插管将骨髓干细胞经肝动脉注入肝脏,对照组注人生理盐水.实验组B在干细胞移植后隔日静脉注射pHGF 2.0 mg/kg共20 d.干细胞移植后2、4、8周抽血进行肝功能检测,8周后取兔肝脏组织标本进行病理学观察.结果 骨髓干细胞肝动脉移植后肝功能逐渐改善,至移植后8周,各组血清AST、ALT活性和TBIL、ALB含量均显著低于术前指标,而球蛋白含量高于术前(P均<0.05),而且各组之间仍有明显差异.病理组织学观察显示实验组肝纤维组织增生程度和肝细胞变性较对照组明显减轻.免疫组化染色可见肝组织内散在分布有CD34阳性肝样细胞,实验组A较对照组多,实验组B最多.结论 自体骨髓干细胞经肝动脉移植对肝损伤有明显治疗作用,可改善肝功能,促进肝组织结构重建,抑制纤维组织增生;pHGF能加速肝组织的修复和肝功能的改善.     

湿润烧伤膏联合表皮细胞生长因子修复兔膝关节软骨缺损的实验研究

目的:观察湿润烧伤膏(MEBO)联合表皮细胞生长因子(epidermal growth factor,EGF)对兔膝关节局部全层软骨缺损的修复作用.方法:30只新西兰大白兔,制成兔膝关节软骨缺损创面.按治疗方法不同随机分为三组,A组:MEBO+EGF组,B组:EGF组,C组:庆大霉素对照组.分别于术后4、8和12周每组各处死3只动物,取材进行大体、组织学及免疫组化染色观察,根据关节软骨组织学计分标准进行评分,数据输入SPSS11.0软件统计分析,比较各组的评分差异是否具有统计学意义.结果:MEBO+EGF组为透明软骨样修复,而单纯EGF组和对照组为纤维性修复;对术后12周大体及各阶段组织学形态评分结果示,MEBO+EGF组明显优于EGF组和对照组(P<0.05);EGF组优于对照组(P<0.05).结论:MEBO联合EGF对兔膝关节全层软骨缺损有修复作用.     

透明质酸钠预防膝关节内骨折内固定后膝关节粘连的疗效观察

目的　探讨膝关节内骨折内固定术后预防膝关节粘连的方法。方法　全部膝关节内骨折患者接受骨折内固定术。其中观察组术后关节腔内注射透明质酸钠 ,而对照组则不用 ,观察术后膝关节伸屈活动度以评价疗效。结果　 6 4例患者中 5 6例获得随访 ,随访时间 8～ 2 4个月 ,观察组术后平均膝关节活动度为 ( 85 .3± 1 9.6 )°;对照组为 ( 76 .4± 1 6 .8)°。观察组术后平均膝关节活动度明显大于对照组 ,两者有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,表明透明质酸钠治疗组结果优于对照组。结论　膝关节内骨折内固定术后透明质酸钠关节腔内注射 ,可有效防止关节粘连     

成骨诱导后人脐血间充质干细胞移植对兔骨折愈合的实验研究

目的探讨成骨诱导后的人脐血间充质干细胞(HUCBMSCs)移植对兔模型骨折愈合的影响。方法严格无菌条件下采集健康产妇志愿捐献的脐带血,采用密度梯度离心和贴壁培养法分离培养HUCBMSCs。取第3代细胞应用条件培养基进行成骨诱导2周;4~5月龄健康新西兰大白兔48只,体质量2.0~2.5 kg,雌雄不限,用线锯制作右胫骨横断骨折模型。将其分为A、B两组,每组又分为4个时点组,每小组6只。A组骨折断端注射成骨诱导后的HUCBMSCs;B组注射生理盐水。细胞移植后2、4、6、8周进行影像学、骨密度检测、组织学观察,观察评估骨折愈合情况。结果 2~8周X线片示:A组的骨折愈合速度要明显快于B组;组织学观察:A组新生骨小梁及类骨质明显多于B组;细胞移植后各时间点A组影像学结合组织学评分显著高于B组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);骨密度检测:细胞移植后第2、4、6周A组骨密度高于B组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),而在第8周A组骨密度低于B组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成骨诱导后的HUCBMSCs移植能明显促进兔骨折愈合。     

门静脉阻断兔肝VX2移植瘤的DSA评价

目的评价DSA在兔肝VX2移植瘤经门静脉阻断后显示肝动脉与门静脉的价值。方法20只新西兰大白兔随机分为移植瘤体生长3周后门静脉阻断组和移植瘤体未行门静脉阻断对照组,2周后分别行兔肝动脉与门静脉DSA检查。结果DSA在肝动脉分支的显示效果上较血管灌注好,实验组肝左外叶肿瘤组织可见少许肝动脉供血。肝左外叶门静脉分支结扎(PBL)者均能被DSA证实。结论DSA可直观地显示兔肝动脉与门静脉的空间解剖细节,在兔肝门静脉阻断效果的评价中起着重要作用。     

模拟失重对新西兰兔股静脉压力-容积关系的影响

目的观察模拟失重对兔股静脉压力 -容积关系的影响及静脉壁显微结构的变化。方法采用头低位 ( - 2 0°)倾斜的方法作为模拟失重家兔模型。 2 4只雄性健康新西兰兔 ,随机分为对照组、模拟失重 2 1d组和模拟失重 1 0d组 ,每组 8只。进行股静脉的压力 -容积 (P V)关系测试 ,并观察血管壁的显微结构。结果模拟失重后股静脉P V曲线向容积变化比增大的方向移动 ,模拟失重 2 1d组较 1 0d组移动更明显。分别于加、卸载测试时拟合出的模拟失重 2 1d组P V二次抛物线方程式系数B1 、B2 值均显著高于对照组及模拟失重 1 0d组 (P <0 .0 1 ) ,模拟失重 1 0d组的B1、B2值和对照组相比有增加的趋势。组织学观察表明 ,模拟失重组股静脉内皮细胞呈立方或矮柱状并有细胞脱落 ,平滑肌层变薄等变化。结论模拟失重后股静脉顺应性增加 ,2 1d组较 1 0d组增加明显 ,同时股静脉管壁结构也发生明显改变     

β射线局部照射预防自体移植静脉内膜增生的实验研究

目的：研究放射性同位素局部照射对自体移植静脉段内膜增生反应的影响及其可能机理。方法：建立40只大鼠自体静脉移植模型，随机分成对照组（单纯自体静脉移植组），8，18，36Gy组（按不同32P内膜照射剂量），每组10只，2周后取材固定，行HE染色，Verhoeff弹力纤维染色，增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组化测定（SP法），计算机图像分析仪测量移植血管内膜厚度。结果：移植静脉段的内膜平均厚度：对照组与8Gy组差异无显著性（P＞0．05），但高于18，36，Gy组（P＜0．05），18Gy组与36Gy组间差异无显著性（P＞0．05），PCNA阳性片示，18，36Gy组VSMC增殖较对照组受到明显抑制（P＜0．01），两组差异无显著性（P＞0．05），8Gy组较对照组差异无显著性（P＞0．05），结论：适当剂量β射线局部照射可以抑制自体移植静脉的内膜增生及平滑肌细胞（SMC）的增殖，减少再狭窄的发生。     

带神经、血管预构皮瓣动物模型的建立及研究

目的设计带血管、神经预构皮瓣动物模型并进行实验研究，探讨带血管、神经预构皮瓣治疗四肢严重损伤可行性．方法新西兰大耳白兔共15只，按拟植入的血管束名称分为3组：A组植入腹壁下动静脉血管束；B组植入阴部外动静脉血管束；C组植入股动静脉血管束及部分股神经．术后3周分别进行大体观察、活体皮瓣血管染色和组织学检查，观察血管神经的生长情况。结果预构皮瓣中的血管生长良好，可见少量神经纤维和轴突向远端生长。结论预构带神经、血管皮瓣是可行的，该方法克服了传统皮瓣的外形臃肿和感觉功能差的问题。     

DSA引导下注射聚多卡醇和鱼肝油酸钠硬化剂对比格犬隐静脉的影响

目的：比较DSA引导下注射两种常用泡沫硬化剂聚多卡醇和鱼肝油酸钠对比格犬下肢隐静脉血管璧的组织学损伤。 方法：成年健康比格犬12只,随机分为聚多卡醇组和鱼肝油酸钠组,每组6只。DSA透视下行隐静脉造影,聚多卡醇组于左前、左后、右后肢注射1%聚多卡醇泡沫硬化剂,鱼肝油酸钠组于左前、左后、右后肢注射5%鱼肝油酸钠泡沫硬化剂。注射后30 min、2 d及28 d,采集隐静脉标本进行HE和Massion染色,光镜下对比观察犬隐静脉血管壁内皮及中膜的组织学变化。 结果：两种泡沫硬化剂均可致犬隐静脉血管内皮损伤和中膜增厚;注射后30 min,两组病理上均可见内皮细胞部分丢失,中膜层平滑肌增厚,组织学未见明显差异;注射后2 d,聚多卡醇组的中膜损伤率高于鱼肝油酸钠组[（63.6±9.4）% vs.（49.2±4.4）%],差异有统计学意义（P<0.05）。注射后28 d,两组的内皮细胞完全脱落,中膜层平滑肌增厚,甚至延伸至外膜。聚多卡醇组血管壁内皮脱失率随时间延长无明显变化,中膜厚度随时间延长增大,鱼肝油酸钠组血管壁内皮脱失率随时间延长而加重,中膜厚度随时间延长增大。 结论：聚多卡醇和鱼肝油酸钠均可对血管内皮和中膜造成损伤,长期对血管作用均产生胶原纤维化,聚多卡醇对血管产生纤维化的作用较鱼肝油酸钠大。     

激光联合光敏剂治疗门静脉癌栓的实验研究

目的：介绍肝癌门静脉癌栓激光联合光敏剂治疗的方法,并探讨这一治疗方法的安全性和有效性。方法：20只新西兰大白兔门静脉癌栓模型,随机分成A、B两组各10只：A组经皮穿刺激光联合光敏剂治疗,B组经皮穿刺激光治疗。对比观察两组术后门静脉癌栓支彩色多普勒血流信号变化,以及术后肝功能、腹水等的改变情况。结果：术前癌栓门静脉内彩色多普勒均无血流信号;术后1天A、B两组分别有9只6、只出现血流信号;术后7天A、B两组所有动物均出现血流信号,但血流信号分级A组明显好于B组（P〈0.05）。术后肝功能均得到不同程度改善。结论：肝癌门静脉癌栓的激光联合光敏剂治疗安全、有效,有望成为一种治疗门静脉癌栓的新方法。     

应用透明质酸钠对跟腱断裂术后疗效的影响

目的　研究局部使用透明质酸钠对跟腱断裂修复术后疗效的影响。方法　对5 3例跟腱断裂患者,根据术后是否局部使用透明质酸钠分为对照组(甲组)和治疗组(乙组) ,术后随访按照Arner Lindholm的疗效标准评定疗效,并测量患侧踝关节较健侧活动度减小度数,两组间进行比较。结果　治疗组疗效明显优于对照组(P <0 .0 5 ) ,且踝关节活动度丧失明显小于对照组(P <0 .0 5 )。结论　局部使用透明质酸钠可有效预防跟腱修复术后黏连,提高疗效。     

Autologous vein stent-graft: feasibility study

PURPOSE: To evaluate expandable stents healed into vein wall as autologous vein stent-grafts for endoluminal grafting. MATERIALS AND METHODS: Balloon expandable stents were placed into external jugular veins of eight dogs. Stent and vein patency was followed by ultrasonography. Five weeks after stent placement, jugular veins with endothelialized stent were harvested. The autologous vein stent-grafts were divided into two groups. In group A, autologous vein stent-grafts (n = 3) were placed immediately into Baker solution for microscopic examination. In group B, autologous vein stent-grafts (n = 3) underwent mechanical manipulation; they were compressed, mounted on angioplasty balloon, pushed through a 9-F sheath and dilated. The autologous vein stent-graft endothelialization and changes after mechanical manipulation were evaluated by light and electron microscopy. RESULTS: Stent placement was successful in seven dogs. One stent migrated into the pulmonary artery. One well placed stent was damaged by compression dressing and thrombosed. At 5 weeks, gross and microscopic examinations revealed the autologous vein stent-grafts were fully covered by a 0.115- +/- 0.036-mm-thick neointimal layer. Small wall thrombus was observed in one autologous vein stent-graft. Repeated manipulations did not result in any intimal damage or stent loosening in the autologous vein stent-grafts. CONCLUSION: Expandable stents healed into a vein have potential to be used as autologous vein stent-grafts for endoluminal grafting without risk of disruption during percutaneous transcatheter introduction.     

Experimental model of knee contracture in extension: its prevention using a sheet made from hyaluronic acid and carboxymethylcellulose

Treatment once extension contracture of the knee has completed is difficult and costly. The most effective treatment might be the prevention of contracture, especially after joint injury. In order to establish an effective method for contracture prevention we first made an extension contracture in rabbit knees, then studied the effect of a sheet made from hyaluronic acid and carboxymethyl cellulose (HA/CMC) for the prevention of knee contracture. One hundred and twenty two mature male Japanese white rabbits were divided into three groups: (1) group B (n=42), where bony holes were made at the medial and lateral epicondyles, (2) group H (n=40), where HA/CMC sheets were placed on the bony holes, and (3) group S (n=40),where only arthrotomy was performed. All surgical procedures were performed on the right knees. All right knees were fixed at 45° using external fixators; this is the maximum extension angle the rabbit is able to tolerate and still walk. At 1, 3, and 6 weeks after surgery, we measured the moment necessary to flex the knee using a special device. We defined the moment as flexion moment (FM). Forty four left knees were also tested as group N, not operated on and serving as the healthy side. In all groups, FM was increased parallel to the increment of flexion angle from 45° to 115°. At many flexion angles, the FM in group B was higher than those of group S at 3 and 6 weeks. The FM in group H was significantly lower than those of group B at 85° and 95° of flexion at 6 weeks after the operation. By macroscopic observation, the area and degree of adhesion were greater in group B than those of group S. In group H, adhesions around the bony hole were less evident than in group B at 6 weeks after the operation. By histological examination, dense granulation tissue was found adjacent to the bony hole in group B at 3 and 6 weeks after the operation. In contrast, in group H the amount of granulation tissue was smaller at 3 and 6 weeks after the operation than those of group B. The usage of HA/CMC sheet should be effective for prevention of contracture occurring after trauma such as treatment for intra-articular fracture.     

~(99)Tc~m-植酸钠显像在猪辅助性肝移植中的应用

目的　观察99Tcm 植酸钠显像在猪辅助性肝移植中的应用价值。方法　将供肝右叶移植于受体右肝下 ,建立猪辅助性肝移植模型 ,动脉血供相同 ,部分缩窄宿主门静脉控制门脉血流量。根据缩窄程度不同分A(缩窄 1/ 3)、B(缩窄 1/ 2 )、C(无缩窄 ) 3组。术后通过99Tcm 植酸钠显像检测两肝血流量 ,判断肝功能 ,并与组织学检查结果相对照 ,观察两肝存活情况在99Tcm 植酸钠显像中的表现。结果　99Tcm 植酸钠显像提示A组两肝血流均衡、充足 ,B组移植肝及C组宿主肝血流充足 ,B组宿主肝及C组移植肝血流量明显降低 ;组织学检查见肝血流充足者无萎缩 ,血流量低者肝萎缩。结论　99Tcm 植酸钠显像能准确反映辅助性肝移植后两肝存活情况及功能状况