运动心脏重塑过程中降钙素基因相关肽基因的表达

目的:从基因水平上探讨运动性心脏重塑的发生机制。方法:70只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组进行75天的跑台耐力训练。分别于训练第3、10、23、37和75天次日晨宰杀实验组大鼠,每次7只。相应对照组亦于当天上午取材。以异硫氰酸胍法提取大鼠心室肌组织总RNA,聚合酶链式反应技术(PCR)测定心室肌降钙素基因相关肽(Calcitonin Gene Related Peptide,CGRP)mRNA的表达量,β-actin为内参照,CGRP mRNA/β-actin的比值为每个测试样本中CGRPmRNA的表达值。结果:在5个时相点中,实验组大鼠心室肌组织CGRP mRNA表达量与对照组相比无显著差异。结论:运动性心脏重塑过程中,大鼠心室肌组织CGRP mRNA表达量无明显变化。     

NK型同源盒基因转录因子2.5及甲胎蛋白在卵巢恶性肿瘤中表达及其相关功能单中心回顾性研究

目的探讨NK型同源盒基因转录因子2. 5(NKx2. 5)及甲胎蛋白(AFP)在卵巢恶性肿瘤中的表达情况及其在诊断中的应用价值。方法回顾性分析自2002年1月至2015年5月在辽宁省肿瘤医院妇科住院并接受手术治疗的卵巢恶性肿瘤患者201例的临床资料。根据肿瘤类型将患者分为卵巢内胚窦瘤组(n=76)及其他类型卵巢恶性肿瘤组(n=125)。采用免疫组织化学法检测瘤体组织内NKx2. 5、AFP的表达情况,分析NKx2. 5联合AFP检测在卵巢内胚窦瘤诊断中的应用价值。结果卵巢内胚窦瘤组的NKx2. 5及AFP阳性表达率均高于其他类型卵巢恶性肿瘤组,组间比较,差异有统计学意义(P <0. 05)。在卵巢内胚窦瘤组中,NKx2. 5蛋白表达与患者的年龄、腹水量无相关性(P> 0. 05),与肿瘤分期存在相关性(P <0. 05)。卵巢内胚窦瘤组中NKx2. 5、AFP联合检测的敏感性、特异度均显著高于单一检测NKx2. 5、AFP的敏感性和特异度。结论 NKx2. 5作为一种新型的标志物,在诊断卵巢内胚窦瘤中具有重要意义,联合检测NKx2. 5及AFP可提高卵巢内胚窦瘤诊断的准确性,有助于不同类型间卵巢恶性肿瘤的鉴别诊断。     

大鼠放射性脑损伤模型中核转录因子-κB表达的动态变化规律

目的 探讨放射性脑损伤发生过程中核转录因子-κB(NF-κB)的表达变化。方法 健康SD大鼠82只,按随机数字表法分为健康对照组(32只,给予相同的麻醉但不照射)和照射组(50只,单次全脑照射20 Gy建立放射性脑损伤模型),分别于照射后1、3、7、14、28 d处死,断头取脑。通过实时荧光定量反转录聚合酶链反应(QRT-PCR)检测NF-κB mRNA表达变化,用ELISA及Western blot检测NF-κB蛋白质表达情况,免疫组织化学染色观察NF-κB蛋白在海马区域的定位表达情况。结果 照射组NF-κB mRNA水平在照后开始升高,第3天达到表达高峰,其中第3、7天表达量与健康对照组相比,差异有统计学意义(t=37.79、35.30,P<0.05)。NF-κB蛋白的表达在照后第1天即达最高峰,随后开始逐渐下降,至照后第28天恢复正常水平。ELISA结果显示,与健康对照组相比,受照后第1、3、7、14天蛋白表达差异有统计学意义(t=30.94、14.87、27.17、13.27,P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,在受照后第1、3、7天海马区域的NF-κB染色强度增强,阳性表达细胞数量增多,与健康对照组相比,差异有统计学意义(t=-8.49、-4.47、-3.46,P<0.05)。结论 NF-κB的基因及蛋白水平表达趋势均先升高后降低,促进了放射性脑损伤的发生发展。     

应用cDNA微矩阵基因芯片筛选运动性心肌肥大相关基因的初步研究

目的 :应用cDNAchip(cDNA芯片或微矩阵基因芯片 )技术筛选运动性心肌肥大相关基因。方法 :摘取运动组和对照组小鼠心脏 ,按一步法抽提总RNA并纯化mRNA ,将 2 30 4个点包括10 3个阴性及对照基因和 2 2 0 1条小鼠靶基因的PCR扩增产物 ,按微矩阵 (12× 12点× 16亚矩阵 ,点间距离 375 μm)点制于硅烷化玻片上 ,制备成cDNA芯片。将等量抽提纯化的运动组和对照组小鼠心肌组织mRNA ,分别与掺入的荧光分子Cy3和Cy5经逆转录合成cDNA荧光探针 ,混合后再与cD NA芯片杂交 ,通过芯片扫描仪对荧光信号图像进行扫描 ,经计算机分析比较运动组和安静对照组心肌组织中基因表达谱的变化。结果 :在 2 2 0 1条待研究基因中 ,两组小鼠心肌组织间存在差异表达的基因。具有显著表达差异的基因有 71条 ,其中上调基因有 37条 ,下调基因有 34条。结果显示 :cDNA芯片技术筛选运动性心肌肥大相关基因具有高通量、高敏度、高效率、大规模和并行性等优点。     

过表达Nrf2蛋白对妊娠糖尿病孕鼠胎盘氧化应激及子鼠心脏功能的影响

目的探讨过表达核转录因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白对妊娠糖尿病孕鼠胎盘氧化应激及子鼠心脏功能的影响。方法将36只妊娠成功的小鼠随机均分为对照组、模型组、pcDNA组、Nrf2组。腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立妊娠糖尿病孕鼠模型,根据分组转染腺病毒或生理盐水。采用RT-PCR及Western blotting检测孕鼠胎盘Nrf2的mRNA及蛋白表达水平;检测空腹血糖;计算子宫指数、总胎数及流产率;检测孕鼠胎盘超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量;HE染色观察孕鼠肝肾组织病理改变。Western blotting检测子鼠心脏组织Nrf2蛋白表达水平;检测子鼠心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室射血分数(LVEF)及缩短分数(FS);ELISA法检测子鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肌红蛋白(MB)含量;HE染色观察子鼠心肌病理改变。结果与对照组比较,模型组、pcDNA组孕鼠胎盘的Nrf2 mRNA及蛋白表达水平、SOD活性、GSH含量,子鼠的HR、LVSP、LVEF、FS均明显降低;孕鼠空腹血糖、流产...     

耐力运动和力竭运动对大鼠心脏降钙素基因相关肽及其受体样受体表达的影响

目的:探讨耐力运动和力竭运动对降钙素基因相关肽(CGRP)及其受体样受体(CRLR)在大鼠心脏组织中表达的影响及其作用机制。方法:健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、耐力运动组和力竭运动组。耐力运动组和力竭运动组进行10周的跑台耐力训练,力竭运动组在最后一次训练后48h进行连续3天的力竭运动。采用放射免疫法、免疫组化SABC法、免疫荧光法和计算机图像分析技术检测心肌组织CGRP含量和CRLR表达。结果:耐力运动组心肌组织CGRP含量和CRLR表达明显高于对照组(P<0.05);力竭运动组心肌组织CGRP含量和CRLR表达明显低于耐力运动组(P<0.05)。结论:长期耐力运动使心脏CGRP含量增加,CRLR表达上调,增强了CGRP对心脏的作用;力竭运动导致心脏CGRP含量下降,CRLR表达下调,使CGRP对心脏的保护作用减弱。     

鼻咽癌中hMLH1基因启动子甲基化状态及转录表达的研究

目的 探讨鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子区甲基化状态及其对转录表达的影响.方法 运用甲基化特异性FCR和半定量反转录PCR法检测54例鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态及其转录表达水平,分析鼻咽癌组织中hMLH1甲基化与临床资料的关系,以及hMLH1甲基化对转录表达的影响.结果 54例鼻咽癌组织hMLH1基因启动子甲基化频率为42.59%(23/54),鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子甲基化与临床资料无关.23例甲基化鼻咽癌组织hMLH1基因相对转录表达水平为0.939 6±0.037 5,31例非甲基化鼻咽癌组织hMLH1基因相对转录表达水平为0.951 3±0.055 1,两者间差异无统计学意义(P>0.05).结论 鼻咽癌组织中hMLH1基因启动子甲基化与临床资料及转录表达水平均无关,表明其转录表达可能不受甲基化调控.     

表皮生长因子、甲状腺转录因子-1及转化生长因子-β1基因多态性在非小细胞肺癌组织中表达及意义

目的探讨表皮生长因子(EGFR)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1)基因多态性在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。方法选取自2015年4月至2017年6月河北省沧州市中心医院收治的非小细胞肺癌患者50例设为B组。选取同期入院进行手术治疗的肺部良性疾病患者50例设为A组。取两组患者病灶部位组织制备标本,采用免疫组织化学法检测两组患者的EGFR、TTF-1及TGF-β1水平,分析EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性在非小细胞肺癌组织中的表达及意义。结果 B组EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性阳性率均高于A组(P<0.05),EGFR多表达在细胞膜或细胞浆中,呈阳性表达;TTF-1在细胞浆内出现红色颗粒,呈弱阳性表达;TGF-β1在细胞浆内可见强阳性表达。B组EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性阳性率与年龄、肿瘤直径及病理分型无相关性,与淋巴结转移、肿瘤分期及分化程度呈正相关(P<0.05)。结论 EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性能直接参与非小细胞肺癌的发生、发展,加强EGFR、TTF-1及TGF-β1基因多态性检测,能评估患者预后,指导临床治疗。     

长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1表达水平与颅内动脉瘤血管内治疗后复发的关系研究

【摘要】 目的 探讨颅内动脉瘤患者血管内栓塞治疗后长链非编码RNA（lncRNA）肺腺癌转移相关转录因子（MALAT）1表达水平与复发的关系。 方法 选取2016年3月至2018年9月在杭州市第九人民医院就诊的168例颅内动脉瘤患者作为研究对象,根据血管内栓塞治疗2年内颅内动脉瘤是否复发分为复发组（n=31）和未复发组（n=137）。采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测lncRNA MALAT1表达水平,并分析其与复发的关系。 结果 复发组术前和术后lncRNA MALAT1表达水平均高于未复发组,差异均有统计学意义（P＜0.05）;1∶1倾向性评分匹配后,复发组术后lncRNA MALAT1表达水平高于未复发组,差异有统计学意义（P＜0.05）。logistic回归分析结果显示,动脉瘤颈、Raymond分级、术后lncRNA MALAT1均为颅内动脉瘤患者血管内栓塞治疗后复发的独立风险因素（P＜0.05）。限制性立方样条拟合logistic回归分析结果显示,术后lncRNA MALAT1与颅内动脉瘤患者血管内栓塞治疗后复发呈线性关系。 结论 颅内动脉瘤患者血管内栓塞治疗后lncRNA MALAT1表达水平降低。术后低lncRNA MALAT1提示颅内动脉瘤患者血管内栓塞治疗后复发风险低。     

肝组织中肝富集转录因子及其调控网络的研究进展

肝脏是机体重要的实质性器官,肝富集转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络精确地控制着肝脏的早期发育及其各项功能的发挥.目前依据其结构特征将肝富集转录因子分为7大家族,这里着重介绍这7类肝富集转录因子的结构特征、在肝组织中的生理功能及其调控网络的新进展.     

内质网应激对ATF6调控XBP1启动子转录的影响

目的 确定XBP1启动子的转录核心区域,探讨激活转录因子6(ATF6)在内质网应激(ERS)与非ERS状态下对XBP1启动子转录活性的调控作用.方法 采用基因重组技术构建ATF6基因及两个缺失体ATF6s1p、ATF6s2p的真核表达载体pcDNA3.1 (-)-ATF6、pcDNA3.1 (-)-s1p、pcDNA3.1(-)-s2p,以及XBP1启动子报告基因载体pGL3-XBP1.针对XBP1启动子的各个组成元件设计和构建XBP1一系列截短体的报告基因载体.采用双荧光素酶报告基因法检测并确定XBP1启动子的核心启动子区,Western blotting检测ATF6及缺失体s2p、s1p在ERS与非ERS状态下对XBP1核心启动子区转录的调控作用.结果 XBP1启动子的-407bp-+133bp区域是转录活性调控的核心区域,-2000bp--407bp区域不具有转录活性,该区域可能含有抑制转录活性的组成元件.非ERS状态时,ATF6及两个缺失体s2p、s1p可明显上调XBP1启动子的转录活性及XBP1蛋白表达;而在ERS状态时,ATF6及两个缺失体s2p、s1p下调了XBP1启动子的转录活性和XBPl蛋白表达.结论 ATF6对XBP1的转录调控作用在ERS状态和非ERS状态下存在差异.非ERS状态时,ATF6上调XBP1的转录和表达,而ERS状态时,ATF6下调XBP1的转录和表达.     

7条印迹基因在人类种植前胚胎的表达

目的完善印迹基因在人类种植前胚胎的表达图谱。方法应用巢式RT-PCR技术检测7条印迹基因P57^KIP2、LIT1、TSSC3、GRB10、PEG3、ARHI、ZAC1在人类卵子和种植前胚胎中的正常表达。结果卵子和各期种植前胚胎、囊胚中均存在P57^KIP2、ZAC1的表达；LIT1自8细胞胚胎开始表达，持续至囊胚期；TSSC3于卵子及各期种植前胚胎中均未表达；4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到GRB10正常表达；除4细胞胚胎未见表达外，卵子和其余各期胚胎均可测得ARHI表达；Peg3表达于4细胞、8细胞胚胎和囊胚。结论除TSSC3外的其余6条基因均表达于种植前胚胎，有助于开展种植前遗传学诊断，为探讨印迹基因与辅助生殖、先天性印迹疾病以及肿瘤的关系提供理论依据。     

神经肽Y1受体激动药诱导大鼠心肌细胞肥大的研究

 目的 探讨神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY在诱导心肌细胞肥大中的作用.方法 用不同浓度[Leu31,Pro34]NPY刺激原代培养心肌细胞,采用放射性核素3H-leu掺入法检测培养心肌细胞蛋白质合成速率.应用荧光定量PCR方法检测[Leu31,Pro34]NPY对培养心肌细胞肥大相关基因ANF、β-MHC mRNA表达的影响.结果 [Leu31,Pro34]NPY(10-9 mol/L、10-8 mol/L、10-7 mol/L)作用心肌细胞24 h后可明显增加心肌细胞3H-leu的掺入量 (P＜0.01),并可诱导心肌细胞β-MHC表达增加(P＜0.01),对ANF表达的影响不明显.结论 神经肽Y1受体激动药[Leu31,Pro34]NPY可加快细胞蛋白质合成速率、促进心肌细胞β-MHC表达,直接诱导心肌细胞的肥大.     

低氧诱导因子-1结构、活性调节及其靶基因的研究进展

低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor 1，HIF-1)是由低氧等诱导细胞产生的一种转录因子。通过调控近50种靶基因，引起细胞对低氧发生一系列适应性反应，以实现其主要调节氧稳态的功能，说明其在低氧信号转导过程中起关键作用，具有重要的生理学和病理生理学意义。本文综述了HIF-1的结构、活性调节及其靶基因等方面的研究进展。     

用RT-PCR方法定量检测脑内早老性痴呆有关基因的表达

目的：建立定量检测脑内早老性痴呆有关基因表达的方法。方法;采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的方法定量检测了小鼠海马和皮层内早老性痴呆有关基因β－淀粉样蛋白的前体蛋白（ＡＰＰ）、早老蛋白１（ｐｒｅｓｅｎｉｌｉｎ－１,ＰＳ－１）、ＰＳ－２、ａｐｏＥ、ｔａｕ等基因的表达水平。结果：ＲＴ－ＰＣＲ具有灵敏度高、性好、快速等特点,尤其适合于定量检测微量样品和表达水平较低的基因。结论：ＲＴ－ＰＣＲ是一种定     

不同发育阶段胎儿皮肤的基因差异表达及意义

目的:探讨不同胎龄的胎儿皮肤基因表达变化的特征及其可能的生物学意义。方法:收集10(H1)、15(H2)、24(H3)、32(H4)周共4组不同胎龄正常胎儿皮肤,用病理学技术检测不同发育阶段胎儿皮肤的结构特征,提取各标本总RNA,用RT-PCR方法和基因芯片技术检测胎儿皮肤不同发育阶段的基因表达变化规律。结果:基因芯片高通量地揭示了胎儿皮肤不同发育阶段的遗传信息,H2与H1样本相比(H2／H1),差异表达基因有113个,其中下调的基因有45个,上调的基因有68个;H3与H2样本相比(H3／H2),差异表达基因有91个,其中下调的基因有66个,上调的基因有25个;H4与H3样本相比(H4／H3),差异表达基因有128个,其中下调的基因有63个,上调的基因有65个。不同差异表达的基因与皮肤发育进程密切相关。结论:基因芯片运用于胎儿皮肤发生机制的研究,可以较全面地反映其发育及成熟过程中不同基因表达变化的规律,为进一步寻找特异性发育调控基因,实现基因水平调控皮肤的发育、结构功能的维持、创伤修复和组织再生及多种皮肤病理现象寻找到直接的预防和干预手段。     

耐力训练过程中大鼠心肌组织心钠素、脑钠素基因的表达

本研究采用定量反转录聚合酶链式反应技术,观察大鼠在11周中等强度耐力训练过程中心肌心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)基因表达的变化.结果显示,大鼠心室BNP mRNA表达在训练第24天、第3天和第77天均较对照组显著增强(P＜0.01),心房BNP mRNA表达无显著变化.大鼠训练第38天,心室ANP mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),其余各时相较对照组变化不明显,训练第3天心房ANP mRNA表达显著高于对照组(P＜0.01),其余各时相较对照组变化不明显.结论:在耐力训练过程中,心肌BNP基因表达与ANP不一致,心室BNP基因表达变化与心肌肥大的发展过程一致,提示BNP在运动性心肌肥大发展过程中起着一定的作用.     

人降钙素基因在大肠杆菌中的克隆与表达

目的：利用大肠杆菌表达具有生物活性的人降钙素（ｈＣＴ）。方法：以人类基因组ＤＮＡ，为模板，经ＰＣＲ扩增获取ｈＣＴ基因片段，测序分析克隆到ｐＵＣ１９载体中的ＰＣＲ产物，确定得到两种ＣＴ基因序列，其中１＾＃与文献报道完全一致，２＾＃序列中含有（Ｇ６４／Ａ）点突变，采用带有热诱导启动子的高效表达载体ｐＢＶ２２０，对所获得的基因进行了表达，并利用大鼠降血钙实验，对表达产物的活性进行了检测。结果：所获得的ｒ     

重构型人caspase-8基因原核表达载体的构建及其表达

目的：构建三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体，转染大肠杆菌并诱导其表达。方法：将人caspase—8催化结构域基因及两种大、小亚基基因次序颠倒的重构型人caspase—8基因克隆人原核表达载体pBV220，转染大肠杆菌并诱导表达。结果：成功构建了三种重构型人caspase—8基因的原核表达载体。转染大肠杆菌后，经温度诱导，重构型人caspase—8基因获得了高效的表达。结论：在大肠杆菌中成功表达了三种重构型人caspase—8基因。