大肠杆菌甲基化缺陷DM1菌株与普通DH5α菌株的感受态转化率的比较

目的 观察甲基化缺陷的大肠杆菌DM1菌株与普通DH5α菌株感受态转化效率的差别.方法 用常规氯化钙法制备二者的感受态细胞,质粒转化后计算转化率.结果 DM1菌株感受态细胞转化率为(2.2±0.3)×106 CFU/μg,DH5α菌株感受态细胞转化率为(6.3±0.5)×106 CFU/μg.结论 成功建立一种高效制备甲基化缺陷菌株DM1感受态细胞的方法,虽然该法制备DM1感受态细胞转化效率比DH5α低2-3倍,但其能够高效满足质粒克隆实验中Dam或Dcm甲基化的限制性位点的使用要求.     

肺炎链球菌comX基因可影响细菌毒力基因表达

目的:探讨肺炎链球菌的转化相关基因comX与其毒力表达的关系.方法:采用插入失活的方法制备肺炎链球菌的相关基因缺陷菌株,通过小鼠毒力实验观察它们毒力的变化,并应用RT-PCR测定肺炎链球菌的主要毒力因子透明质酸酶(phd),分泌型IgA结合蛋白(sIgA),肺炎链球菌自溶酶(lytA),肺炎链球菌神经氨酸酶A (nanA)和肺炎链球菌溶血素(ply)在细菌感受态发生过程中的表达,并比较其在野生和缺陷菌株中的表达的异同.结果:野生菌株的毒力基因受感受态刺激因子(CSP)诱导表达增加;虽comX基因缺陷菌株与野生菌株感染小鼠的能力无显著差异,但其ply基因的表达与comE基因缺陷菌株一样显著低于野生菌株的表达.结论:comX可通过细菌转化的通路影响细菌毒力基因的表达.     

pUC19-pbp2b重组质粒转化对肺炎链球菌感受态菌株耐药性的影响

目的 探讨pUC19-pbp2b重组质粒转化对肺炎链球菌(SP)感受态菌株耐药性的影响.方法 收集13株对青霉素不敏感的SP菌株,其中8株青霉素结合蛋白(PBPs)编码基因pbp2b未突变,5株pbp2b基因突变,制备SP感受态.化学合成含SSN保守区的pbp2b基因片段,构建pUC19-pbp2b重组质粒,将重组质粒转化感受态菌株.测定青霉素、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢曲松和头孢吡肟5种β-内酰胺酶类抗生素(BLA)对转化前后SP感受态菌株的最小抑菌浓度(MIC).结果 pbp2b基因扩增产物可见约300 bp的特异条带,13株SP菌株均能形成感受态.与转化前菌株比较,5种抗生素对转化后菌株的MIC均降低(P＜0.05).5种抗生素对5株转化后的pbp2b基因突变菌株的MIC均降低(P＜0.05).结论 外源重组质粒转化SP感受态可以协助减缓SP耐药性的进展.     

comE基因的表达水平与肺炎链球菌的转化率相关性研究

目的：探讨肺炎链球菌感受态形成关键基因comE的表达对肺炎链球菌转化的影响。方法：构建肺炎链球菌妻因comE的缺陷菌株,将野生菌株与缺陷菌株分别进行自然掣化和感受态刺激因子（CSP）诱导转化,记录不同时间段的掣化率,并采用FQ-PCR技术检测其comE的mRNA表达水平。结果：comE基因缺陷菌株的自然转化和CSP诱导转化率都茭0,且检测不到comE的mRNA表达。R6野生菌株的自然转戗率在细菌密度A550nm为0.3左右时最高,comE mRNA的表逆水平与其转化率的相关系数为0.244。D39在不同浓度CSI的诱导下都能发生转化,但CSP浓度为100μg／L时的转化璋高于10,1000μg／L两个诱导浓度。100μg／L CSP诱导10miln时comE mRNA的表达量较基础水平显著增高（P〈0.05）。10,1000μg／L CSP诱导时,其不同时间comE mRNA的表达鱼与其转化率相关性差。100μg／LCSP诱导时,其转化率与0,20min时comE mRNA表达量的相关系数分别为0.9966和0.9984;与10min时comE mRNA表达量的相关系数为0.7950。结论：不管是自然转化还是CSP诱导转化,comE的表达都是必需的,但其表达水平与细菌的自然转化率无显著相关性。CSP诱导转化的最佳浓度为100μg／L,此时的转化率与comE mRNA的基础表达量显著相关,而在10,1000μg／t的CSP诱导时不存在这种相关性。     

肺炎链球菌荚膜缺陷菌株的构建及功能研究

目的: galU基因是肺炎链球菌荚膜合成的关键基因,构建该基因的缺失突变体,获得肺炎链球菌荚膜缺陷菌株,研究其生物学功能,并为肺炎链球菌功能基因组研究提供实验菌株和技术平台. 方法:采用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法制备中间为红霉素耐药基因(erm),两侧为galU基因上、下游同源序列的连接片段,并将此片段转化入肺炎链球菌,在含红霉素的血平板上筛选出缺陷菌株.用PCR鉴定缺陷菌株,小鼠实验研究其毒力.结果: PCR结果显示galU基因完全被erm基因所替代,小鼠毒力实验表明缺陷菌株毒力显著下降.结论: galU缺失突变体在小鼠体内不能形成荚膜导致其难以在小鼠体内存活,可作为筛选肺炎链球菌体内诱导启动子的宿主菌.用LFH-PCR作基因突变,可完全替代靶基因,简便、快速,是肺炎链球菌功能基因组研究的一种有效的方法.     

操纵子comCDE调控肺炎链球菌转化的分子机制研究

目的:探讨操纵子comCDE对调控肺炎链球菌转化的分子机制.方法:将D39野生菌株与comE基因缺陷菌株(ΔcomE)分别用感受态刺激因子(Competence-stimulating peptide,CSP)诱导转化,记录不同时间点的转化率,并采用FQ-PCR技术检测其comE的mRNA表达水平,并通过双向电泳及图像分析比较CSP诱导后不同时间点的蛋白质表达谱差异及野生菌株与ΔcomE菌株的蛋白质表达谱差异.结果:D39菌株在CSP诱导后不同时间点都能发生转化,其中0 min时转化率最高,其comE的mRNA表达量在CSP诱导10 rain后表达显著增加,20 rain时迅速回落(P＜0.05). ΔcomE菌株不能被CSP诱导发生转化.蛋白质组学研究显示,ΔcomE菌株有6个蛋白较D39菌株的表达量显著增加;CSP诱导10min时有6个蛋白表达显著增加,而在20 min时又迅速回落;二者有2个蛋白相同;有1个蛋白在加入CSP后表达显著降低.结论:基因comE的存在是CSP诱导转化必需的,CSP诱导转化可能有非comE依赖途径,而comE可能有除转化以外调控功能,且不依赖于CSP.     

2000-2002年北京、上海和广州儿童肺炎链球菌携带及抗生素耐药性监测

目的了解当前我国儿童携带肺炎链球菌情况,及该菌对常用抗生素的敏感性分布,为临床合理用药提供依据。方法2000-2002年于北京、上海和广州3家儿童医院门诊就诊的年龄为1个月至5岁急性上呼吸道感染儿童鼻咽部分离肺炎链球菌,采用纸片扩散法和E-test法检测菌株对10种抗生素的敏感性。结果肺炎链球菌分离率24．9％。肺炎链球菌对青霉素的不敏感率达39．9％,耐药率6．4％;20．4％的菌株对头孢克洛耐药;19．0％的菌株对头孢呋辛不敏感;肺炎链球菌对阿莫西林／克拉维酸和头孢曲松的敏感率分别为98．5％和97．2％。对红霉素、复方新诺明和四环素的不敏感率都在80．0％以上。98．0％的菌株对环丙沙星敏感。3城市肺炎链球菌抗生素敏感性变化有各自的特点。耐药模式分析表明多重耐药率达88．7％,青霉素不敏感肺炎链球菌（PNSP）较青霉素敏感菌（PSSP）更为多见（99．1％和78．8％,P〈0．01）;红霉素不敏感菌株较红霉素敏感菌株也更为多见（95．8％和17．1％,P〈0．01）。结论我国肺炎链球菌对抗生素的耐药状况已很严峻,不同地区肺炎链球菌的耐药性变化具有不同特点。必须加强各地肺炎链球菌耐药性和抗生素使用情况的监测,及时调整经验用药方案和公共卫生策略。     

呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因突变分析

目的 分析呼吸道感染婴幼儿肺炎链球菌的耐药性及青霉素结合蛋白基因(PBPs)突变情况.方法 收集呼吸道感染婴幼儿痰或咽拭子标本中分离出的24株肺炎链球菌,进行菌株鉴定和药敏试验.对筛选出的耐青霉素肺炎链球菌行耐药性分析,并提取菌株DNA后分析PBPs基因突变情况.结果 24株肺炎链球菌中,青霉素不敏感菌株有13株,占54.2％;13株青霉素不敏感菌株对对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸和头孢呋辛不敏感率较高,分别为100％、76.9％和76.9％;对头孢噻肟、头孢曲松和头孢吡肟的不敏感率较低,分别为46.2％、38.5％和30.8％;对美罗培南和万古霉素的不敏感率最低,分别为15.4％和0.13株青霉素不敏感菌株未发现pbp1a基因突变菌株,5株存在pbp2b基因突变,占38.5％.结论 青霉素不敏感肺炎链球菌存在对多种抗生素耐药情况,而pbp2b基因突变可能是导致肺炎链球菌耐药的重要原因,应加强肺炎链球菌耐药性及PBP基因突变监测.     

肺炎克雷伯菌基因分型与药敏结果分析

目的对肺炎克雷伯菌各型菌株的耐药现状进行流行病学研究。方法采用改进的随机引物扩增多态性DNA分型法(RAPD)基因分型技术,对分离自门诊和住院患者的48株肺炎克雷伯菌进行基因分型,同时对菌株进行12种抗生素敏感试验。结果48株肺炎克雷伯菌41株有稳定的RAPD带型,共分16型,同型菌株药敏结果基本相同。结论该院呼吸科R ICU存在肺炎克雷伯菌的小流行;合理使用抗生素,加强重点病区的消毒隔离措施,是控制医院感染流行的重要措施。     

儿童下呼吸道感染常见病原菌分布和耐药性分析

目的了解下呼吸道感染患儿主要病原菌分布及耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法对住院的下呼吸道感染患儿痰液标本10 490例,经分离培养,做菌株鉴定和药敏试验。结果儿童下呼吸道感染常见的病原菌为大肠埃希菌(31.64%)、肺炎克雷伯菌(14.83%)、金黄色葡萄球菌(10.25%)、流感嗜血杆菌(10.10%)、肺炎链球菌(7.42%)。左氟沙星、头孢他啶以及美洛培南对产ESBLs菌株较敏感。不产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌除对美洛培南、阿米卡星、左氟沙星、头孢他啶以及氨苄西林/舒巴坦较为敏感外,其他抗生素均有不同程度的耐药。大部分抗生素对产ESBLs菌株的耐药性高于不产ESBLs的菌株。流感嗜血杆菌对青霉素和复方新诺明的耐药率较高,且近年来呈上升趋势。金黄色葡萄球菌对青霉素的耐药率高,但对苯唑西林敏感。肺炎链球菌对复方新诺明和阿奇霉素耐药率较高。结论儿童下呼吸道感染病原菌主要为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌,对抗生素有不同程度耐药,临床上应注意合理选择和使用抗生素。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。