大鼠牙胚组织发育过程中釉原蛋白mRNA的表达

目的：观察釉原蛋白（Ａｍ）基因在大鼠牙胚组织发育过程中的表达。方法：采用原位杂交的方法,检测大鼠孕期１７、１８、１９ｄ和出生后１、３、５、７、９ｄ牙胚中成釉细胞ＡｍｍＲＮＡ的表达。结果：从出生后１ｄ至出生后９ｄ大鼠第一磨牙牙胚中均检测到ＡｍｍＲＮＡ的表达,其中出生后第５ｄ表达最高,成釉细胞分泌完成后Ａｍ的表达下降。成牙本质细胞在发育的任何时期均未见到Ａｍ的表达。结论：釉原蛋白基因的转录只发生在牙胚发育的早期,前成釉细胞极化阶段和成釉细胞分泌阶段;发育成熟的釉基质中没有釉原蛋白。成牙本质细胞不表达釉原蛋白基因。     

釉原蛋白在大鼠胚发育过程中的表达

目的 研究大鼠切牙牙胚形态分化的不同阶段,釉原蛋白（Amelogenin Am）的表达,探讨釉器细胞的形态分化与功能状态的关系,为探明牙釉质与牙本质在发育、矿化过程中的相互诱导关系及牙釉质蛋白硬组织诱导能力的有无提供实验依据。方法 将标本进行GMA树脂包埋,制作半薄切片后,进行免疫组织化学染色。结果 大鼠牙胚基底部釉器无Am的表达,分化末期内釉上皮细胞呈弱阳性染色,釉基质形成期成釉细胞及釉基质内呈强阳性染色。达到釉基质移行期后阳性反应逐渐减弱,直到釉质成熟期后期阳性反应消失。同时在对应的牙本质和牙本质小管内可以见到釉原蛋白的阳性染色。结论 在釉质形成过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白大部分存留在釉基质内形成釉质,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管、以及成牙本质细胞层内。釉原蛋白向牙本质层扩散和渗透功能上的意义,可以是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质钙化的作用。     

釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达

目的　观察釉蛋白在大鼠牙胚发育过程中的转录表达 ,为进一步研究釉蛋白的生物学功能提供基础。方法　采用原位杂交方法 ,检测出生后 1、3、7、10、14d龄大鼠第一磨牙牙胚中釉蛋白mRNA的表达。结果　大鼠出生后 1～ 10d在成釉细胞和成牙本质细胞中均检测到釉蛋白mRNA的表达。在成釉细胞中的表达随细胞的分化、基质分泌具有规律性 ,1d已有微弱表达 ,3d表达增强 ,7d达到最强 ,10d减弱 ,14d为阴性。釉蛋白mRNA在成牙本质细胞中的表达 1d很微弱 ,14d阴性 ,3～ 10d为持续的中等强度的表达。结论　釉蛋白在成釉细胞中的转录表达从前成釉细胞一直持续到成熟期 ,至牙冠硬组织发育完全时中止。成牙本质细胞也表达釉蛋白基因 ,提示釉蛋白可能参与早期罩牙本质的形成     

釉原蛋白在人牙胚发育不同时期表达的免疫组化研究

目的：探讨釉原蛋白在人牙胚发育不同时期的表达及其意义。方法：采用免疫组织化学方法观察釉原蛋白在不同发育阶段人牙胚中的分布。结果：在前成釉细胞、基底膜及前成牙本质细胞相邻部位都呈阳性反应。牙乳头细胞及牙本质呈阴性反应。釉原蛋白分布于釉质全层，在釉质浅层及与成釉细胞界面处呈线状强阳性染色，在后期矿化成熟时，成釉细胞及釉质染色阴性。结论：釉原蛋白与成釉细胞、成牙本质细胞的分化及釉质的矿化有关。     

釉原蛋白、釉蛋白及成釉蛋白在小鼠牙胚组织发育过程中的表达

目的:比较小鼠釉原蛋白(amelogenin,AMELX)、成釉蛋白(ameloblastin,AMBN)和釉蛋白(enamelin,ENAM)在牙胚组织发育过程中表达的差异,从而揭示其不同的功能。方法:选择牙胚发育期分别位于钟状期、钟状晚期、釉质成熟期的昆明小鼠头颅切片,使用抗鼠AMELX、AMBN和ENAM多克隆抗体(由美国德州大学健康科学中心Dr.Sim-mer赠送),行免疫组织化学EnVision二步法染色,观察三种蛋白在处于三个不同发育阶段小鼠头颅切片中的表达情况。结果:免疫组化结果显示,三种蛋白在三种小鼠牙胚的成釉细胞、釉质、牙本质中的表达存在时空顺序差异,随着牙胚发育和釉质成熟,AMELX呈递减表达,而AMBN和ENAM则较恒定表达。AMELX在周围发育中的编织状骨组织中也有微弱表达。结论:AMELX、AMBN和ENAM为主要的釉质基质蛋白,在牙胚发育的不同阶段有不同的调节矿化的作用,AMELX在釉质矿化早期促进晶体生长,而其在骨中的表达则进一步表明其在骨修复中可能的作用;AMBN促进釉质基质矿化,并维持晶体形状、大小;ENAM促进和维持晶体生长,并与再矿化有关。     

釉原蛋白在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的 研究大鼠切牙牙胚形态分化的不同阶段,釉原蛋白(AmelogeninAm)的表达,探讨釉器细胞的形态分化与功能状态的关系,为探明牙釉质与牙本质在发育、矿化过程中的相互诱导关系及牙釉质蛋白硬组织诱导能力的有无提供实验依据。方法 将标本进行GMA树脂包埋,制作半薄切片后,进行免疫组织化学染色。结果 大鼠牙胚基底部釉器无Am的表达,分化末期内釉上皮细胞呈弱阳性染色,釉基质形成期成釉细胞及釉基质内呈强阳性染色。达到釉基质移行期后阳性反应逐渐减弱,直到釉质成熟期后期阳性反应消失。同时在对应的牙本质和牙本质小管内可以见到釉原蛋白的阳性染色。结论 在釉质形成过程中,成釉细胞分泌的釉原蛋白大部分存留在釉基质内形成釉质,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管、以及成牙本质细胞层内。釉原蛋白向牙本质层扩散和渗透功能上的意义,可能是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质钙化的作用。     

小鼠牙胚发育过程中釉原蛋白和釉蛋白的表达特征

目的 观察釉原蛋白和釉蛋白在小鼠牙胚发育中的表达特征,进一步揭示釉原蛋白和釉蛋白的生物学特性.方法 分别制备出生后第1、3、7和14天小鼠下颌第一磨牙牙胚切片,采用免疫组织化学和反转录聚合酶链反应法检测釉原蛋白和釉蛋白的组织学定位和基因转录表达水平.结果 釉原蛋白表达于分泌期成釉细胞的胞质和釉质基质全层,在新生小鼠牙胚成牙本质细胞中有一过性表达;釉蛋白表达于分泌期釉质基质中,在成釉质细胞突边缘和釉质基质深层呈强阳性表达,釉原蛋白和釉蛋白在矿化成熟的釉质中均未见表达.釉原蛋白和釉蛋白在出生后第7天mRNA表达量的相对值分别为0.813±0.085和0.799±0.064,显著高于其他时间的表达水平(P＜0.05).结论 釉原蛋白和釉蛋白主要由分泌期成釉细胞合成并分泌到釉质基质中,其表达具有高度的时空特异性,提示它们在釉质形成和生物矿化中有重要的作用.     

MMP-9基因敲除小鼠磨牙牙胚中釉原蛋白和成釉蛋白表达的研究

目的:检测MMP-9基因敲除小鼠(MMP-9^-/-)和野生型小鼠磨牙牙胚中釉原蛋白和成釉蛋白的表达。方法:使用免疫组化方法检测出生后2 d(P2)、5 d(P5)、7 d(P7)野生型小鼠和MMP-9^-/-小鼠下颌磨牙牙胚中釉原蛋白和成釉蛋白的表达分布。结果:在P2时,釉原蛋白主要表达在成熟的成釉细胞胞、及其相邻的成牙本质细胞内,敲除MMP-9后,釉原蛋白的表达可扩散至牙乳头间充质;在P5和P7时,釉原蛋白的表达分布在野生型小鼠和MMP-9^-/-小鼠中无差异,但在MMP-9^-/-小鼠中釉原蛋白在成釉细胞中的表达量明显增强。在P2、P5和P7时,成釉蛋白的表达分布和表达量在野生型小鼠和MMP-9^-/-小鼠中均无差异。结论:MMP-9可能通过酶切釉原蛋白而影响其表达分布。     

釉成熟蛋白和釉原蛋白基因在小鼠牙胚发育过程中的时空表达研究

目的：观察、比较小鼠釉成熟蛋白（amelotin）和釉原蛋白（amelogenin）基因在牙齿发育过程中的表达。方法：利用Digoxigenin标记的cRNA探针,采用原位杂交技术对amelotin和amelogenin基因表达进行组织学定位;然后从小鼠下颌中提取总RNA,采用RT—PCR技术观察小鼠amelotin和amelogenin基因在小鼠下颌组织中的表达。结果：在出生后1d的小鼠下颌第一磨牙,随着前期牙本质形成,amelogenin在成釉细胞层开始表达,并逐渐增强,但未检测到amelotin基因表达;在出生后5d的小鼠,成釉细胞处于分泌期,amelotin和amelogenin基因在成釉细胞中显著表达;在出生后10d小鼠下颌第一磨牙,amelotin和amelogenin基因在牙尖周围成熟期成釉细胞中的表达信号明显降低。利用RT—PCR技术,在新生小鼠下颌中未检测到amelotin基因表达,但amelogenin已开始表达;从出生1—7d小鼠下颌中均检测到amelotin和amelogenin基因表达;在出生后7d小鼠,amelogenin表达显著下降。结论：amelotin和amelogenin均参与了釉质发育过程;amelotin基因表达迟于amelogenin基因,提示两种釉质基质蛋白在釉质发育过程中可能发挥不同生物学作用。     

成釉蛋白在小鼠牙胚发育不同时期的免疫组化定位

目的：观察成釉蛋白（ameloblastin,AMBN)在小鼠牙胚发育不同时期的表达和分布情况。方法：采用免疫组化的方法观察AMBN在小鼠牙胚不同时期的表达和定位。结果：蕾状期、帽状期和钟状早期牙胚中未见AMBN的表达；出生后1d钟状期，在成釉细胞和釉基质中呈强阳性表达，成牙本质细胞和牙本质基质中呈弱阳性表达；出生后3d，在成釉细胞胞浆中呈弱阳性表达，在成牙本质细胞中表达阳性，着色较成釉细胞深；出生后7d，AMBN在成釉细胞托姆氏突呈弱阳性表达，其余部位呈阴性表达。在牙胚发育的各个时期，AMBN在外釉细胞、星网层细胞、牙乳头细胞均呈阴性表达。结论：AMBN参与釉基质的形成，可能与牙胚发育中基质形成的信息传递有关。     

牙本质磷蛋白在人牙胚发育中的原位杂交研究

目的：观察牙本质磷蛋白（DPP）基因在人牙胚组织发育过程中的表达，探讨其在牙齿发育中的作用。方法：采用原位杂交的方法，检测帽状期、钟状期牙胚组织DPPmRNA的表达。结果：人牙胚帽状期、钟状早期均未检测到DPPmRNA的表达，在钟状晚期前期牙本质形成时成牙本质细胞、前成釉细胞中呈阳性表达。结论：牙本质磷蛋白基因的转录具有明显的的时空特异性，它可能在牙体硬组织的形成中起重要的作用。     

Experimental luxation injuries in immature rat teeth

Abstract The development of an experimental model in which a standardized traumatic injury is given to dental tissues of experimental animals is necessary to understand the tissue reactions of luxated human teeth. In this study we contrived a rat molar luxation device by which bilateral upper first molars are pushed horizontally toward the palate to cause a constant amount of dislocation. The pushing force is controlled with regard to strength, direction and duration. Using this device, molars of 3-week-old Wistar rats weighing 45-60 g were luxated, and damage to the pulps and periodontal tissues was evaluated histologically. Every luxated tooth had approximately equal hemorrhage, cell degeneration, and irregularity of periodontal fibers in the palatal cervical region. In the buccal cervical and in the bifurcation regions, the periodontium suffered edema and hemorrhage. The periodontal fibers in these regions were elongated and, in some areas, torn. Periodontal hemorrhage was also observed at the distobuccal root apex. The severity and distribution of the tissue injury were nearly equal in almost all of the molars. Few alveolar bone fractures or root fractures were observed. From these results, it is concluded that a standardized luxational trauma can be delivered to rat molars by the use of this experimental method.     

牙本质磷蛋白在大鼠牙齿发育中表达的原位杂交研究

目的;观察牙本质磷蛋白(DPP)在大鼠牙齿发育各期的表达,探讨其在牙齿发育中的作用。方法：采用原位杂交方法,检测大鼠牙齿发育各阶段DPP mRNA的表达。结果：在分化成熟的大鼠成牙本质细胞中存在DPP mRNA表达,在前成釉细胞也存在DPP mRNA表达,在成釉细胞中可见较弱的表达,成牙骨质细胞和牙髓细胞呈阴性表达。结论：DPP的表达具有明显的时空特异性,它不但对牙本质的形成起重要作用,而且可能作为成釉细胞分化的信号分子调控牙釉质的形成。     

过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响

目的研究过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响,探讨氟斑牙的发病机制。方法选择6只Wistar大鼠,随机分成实验组和对照组。实验组每日饲以F-质量浓度为100mg/L的氟化水,对照组饲以蒸馏水,两组均用常规饲料喂养8周。饲养8周后处死大鼠,利用实时定量聚合酶链反应(PCR)观察过量氟对大鼠下切牙釉原蛋白表达的影响。结果实验组大鼠下切牙釉原蛋白的表达低于对照组(P<0.05)。结论过量氟可能通过抑制釉原蛋白的表达来影响釉质发育。     

Histochemical characterization of alkaline phosphatase in developing rat teeth and bone

abstract — Alkaline phosphatase (EC 3.1.3.1.) in developing teeth and in bone has been studied. Prior to hard tissue function a rather high enzyme activity was noted in differentiating odontoblasts, stratum intermedium, and outer enamel epithelium. A lower activity was observed in the cells of the dental papilla and stellate reticulum. After the onset of hard tissue formation the alkaline phosphatase activity was generally increased. Enzyme activity was also found in the proximal part of tall, secretory ameloblasts. In the short post-secretory ameloblasts a high enzyme activity was noted. At the onset of dentin mineralization there was an increase in enzyme activity in the cells of the subodontoblastic layer. In bone the highest alkaline phosphatase activity was found in osteoblasts. A difference was noted between the alkaline phosphatase of hard and soft tissues by means of the addition of inhibitors to the incubation media. Within the hard tissues it was possible to distinguish between two alkaline phosphatases after pretreatment with heat (56°C) or the addition of specific inhibitors (sodium metavandate, ortho-and pyrophosphate). An isoenzyme which was sensitive to these procedures was demonstrated in odontoblasts and in the pulpal connective tissue. Another alkaline phosphatase isoenzyme, which was resistant to pretreatment with heat or the addition of vanadate or phosphate, was demonstrated in the subodontoblastic cell layer, stratum intermedium and the outer cells of the reduced enamel epithelium.     

Co-operative mineralization and protein self-assembly in amelogenesis: silica mineralization and assembly of recombinant amelogenins in vitro

An amorphous silica mineralization technique was used to produce inorganic/protein composites to elucidate the structure and mechanism of formation of amelogenin assemblies, which may play an important role in regulating enamel structure during the initial stages of amelogenesis. Full-length recombinant amelogenins from mouse (rM179) and pig (rP172) were investigated along with key degradation products (rM166 and native P148) lacking the hydrophilic C terminus found in parent molecules. The resulting products were examined using transmission electron microscopy and/or small-angle X-ray scattering. Using protein concentrations of 0.1–3 mg ml⁻¹, large monodisperse spheres of remarkably similar mean diameters were observed using rM179 (124 ± 4 nm) and rP172 (126 ± 7 nm). These spheres also exhibited 'internal structure', comprising nearly spherical monodisperse particles of ≈ 20 nm in diameter. In the presence of rM166, P148, and bovine serum albumin (control), large unstructured and randomly shaped particles (250–1000 nm) were observed. Without added protein, large dense spherical particles of silica (mean ≈ 500 nm) lacking internal structure were produced. These findings demonstrate that full-length amelogenins have the ability to form higher-order structures, whereas amelogenins that lack the hydrophilic C terminus do not. The results also suggest that full-length amelogenin can guide the formation of organized mineralized structures through co-operative interactions between assembling protein and forming mineral.     

大鼠上下颌突未人化外胚间充质细胞的体外培养

目的：建立体外培养大鼠上下颌突未分化外胚间充质细胞的方法。方法：于饲养细胞上用组织块培养法作原代培养细胞;免疫组织化学法鉴定细胞来源。结果：培养的细胞呈单层贴壁生长,细胞起源鉴定为外胚间充质细胞。结论：建立了一种简便培养大鼠未分化外胚间充质细胞的方法,为下一步的研究工作奠定基础。     

原癌基因c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的：通过观察原癌基因c—jun、c—fos在大鼠牙胚发育过程中时空表达的特点，探讨它在牙胚发育中的作用。方法：制备大鼠牙胚发育各期组织标本，采用免疫组化的方法观察c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同阶段的表达情况，并对结果进行图像分析和统计学分析。结果：c-jun在大鼠牙胚的蕾状期、帽状期呈阴性表达，在钟状晚期牙胚的成牙本质细胞中呈阳性表达，成釉细胞中亦有表达；c-fos在大鼠牙胚的蕾状期呈阴性表达，帽状期表达于内釉、外釉上皮和星网层，以内釉上皮层表达最强。钟状期表达于成熟的成牙本质细胞，且随着硬组织的形成、矿化，表达逐渐减弱。结论：观察到c-jun、c-fos在大鼠牙胚发育不同时期的表达和表达变化，提示其可能参与成牙本质细胞、成釉细胞的分化和牙本质形成的过程。