p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病大鼠肾组织细胞外基质重构中的作用

目的探讨糖尿病大鼠肾组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)及其下游转录因子cAMP反应元件结合蛋白(cREB1)的表达特征及与细胞外基质重构的关系。方法雄性Wistar大鼠60只，行右肾切除术2周后，随机均分为右肾切除对照组(CN组)和糖尿病组(DM组)。DM组腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65mg／kg诱发糖尿病模型，并于注射后1、2、4、8、12周各宰取6只大鼠，免疫组化检测肾皮质磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)及其磷酸化CREE1(p-CREB1)的表达特征，Western blot检测肾皮质p38MAPK和CREE1磷酸化(活性)，RT-PCR检测p38 MAPK、CREB1和纤维粘连蛋白(FN)mRNA的表达。结果与对照组相比，DM病组p-p38 MAPK在1、2、4和8周升高，在12周降至正常；p-CREB1在2、4和8周增高，在12周时降至正常；FN于4周开始升高。结论早期糖尿病大鼠肾组织中p38 MAPK及CREB1的活性升高；p38 MAPK途径的激活有可能在糖尿病肾病的细胞外基质重构中发挥一定作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在急性胰腺炎中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路能够接受多种细胞外刺激,是真核生物细胞传递细胞外信息到细胞内,调节细胞生命活动的重要信号转导系统。p38MAPK信号通路是迄今发现的重要MAPK通路之一,在炎症、细胞分化、细胞周期、细胞凋亡和发育等多方面发挥重要调节作用。     

金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α活性抑制作用的研究

目的 探讨金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α(p38αMAPK)的抑制作用。方法 应用分子对接软件Autodock Vina将金合欢素与靶酶三维晶体结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证金合欢素对p38αMAPK的抑制作用。结果 金合欢素可结合于1KV2的活性位点处而阻碍底物三磷腺苷的进入,对p38αMAPK的生物学功能产生抑制作用。与模型组相比,阳性对照药地塞米松和金合欢素不同浓度干预后可明显下调小鼠RAW 264.7细胞炎症模型细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论 金合欢素可能是通过作用于p38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。     

姜黄素与p38MAPK的研究进展

姜黄素是从中药姜黄中提取的酚性物质,现代药理研究表明,姜黄素具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等多种药理作用,具有较好的临床应用前景。p38 MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族的重要一员,其生物学功能主要是参与炎症反应、缺血/再灌注损伤、调控肿瘤的增殖与凋亡,近年来研究发现,姜黄素发挥其生物活性与p38 MAPK信号通路密切相关,本文就两者的研究进展作一综述。     

氟伐他汀对哮喘气道重建的抑制作用

目的:探讨氟伐他汀对哮喘气道重建的影响。方法:大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)原代培养,MTT法观察细胞增殖状况,流式细胞仪检测细胞周期变化;构建大鼠慢性哮喘模型,随机分为4组,即:空白对照组(A组)、哮喘组(B组)、氟伐他汀组(C组)、地塞米松组(D组)。测量气道壁厚度和气道内外径比值,以及免疫组化法半定量法检测PCNA、Ⅲ型胶原表达含量。结果:氟伐他汀对于由组胺、血清刺激增生的ASMC有明显的抑制作用,细胞分裂多数停滞于G1期。大鼠哮喘模型中,C组的气道壁厚度、PCNA、Ⅲ型胶原表达明显低于B组,差别均具有统计学意义(P<0.05),C组气道壁厚度、PCNA、Ⅲ型胶原表达高于D组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:氟伐他汀对哮喘气道重建具有抑制作用。     

IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应

目的：探讨IκB激酶（IκB kinase,IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation, UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。     

钙激活Cl-通道阻断剂对哮喘气道黏液高分泌的抑制研究

 目的 观察小鼠钙激活Cl-通道阻断剂尼氟灭酸(Niflumic acid,NFA)对哮喘小鼠气道黏液高分泌的抑制作用.方法 将BABL/c小鼠随机分为哮喘组、吸入NFA预防组和正常对照组.AB-PAS特染法检测各组小鼠小支气管杯状细胞的数量及黏液分泌状况.RT-PCR法检测各组肺组织中黏蛋白MUC5AC mRNA和mClCA3 mRNA水平.结果 正常对照组小支气管只有少量散在分布的杯状细胞,管腔干净;而哮喘组出现大量簇状分布的杯状细胞,胞质内富含着色颗粒,管腔具有着色黏液;NFA预防组的杯状细胞数量与正常对照组相近.哮喘组的MUC5AC及mClCA3 mRNA水平均显著高于正常对照组;NFA预防组的MUC5AC mRNA水平与正常对照组接近,而mClCA3 mRNA水平稍高于正常对照组.结论 NFA能有效抑制哮喘小鼠气道杯状细胞数量的增加及黏蛋白的合成,这一效果是通过阻断mCLCA3活性和降低其表达水平来实现的.     

增生性瘢痕内p38丝裂素活化蛋白激酶及其MAPKKs基因的表达

为探讨增生性瘢痕和正常皮肤中p3 8丝裂素活化蛋白激酶 ( p3 8MAPK)及其上游信号分子mkk3和mkk6基因表达的变化 ,提取 8例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织的总RNA后 ,分离纯化mRNA ,用RT PCR方法检测这 3种基因在不同组织中的表达变化规律。结果显示 ,在正常皮肤组织中 ,mkk6和p3 8MAPK基因表达较弱 ,而在增生性瘢痕内 ,这 2种基因PCR产物的灰度比分别为正常皮肤的 1 2倍和 1 9倍 ,基因表达量明显升高 (P <0 0 5和P <0 0 1) ,而mkk3在这两种不同类型组织中的表达量没有显著性差异 (P >0 0 5 )。提示增生性瘢痕的发生可能与mkk6和 p3 8MAPK基因表达升高有关 ,而mkk3在其中的作用需进一步研究     

应力刺激下p38MAPK信号通路在软骨损伤中的作用

软骨组织由软骨细胞、基质和纤维构成,无直接的血液供应、神经支配和淋巴循环。软骨的损伤好发于腰、颈椎、髋、膝、肘、踝等关节部位,可见于多种疾病,如骨性关节炎、风湿性关节炎、末端病等。其中,应力刺激作为一种外界环境刺激,是使软骨发生损伤的主要因素之一。近年研究表明,在力学因素影响下,软骨细胞中重要的信号传导通路p38MAPK信号通路被激活,其激活后通过对细胞核内相关转录因子及激酶的调控,在软骨损伤的病理过程中发挥着重要作用。     

黄芩苷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的p38MAPK途径研究

目的研究黄芩苷对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用及其对p38MAPK信号通路的影响。方法以不同浓度的黄芩苷与人肝癌HepG2细胞共同培养24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞增殖抑制率;通过活细胞计数,检测不同浓度黄芩苷处理后细胞活力的变化;采用western blotting方法检测黄芩苷处理72 h后HepG2细胞p38和p-p38蛋白的表达变化。结果黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,并随药物作用时间的延长和药物浓度的增加,其抑制效果越明显;通过对活细胞计数发现黄芩苷对HepG2细胞生长有抑制作用,随黄芩苷浓度的增加,细胞存活率下降,细胞增殖速度明显减缓;在黄芩苷处理72 h后p38蛋白表达兀明显变化,而p-p38蛋白表达上调且随黄芩苷浓度升高蛋白表达升高。结论黄芩苷可能通过激活p38MAPK信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

急性大、中强度运动对大鼠骨骼肌p38 MAPK、NF-kappaB活性,IL-6、MRFs mRNA的影响

目的:探索急性大、中强度运动对大鼠肌肉发生相关因子p38 MAPK、NF-kappaB、IL-6、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)、MEF2c活性/mRNA影响。方法:66只雄性SD大鼠分为11组,C组(安静组)、大强度组H-0、1、6、16、24 h组(急性大强度运动后0、1、6、16、24 h组,跑台运动方案:1 h、27 m/min、倾角10%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min),M-0、1、6、16、24 h组(急性中等强度运动后0、1、6、16、24 h组,运动方案:1 h、20 m/min、5%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min)。检测各组大鼠腓肠肌p38、Phospho-p38、p65、Phospho-p65、IL-6 mRNA、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)mRNA、MEF2c mRNA水平。结果:(1)H-0、1、6 h组Phospho-p38、Phospho-p65、IL-6 mRNA显著高于C组(均P<0.01)。M-0、1、6 h组Phospho-p38及M-0、1h组Phospho-p65、IL-6 mRNA显著高于C组(均P<0.01),但均显著低于H对应组,其中M-0、1h组IL-6 mRNA显著性水平为P<0.05,其余为P<0.01。(2)H-0、1、6 h组MEF2c mRNA显著高于C组(均P<0.01),M-0、1 h组显著高于C组(均P<0.01)但显著低于H对应组(均P<0.05)。H-1、6 h组MRF4 mRNA,H-6h、M-6 h组MyoD mRNA,H-6、16 h组MyoG mRNA显著高于C组(均P<0.01)。M-6 h组MyoD mRNA显著低于H对应组(P<0.05)。(3)H-6 h、M-6 h组MyoD mRNA/MyoG mRNA比值显著高于C组(P<0.01),H-16 h组显著低于C组(P<0.01)。大、中强度运动后,该比值分别在24、16 h恢复至C组水平(P>0.05)。结论:(1)p38、NF-B活性、IL-6 mRNA均对运动刺激敏感,急性运动后,三者变化相似,特别是大强度条件下。p38活性、NF-B活性、IL-6 mRNA上调幅度及NF-B活性、IL-6 mRNA上调时间与运动强度有关。(2)MEF2c、MyoD mRNA均对运动刺激敏感。MEF2c、MyoD mRNA的上调幅度、MEF2c mRNA的上调时间与运动强度有关。MRF4、MyoG mRNA仅对大强度运动刺激敏感,Myf-5基因表达对运动刺激敏感。(3)大强度运动后,肌肉表型转化趋势经历了慢-快、快-慢两个阶段,后再恢复正常水平。中等强度运动后早期,表型转化同样为慢-快,表型转化结束较早。     

卵白蛋白致敏时减毒活菌卡介苗干预对哮喘小鼠气道炎性反应的影响

 目的 探讨分别在卵白蛋白致敏时和致敏前以不同剂量接种卡介苗对哮喘小鼠气道炎性反应及黏液分泌的影响.方法 将C57BL/6小鼠随机分为模型组、阴性对照组、4组卡介苗接种组.105、106集落形成单位致敏前接种依次为A1组、A2组,致敏时接种依次为B1组、B2组.收集肺泡灌洗液和外周血,分别测定其中IL-5、IFN-γ浓度;病理观察肺组织炎性反应及气道黏液分泌情况,测算杯状细胞化生指数、上皮黏液储备指数.结果 卡介苗接种后,只有B1组、B2组能抑制化生指数(P＜0.05);B2组较A1组、A2组明显地降低了储备指数(P＜0.05),降低了肺泡灌洗液中IL-5/IFN-γ比值(P＜0.01).结论 致敏时接种卡介苗较致敏前接种能更有效抑制哮喘小鼠气道炎性反应、减少黏液分泌,并且存在一定量效关系,可能与纠正Th1/Th2失衡有关.     

嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞中p38 MAPK信号转导通路的活化作用观察

目的探讨嗜酸性粒细胞在与支气管上皮细胞接触共培养过程中对后者炎性介质释放的影响。方法用CD16抗体磁珠法分离嗜酸性粒细胞,免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管上皮细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、激活转录因子(ATF)-2蛋白含量,微珠免疫沉淀结合免疫印迹法检测p38MAPK活性。结果经与嗜酸性粒细胞共同培养活化后,支气管上皮细胞中磷酸化p38MAPK蛋白含量及其活性均显著上升,p38MAPK信号转导通路链中下级底物蛋白质ATF-2(细胞内调控某些基因表达的转录因子)量也显著上升;多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞同样可以活化支气管上皮细胞,增加其细胞内p38MAPK蛋白质磷酸化。p38MAPK酶选择性抑制剂SB203580可有效抑制p38MAPK诱导其底物ATF-2磷酸化。结论嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞接触共培养过程中对炎性介质表达和释放的调控作用可能是通过活化支气管上皮细胞内p38MAPK信号传导通路未实现的。     

内毒素休克大鼠丝裂原活化蛋白激酶p38通路在生物喋呤诱生中的作用及其意义

目的　观察丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)p38信号通路抑制剂SB2 0 35 80对内毒素休克大鼠生物喋呤 (BH4 ) 一氧化氮 (NO)表达的影响及其意义。　方法　采用内毒素休克模型 ,5 6只大鼠随机分为正常对照组 (8只 )、内毒素休克组 (32只 )和SB2 0 35 80拮抗组 (1 6只 )。留取肝、肺、肾组织测定三磷酸鸟苷环水解酶I (GTP -CHI)与诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)mRNA表达 ,同时检测血浆与组织中BH4 和NO水平的变化。　结果　内毒素攻击后 ,各组织GTP -CHI基因表达和BH4 水平明显升高 ,至伤后 2 4h仍持续于较高水平。组织iNOS基因表达和NO水平亦明显升高 ,其中肝、肺改变尤为显著。SB2 0 35 80处理后 ,肝、肺、肾组织GTP -CHImRNA表达分别于 1 2 ,2 4 ,2～ 1 2h受到显著抑制 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,肝组织BH4 水平 1 2h显著降低 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,肝、肺和肾组织iNOSmRNA表达亦有不同程度下调 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,且肝、肺组织NO水平明显下降。　结论　p38MAPK信号途径参与了内毒素介导BH4 诱生的病理生理过程 ,抑制该通路能明显下调内毒素休克动物多器官BH4 NO系统的表达。     

靶向p38MAPK的siRNA通过干扰线粒体途径弱化光激发酞菁锌诱导Lovo细胞的凋亡

目的探讨RNAi沉默p38MAPK基因表达对光激发TαPc Zn诱导的人结肠癌Lovo细胞线粒体凋亡途径干扰的机制。方法运用siRNA靶向干扰p38MAPK基因,采用RT-PCR和Western blot法分别检测细胞内p38MAPK的干扰效率,同时用Western blot法检测AIF、Bcl-2、Cyto-c及Caspase-3的表达,JC-I染色检测沉默p38MAPK基因对ΔΨm的影响。结果与对照组比较,光作用下siRNA-p38MAPK转染组中p38MAPK的mRNA和蛋白水平显著下调(P0.01)。在光激发下,TαPc Zn明显诱导Lovo凋亡,ΔΨm降低,从线粒体释放到细胞质的AIF、Cyto-c增加,Bcl-2表达减少,同时caspase-3发生断裂激活。而在siRNA沉默p38MAPK后,光激发TαPc Zn诱导细胞凋亡的作用减弱,ΔΨm有所增加,细胞质中AIF、Cyto-c释放减少,caspase-3激活减弱,Bcl-2表达增加。结论光激发TαPc Zn作用下,沉默p38MAPK基因可明显干扰线粒体途径,进而减弱光激发TαPc Zn所诱导的细胞凋亡。     

P38MAPK抑制剂对缺血/再灌注大鼠肾脏功能损伤的保护作用

目的：观察P38MAPK抑制剂对缺血／再灌注大鼠肾脏功能损伤的保护作用。方法：夹闭肾动脉制遣大鼠肾脏缺血／再灌注损伤动物模型，静脉注射P38MAPK抑制剂阻断P38MAPK信号转导通路，测量其对肾功能及细胞因子含量的影响。结果：肾脏和血浆中TNF—α和IL-β含量随缺血／再灌注时间的延长而升高，肾功能损伤也随缺血／再灌注时间的延长而加重。应用P38MAPK抑制剂可显著降低TNF-α和IL-β含量，对缺血／再灌注所致的肾功能损伤具有明显改善作用。结论：P38MAPK抑制剂可通过抑制致炎因子的产生而减轻缺血/再灌注所致的大鼠肾脏功能损伤。     

哮喘气道上皮杯状细胞合成GM-CSF及其调控机制的研究

目的 观察哮喘小鼠气道上皮杯状细胞合成粒细胞／巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的能力,探讨钙激活Cl^-通道(CLCA)在合成中的调控作用。方法 取成年雄性BALB／c小鼠,采用卵蛋白致敏法制备哮喘模型。AB-PAS特染法检测哮喘小鼠小支气管杯状细胞的分布;同一解剖部位采用免疫组化染色法检测GM-CSF的表达。体外培养人气道黏液上皮细胞系NCI-H292,采用含人hCLCA1的重组质粒pIRKS2-EGFP／hcLCA1转染该细胞。筛选到稳定表达hCLCA1的细胞后,免疫组化法及RT-PCR法检测该细胞GM-CSF的表达、转录水平。设非转染细胞和CLCA阻断剂NFA干预的转染细胞为两个对照组。结果 哮喘小鼠气道杯状细胞GM-CSF免疫组化染色为阳性。转染hCLCA1细胞的GM-CSF表达与转录水平明显高于两个对照组;NFA能抑制转染细胞GM-CSF的表达和转录。结论 哮喘气道上皮杯状细胞能合成GM-CSF,特定CLCA表达升高是促进GM-CSF合成的机制之一。     

p38 MAPK对PDGF诱导的细胞迁移的调控作用

目的 研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的细胞迁移中的作用.方法 PDGF刺激小鼠NIH 3T3细胞后,利用免疫印迹法检测p38磷酸化程度的改变情况.利用Transwell细胞迁移系统来观察PDGF对NIH 3T3细胞迁移的诱导作用,以及p38基因敲除对PDGF诱导的细胞迁移的影响.结果 PDGF能显著诱导NIH 3T3细胞迁移(P＜0.001),且在此过程中p38能被磷酸化激活,p38基因敲除能阻断PDGF诱导的细胞迁移(P＜0.001).结论 p38 MAPK参与了PDGF诱导的细胞迁移的调控.