利用膜片钳技术对急性分离小鼠螺旋神经节神经元的电生理研究

目的 探讨小鼠螺旋神经节神经元(spiral ganglion neurons，SGN)的电生理特性。方法 应用全细胞电压钳技术对急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞膜上的离子通道电流进行记录和分析。结果 在SGN细胞膜上记录到对氯化四乙胺、4-氨基吡啶敏感的外向延迟整流钾电流和瞬时钾电流，以及对河豚毒素敏感的内向钠电流。并且离子通道活动具有明显的电压依赖性，在没有记录到钠电流的细胞记录到延迟整流钾电流。结论 急性酶分离的小鼠耳蜗SGN细胞的电生理特性可为听觉传导机制的研究提供了重要的参考，并指导下一步通道药理学的研究。     

速尿对小鼠螺旋神经节神经元细胞钾、钠通道电流的影响

目的 探讨速尿对小鼠耳蜗螺旋神经节(spiral ganglion neuron,SGN)细胞延迟整流钾通道和钠通道电流的影响.方法 分离并酶解生后1~6 d的15只小鼠耳蜗SGN细胞,利用全细胞膜片钳技术记录外向延迟整流钾通道和内向钠通道,并观察速尿对钾、钠离子通道的影响.结果在SGN细胞外加入速尿以后,延迟整流钾电流可被阻滞到+200~+300 pA左右,钠电流可被阻滞到速尿作用前峰电流幅值的30%左右.在速尿作用稳定后的1、5、10 min时开始洗脱速尿,延迟整流钾电流和钠电流分别可以恢复到速尿作用前峰电流幅值的98%、64%、25%和96%、76%和54%.结论 速尿可在不同程度上阻滞SGN细胞的延迟整流钾通道和钠通道,并随着速尿作用时间的延长,其对离子通道的损害越大.     

小鼠耳蜗螺旋神经节细胞电生理学特性的研究

目的：应用膜片钳技术记录小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的全细胞电流,了解电压依赖性离子通道的基本电生理学特性,并比较耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异。方法：应用全细胞构型电压钳制技术,采用不同的电极内液及阻断剂,在不同的刺激参数下记录耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的电压依赖性离子通道电流,并进行分析比较。结果：实验记录到了内向的钠电流、延迟整流钾电流、超极化激活内向阳离子通道电流及瞬时外向钾电流,并发现耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞的延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流的电生理学特性具有显著性差异（P〈0．05）。结论：实验记录到的各种离子电流数据表明耳蜗螺旋神经节细胞具有完成动作电位的形成、传导并对其功能进行调节的离子通道基础;耳蜗顶、底转螺旋神经节细胞电生理学特性的差异有助于听觉的形成过程。     

顺铂对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流的影响

目的:观察记录顺铂作用下急性分离新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGNs)延迟整流钾通道的电流曲线,分析顺铂对SGNs钾电流激活动力学的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录SGNs外向延迟整流钾电流及顺铂对此电流的影响。结果:钳制电压为-60mV,刺激电压从-60mV到 80mV逐渐去极化,阶跃电压为10mV,持续时间为500ms,可在SGNs上记录到外向钾电流,该电流对TEA-Cl(4-乙基胺)敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入10μmol/L顺铂,能明显抑制SGNs延迟整流钾电流;顺铂对此电流的抑制作用与细胞外液中顺铂的浓度呈剂量依赖性;外液洗脱后SGNs电流可基本恢复正常。结论:钾通道与SGNs动作电位的产生密切相关,顺铂可抑制SGNs钾通道电流,导致听觉功能障碍。     

豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道特性的研究

目的 研究单个豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞的基本电生理特性。方法 应用耳蜗血管纹组织块培养技术和全细胞膜片钳技术，观察单个培养的豚鼠血管纹边缘细胞在电压钳模式下的电流特性。结果 边缘细胞上记录到钾离子电流，该钾通道有以下特性：①具有电压依赖性；②通道的活动可被4-氨基吡啶（4-aminopyridine，4-AP）和四乙铵（tetraethylammonium，TEA）在相对高浓度下阻滞；③细胞外钙离子浓度的减少可导致该钾通道电流的降低。结论 豚鼠耳蜗血管纹边缘细胞钾离子通道电流包括钙离子依赖性钾电流、外向延迟整流钾电流和A型钾电流。     

庆大霉素对小鼠螺旋神经节神经元电生理特性的影响

目的 探讨庆大霉素对小鼠耳蜗螺旋神经节神经元细胞电生理特性的影响及其意义。方法 应用全细胞电压钳技术研究庆大霉素对急性酶分离小鼠螺旋神经节神经元细胞膜上的钾、钠离子通道电流的峰值的影响．与细胞外液中庆大霉素浓度的关系，以及庆大霉素洗脱后电流的恢复情况。结果 庆大霉素能抑制电压依赖性钾通道，但不能抑制电压依赖性钠通道，其钾通道抑制作用与细胞外液中庆大霉素的浓度呈剂量依赖性，庆大霉素洗脱后电流恢复不完全。结论 庆大霉素通过抑制螺旋神经节神经元细胞的钾离子通道而产生耳毒性。     

听力学

20 0 4 0 82 0豚鼠耳蜗单离Hensen细胞钾电流特性及三磷酸腺苷对其影响 /李建雄… / /中华耳鼻咽喉科杂志 2 0 0 3;38(5 ) 343～ 346目的 :研究豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的钾离子电流及其特性以及三磷酸腺苷 (ATP)对Hensen细胞电生理特性的影响。方法 :采用传统全细胞膜片钳技术 ,对单离Hensen细胞进行记录。ATP通过压力注射仪对单离Hensen细胞给药。结果 :Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性 ,只有延迟整流性钾电流 (delayedrectificationpotassiumcurrent ,IK) ,没有瞬间外向性钾电流 (transientoutwordpotassiumcur rent ,IA)…     

听力学

20021291豚鼠耳蜗单离外毛细胞的外向整流钾电流/杨军…//临床耳鼻咽喉科杂志一2002,16(1)一27一30 目的:观察豚鼠耳蜗单离外毛细胞(OHC)的电生理特性,记录不同长度OHC的外向整流钾电流,分析区分外向整流钾电流所包含的通道电流成分,研究外向整流钾电流的动力学特征。方法:采用酶消化法及机械分离OHC。运动全细胞膜片钳技术,在电压钳下记录K 通道电流。结果:OHC的全细胞膜电容为(30.96士2.79)pF(n=29),零电流电位(30士2.1)mV(n=16),反转电位为(一51.67士1.84)mV(n一9)。不同长度OHC的外向整流钾电流存在系统差异,短OHC表现出大的钾…     

豚鼠耳蜗单离Hensen细胞的分离技术及其钾通道

目的　探讨适合膜片钳技术的单离Hensen细胞的分离及对其钾通道的研究。方法　取豚鼠耳蜗 ,获得Corti器 ,采用酶消化和机械分离方法对Hensen细胞进行分离 ,并采用传统全细胞膜片钳技术 ,记录单离Hensen细胞的钾电流。结果　每只耳蜗可以获得活性良好的单离Hensen细胞 12± 3个。Hensen细胞的钾电流呈明显的外向整流性 ,只有迟电流 (IK) ,没有峰电流 (IA)。结论　酶消化结合机械分离的方法可获得适用于膜片钳技术研究的单离Hensen细胞 ,并用于讨论了所记录到的Hensen细胞钾电流     

顺铂对小鼠耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响

目的探讨耳毒性药物顺铂对耳蜗螺旋神经节细胞延迟整流钾电流的影响,了解顺铂耳毒性的离子机制。方法选择状态良好培养2—14d的耳蜗螺旋神经节细胞在电压钳制条件下记录的钾电流作为对照组,浴液中分别加入100,500,1000,5000μM不同浓度的顺铂溶液后记录的电流为实验组,观察其对钾通道电流电生理学特性的影响,并观察冲洗后电流的恢复情况。结果实验显示耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性受不同浓度顺铂溶液的影响,并具有浓度依赖性,表现在其活化动力学和电流幅度的改变。本实验中顺铂的50％的电流被抑制时的浓度（IC50）为294μM,冲洗后钾通道电流逐渐恢复。结论顺铂可以改变耳蜗螺旋神经节细胞钾通道电流的电生理学特性,这种变化在短期内可逆,揭示其耳毒性的形成具有一定的离子机制。     

大鼠耳蜗切片螺旋神经元的红外可视膜片钳技术

目的建立大鼠离体耳蜗切片技术，结合红外可视膜片钳技术探讨耳蜗螺旋神经元（spiral ganglion neuron，SGN）的电生理特性。方法0～2日龄、3～6日龄及7～14日龄的健康SD大鼠各10只，快速制作耳蜗切片，应用红外微分干涉相差技术，结合膜片钳记录，观察SGN的基本电生理特性，并分析影响耳蜗切片制作质量及膜片钳记录成功的因素。结果3～6日龄大鼠耳蜗切片的成功率最高，每只耳蜗可制备2～4张切片；保持部分颅骨与耳蜗的连接及耳蜗骨壳的完整是影响切片成功的关键，切片时蜗轴与刀片的位置及切片取材的时间也是影响切片质量和细胞活性的重要因素。红外可视膜片钳技术可准确找到状态良好的SGN，有助于对封接过程的判断。全细胞记录SGN静息膜电位平均为（-45．6±5．3）mV（x±s，n=52），可记录到Na^＋和K^＋电流。结论耳蜗切片技术能够较完整地保持耳蜗结构以及各种构成细胞的活性及其相互之间的联系，红外可视膜片钳技术具有实时、直视的特点，可操作性强，二者结合能为深入研究SGN的电生理特性及听觉传导机制提供良好的手段和平台。     

Development of a fast transient potassium current in chick cochlear ganglion neurons.

Neurons of the cochlear ganglion are endowed with a set of voltage-gated ion channels that enable them to encode and transmit sound information from the cochlear receptors to the brain. The temporal expression pattern of the K+ currents in chick cochlear ganglion neurons during embryonic development was analyzed using whole-cell voltage clamp techniques. In acutely isolated neurons, slowly activating delayed rectifier K+ currents appear at embryonic day 7 (E7) and increase in amplitude during development. A fast activating, fast inactivating K+ current of the A type is first expressed at E10, increasing in amplitude thereafter. To investigate the possible role of neurotrophins in the induction of these K+ channels, neurons were grown in culture in the presence or absence of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) or neurotrophin-3 (NT-3). Neurons isolated at E8 and grown in culture for 1 day exhibit a high expression of A-current, together with the outgrowth of neurites. A-currents are not seen in acutely dissociated neurons from age-matched embryos (E9) which lack neurites, cut off by the isolation procedure. This suggests a preferential neuritic location of the channels carrying the A-current. However, the level of expression of the K+ currents was independent of BDNF or NT-3 application. Similarly, neurons isolated at E10 and grown in culture for up to 4 days maintain the amplitude of the K+ currents independently of the presence of the neurotrophins. These results indicate that BDNF and NT-3 may not directly regulate the expression of K+ channels in chick cochlear ganglion neurons. The notable expression of the fast inactivating A-current suggests that it plays a significant role in the modulation of synaptic efficacy and the encoding of auditory stimuli.     

螺旋神经节神经元原代培养及其免疫细胞化学鉴定

目的 建立成体哺乳动物耳蜗螺旋神经节神经元（ＳＧＮ）体外培养的细胞模型。方法 对出生后７ｄ的Ｗｉｓｔａｒ大鼠的螺旋神经节细胞进行解离与分散培养。用荧光显微镜与倒置相差显微镜观察原代培养ＳＧＮ细胞的活力以及生长与分化过程。应用链霉卵白素过氧化物酶（ＳＰ）方法和抗神经丝蛋白单克隆抗体（ＮＦＰ－ＭｃＡｂ）对ＳＧＮ进行免疫细胞化学染色鉴定。结果 幼龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠的ＳＧＮ在体外条件下，可良好存活并有正常     

水杨酸钠诱导大鼠螺旋神经节细胞发生程序性坏死的研究

目的 探讨受体相互作用蛋白激酶-1(receptor-interacting protein kinase1,RIPK1)/受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)/混合系列蛋白激酶样结构域(mixed lineage kinase domain...     

不同培养方法对螺旋神经元体外生长的影响

目的 观察不同培养条件下螺旋神经元体外生长情况,获得高纯度螺旋神经元培养物.方法 利用酶消化法、剪切分离结合酶消化法对出生后3～5天的大鼠螺旋神经节进行分离,分别在血清培养基和神经元专用培养基内培养,观察神经元形态及生长情况,并进行免疫组化鉴定.结果 神经元专用培养基比含血清培养基能够得到纯度更高的神经元,且细胞形态良好,轴突再生能力强.结论 酶消化结合剪切分离螺旋神经节,经神经元专用培养基培养,能获得高纯度的螺旋神经元.