不同胎龄人胎脑皮质颞叶神经干细胞变化特征观察

目的：探讨不同胎龄胎脑皮质颞叶神经干细胞（NSC）的发育规律。方法：收集胎龄为16～36周的水囊引产胎儿90例，采朋免疫组化及光镜技术对人胎脑皮质颞叶NSC的分布、彤态、生长方式以及数量进行检测。结果：NSC主要分布在锥体细胞层及内颗粒细胞层，呈圆形、椭圆形及多角形，尤以小圆形细胞为甚，0～2个突起，核相对较大，1～2个核仁不等，染色质疏松。NSC呈区域性分布，其中有大量由数个细胞形成的NSC集落，少部分NSC以单个彤式存在于其他神经细胞间。各胎龄组间NSC在分布、形态、种类、生长方式等方面无明显差异；随着胎龄的增加，皮质颞叶NSC逐渐减少。结论：不同胎龄人胎脑皮质颞叶NSC在分布、形态、种类和生长方式等方面无明显差异，其数量随着胎龄的增加而减少。     

人不同胎龄胎脑海马神经干细胞发育规律初探

目的探讨人不同胎龄胎脑海马部位神经干细胞的发育规律.方法收集胎龄16～32周的水囊引产胎儿100例,采用免疫组织化学和光镜技术对人胎脑海马部位神经干细胞的分布、形态、存在方式以及数量进行检测.结果不同胎龄胎脑海马均存在神经干细胞,神经干细胞位于海马多形细胞层、锥体细胞层、颗粒细胞层及分子层,以多形细胞层、锥体细胞层及颗粒细胞层多见.细胞呈圆形、椭圆形、三角形及星形,以圆形和椭圆形多见,未见明显突起.细胞胞浆丰富,核呈圆形及椭圆形,染色质疏松,2～6个核仁不等.多数单个散在分布于其它神经元间,可见对称分裂现象,但有的神经干细胞呈簇状及群状分布,各组神经干细胞随着胎龄的增加呈减少趋势.结论人不同胎龄胎脑海马广泛存在神经干细胞,各胎龄神经干细胞在分布部位、形态、存在方式及数量上存在一定的差异,海马可能是神经干细胞新的生发区.     

人胎脑神经干细胞的体外分离、培养与鉴定

目的探索人胎脑神经干细胞的体外分离培养条件,从而在体外大量增殖神经干细胞,并观察神经干细胞增殖和分化的特点。方法采用含碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和表皮细胞生长因子（EGF）的无血清培养技术,从14周自愿水囊引产人胎脑海马皮质中分离出神经干细胞,并进行培养、传代、分化观察,应用免疫荧光细胞化学技术对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果从14周人胎脑皮质中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长,形成神经球,该细胞具有连续增殖能力,可传代培养,表达神经巢蛋白抗原（Nestin）;在含血清培养时诱导神经干细胞分化,分化后的细胞表达神经元细胞和胶质细胞的特异性抗原。结论在含有EGF和bFGF的无血清培养液中,从人胎脑能分离培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞,并能在体外扩增,可进一步用于基础及临床研究。     

人胎脑纹状体发育过程中NSCs变化的原位杂交研究

目的:观察人胎脑纹状体不同发育时期NSCs的变化。方法:60例胎龄16~28周的水囊引产胎儿,采用原位杂交及光镜技术对人胎脑纹状体NSCs的分布、形态以及数量进行检测。结果:不同胎龄人胎脑纹状体均可见Nestin mRNA阳性表达NSCs,呈圆形、椭圆形及星形等多形性,且明显群状分布,多数单个存在,细胞体积相差悬殊,有大有小,细胞有0~3个突起,胞核呈圆形和椭圆形,1~4个核仁不等,细胞染色质疏松。随着胎龄的增加,纹状体NSCs逐渐减少。结论:不同胎龄人胎脑纹状体均存在NSCs,Nestin mRNA可作为定性NSCs的可靠标志物。     

血性脑脊液对人胎脑神经干细胞影响的体外研究

目的:研究血性脑脊液对人胎脑神经干细胞增殖和分化的影响.方法:分别用人的血性脑脊液和正常脑脊液培养神经干细胞,分为试验组(血性脑脊液组)和对照组(正常脑脊液组),分别于不同时间观察神经干细胞在两组脑脊液中的生长及增殖分化情况,并应用免疫细胞化学技术对两组脑脊液中神经下细胞的分化进行鉴定和比较.结果:神经干细胞在血性脑脊...     

人脑神经干细胞的分离培养和鉴定

目的 探讨人脑神经干细胞的分离培养和鉴定方法。方法 采用无血清培养液从人胚胎脑皮质分离和培养神经干细胞，并应用免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向化潜能的鉴定。结果 鉴定表明从人胚胎脑皮质分离培养的细胞具有神经干细胞的特征，并可在体外增殖，经诱导可分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶质细胞。结论 从人胚胎脑皮质成功分离培养了神经干细胞，它是研究细胞诱导分化的良好模型。     

PD大鼠纹状体提取液诱导中脑神经干细胞分化为多巴胺能神经元的研究

目的研究PD大鼠纹状体提取液诱对中脑神经干细胞的诱导分化作用.方法①体外分离、培养大鼠胚胎的中脑神经干细胞,并诱导其分化,巢素(Nestin)、神经丝-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色鉴定.②加入纹状体提取液后,分化细胞用抗酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化鉴定,并用流式细胞技术检测分化比例.结果①从大鼠胚胎的腹侧中脑部位分离获得了大量未分化、呈巢状悬浮生长的细胞团,且能分化为神经元和神经胶质细胞.②经纹状体提取液诱导后,能够分化出多巴胺能神经元,分化比例达20%左右.结论纹状体提取液能诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元的分化.     

不同胎龄小鼠脑组织中神经干细胞所占比例的研究

目的详细了解并比较不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞(neural stem cells,NSCs)所占比例,为后期优化分离培养NSCs提供直接量化数据。方法分离不同胎龄小鼠全脑(胎龄12.5、14、16和18d)和大脑皮层(胎龄14、16和18 d)组织,消化成单细胞悬液,贴壁培养3~4 h,细胞免疫荧光标记NSCs特异性标记物Nestin,统计分析各组中NSCs所占比例。另外,通过实时荧光定量PCR技术检测Nestin mRNA在不同胎龄(12.5、14、16和18 d)小鼠大脑皮层中的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,分离培养的不同胎龄小鼠全脑和大脑皮层组织中均有Nestin阳性细胞。在分离培养的小鼠全脑组织中胎龄12.5 d组NSCs所占比例最高,为53.42%±1.57%;胎龄18 d组NSCs所占比例最低,为25.96%±1.31%,而胎龄14 d组和16 d组位于二者之间。在分离培养的不同胎龄小鼠大脑皮层组织中,胎龄14 d组NSCs所占比例最高,为33.65%±0.29%;胎龄18d组比例最低,为25.29%±0.28%,胎龄16 d组位于二者之间(26.82%±0.30%)。实时荧光定量PCR结果显示,当把胎龄12.5 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA表达水平设定为1,胎龄14 d组的小鼠大脑皮层组织中Nestin mRNA的相对表达量为0.83±0.04,胎龄16 d组为0.77±0.05,胎龄18 d组为0.44±0.05。因此,随着小鼠胎龄增加,小鼠大脑皮层中的Nestin mRNA的表达水平逐渐下降。结论在小鼠大脑发育过程中,随着胎龄增加,分离培养的小鼠全脑和大脑皮层组织中神经干细胞比例逐渐降低。     

大鼠胎脑神经干细胞的分离培养及电穿孔转染

目的 分离培养大鼠胎脑神经干细胞(NSC),研究电穿孔技术在NSC中的转染效率.方法 从sD胎鼠脑组织中分离、培养和扩增NSC,利用免疫荧光组织化学技术对NSC及其分化细胞进行鉴定.使用电穿孔技术将质粒pEGFP-N1转染入NSC,利用其表达的绿色荧光蛋白(GFP)作为转染成功的报告物或标记物,在荧光显微镜下根据发出绿色荧光的NSC数量,计算出转染效率.结果 从SD胎鼠脑组织中分离的细胞在体外可长时间自我增殖,原代及传代克隆细胞均表达NSC的特异性抗原巢蛋白,且诱导分化后可表达星形胶质细胞的特异性抗原-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元的特异性抗原-神经元特异性烯醇化酶(NSE).用电穿孔技术转染神经干细胞,其效率为17.9%～69.1%,平均30.5%.结论 本实验成功分离出具有自我增殖和多向分化潜能的胎鼠NSC,并证实电穿孔技术可对其进行高效转染,为进一步研究NSC的转基因治疗提供实验基础.     

神经营养素受体p75NTR在不同胎龄人胎脑海马中的表达

0引言 神经营养素是一个高度保守的生长因子家族,包括两种受体：低亲和力的神经营养素受体p75（p75neurotrophi nreceptor,p75NTR）和高亲和力的Trk．p75NTR是一种M,为75000的Ⅰ型膜蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRI）的成员．在不同的条件下p75NTR发挥完全不同的生物学效应,一方面它与Trk共表达时,二结合成杂合二聚体,形成神经营养因子的高亲和性受体,促进神经细胞的存活与生长;另一方面,当p75NTR单独表达时,它能以相同的亲和力与所有的神经营养因子结合而诱导细胞凋亡．海马属边缘系统,与学习记忆、情绪、行为及内脏活动密切相关,     

人胚神经干细胞体外分离扩增及移植应用

目的　从胎龄 10周 - 12周的人工流产胚胎脑皮分离 ,鉴定神经干细胞并加以扩增后移植进入脑瘫患儿脑内的治疗效果。方法　利用无血清培养从胎龄 10周 - 12周的人工流产胚胎皮层分离具有增殖能力的细胞群 ,经过连续传代后得到大量亚克隆 ,采用免疫荧光细胞化学技术检测 Nestin抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。确定合适的受体后将其多点植入胼胝体及受损脑区。结果　从皮层分离的细胞群具有连续克隆能力 ,免疫组化证实其 Nestin抗原阳性。移植术后患儿病情有一定好转。结论　我们分离的中枢神经系统的细胞具有自我更新能力 ,是神经干细胞。这种神经干细胞为以脑瘫为代表的某些神经系统疾病的进一步治疗提供了有潜在价值的细胞资源。     

人胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

目的探索人胚胎神经干细胞的体外分离培养条件,并观察神经干细胞增殖、分化的特点.方法采用机械方法从流产的10～18周胎龄的人胚胎前脑分离神经干细胞,用无血清培养液,加入表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)刺激细胞增殖,进行体外扩增、传代培养.传3～4代的神经细胞球在含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液贴壁诱导分化培养.采用免疫荧光法鉴定神经干细胞和分化的神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞.结果从人胚胎前脑分离的细胞在含有EGF和bFGF的无血清培养液中能形成大量的神经细胞球,这些神经细胞球可在体外增殖及传代培养.神经细胞球用特异性的鼠抗人巢蛋白(nestin)抗体鉴定,大部分为阳性细胞.神经细胞球在血清培养液贴壁培养后可分化出神经纤维细丝(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、半乳糖脑苷脂(Gal-C)表达阳性的细胞.结论从人胚胎前脑分离的细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,属于神经干细胞;在含有EGF和bFGF的无血清培养液中,神经干细胞能在体外大量扩增.     

免疫磁珠法分选胚胎大鼠脑神经干细胞的初步研究

目的：探索应用免疫磁珠间接阳性法分选神经上皮干细胞蛋白（ｎｅｓｔｉｎ）阳性的神经干细胞群的实验条件,为研究神经干细胞的特性与神经干细胞的培养和移植研究创造有利条件。方法：制取胎鼠大脑组织细胞悬液,免疫磁珠法分选胎鼠脑神经干细胞,以流式细胞术检测阳性细胞纯度,以锥虫蓝染色法检测细胞活性。结果：该法分选的ｎｅｓｔｉｎ阳性细胞纯度为９３．０％～９９．７％,其中活性细胞为９２％～９７％。结论：免疫磁珠法分离胎鼠脑神经干细胞群落简便、有效,可以为神经干细胞细胞培养和移植提供细胞来源,也为研究高纯度神经干细胞的特性提供了实验基础。     

脑外伤后不同时间移植神经干细胞的疗效对比研究

目的通过观察脑外伤后不同时间移植神经干细胞的疗效，探讨脑外伤后进行神经干细胞移植的最佳时机。方法将成年大鼠制成脑外伤模型，分别在伤后即时、24h、48h三个时点进行神经干细胞移植，治疗后比较其行为学、流式细胞仪计数、免疫组化染色、电镜观察等指标。结果移植组较对照组各项指标均有改善，24h移植组在流式细胞仪计数、免疫组化染色、电镜观察等指标上较其他各组改善更加明显（P〈0．05），而行为学改善与其他实验组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论脑外伤后24h是进行神经干细胞移植的适宜时间。     

胎牛血清对人胚胎神经干细胞分化的影响

目的：探索胎牛血清对人神经干细胞（NSCs）的影响。方法：采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪检测的方法，观察了不同浓度胎牛血清对人NSC分化的影响。结果：胎牛血清促进人NSC分化为神经系统的主要的3种细胞（神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞），且培养基中胎牛血清浓度为15％时，人NSC分化为星形胶质细胞的数量占80％－90％。结论：胎牛血清影响人NSC分化为神经元和神经胶质细胞的比例，并与胎牛血清的浓度有一定的关系。