重型慢性活动性肝炎患者急性加重的病因探讨

为探讨慢性活动性肝炎患者急性加重的病因,对15例患者进行肝细胞内HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)原位杂交研究,同时检查血清与肝内HBV标志及肝内HDAg。发现:①60.0％(9/15)患者存在HBV活动性复制或HBV复制重新激活,观察到表达浆膜型HBcAg肝细胞多紧紧毗邻肝细胞坏死灶;②20.0％(3/15)患者肝内HBsAg或(和)HBVDNA阳性,虽无HBcAg表达,但见到浆膜型HBsAg表达或含HBV DNA肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切的表现:③13.3％(2/15)患者有HDV二重感染;④1例患者缺乏HBV感染标志。表明慢性活动型肝炎急性加重主要与HBV活动性复制、HBV复制重新激活或HBV感染持续存在有关,其次是HDV二重感染,少数病例可能存在HAV或HCV的重叠感染。     

血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者肝内HBV DNA原位杂交分析

本文采用原位杂交及免疫组化方法对23例血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者的HBV感染状态进行了研究。发现肝内乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),HBsAg,HBcAg的检出率分别为43.48％、38.89％.16.67％;肝内有HBV感染依据者占65.22％,表明半数以上的血清HBV标志或HBsAg阴性患者肝内仍然存在HBV复制或基因表达。含HBV DNA的肝细胞及表达HBsAg,HBcAg的肝细胞大多毗邻灶状坏死和(或)碎屑样坏死灶,提示HBV复制及其产物表达与患者的慢性化、活动性坏死性炎症密切相关。     

原位杂交研究慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织内HBV DNA清除模式

用地高辛素探针原位杂交技术研究52例慢性HBV感染者肝内HBV DNA分布,发现在病毒高复制期,HBV DNA阳性肝细胞以弥漫性分布为主,肝细胞HBV DNA表型为胞浆型和核型,在病毒低复制期肝内HBV DNA阳性肝细胞以小叶聚集分布为主,多分布于灶性坏死和碎片状坏死区,在病毒非复制期,HBV DNA阳性肝细胞以局灶性分布为主,表型多为包涵体型和核型。提示在漫长的HBV感染过程中,肝内HBV DNA阳性肝细胞的分布经历弥漫性—小叶聚集性—局灶性的演变过程,该过程反映肝组织内HBV的清除模式。HBeAg(+)的慢性HBV无症状感染者肝组织病变轻可能是由于HBV DNA易装配为完整的病毒排出肝细胞的结果。说明免疫活性细胞攻击的靶细胞主要是含有HBV DNA的肝细胞。     

肝癌患者血清PreS_2蛋白与HBV复制标志物的关系

采用EIA法检测了84例肝细胞肝癌(HCC)患者和336名“健康”对照血清中的Pre-S_2蛋白,并初步分析了Pre-S_2蛋白与HBV其它复制标志物问的关系。结果显示:(1)HCC患者血清Pre-S_2蛋白及其它HBV感染、复制标志物的检出率均显著高于“健康”对照(P<0.01);HBsAg阳性HCC患者中HBV复制标志物的检出率均高于HBsAg阴性者;提示HBV复制标志物可能与HCC有着更密切的病因学联系。(2)HCC患者血清Pre-S_2蛋白的检出率与HB_eAg、HBV-DNA的检出率差异显著,说明Pre-S_2蛋白是反映HBV复制极为敏感的标志,值得用于HBV与HCC关系的研究“     

慢性乙型肝炎病情再活动时血清HBV DNA水平的变化

目的 研究慢性乙型肝炎患者HBV复制水平与病情活动关系。方法 采用荧光标记定量PCR的方法,测定一组急性发作的慢性乙型肝炎患者(其中HBeAg阳性组38例,抗HBe阳性组22例)病情活动期和恢复期的血清HBV DNA含量。结果 血清HBV DNA含量在活动期明显高于恢复期(P＜0.05)。血清HBV DNA含量与丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)及总胆红素(T-BLLI)之间无相关性。结论 HBV DNA复制水平与慢性乙型肝炎的活动密切相关。     

乙型肝炎患者HBV抗体阳性模式与HBV DNA含量的相关分析

目的:探讨乙型肝炎患者HBV抗体阳性模式与HBV DNA含量的相关关系。方法:采用乙肝患者入院时第一份血清,同步进行HBV标志物(HBVM)、HBV DNA含量和肝功能检测,对其中96例HBV抗体阳性的病例进行综合分析。结果:HBsAg/HBeAb/HBcAb组和HBsAg/HBcAb组的HBV DNA含量显著高于HBsAb/HBeAb/HBcAb组和HBcAb组(P<0.01)。按临床分型,HBV DNA阳性率为HLC(85.0%)>CH(76.5%)>AH(12.5％)。结论:乙肝患者血清HBV抗体阳性并不表示体内病毒复制停止而无传染性,多数患者体内HBV DNA呈低水平持续复制,部分患者仍保持较高的复制水平。本文结果提示,慢性持续感染者体内病毒复制活跃与机体免疫功能紊乱或功能低下,不能清除病毒有关。部分HBeAb阳性患者HBV DNA持续复制,可能与HBV基因变异有关。     

乙型肝炎病毒前S_2蛋白和前S_2抗体检测的临床意义

本文用酶联免疫法(ELISA)对202例各类乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清前S2蛋白(PreS2)和前S2抗体(抗PreS2)进行了检测。结果PreS2的阳性率为51.5％(104/202),抗PreS2为6.9％(14/202)。各型HBV感染者,PreS2的标化检出率无明显差异。在HBVDNA阳性组、HBeAg阳性组和PHSAR阳性组PreS2的检出率均明显高于阴性组。抗PreS2在急性乙型肝炎(AVH)恢复期的检出率为55.6％,高于慢性迁延性肝炎(CPH)的10.3％(P<0.005)。动态观察发现抗PreS2在AVH患者多产生于HBsAg、HBVDNA被清除后、抗-HBs产生前,这类患者预后较好。CPH患者抗PreS2的出现则提示HBV复制停止,病情稳定。     

慢性肝炎肝细胞坏死与HBV标志及T细胞亚群的关系

本文应用兔疫组化方法研究慢性肝炎肝细胞坏死与乙型肝炎病毒(HBV)标志及T细胞亚群的关系,结果发现:e抗原阳性(eAg+)患者肝内HBsAg与HBcAg检出率明显高于e抗原阴性(eAg-)患者;在大多数膜HBsAg或浆膜型HBcAg表达部位中间或周围伴有肝细胞坏死,聚集在eAg+慢性活动型肝炎肝细胞坏死部位的单个核细胞大多为OKT~+_8细胞,OKT~+_4细胞少见,提示:eAg+的肝细胞破坏与HBV标志膜表达及OKT~+_8细胞浸润有一定关系。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清HBVPreS1-Ag、HBV-DNA、HBeAg之间的关系分析

目的探讨慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清HBVPreS7-Ag、HBV—DNA、HBeAg之间的相关性及意义。方法对60例慢性乙型肝炎及肝硬化患者进行回顾性分析,均为HgsAg阳性,采用实时荧光定量聚合酶链反应、化学发光法及全自动酶免仪分别检测患者血清HBV—DNA、HBeAg及HBVPreSl-Ag。结果60例HBsAg阳性慢性乙型肝炎及肝硬化患者中,HBVPreSl-心的检出率为58．33％,HBV—DNA的检出率为6167％,HBeAg的检出率为33．3％。HBVPreSl-Ag、HBV—DNA的检出率明显高于HBeAg的检出率,差异有统计学意义（P〈0．05）;HBVPreSl-Ag与HBV—DNA的检出率相近,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论HBV PreS1-旭与HBV—DNA在慢性乙肝及肝硬化患者血清中有相似的检出率,在反映慢性乙型肝炎及肝硬化患者血液中HBV的复制情况时,更加显著。     

Prevalence of antibodies to hepatitis C virus in Chinese patients with viral hepatitis and hepatic failure.

Anti-HCV assay with ORTHO kits was done in 100 blood donors and recipients and 374 cases of viral hepatitis, including 65 cases of fulminant, subacute and chronic hepatic failure. None of the 100 blood donors and recipients showed positive anti-HCV response. Anti-HCV was positive in 7.6% of the patients with chronic persistent hepatitis, 9.7% of the patients with chronic active hepatitis and 23.1% of the patients with liver cirrhosis. High prevalence of anti-HCV was observed in subacute hepatic failure (60.8%) and chronic hepatic failure (53.9%). Fifty-two (83.9%) of 62 anti-HCV positive cases were infected concurrently with HBV. The incidence of HBV replicating marker in patients with HCV or co-infected with HBV was lower than that of those with HBV alone. It is suggested that HCV might inhibit the replication of hepatitis B virus. The mortality rate of patients with anti-HCV positive hepatic failure was higher than that of those with HBV infection. Therefore, anti-viral therapy for anti-HCV positive hepatic failure should be considered.

     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——各型肝病时HBV DNA的定位及形态

报告用生物素标记HBV DNA探针原位杂交技术,现察75例慢性肝病者肝石蜡切片上HBV DNA定位及形态。共检出HBV DNA阳性者25/75例(33.33％)。其中:CPH2/7例、CAH10/21例、肝硬化0/3例、SS4/11例、无症状HBsAg携带者4/21例和HCC5/12例。HBVDNA在肝切片上呈棕黄色粗颗粒状,主要分布于肝细胞浆内,个别核内亦可见少数浅染棕黄色颗粒。阳性肝细胞分布有三种形式:Ⅰ型(弥漫型):25例中有4例(16％),Ⅱ型(局灶型):20例(80％),Ⅲ型(散在型):仅1例(4％)。颗粒在胞浆内亦有a型(密集)和b型(稀疏)之分。各型乙型肝炎HBV DNA在肝切片上定位与分布不完全相同,可能表示不同的病毒感染状态和复制的活跃程度。HCC只在癌旁肝组织内查见HBV DNA。     

血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床

目的了解血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床特征。方法对62例血清学标志阴性反复肝功能异常的肝炎患者进行血清肝炎病毒学检测、肝穿刺病理和免疫组化检查、肝功能和凝血功能检查,对其中乙肝患者采用荧光定量PCR方法检测血清乙肝病毒DNA（HBVDNA）。结果62例患者临床诊断与病理诊断的符合率为53．2％,慢性肝炎轻度的符合率较高为69．1％。62例患者肝组织免疫组化检查示28例（45．2％）HBsAg和／或HBcAg阳性,可确诊为乙型肝炎。28例乙肝患者肝组织病理均有炎症病变,其中G1最高占13例（46．4％）,其次G2占10例（35．7％）,G4最少占2例（7．1％）;肝纤维化分期S0占12例（42．9％）,S1占7例（25％）,S4最少占1例（3．6％）。28例患者中10例（35．7％）检测血清HBVDNA阳性,平均（3．3±2．2）×10^3拷贝／ml,肝脏炎症分级及纤维化分期各组之间血清HBVDNA定量水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。HBVDNA阳性和阴性患者的各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。乙肝患者和非乙肝患者各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论血清学标志阴性HBV感染仍是我国原因不明肝病的主要病因之一,且多为慢性肝炎,HBVDNA仍低水平复制,临床表现轻,炎症分级和纤维化程度较轻,但仍可发展为肝硬化。     

丙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的关系——不同人群血清HCV RNA的调查

本文以聚合酶链反应(PCR)对重庆地区各种慢性肝病(CLD,n=182)和献血员(n=35)血清HCV RNA的存在状况进行了初步调查。结果发现:①HCV RNA在原发性肝癌(PHC)、肝硬化(LC)、慢性肝炎(CH)及献血员中的检出率分别为36.6％(34/93)、31.7％(20/63)、15.4％(4/26)和2.9％(1/35);②多数HCV RNA阳性CLD(41/58)与HBsAg或HBV DNA双阳性,单纯HCV RNA阳性见于15.1％(14/93)PHC、3.2％(2/63)LC和3.8％(1/26)CH。此资料提示约20％PHC可能与HCV-HBV双重感染有关,约15％PHC可能与单独HCV感染有关。     

慢性HBV感染血清HBV DNA五项指标及肝病理之间的相关性分析

用ＰＣＲ检测了ＨＢＶ标志不同状态１０２例，均经肝活检诊断，其中慢性迁延性肝炎（ＣＰＨ）７４例，慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）２１例，肝组织正常７例。结果：ＨＢｓＡｇ阳性率ＣＡＨ为８５．７％，显著高于ＣＰＨ４７．３％（Ｐ〈０．０１）；抗－ＨＢｓ阳性率ＣＰＨ为１８．９％，明显高于ＣＡＨ４．７％。ＰＣＲ血清ＨＢＶ ＤＮＡ总阳性率分别为ＣＰＨ８３．８％、ＣＡＨ８５．７％。在抗－ＨＢｅ阳性的血清ＨＢＶ ＤＮＡ检出     

肝细胞癌和其它慢性肝病HCV HBV感染比较分析

对１２８例有病理诊断依据的肝细胞场（ＨＣＣ）、４７例慢迁肝（ＣＰＨ）、１０５例慢活肝（ＣＡＨ）、４６例肝硬化（ＬＣ）．采用嵌套式ＰＣＲ技术检测其血标本中的丙型肝炎病毒（ＨＣｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＩＩＡ，对这两种病毒的血清学标志也进行了研究。结果：在ＨＣＣ组。ＨＣＶＲＮＡ１４．１％阳性，ＨＢＶＤＮＡ７ｉ．３％阳性。ＣＰＨ，ＣＡＨ，ＬＣ和ＨＣＣ的ＨＢＶ感染率均在９０％左右，而ＨＣＶ感染率则分别为８．５％、９．５％、１７．４％和１９．５％，显示ＨＣＶ感染率随肝病严重程度的增加而有增加的趋势；晚期肝病组的ＨＣＶ感染率（１９．０％）显著高于慢性肝炎组（９．２％，Ｐ＜０．０５）。提示ＨＣＶ感染后经过慢性肝炎、肝硬化发展为ＨＣＣ可能是一个逐渐演进的病理过程。ＨＣＶ，ＨＢＶ重叠感染率。ＨＣＣ组高于ＣＰＨ，ＣＡＨ，而与ＬＣ相近，显示ＨＣＶ重叠感染在原有ＨＢＶ感染的基础上促进病变向着迁延化、慢性化，进而向着肝硬化、ＨＣＣ方向发展。     

环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)

 目的  建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法  提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果  30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论  LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。     

重叠HCV感染的慢性乙肝患者病毒复制及肝损害情况

为探讨慢性乙肝患者重叠感染HCV后，对乙肝病毒复制及肝功能损害的影响，对23例重叠HCV感染的慢性乙肝患者（A组）和50例单独HBV感染的慢性肝病患者（B组），分析其HBeAg,HBV-DNA，抗-HBcIgM及其临床表现、临床体征、ALT、TBIL、白蛋白、凝血酶原活动度等指标。结果：A组HBeAg阳性率26．1％低于B组56％（P＜0．05），DNA阳性率A组30．4％低于B组62％（P＜0．05），抗-HBcIgM阳性率A组17．4％低于B组46％（P＜0．05）。A组引起重度肝损害的阳性率为34．8％，B组为14％（P＜0．05），提示慢性乙型肝炎重HCV感染，HCV对HBV复制有抑制作用，重叠感染发生重度肝损害的机会大。     

Hepatitis B e Antigen Negative Chronic Hepatitis in Indian Patients : A Reality

Background

Hepatitis B e antigen negative chronic hepatitis (e⁻ CHB) with detectable levels of hepatitis B virus DNA (HBV DNA) in serum has been reported in cases from Asia. This study was undertaken to find out prevalence e⁻CHB and to correlate its presence with the clinical status and severity of the illness in cases of chronic liver disease in India.

Methods

All patients of infective hepatitis, who were hepatitis B surface antigen (HBsAg) positive by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), were evaluated with liver function tests and HBeAg and antiHBe antibody studies. Polymerase chain reaction (PCR) test was carried out to detect HBV DNA qualitatively.

Result

Out of 2064 samples tested by ELISA, 429 (20.78 %) were HBsAg positive. HBV DNA (qualitative) was performed on all 429 patients and 74 (17.2%) were HBV DNA positive. Of these only 42 (56.75 %) tested positive for HBeAg. Overall, 8.3 % of HBeAg negative patients (32/384) were viraemic with evidence of chronic liver disease/clinical cirrhosis and alteration of transaminase levels, while three cases (0.84 %) HBeAg positive cases did not show presence of HBV DNA.

Conclusion

This study shows e⁻CHB prevalence rate of 8.3% in patients with HBV infection in India. Since HBeAg negative patients had detectable levels of HBV DNA as seen in HBeAg positive patients, benefit of antiviral therapy should be given to them. Population studies on e⁻ CHB cases are needed to determine its true prevalence, natural course and response to therapy.Key Words: Chronic hepatitis, Hepatitis B virus, Hepatitis B e antigen negative     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平变化及临床意义

目的 :探讨慢性乙型肝病患者血清 HBV DNA水平变化在慢性乙型肝病发生发展中的作用及临床意义。方法 :采用荧光定量 PCR( FQ- PCR)法检测慢性乙型肝炎 ( CHB)、慢性乙型重型肝炎 ( CSHB)、乙型肝炎性肝硬化 ( HBC)患者血清 HBV DNA含量。结果 :HBV DNA含量随病情加重逐渐下降 ,CSHB组与 CHB、HBC组相比差异具有显著性 ( P<0 .0 1 )。结论 :慢性乙型肝病患者机体存在免疫功能调控失衡 ;动态观察 HBV DNA水平变化有助于判断肝脏病变程度