第3～12周人胚肝甲胎蛋白及细胞角蛋白1 9和c-Met的时空表达

背景:现阶段对于肝干细胞在胚胎肝发育过程中的形态学特征、时空分布、分化过程的报道很少.目的:以甲胎蛋白、细胞角蛋白19、c-Met作为标志物,观察其在不同发育阶段肝干细胞中的时空分布.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-06/2006-12在潍坊医学院中心实验室完成.材料:40例胚胎标本取自3个月内的流产胎儿,由潍坊医学院附属医院提供.方法:收集流产胚胎,30 min内制作切片,显微镜下根据胚层形成情况、体节数目及器官发育状况确定胎龄.选择胎龄第3～12周的标本切片,每隔10张抽出1张切片,行免疫组织化学染色.主要观察指标:第3～12周胚胎肝干细胞甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19的表达.结果:第3～5周甲胎蛋白、c-Met呈阳性反应,提示为肝干细胞;第10～12周甲胎蛋白、c-Met阳性细胞主要分布于汇管区周围,提示此时肝干细胞主要局限于汇管区周围的肝索内,与成年肝中卵圆细胞(成年肝干细胞)的分布一致.细胞角蛋白19阳性反应在第7周时开始出现;第10～11周时细胞角蛋白19阳性反应主要位于汇管区附近的肝索细胞和胆管板细胞及胆管上皮细胞;第12周时细胞角蛋白19阳性信号仪见于胆管板和胆管上皮细胞.此时所有的胆管板细胞及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met和细胞角蛋白19阳性.结论:细胞角蛋白19在肝干细胞中无表达,仅在胆管上皮细胞及其祖细胞中有表达,可能不适合作为肝干细胞的标志物.所有的胆管板及胆管上皮细胞均呈甲胎蛋白、c-Met、细胞角蛋白19阳性反应,推测甲胎蛋白+/c-Met+/细胞角蛋白19+的细胞可能为胆管祖细胞.     

胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估

背景:体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道,但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚.目的:应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植, 观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况.设计:随机对照动物实验.单位:中山大学附属第二医院小儿外科.材料:选用BALB/c小鼠24只为受体,鼠龄6～8周,体质量20～ 35 g,雌雄不拘购自广州市实验动物中心.实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成.小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供.方法:实验于2006-07/2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成.将24只小鼠随机分为2组:肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组,每组12只.前组分两次按50 mg/kg剂量腹腔内注射倒千里光碱(retrorsine) ,间隔2周,第2次注射4周后行70%肝部分切除制造肝损伤;然后经门静脉分别移植1×105羟基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.后组在行70%肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植.主要观察指标:荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况.2周后行白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)、血清白蛋白水平检测其功能状况.将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内,将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照,观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况.结果:①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况:CFDA SE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周,受体小鼠肝实质内可见散在绿色荧光分布.2周后,肝实质内绿色荧光分布区域明显扩大,且可见类似肝索样结构排列.②肝功能:共焦白蛋白荧光免疫组化(双荧光染色)结果表明,受体小鼠肝组织内可见标记细胞表达白蛋白阳性信号(呈黄色荧光),肝再生模型 干细胞移植组和肝切除 干细胞移植组血清白蛋白水平则无明显差异(P > 0.05).③肝干细胞移植安全性:6周内未见畸胎瘤形成,而将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下6周后则可见畸胎瘤形成.结论:胚胎干细胞源性肝干细胞移植入治疗性肝再生模型小鼠肝内后可有效在肝内能进一步生长分化并部分表达肝细胞功能;且此移植安全性较好.     

小鼠胚胎肝干细胞体外向肝样细胞的诱导分化

背景:目前肝干细胞尚无特异性标志物,故其分离、培养尤其是纯化技术尚不成熟.目的:观察体外培养的小鼠胚胎肝干细胞生物学特性,及其向肝样细胞的诱导分化能力.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-01/06在厦门大学附属中山医院消化中心实验室完成.材料:SPF级BALB/c胎鼠20只,13.5 d龄,由厦门大学生命科学学院实验动物中心提供.方法:无菌操作取出胎鼠肝脏,用细胞刮梳理后用Ⅳ型胶原酶消化.取分离纯化后的第2代细胞进行免疫荧光染色.细胞培养到第3代时,分别用3mmol/L丁酸钠盐与0.1%DMSO进行诱导,5 d后收集细胞进行Western blotting实验.主要观察指标:胚胎肝干细胞的形态及表面分子的表达,诱导后胚胎肝干细胞mRNA与蛋白水平的变化.结果:分离培养的细胞第2代即可得以纯化,呈克隆样生长,高表达白蛋白、甲胎蛋白、C-met及角蛋白19,且多数细胞共表达白蛋白与角蛋白19、C-met与角蛋白19,双阳性率约80%.细胞诱导后肝细胞标志物白蛋白表达明显增加,而作为不成熟肝细胞的经典标志物甲胎蛋白表达减少,同时干细胞标志物c-kit mRNA水平也明显下降,角蛋白19水平无明显变化.结论:胚胎肝干细胞具有双向分化潜能,经丁酸钠盐与DMSO诱导后可以向肝样细胞分化.     

体外诱导大鼠骨髓干细胞向肝干细胞分化的特征

目的:骨髓干细胞分化为肝干细胞的发现具有重要的临床应用价值,可用其作为生物人工肝或肝细胞移植的供体细胞,以解决供体缺乏,同时自体细胞还可免除异基因或异种细胞所致的许多问题.为此,实验模拟肝脏发育的微环境,观察体外诱导分化大鼠骨髓干细胞为肝干细胞的可行性及特征.方法:实验于2006-10/2007-08在解放军第一二三医院南京军区肝病中心实验室完成.①实验动物: SPF级SD大鼠,2月龄,体质量(200±20) g,雌雄不拘,购于上海斯莱克实验动物公司.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:采用密度梯度分离法分离培养大鼠骨髓干细胞,并设诱导组和非诱导组,应用25 μg/L肝细胞生长因子、10 μg/L成纤维生长因子-4、10 μg/L干细胞生长因子共同诱导.③实验评估:于诱导第0,7,14,21,28天,观察细胞形态变化,采用放射免疫法检测培养上清液中甲胎蛋白浓度,免疫组织化学染色检测甲胎蛋白、细胞角蛋白19、白蛋白的表达,应用流式细胞仪检测甲胎蛋白、细胞角蛋白19表达阳性细胞比例.结果:①诱导培养的骨髓干细胞呈卵圆形或圆形的肝干细胞样改变.②放射免疫法检测到诱导组细胞甲胎蛋白浓度逐渐升高,第14天达高峰,随后呈下降趋势,与非诱导组相比,除第0,7天无差异,其余各时间点差异均显著(P < 0.05).③免疫细胞化学法检测到诱导组细胞特异性表达甲胎蛋白、细胞角蛋白19及白蛋白,非诱导组不表达3种蛋白.④流式细胞分析诱导组甲胎蛋白阳性细胞比例为66.20%、细胞角蛋白19阳性细胞的比例为44.96%.结论:在实验建立的诱导培养体系中,骨髓干细胞在体外能分化为肝干细胞样细胞,诱导细胞有分泌甲胎蛋白、细胞角蛋白19、白蛋白的特征性功能.     

胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植对宿主肝功能的影响及安全性评估

背景：体外诱导胚胎干细胞分化为肝细胞已有不少成功的报道，但其体内移植后能否有效整合入宿主肝板、在肝内能否进一步生长分化并表达肝细胞功能以及成瘤的风险等情况目前还不清楚。 目的：应用治疗性肝再生模型进行胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植．观察其在肝组织替代、体内的生长分化及成瘤性情况。 设计：随机对照动物实验。 单位：中山大学附属第二医院小儿外科。 材料：选用BALB／c小鼠24只为受体，鼠龄6～8周，体质量20～352，雌雄不拘购自广州市实验动物中心。实验所用胚胎干细胞源性肝干细胞由作者所在课题组诱导胚胎干细胞分化而成。小鼠胚胎干细胞株E14由本院干细胞中心提供。 方法：实验于2006-07／2007-06在中山大学附属第二医院干细胞研究中心完成。将24只小鼠随机分为2组：肝再生模型＋干细胞移植组和肝切除＋干细胞移植组，每组12只。前组分两次按50mg／kg剂量腹腔内注射倒千里光碱（retrorsine），间隔2周，第2次注射4周后行70％肝部分切除制造肝损伤；然后经门静脉分别移植1×10^5羟基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）荧光标记的细胞入小鼠肝内进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。后组在行70％肝部分切除制造肝损伤模型后进行胚胎干细胞源性肝干细胞移植。 主要观察指标：荧光显微镜下观察移植细胞组受体鼠肝脏内分布、整合与体内生长分化情况。2周后行白蛋白荧光免疫组化（双荧光染色）、血清白蛋白水平检测其功能状况。将胚胎干细胞源性肝干细胞注入治疗性肝再生小鼠肝内，将未分化的胚胎干细胞移植入小鼠腋区皮下作为对照，观察胚胎干细胞源性肝干细胞体内成瘤情况。 结果：①肝干细胞在受体鼠肝内生长情况：CFDASE标记的胚胎干细胞源性肝干细胞肝内移植1周，受体小鼠肝实质内可见散     

原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的分析

背景：近年来，有观点认为原发性肝癌的发生机制可能为肝干细胞分化不全或分化异常所致。目前，肝干细胞研究正处于起步阶段，对人原发性肝癌的“干细胞起源”学说尚需进一步验证。目的：观察原发性肝癌不同病理组织类型中肝干细胞的活化、分布、来源和免疫表达特征。设计：观察对比实验。单位：解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心。对象：实验于2003-09／2004-07在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心完成，选用94例肝细胞癌和12例肝内胆管细胞癌和10例混合型肝癌石蜡包埋组织，同时选用5例肝硬化和4例正常肝组织作为实验对照，均取自病理科存档资料。肝癌组织均为患者首次肝癌切除手术时采取，包括肿瘤组织和癌旁组织，患者均无化疗和放射治疗史，并对受检项目知情同意。实验主要抗体均购自SantaCruz公司。方法：采用苏木精一伊红染色、免疫组织化学SP方法（检测的免疫标志有鼠抗人细胞角蛋白19单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白7单克隆抗体、鼠抗人细胞角蛋白8＆18单克隆抗体、鼠抗人c—kit单克隆抗体、鼠抗人Thy—1单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体）观察各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。、主要观察指标：各病变类型肝干细胞免疫标志表达情况。结果：在原发性肝癌不同病理组织类型中干细胞免疫标志均有不同程度的表达，均可观察到肝干细胞向肝癌细胞的转化，以混合型肝细胞癌中肝干细胞免疫表型表达率最高（P〈0．05）。正常组和肝硬化组干细胞免疫表型特征为阴性。结论：不同病理组织类型的肝癌组织中均存在不同分化状态和不同来源的肝干细胞。     

免疫组化检测GPC-3与CK-19在肝细胞癌诊断中的应用价值

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC-3)与细胞角蛋白-19(CK-19)免疫组化检测项目在肝细胞癌临床诊断及鉴别诊断中的应用价值。方法选取2012年1月至2016年1月收集的肝癌细胞标本98例作为研究对象。其中肝细胞癌71例,肝内胆管细胞癌18例,肝细胞癌合并肝内胆管细胞癌9例。对所有标本进行免疫组化检测,观察GPC-3与CK-19在肝细胞癌、肝内胆管细胞癌以及肝细胞癌合并肝内胆管细胞癌组织中的分布及表达情况。结果肝细胞癌、肝细胞癌合并肝内胆管细胞癌中GPC-3阳性率均明显高于肝内胆管细胞癌,差异有统计学意义(P0.05)。而肝内胆管细胞癌、肝细胞癌并肝内胆管细胞癌标本中CK-19阳性率明显高于肝细胞癌(P0.05)。并且中低分化的肝细胞癌标本中GPC-3的阳性率明显高于高分化肝细胞癌(P0.05)。中低分化肝癌标本中CK-19的阳性率明显高于高分化肝癌标本,差异具有统计学意义(P0.05)。结论免疫组化检测组织内GPC-3以及CK-19的表达情况可提升临床对肝细胞癌、肝内胆管细胞癌、肝细胞癌合并肝内胆管细胞癌诊断的特异性与敏感性。GPC-3联合CK-19免疫组化检测对诊断及鉴别诊断肝细胞癌具有重要的临床应用价值。     

移植胚胎干细胞的衍生细胞修复小鼠脊髓损伤的行为学观察

目的：观察胚胎干细胞的衍生细胞移植对小鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响.方法：将小鼠胚胎干细胞体外诱导分化为胚胎干细胞的衍生细胞后,制作小鼠脊髓半切损伤模型,在实验组注射胚胎干细胞的衍生细胞到脊髓半切小鼠的损伤脊髓周围.实验对照组按照同样方法注入等量磷酸盐缓冲液.移植后2、4、8周观察小鼠脊髓神经功能恢复情况（BBB评分）.结果：实验组较实验对照组死亡数下降（实验组2只,实验对照组7只）,并有明显的神经功能恢复（各时相点BBB评分及斜板试验临界角度两组间比较（P＜0.01）.结论：在脊髓损伤小鼠体内移植胚胎干细胞的衍生细胞可改善受损的脊髓神经功能和提高生存率.     

不同胎龄小鼠胎肝干细胞的性状比较

背景：胎肝干细胞具有比骨髓干细胞更强的增殖分化能力和更低的免疫原性和免疫活性,逐渐受到关注,目前多数研究集中在成体肝干细胞,对小鼠胚胎肝干细胞的研究较少。目的：比较不同胎龄小鼠胎肝干细胞的生物学性状,探讨胎肝发育过程中干细胞的变化。方法：采用机械分离结合酶消化法及差速贴壁法分离培养不同胎龄（13．5d,16．5d,19．5d）的小鼠胎肝干细胞,对原代细胞形态,生长状态及表面标记物进行观察比较。结果与结论：胎龄13．5d组胎肝干细胞形态均一,生长状态良好,干细胞特性明显,白蛋白和细胞角蛋白19基本无表达,提示胎肝干细胞处于相对原始的未分化阶段。随胎龄增加,胎龄16．5d,19．5d组胎肝干细胞形态差异渐大,生长状态渐次,白蛋白和细胞角蛋白19阳性表达率增加。提示胎肝干细胞逐渐向具有肝细胞和胆管细胞标志的双显型干细胞方向转化。     

胚胎干细胞源性肝样细胞移植治疗急性肝功能衰竭模型小鼠

背景:采用胚胎干细胞源性肝样细胞进行移植治疗时,诱导分化的肝样细胞致瘤性及其对肝脏生化代谢的影响有待观察.目的:评价胚胎十细胞源性肝样细胞移植对急性肝功能衰竭模型小鼠的治疗效果.设计:随机对照观察.单位:中山大学附属第一医院.材料:实验于2005-01/2006-102在中山大学附属第一医院中心实验室完成.选用转染绿色荧光蛋白基因的小鼠D3-ES细胞(129系小鼠分离建系),由中山大学眼科中心黄冰教授馈赠.选用40只清洁级6周龄D3-129系小鼠,雌雄不限,由中山大学实验动物中心提供,许可证号码为SCXK(粤)2004-0011,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为美国Gibco BRL公司产品.方法:[1]利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子联合诱导小鼠D3-ES细胞分化为肝样细胞,将细胞悬液以2.0×10(6)只注入20只小鼠肝包膜下,其余20只小鼠作为对照组,仅给予生理盐水注射.[2]注射后24h,采用5 μL/20g四氯化碳腹腔注射,诱发两组小鼠急性肝功能衰竭,观察小鼠生存质量及平均生存时间:急性肝功能衰竭24 h,取小鼠后腔静脉血进行总胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白、血糖、凝血酶原时间等肝功能指标检测;小鼠死亡后取肝脏标本,观察有无肿瘤生成,应用苏木精-伊红染色和免疫组化观察移植细胞生长和白蛋白表达情况.主要观察指标:[1]小鼠生存质量及平均生存时间.[2]肝功能指标检测结果.[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况.结果:[1]小鼠生存质量及平均生存时间:诱发急性急性肝功能衰竭后,对照组先出现共济失调等中枢神经系统症状,对照组14只及移植组8只出现腹水.对照组平均存活时间短于移植组,差异有统计学意义(23,62 h,P<0.05).[2]小鼠肝功能指标检测结果:对照组及移植组总胆红素及谷丙转氨酶较造模前升高,白蛋白及血精较造模前低,凝血酶原时间较造模前延长,差异有显著性意义(P<0.01),移植组总胆红素及谷丙转氨酶较对照组下降,血糖较对照组高,凝血酶原时间较对照组短,差异有显著性意义(P<0.05).[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况:移植组小鼠死亡后取肝脏标奉做病理切片观察,发现肝脏组织结构无明显改变,无肿瘤形成,移植细胞与小鼠肝样细胞形成很好的排列连接并表达白蛋白.结论:胚胎干细胞源性肝样细胞移植能改善急性肝功能衰竭模型小鼠生活质量,延长小鼠生存时间,移植细胞对肝脏生化代谢起到了较好的支持作用.     

Hepatocellular carcinoma originates from hepatocytes and not from the progenitor/biliary compartment

In many organs, including the intestine and skin, cancers originate from cells of the stem or progenitor compartment. Despite its nomenclature, the cellular origin of hepatocellular carcinoma (HCC) remains elusive. In contrast to most organs, the liver lacks a defined stem cell population for organ maintenance. Previous studies suggest that both hepatocytes and facultative progenitor cells within the biliary compartment are capable of generating HCC. As HCCs with a progenitor signature carry a worse prognosis, understanding the origin of HCC is of clinical relevance. Here, we used complementary fate-tracing approaches to label the progenitor/biliary compartment and hepatocytes in murine hepatocarcinogenesis. In genotoxic and genetic models, HCCs arose exclusively from hepatocytes but never from the progenitor/biliary compartment. Cytokeratin 19–, A6- and α-fetoprotein–positive cells within tumors were hepatocyte derived. In summary, hepatocytes represent the cell of origin for HCC in mice, and a progenitor signature does not reflect progenitor origin, but dedifferentiation of hepatocyte-derived tumor cells.     

超声造影分析二乙基亚硝胺诱发性大鼠肝癌模型的实验研究

目的探讨超声造影评估二乙基亚硝胺诱发性大鼠肝癌模型的可行性。方法20只雄性Wistar大鼠采用30mg/kg腹腔注射二乙基亚硝胺。第14周开始每周轮流抽取5只大鼠进行超声检查,发现肝脏结节的大鼠,进行超声造影(CEUS)检查。检查后处死取标本进行病理诊断。结果大鼠超声检查前死亡率45%(9/20),肝癌造模成功率80%(16/20)。肝细胞癌(HCC)病灶超声检出率72.5%(29/40)。55.2%(16/29)HCC病灶呈“高回声增强-无廓清”为主要CEUS增强模式。结论此动物肝癌模型成瘤率较高,CEUS可用于此模型的评估。     

Hepatocelluar nodules in liver cirrhosis: hemodynamic evaluation (angiography-assisted CT) with special reference to multi-step hepatocarcinogenesis

To understand the hemodynamics of hepatocellular carcinoma (HCC) is important for the precise imaging diagnosis and treatment, because there is an intense correlation between their hemodynamics and pathophysiology. Angiogenesis such as sinusoidal capillarization and unpaired arteries shows gradual increase during multi-step hepatocarcinogenesis from high-grade dysplastic nodule to classic hypervascular HCC. In accordance with this angiogenesis, the intranodular portal supply is decreased, whereas the intranodular arterial supply is first decreased during the early stage of hepatocarcinogenesis and then increased in parallel with increasing grade of malignancy of the nodules. On the other hand, the main drainage vessels of hepatocellular nodules change from hepatic veins to hepatic sinusoids and then to portal veins during multi-step hepatocarcinogenesis, mainly due to disappearance of the hepatic veins from the nodules. Therefore, in early HCC, no perinodular corona enhancement is seen on portal to equilibrium phase CT, but it is definite in hypervascular classical HCC. Corona enhancement is thicker in encapsulated HCC and thin in HCC without pseudocapsule. To understand these hemodynamic changes during multi-step hepatocarcinogenesis is important, especially for early diagnosis and treatment of HCCs.     

Preventive effect of JTE-522, a selective cyclooxygenase-2 inhibitor,on DEN-induced hepatocarcinogenesis in rats

Background

Chemopreventive effect of a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor JTE-522 on diethylnitrosamine (DEN)-induced hepatocarcinogenesis was evaluated in Wistar rats.

Methods

Animals in the control group (G1) were injected with phosphate buffered saline (PBS), those in hepatocellular carcinoma (HCC) group (G2) were injected with DEN with regular foods for 14 weeks, and those in the treatment groups were injected with DEN for 14 weeks fed with JTE-522 for 7 (G3) and 14 weeks (G4), respectively. Proliferation and precancerous lesions were evaluated by expression levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and glutathione S-transferase-P (GST-P), respectively by immunohistochemistry and Western blot analysis. Apoptosis and oxidative stress were evaluated by TdT-mediated dUTP-biotin nick-end labeling (TUNEL) and 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine (8-OHdG) staining, respectively.

Results

After 14 weeks of the treatment, HCC was developed in G2, G3, and G4 showing no significant differences in gross appearance and histology of the liver among the three groups. There were no significant differences in the expression levels of PCNA and numbers of TUNEL and 8-OHdG positive cells in the liver among the three groups. However, GST-P positive area was significantly suppressed in G3 and G4 compared to G2.

Conclusion

Our data revealed that JTE-522 had a modest inhibitory effect on hepatocarcinogenesis in rats in a manner independent of induction of apoptosis and inhibition of oxidative stress.     

原发性肝细胞癌组织芯片的制备及其在原发性肝细胞癌分子病理研究中的应用

目的:制备原发性肝细胞癌组织芯片,并利用该组织芯片在分子病理水平探讨原发性肝细胞癌(hep-atocellularcarcinoma,HCC)的发生发展与乙型肝炎病毒感染、细胞周期G1期调节基因Rb的功能状态,以及库普弗细胞的分布规律之间的关系。方法:选取40例HCC肿瘤组织及其相应癌旁、远癌肝组织块制备共含120个标本的组织芯片,应用免疫组织化学技术(SP法)检测在HCC肿瘤、癌旁、远癌肝组织中,HBsAg、HBcAg和Rb蛋白的表达情况以及库普弗细胞的分布情况。结果:HCC肿瘤组织中的HBsAg、HBcAg的表达率明显低于癌旁及远癌肝组织(P<0·01);Rb蛋白缺失率在HCC肿瘤组织中为42·5%,显著高于癌旁和远癌正常肝组织(P<0·05),但与HCC肿瘤的大小和组织学分级均无统计学相关性(P>0·05);肝癌组织中的Kupffer细胞数明显少于癌旁及远癌肝组织(P<0·05)。随着肿瘤体积的增加和肿瘤组织分化程度的降低,肿瘤组织中Kupffer细胞数量减少(P<0·05)。结论:HCC的发生、发展可能与HBV感染、Rb蛋白表达缺失和库普弗细胞数量的减少均有着密切联系;组织芯片是一种有效的肿瘤分子病理研究技术平台,具有检测质控的高度均一性和检测操作的高通量性。     

SOCS1 is a suppressor of liver fibrosis and hepatitis-induced carcinogenesis

Hepatocellular carcinomas (HCCs) mainly develop from liver cirrhosis and severe liver fibrosis that are established with long-lasting inflammation of the liver. Silencing of the suppressor of the cytokine signaling-1 (SOCS1) gene, a negative regulator of cytokine signaling, by DNA methylation has been implicated in development or progress of HCC. However, how SOCS1 contributes to HCC is unknown. We examined SOCS1 gene methylation in >200 patients with chronic liver disease and found that the severity of liver fibrosis is strongly correlated with SOCS1 gene methylation. In murine liver fibrosis models using dimethylnitrosamine, mice with haploinsufficiency of the SOCS1 gene (SOCS1(-/+) mice) developed more severe liver fibrosis than did wild-type littermates (SOCS1(+/+) mice). Moreover, carcinogen-induced HCC development was also enhanced by heterozygous deletion of the SOCS1 gene. These findings suggest that SOCS1 contributes to protection against hepatic injury and fibrosis, and may also protect against hepatocarcinogenesis.     

Intentional delay of human hepatocarcinogenesis due to suppression of chronic hepatitis

Human hepatocellular carcinomas (HCCs) are preceded by chronic hepatitis and cirrhosis. Despite a clear viral etiology [hepatitis B virus (HBV) and hepatitis C virus (HCV)] of human hepatocarcinogenesis, the mechanism is complex and the distinct molecular pathway or molecules to explain this phenomenon are not yet known. Hepatitis viral, 'inflammation-mediated' hepatocarcinogenesis greatly influences the incidence of somatic genetic events in hepatocytes by increasing the number of target cells, or the proliferation of once-hit hepatocytes, eventually leading to HCCs. These conditions may be designated as the 'hypercarcinogenic state'. Our goal is to lead the 'hypercarcinogenic state' to the 'normo- or hypocarcinogenic' state and to prevent HCC development (intentional delay of HCC).     

Imaging of multistep human hepatocarcinogenesis by CT during intra-arterial contrast injection

Various types of hepatocellular nodules are seen in cirrhotic livers. In these nodules, two types of human hepatocarcinogenesis are now considered. One is de novo hepatocarcinogenesis and the other is the stepwise development from high-grade dysplastic nodule (DN), high-grade DN with well-differentiated HCC foci, and overt HCC. According to our analysis by CT during arterial portography (CTAP) and CT during hepatic arteriography (CTHA) and histological study, in accordance with the elevation of the grade of malignancy of the nodules, the portal tract including normal portal vein (intranodular portal supply) and hepatic artery (intranodular arterial supply through normal hepatic arteries) are decreased. On the other hand, abnormal artery (intranodular arterial supply through newly formed abnormal arteries) gradually increases. Therefore, we can estimate the grade of malignacy of the nodules from intranodular blood supply. To know this blood supply pattern is important for the early detection, characterization and treatment of early stage HCCs. We also revealed that there was a close correlation between the prognosis of the nodules and the blood supply patterns.