儿童登革病毒感染诊断、治疗及预防

登革病毒(Dengue Virus,DV)是黄病毒科、黄病毒属的成员,有4种血清型和许多种生物型.DV主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,一种耐冷伊蚊还可对温带地区儿童的生命造成严重威胁[1].DV可引起多种疾病,从登革热(dengue fever,DF)到高发病率和高死亡率的登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)、登革休克综合征(dengue shock syndrome,DSS).据估计,世界上每年约发生1亿例DF,50万例DHF,25 000人死亡,而且在亚、非、南美的热带地区发病率呈上升趋势.     

登革病毒复制分子机制的研究进展

登革病毒(dengue virus,DV)是登革热(dengue fever,DF)、登革出血热/登革休克综合征(DHF/DSS)的病原体,按血清型分为四型(DV1～4)。DV以埃及伊蚊和白纹伊蚊为传播媒介,广泛流行于全球热带及亚热带的60多个国家和地区[1]。我     

两株登革2型病毒E、NS1蛋白基因序列测定及其系统发生分析

目的 :对从登革出血热 (denguehemorrhagicfever ,DHF)病人血清分离到的一株登革 2型病毒 (denguevirustype 2 ,DEN 2B株 )和DEN 2NGC株作E、NS1蛋白部分基因序列测定并进行系统发生树分析 ,了解其变异及分子进化特证。方法 :利用RT PCR法扩增B株和NGC株E、NS1部分基因片段 ,PCR产物直接测序 ;利用DNAssist软件预测其氨基酸序列 ,以及PHYLIP软件的CLUSTAL方法绘制系统发生树。结果 :B株与NGC株E蛋白基因区第 1～ 4 76nt(4 76bp)碱基序列存在 8个位点的差异 ;编码氨基酸存在 4个位置的不同 ;NS1基因区第 5 89～ 1 0 0 …     

成蚊传播登革病毒媒介效能的研究进展

登革热(dengue fever，DF)和登革出血热(dengue hemorrhagic fever，DHF)是由黄病毒科黄病毒属的登革病毒(dengue virus，DV)引起，是我国南方重要的虫媒病。近年全球许多地区发病率也呈明显的上升趋势，已引起国际医学界高度重视。由于DF／DHF迄今尚无可用疫苗和药物预防或防治其发生和流行，媒介控制在DF／DHF流行的防治中起着重要作用，因而对媒介效能的研究具有实际的意义。     

丙型肝炎实验室诊断方法的研究进展

HCV由Choo于1989年从受感染的黑猩猩血液标本中被发现，属黄病毒科。HCV基因组是一单股正链RNA，全长约9500个碱基对（bp），整个基因组只含有一个大的开放阅读框架（ORF）（如图1），根据所编码蛋白功能不同分为结构区和非结构区，结构区基因分为核心区（C区）和包膜区（E区），分别编码核心蛋白和包膜蛋白（E1和E2）及P7蛋白；非结构区（包括NS2、NS3、NS4和NS5基因），分别编码NS2-NS5蛋白。     

登革2型病毒NGC株基因组亚克隆的构建及其鉴定

目的 构建登革2型病毒NGC株基因组全序列的亚cDNA克隆，为进一步构建全长感染性cDNA克隆奠定基础。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列中的酶切位点设计2对引物，从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA，采用长链RT—PCR技术扩增出覆盖病毒基因组全长的2个cDNA片段，并克隆至pCR—XL—TOPO载体后测序。结果经酶切鉴定和序列测定表明，获得的cDNA克隆为登革2型病毒NGC株特异的。结论已成功构建出登革2型病毒NGC株基因组的2个cDNA亚克隆。     

丙肝病毒基因分型方法学研究进展

1989年美国Chiron公司Choo等[1]应用分子克隆技术,获得了丙型肝炎病毒(HCV)的基因克隆。此后日本和美国学者先后从临床型丙型肝炎病人和试验感染HCV的动物血清中,成功地获得了HCV cDNA基因克隆,并完成了HCV基因的一级结构测定。1HCV基因组的特点HCV的基因组结构类似黄病毒属和瘟病毒属,1991年国际病毒命名委员会将其归为黄病毒科(flaviciridae)丙型肝炎病毒属(hepacivirus)。HCV基因组是一单股正链RNA,全长9600个碱基对(bp),含有一个大的开方读码框架(ORF),编码3010个氨基酸的病毒前体蛋白,HCV基因组5’端和3’端为非编码区(…     

丙型肝炎病毒基因分型及其临床意义

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是单股正链RNA病毒，属黄病毒科丙型肝炎病毒属。全长约9．4kb，其序列为：341b的5’非编码区(5’URT)，编码3011个氨基酸的长开放读框，约27b的3’非编码区(3’URT)。在病毒复制中，氨基端有三个蛋白(C、E1、E2／NSl)，羧基端有四个蛋白(NS2、NS3、NS4、NS5)。由于RNA复制酶的低保真性及缺乏校正功能，HCV呈高度异质性；不同地区，不同患者，甚至同一患者在不同病程中HCV分离株，无论是核苷酸序列，还是氨基酸序列均有显著差异^[1][2][3]。本文就丙型肝炎病毒基因分型及其临床意义作一综述。     

登革病毒诊断与疫苗研究进展

登革病毒(Dengue virus,DV)属于黄病毒科,是一种蚊媒急性传染病的病原体,所致疾病主要有登革热(Dengur fever,DF)、登革出血热(Dengue haemorrhagic fever,DHF)和登革休克综合征(Dengue shock syndrome,DSS),多发于热带和亚热带地区.该病具有世界性,全世界每年有上千万病例,过去25年约有3 500人死于此病.近年来,此病又有暴发流行的趋势.在临床上,登革热主要表现为高热、头痛、肌肉关节痛等,同时伴有白细胞减少;登革出血热则以高热、出血、休克和高病死率为特征;登革休克综合征则以临床过程较严重,伴有休克综合征为特点.本文就登革病毒的主要诊断方法及其疫苗研制的现状作一综述.     

利用DNA免疫技术制备抗登革2型病毒NS2B蛋白多克隆抗体

目的构建登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)非结构蛋白NS2B的真核表达质粒pCAGGS-P7/NS2B,进行DNA免疫,制备小鼠抗NS2B特异性多克隆抗体。方法PCR扩增DV2-NS2B基因片段,构建真核表达载体pCAGGS-P7/NS2B,采用脂质体介导的方法转染Vero细胞,检测目标蛋白的表达。用该表达质粒免疫BALB/c小鼠,制备抗NS2B抗血清。结果成功构建真核表达重组质粒pCAGGS-P7/NS2B,该重组质粒具有良好的免疫原性,免疫小鼠后所获的抗血清,抗体效价达1∶3200,Western blot和间接免疫荧光证实抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。结论通过DNA免疫所制备小鼠抗DV2-NS2B抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白在肝癌发生中的作用

丙型肝炎病毒(HCV)是一种RNA病毒，属黄病毒科。于1989年克隆成功，HCV基因序列清楚。长约9400个核苷酸，由5’端非编码区(NCR)、单一开放阅读框(ORF)、3’端非编码区(NCR)组成。5’端具有高度保守性，在病毒复制及保持病毒性状方面起重要作用，3’端在病毒复制过程中起一定作用。ORF长约9030nt，编码3010个氨基酸，称为病毒多蛋白前体。     

登革病毒及其所致疾病的研究近况

由伊蚊传播登革病毒(DV)所致的登革热(DF)、登革出血热(DHF)及登革休克综合征(DSS)是一种热带传染病,在世界许多热带国家和地区流行,2002年夏季以来在东南亚的数个国家及我国的台湾省再次发生流行,引起国内人士极大的关注,现将近二年来国外有关这方面的研究情况简单介绍如下。     

两株登革2型病毒感染BALB/C小鼠特异性抗体产生动态的比较

目的：两株登革2型病毒(Dengue Type 2 virus，DV2)初次和再次感染BALB／C小鼠建立动物感染模型，对其产生特异性抗体进行动态观察，探讨感染DV2NGG株和DV2临床分离株(B株)引起的体液免疫应答的差异。方法：两株Dv2毒株摸拟自然感染途径，经皮下多点注射建立BALB／C小鼠感染动物模型；采用间接ELISA法检测感染动物血浆中抗DV2特异性IgM类抗体、IgC类抗体，并同时分离病毒观察病毒血症期的变化。结果：不同DV2毒株初次、再次感染BALB／C小鼠后诱导特异性Ig产生的类别存在差异，且DV2B株再次感染动物后表现为病毒血症期相对延长。结论：两株DV2诱导性抗体产生的动态与病毒血症期不同。     

登革Ⅱ型病毒Tr1751株E蛋白基因的克隆与表达载体的构建

目的从登革Ⅱ病毒Tr1751株中克隆表达E蛋白的基因,构建了真核表达质粒,为其后继的关于结构和功能的研究提供了条件。方法合成DEN2(Tr1751株)的E蛋白基因引物,通过RT-PCR的方法扩增含有信号肽E蛋白的基因片段,并与真核载体p IRES-hr GFP-1α连接,得到重组的质粒p IRES-hr GFP-1α-E,再用PCR、双酶切和测序的方法进行鉴定。结果 RT-PCR得到的为1 527bp的E蛋白基因片段,酶切鉴定和测序显示重组的质粒含有DEN2病毒中的E蛋白的基因。用重组质粒测序后与Gen Bank中的已知Tr1751株进行相似性比对,核苷酸序列和推导的氨基酸序列同源性均为99%。结论成功的构建出含有全长DEN2的E蛋白基因的真核质粒,为登革病毒核酸疫苗的研究奠定了基础。     

登革病毒E蛋白入胞机制研究现状

登革病毒(dengue virus,DENV)属于黄病毒科黄病毒属,是具有包膜的单股正链RNA病毒.病毒可通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,引起登革热和登革休克综合征,广泛流行于热带和亚热带地区,全球流行超过100个国家.登革病毒依赖包膜蛋白E蛋白构象的改变,从而发生病毒包膜和宿主细胞膜之间的融合将病毒核酸传递入细胞质中,但其感染人胞机理尚不十分清楚.本文就登革病毒相关E蛋白入胞机制的最新研究进展作一简要综述.     

丙型病毒性肝炎的诊断与治疗

1989年美国Choo等应用分子克隆技术,从受感染的黑猩猩血液标本中找到了一个与本病恢复期血清起阳性反应的克隆,命名丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV),由其引起的肝炎命名为丙型肝炎(hepatitis C,HC).初步研究表明在电镜下HCV为RNA病毒,其直径为55nm,呈球形颗粒,HCV基因组总长9 416个核苷酸,为单股正链,有一个大的开放读码框架,能编码3 014个氨基酸多肽,基因组的两侧分别为5'和3'端的非编码区,编码区从5'端依次为核蛋白(C)区,包膜蛋白(E)区和非结构(NS)区.后者又分为NS1、NS2、NS6、NS4、NS5、等区,NS1又称为E2/NS1.C区基因编码核壳蛋白,E1E2/NS1编码包膜糖蛋白,两者为病毒结构蛋白,NS2、NS6、NS4、NS5区各自编码不同功能的非结构蛋白,其中NS5编码HCV基因组螺旋酶,NS5编码HCV基因组的复制酶.传染源是急、慢性患者和亚临床感染者.传染播途径主要为输血及血液制品,也可通过血液透析、单采血浆、肾移植、性接触、静脉吸毒、母婴传播等.     

丙型肝炎病毒主要酶区结构及功能的研究进展

丙型肝炎病毒和黄病毒、瘟病毒同属于黄病毒科。实验研究证实HCV是一种单股、正链、RNA病毒,基因全长约为9．4kb。在HCV的核苷酸链中有一个巨大的开放读码框架结构(ORF),可编码一个含有3010或3011个氨基酸的多聚蛋白前体。此前体多聚蛋白在宿主细胞编码的信号肽酶作用下,裂解为衣壳蛋白C以及包膜蛋白E1和E2,其非结构蛋白部分在病毒编码的蛋白酶作用下可裂解为NSl、NS2、NS3、NS4a、NS4b、NSSa和NS5b等7种蛋白。     

2003年广州市登革1型病毒流行株的分离及NS2基因序列分析

目的对广州市区2003年仲夏—批疑似登革病毒感染的患进行确诊，并从基因水平分析流行株的可能来源。方法用免疫层析法(ICT)检测早期疑似患的DV—IgN和IgG抗体；同时用逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)、细胞培养病毒分离分别进行病原的分离和鉴定；对所分离到的毒株进行基因克隆、测序，并与国际参考株及国内流行株相应的序列进行同源性分析，结合患的流行病学资料推测本次流行株的可能来源。结果发病5d内患DV—IgM抗体阳性率为56．5％(13／23)，发病5～10d的患DV—IgM抗体阳性率为66．7％(16／24)；DV—IgG抗体无1例阳性。从18份发病5d内患的血标本中分离病毒7份，经RT—PCR和基因测序检测证实为DVI感染；用RT—PER检测30份早期患血标本，患的阳性率为83．3％(25／30)。基因序列分析表明，2003年流行株与登革1型病毒柬埔寨流行株及我国1997、1999年登革1型病毒流行株的同源性最高，分别为97％、97％、98％。所有患在发病前两个月均在广州市区某大院内居住，无输血史、无外出史。结论2003年广州登革热流行为登革1型病毒感染所致，推测广东可能存在登革1型病毒的疫源地。     

登革病毒非结构蛋白1 氨基端抗原性分析及其检测登革病毒感染动物血清

目的    精确分析登革病毒(dengue virus,DENV)非结构蛋白1（non-structural protein 1, NS1)氨基(N)端抗原性和免疫原性,探讨NS1 N端多肽用于分型检测DENV感染可行性。方法    合成4型DENV 标准株NS1蛋白 N端1-15氨基酸残基序列多肽（D-1 P1、D-2 P1、D-3 P1和D-4 P1）,采用ELISA方法检测多肽同DENV NS1 血清型特异性单抗和各型DENV分别免疫小鼠血清的反应性,竞争抑制法进一步验证单抗和对应多肽反应特异性。分析4型DENV 标准株NS1 N端1-15氨基酸残基序列多肽在Pubmed中已报道的各型DENV分离株中的保守性。结果     6株DENV 1型特异性单抗（5A48A3, 5A65A2, 5B29A1, 5B71A8, 5C29A3和5E68A17）特异性的同D-1 P1;6株DENV-2 NS1型特异性单抗（5D21A1、5E19A5、 5A62A12、5A70A4、5E30A5和5E48A15）特异性的同D 2 P1反应。D-1 P1仅识别DENV 1免疫小鼠血清, 其他多肽同各型DENV 1免疫小鼠血清反应无差异。DENV-1、2、3、4 NS1 N端保守性依次为98.96%、89.09%、83.58%和57.81%。结论     DENV-1 NS1 N端是DENV-1血清型特异性优势线性表位,该多肽可用于研制诊断DENV-1感染试剂盒;DENV-2 NS1 N端是DENV-2血清型特异性表位,以上研究有助于DENV亚单位疫苗和DENV感染分型诊断试剂盒的研制。     

bcl-6基因非编码区结构多态性及蛋白表达与移行上皮癌关系研究

[目的]分析bcl-6基因5’端非辅码区-1结构多态性及其蛋白在泌屎系统移行上皮癌及远端正常移行上皮组织中的表达情况．[方法]收集47例膀胱、肾脏及尿道移行上皮癌以及20例远端正常移行上皮组织蜡块，应用PCR—SSCP分析bcl-6基因5’端非编码区E1．11，E1．12区结构乡态性，并应用免疫组织化学染色方法检测bcl-6蛋白表达情况．[结果]bcl-6基因5’端非编码区E1．12的结构多态性乡见于Ⅰ级移行上皮癌中．bcl-6蛋白在正常移行上皮组织中的表达阳性卓较低，且规则地分布在表层；在移行上皮癌组织中bcl-6蛋白的表达卓较高，且分布不规则．[结论]bcl-6基因5’端非编码区E1．12区域的结构多态性及bcl-6蛋白的过度表达可能在移行上皮癌的分化和分级过程中起重要的作用，但两者、无相关性．