TGF-β1对Tenon''''s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对Tenon's囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响.方法用MTT法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGF-β1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon's囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响.结果GF-β1能够剂量依赖性地促进Tenon's囊成纤维细胞增殖(P＜0.05);TGF-β1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mL TGF-β1组之间无统计学差异(P>0.05).结论GF-β1能够促进Tenon's囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制.     

K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的 探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制.方法 人Tenon囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者.采用CCK-8实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出TGF-β1对细胞增殖最佳作用浓度为5.0 μg·L-1,最佳...     

EW-7197对TGF-β1诱导人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及机制

目的：探讨ALK5抑制剂EW-7197对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)增殖和迁移的影响及其机制。

方法：采用MTS法检测细胞增殖率,并摸索EW-7197最佳的作用浓度和作用时间。之后将细胞分为3个组,分别为正常对照组、TGF-β1诱导组和TGF-β1+EW-7197处理组,采用Transwell小室观察各组细胞迁移情况,采用Western blot检测各组细胞Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达水平。

结果：MTS结果显示,不同处理条件的EW-7197以6.0μmol/L作用24h的细胞增殖率最低(均P<0.01)。Transwell小室实验结果显示,TGF-β1诱导组的细胞迁移数量为228.0±17.0个/视野,明显高于正常对照组(149.0±15.0个/视野)和TGF-β1+EW-7197处理组(46.0±8.0个/视野)(均P<0.01)。Western blot检测结果显示,TGF-β1诱导组细胞中Fibronectin、α-SMA、p-Smad2、p-Smad3相对表达量高于正常对照组和TGF-β1+EW-7197处理组(均P<0.001)。

结论：EW-7197能够通过TGF-β/Smad信号通路抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖和迁移。     

TGF-β1对Tenon囊成纤维细胞增生和HSP47表达的影响

目的探讨转化生长因子B1（TGF-β1）对人Tenon囊成纤维细胞（HTF）增生和热休克蛋白47（HSP47）表达的影响。方法青光眼患者Tenon囊组织体外培养，用不同质量浓度0．01、0．1、1、5、10ng／mLTGF-β1处理细胞，继续培养24h，用MTT比色法检测吸光度值（A），用免疫细胞化学检测HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白含量，用实时荧光定量PCR检测HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达。结果TGF-β1能促进HTF的增生（P〈0．05），诱导HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白（P〈0．05），促进HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维mRNA（P〈0．05），其作用随TGF-β1质量浓度的增加而增强。结论TGF-β1通过促进HTF纤维增生，诱导下游介质HSP47和Ⅰ型胶原蛋白表达而促进HTF纤维化，可能是青光眼滤过手术后瘢痕形成的重要机制。     

转化生长因子-β1对人Tenon囊成纤维细胞表型转化的作用

目的探讨转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(humansubconjunctivalTenon’scapsulefibroblast,HTCF)表型转化的作用。方法人白内障手术中取结膜下Tenon囊组织块培养成纤维细胞。用第5~9代细胞,以不同浓度TGF-β1(0μg·L-1,2μg·L-1,5μg·L-1,10μg·L-1,20μg·L-1)、不同时间(24h、48h、72h)诱导成纤维细胞表型转化为肌成纤维细胞。用蛋白质印迹免疫检测技术和免疫细胞化学技术鉴定细胞表型。结果体外用TGF-β1诱导HTCF,在0~10μg·L-1内,TGF-β1呈剂量依赖性增加平滑肌肌动蛋白在蛋白水平的表达,至20μg·L-1时表达迅速下降;10μg·L-1TGF-β1诱导48h后其平滑肌肌动蛋白的表达与24h、72h相比,差异有显著性(P<0.01,n=6)。结论一定浓度和剂量的TGF-β1能显著诱导HTCF表型转化为肌成纤维细胞,在人Tenon囊组织局部组织损伤修复及瘢痕形成中具有重要作用。     

氯化锂对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β及CTGF的影响

目的:研究氯化锂(lithium chloride,LiCl)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响并探讨其作用机制.方法:体外培养HTFs并通过vimentin免疫荧光染色技术及细胞形态特征观察鉴定细胞;将HTFs分为实验组(80mmol/L LiCl处理48h)和对照组(未用药).用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, Real time-qPCR)检测两组细胞内TGF-β及CTGF基因的表达,Western blot检测两组细胞内TGF-β及CTGF蛋白的表达.结果:体外培养的HTFs能够表达TGF-β及CTGF.与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF基因表达下降,差异均具有统计学意义(t=20.042、14.995,P<0.05);与对照组比较,实验组中TGF-β、CTGF蛋白表达下降,差异均具有统计学意义(t=46.058、12.452, P<0.05).结论:体外培养的HTFs在基因和蛋白水平表达TGF-β及CTGF,LiCl能够抑制该过程,其可能通过该机制抑制HTFs增殖,此研究为LiCl用于青光眼滤过术后瘢痕化调控提供了实验依据.     

TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞增殖,表达CTGF和合成Fn

目的:研究转化生长因子(TGF-β2)和结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化中的作用。方法:用不同浓度的TGF-β2刺激HTF,然后用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测CTGF和Fn的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:TGF-β22μg/L到5μg/L范围有剂量依赖性地促进HTF的细胞增殖,CTGF的表达和Fn的合成的趋势(P<0.01),但0.5μg/L,1μg/L与正常对照组对细胞的增殖作用差别无显著性,5μg/L与10μg/L增强细胞的增殖作用也无显著性差异(P>0.05)。结论:TGF-β2能够明显地促进HTF细胞增殖,并增强其下游介质(CTGF)的表达和合成细胞外基质-纤维连接蛋白(fibronetin,Fn)。     

维拉帕米对人眼Tenon's囊成纤维细胞增殖的影响

为了探讨维拉帕米在防治眼部增殖性疾病中的价值,本文研究了维拉帕米对体外培养的人眼Ｔｅｎｏｎ’ｓ囊成纤维细胞增殖的影响及与ＣＡＭＰ的关系。结果发现：维拉帕米明显抑制人眼Ｔｅｎｏｎ‘ｓ囊成纤维细胞的增殖,药物浓度和细胞数量呈负相关,其５０％抑制率浓度（ＩＤ５０）为２８ｍｇ／ｌ;维拉帕米对人眼Ｔｅｎｏｌ’ｓ囊成纤维细胞的抑制作用不通过改变ＣＡＭＰ来实现。提示：维拉帕米可能是一种有价值的防治眼部增殖性疾病     

TGF-β1对小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对培养的小鼠巩膜成纤维细胞的影响;探索TGFβ1在近视眼巩膜重塑中的可能作用。方法应用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)分析技术,观察不同质量浓度TGFβ1(0.1、1、10、100ng/mL)在不同作用时间下(1、3、5、7d)对体外培养的小鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞周期的影响。结果TGFβ1能明显促进小鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性,在质量浓度为10ng/mL时作用最明显。FCM结果显示,TGFβ1作用后,巩膜成纤维细胞G1期百分比降低,而S期百分比显著升高,增殖指数PrI值(S G2M)百分比增高。结论TGFβ1可以促进体外培养的巩膜成纤维细胞增殖和DNA合成,它的表达下调可能在近视发生过程中发挥重要作用。     

罗格列酮对人眼球筋膜囊成纤维细胞增殖及转化生长因子β1分泌的影响

目的 观察罗格列酮对体外培养的人眼球筋膜囊成纤维细胞(HTFs)增殖及转化生长因子β1(TGF-β1)分泌的影响.方法 对照实验研究.体外培养HTFs,分别采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色(MTT)法及划线法,对培养细胞分别加入10、20、50、100、250、300、400及500 ms/L的罗格列酮,研究不同浓度的罗格列酮对体外培养的HTFs增殖及移行的影响,同时采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测不同浓度的罗格列酮对细胞TGF-β1分泌量的影响,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,研究不同浓度罗格列酮对TGF-β1 mRNA表达的影响.不同浓度罗格列酮对HTFs增殖活力、TGF-β1分泌及TGF-β1 mRNA合成的影响,采用单因素方差分析(ANOVA);不同浓度罗格列酬对细胞移行数量的影响,采用单因素多水平设计定量资料的方差分析;相邻药物浓度组间吸光度(A)值和细胞移行数量比较,采用q检验.结果 当罗格列酮浓度为20 ms/L时,MTT法测定的A值为0.29±0.02,ELISA法测定的A值为267.48±20.31,RT-PCR测定的A值为0.55±0.02,与对照组(MTT法测定的A值为0.33±0.01,ELISA法测定的A值为323.48±13.69,RT-PCR法测定的A值为0.69±O.02)相比,能明显抑制HTFs的增殖和移行,并明显下调TGF-β1的分泌和TGF-β1mRNA的表达,差异有统计学意义(F=178.293,86.404,176.102;P＜0.01);随着罗格列酮浓度的增高,抑制作用相应增强,相邻药物浓度间A值差异均有统计学意义(q值介于3.00～10.36之间,P＜0.05).结论 罗格列酮能明显抑制HTFs增殖和移行,其作用与其抑制TGF-β1的分泌有关.     

Bevacizumab对人Tenon囊成纤维细胞转分化的抑制作用

目的　观察Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ（贝伐单抗）对转化生长因子（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＴＧＦ）-β２诱导下的人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞转分化的抑制作用,探讨抗新生血管药物抑制青光眼术后滤过泡瘢痕化的机制。方法　用含体积分数１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ高糖型培养基对人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞株进行体外常规培养和传代。实验分为空白对照组、ＴＧＦ-β２处理组（加入终浓度为１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２ＤＭＥＭ完全培养基）及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组（加入１０μｇ?Ｌ－１的ＴＧＦ-β２和１．０ｇ?Ｌ－１的ＢｅｖａｃｉｚｕｍａｂＤＭＥＭ完全培养基）,置于３７℃、体积分数５％二氧化碳培养箱中培养４８ｈ,并分别应用细胞免疫荧光染色技术和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验检测Ｂｅｖ-ａｃｉｚｕｍａｂ对ＴＧＦ-β２刺激下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅａｃｔｉｎ,α-ＳＭＡ）表达的影响。结果　α-ＳＭＡ蛋白主要表达在细胞质中,免疫荧光染色结果显示ＴＧＦ-β２处理组可以见到α-ＳＭＡ的荧光表达,而Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白表达受到抑制。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ结果显示空白对照组、ＴＧＦ-β２ 处理组及Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量分别为０．６３０±０．０３８、１．１３０±０．０７１和０．３４０±０．０３３,Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ干预组α-ＳＭＡ蛋白相对表达量低于空白对照组和ＴＧＦ-β２处理组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ可明显抑制ＴＧＦ-β２诱导下人Ｔｅｎｏｎ囊成纤维细胞α-ＳＭＡ蛋白的表达,抑制成纤维细胞表型转化。     

特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用

目的观察转化生长因子-β2（TGF-β2）特异性短发夹RNA（shRNA）对人眼Tenon囊成纤维细胞（TCFs）TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA（siRNA）的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义（F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000）。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为（543.58±25.32）、（400.26±30.74）、（202.72±23.24）ng/L,明显低于阴性对照组的（659.78±20.95）、（547.45±24.65）、（442.87±17.43）ng/L及空白组的（721.75±30.19）、（756.61±30.19）、（787.60±18.37）ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义（F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000）。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。     

HSP47 siRNA对体外培养HTCF细胞生物学行为及TGF-β1表达水平的影响

目的:探究热休克蛋白47(HSP47)siRNA对体外培养人眼Tenon囊成纤维(HTCF)细胞生物学行为及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平影响。方法:体外培养HTCF细胞,并分为:空白对照组、空载体组和转染组;转染组根据HSP47基因序列设计并合成干扰siRNA序列,构建载体并导入HTCF细胞中;空载体组导入空白载体。采用RT-PCR和蛋白质印迹实验检测细胞中HSP47 mRNA和蛋白的表达情况,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell法及划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移,蛋白质印迹实验检测增殖、凋亡、侵袭、迁移蛋白和TGF-β1的表达情况。结果:相比空载体组,转染组HSP47 mRNA和蛋白的表达、克隆形成率、细胞愈合率、侵袭细胞数目、Ki67、N-cadherin、TGF-β1蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白相对表达水平显著升高(P<0.05),但细胞凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白相对表达水平均无差异(P>0.05)。结论:HSP47 siRNA可以通过抑制TGF-β1蛋白的表达降低HTCF细胞的增殖、侵袭及迁移能力,但对HTCF细胞的凋亡无明显影响。     

氯化锂对人眼Tenon 囊成纤维细胞增殖的影响

目的：观察氯化锂（Lithium chloride）对人眼Tenon囊成纤维细胞（human Tenons capsule fibroblasts, HTFs）体外生长的抑制效应,并探讨其作用机制。 方法：磺基罗丹明（SRB）法和BrdU法检测细胞生长抑制率;采用流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学的改变。 结果：在40~160mmol/L范围内,氯化锂能够抑制HTFs的增殖,且呈剂量与时间依赖性。氯化锂使HTFs阻滞于G₂/M期,且能诱导细胞凋亡,高浓度组尤为明显。 结论：氯化锂能抑制HTFs增殖,机制为诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞于G₂/M期。     

氯化锂对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的影响

目的：观察氯化锂（Lithium chloride）对人眼Tenon囊成纤维细胞（human Tenons capsule fibroblasts, HTFs）体外生长的抑制效应,并探讨其作用机制。 方法：磺基罗丹明（SRB）法和BrdU法检测细胞生长抑制率;采用流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期的变化;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞形态学的改变。结果：在40-160mmol/L范围内,氯化锂能够抑制HTFs的增殖,且呈剂量与时间依赖性。氯化锂使HTFs阻滞于G2/M期,且能诱导细胞凋亡,高浓度组尤为明显。结论：氯化锂能抑制HTFs增殖,机制为诱导细胞凋亡,并将细胞阻滞于G2/M期。     

3H-TdR掺入法测定TGFβ1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的 用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1 (TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制.方法 人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0 μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度.结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加.100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反.结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素.     

青蒿琥酯对人Tenon囊成纤维细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对人Tenon囊成纤维(human Tenon's capsule fibroblasts,HTFs)细胞增殖与凋亡的影响,探讨青光眼术后滤过泡瘢痕化的治疗对策.方法体外培养HTFs细胞,应用不同浓度(50 μg·mL-1、100 μg·mL-1、150 μg·mL-1、200 μg· mL-1)的Art处理细胞,采用MTT法检测Art对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测Art对细胞凋亡的影响,Western blot检测Art对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响.结果 Art作用细胞48 h后,MTT结果显示:与空白对照组比较,不同浓度的Art处理组对HTFs细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性抑制(均为P＜0.05).流式细胞仪结果显示:与空白对照组比较,50 μg·mL-1、100μg·mL-1、150 μg· mL-1、200 μg·mL-1Art作用后细胞凋亡率逐渐增加(均为P＜0.05),分别为8.80％±0.88％、11.60％±0.56％、16.30％±1.03％、23.40％±1.62％.Western blot检测结果显示:与空白对照组比较,不同浓度Art处理组Bax蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,且均呈浓度依赖性(均为P ＜0.05).结论 Art可抑制HTFs细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达而实现的.Art可能成为一种潜在的抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物.     

TGF-β1诱导体外培养角膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

目的观察转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对体外培养的角膜成纤维细胞结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)的诱导表达作用。方法体外培养的角膜成纤维细胞分实验组和对照组,对照组弃原培养液,加无血清培养液继续培养,实验组用不同浓度的TGFβ1(0.1μg·L-1、1μg·L-1、10μg·L-1)处理24h,用RTPCR方法检测角膜成纤维细胞CTGFmRNA的表达情况。结果1μg·L-1和10μg·L-1TGFβ1处理组CTGF/GAPDH像素比值分别为0.35±0.05和1.25±0.10,均较对照组高(0.13±0.02),差异具有统计学意义,同时CTGF/GAPDH比值随TGFβ1浓度增加而增加。结论TGFβ1可以诱导角膜成纤维细胞CTGF的表达,在角膜成纤维细胞中CTGF也可能是TGFβ1对细胞起作用的下游信号分子。